MiRNA-146a通过NF-κB依赖的途径促进血管平滑肌细胞增殖

摘要：目的观察miRNA-146a对血管平滑肌细胞增殖的作用并研究其机制。方法原代培养大鼠血管平滑肌细胞,分成抑制
组、对照组和正常组,采用脂质体2000分别转染miRNA-146a抑制剂（50 nmol/L）、错义链（50 nmol/L）、PBS,使用real time PCR
方法测定转染后miRNA-146a水平,CCK8法检测转染后血管平滑肌细胞增殖,transwell法检测转染后血管平滑肌细胞迁移程
度,western blot检测转染后血管平滑肌细胞核因子κBp65（NF-κBp65）与增殖细胞核抗原蛋白（PCNA）水平。结果转染48 h
后,抑制组血管平滑肌细胞的miRNA-146a水平明显低于对照组和正常组（P<0.01）;其增殖和迁移比例显著低于对照组和正常
组组（P<0.01）;其NF-κBp65、PCNA蛋白表达水平降低（P<0.05）。结论miRNA-146a可以促进血管平滑肌细胞的增殖和迁移,
其机制与增加NF-κBp65表达相关。
     

3-溴丙酮酸增强肝癌细胞对顺铂敏感性的作用

目的探讨3-溴丙酮酸（3-BP）增强肝癌细胞对顺铂敏感性的作用及其可能机制。方法MTT法检测3-BP、顺铂对HepG2、
SMMC7721细胞的增殖抑制作用。选择低于半数抑制浓度（IC50）的100 μmol/L的3-BP和8 μmol/L的顺铂单独或联合处理细
胞,PI 单染流式细胞术检测细胞凋亡,caspase 3 活性检测试剂盒测定caspase-3 的活性变化,ATP检测试剂盒测定细胞内ATP
水平,Western blot 检测XIAP、PARP蛋白的表达。结果3-BP 在50~400 μmol/L 浓度范围内对HepG2、SMMC7721 细胞具有
明显的增殖抑制作用（P<0.01）,作用48 h 的IC50分别为238.9±13.9 μmol/L、278.7±11.7 μmol/L;顺铂在2~32 μmol/L 浓度范围
内对HepG2、SMMC7721细胞具有明显的增殖抑制作用（P<0.01）,作用48 h的IC50分别为16.4±0.9 μmol/L、20.9±1.8 μmol/L。
100 μmol/L 3-BP与8 μmol/L顺铂联合作用于HepG2、SMMC7721细胞48 h 的增殖抑制率分别为（60.6±2.2）%、（56.8±2.3）%,明
显高于对照组和单独用药组（P<0.01）。100 μmol/L 3-BP与8 μmol/L顺铂联合作用于HepG2、SMMC7721细胞48 h 的凋亡率
分别为（51.1±4.3）%、（46.5±3.9）%,较单用3-BP、顺铂的凋亡率明显提高（P<0.01）。结论3-BP 能增强肝癌细胞HepG2、
SMMC7721对顺铂诱导的凋亡的敏感性,其机制可能是通过引起细胞内ATP缺乏、下调XIAP蛋白的表达以及增加caspase-3的
活性。     

抑制miR-23a表达增强卵巢癌顺铂敏感性的分子机制

目的分析抑制miR-23a表达后,耐药卵巢癌A2780细胞对化疗药物顺铂的敏感性变化及其分子机制。方法选择顺铂耐
药卵巢癌A2780细胞株为研究样本,并分为两组,其中对照组仅加入顺铂,实验组加入顺铂及antagomir-23a。应用MTT法检测
antagomir-23a抑制miR-23a并经顺铂处理后细胞增殖抑制率;应用流式细胞仪分析细胞周期分布情况;应用Hoechst33258染色
分析细胞凋亡形态学变化;应用Western blot法分析耐药糖蛋白P-gp的表达变化。结果抑制miR-23a并经顺铂处理后,细胞增
殖抑制率显著上升（P<0.01）,顺铂中效浓度（IC50）为17.89 μmol/L,比对照组IC50 110.18 μmol/L降低了83.76%（P<0.01）,细胞被
阻滞于G0/G1期且凋亡率增加（P<0.01）;Hoechst33258染色见细胞核浓缩、染色增强。Western blot检测提示细胞P-gp蛋白表
达随着顺铂浓度加大而逐渐减低（P<0.01）。结论抑制耐药卵巢癌A2780细胞内miR-23a表达后,细胞对顺铂的敏感性显著增
加,这可能miR-23a靶基因负性调控因素得以缓解,并由此引发P-gp蛋白表达受抑有关。
     

Compound K 对小鼠CT26结肠肿瘤模型中髓系抑制细胞的抑制作用

目的探讨人参皂苷Compound K（C-K）对髓系抑制性细胞（myeloid derived suppressor cell, MDSC）凋亡、免疫抑制及促
炎症细胞因子分泌的影响。方法流式细胞术分选得到CT26 肿瘤小鼠骨髓MDSCs,分别用C-K或PBS处理后,Annexin V/
7-AAD检测细胞凋亡;qRT-PCR检测Cox-2 和Arg-1 的mRNA表达水平;ELISA技术检测细胞培养上清中IL-1β、IL-6和IL-17
的水平。体内实验中,C-K 或对照PBS处理的MDSCs和结肠癌细胞系CT26共同皮下免疫Balb/c小鼠,21 d后,对两组小鼠肿
瘤的大小以及组织形态学进行鉴定。结果C-K促进了体外培养的MDSC的凋亡,表现为早期细胞凋亡率及晚期凋亡细胞或
坏死率均增加（P<0.01,P<0.05）;并显著下调了MDSC中免疫抑制作用相关基因Cox-2及Arg-1的表达（P<0.05,P<0.01）;同时
抑制了MDSC中促炎症细胞因子IL-1β、IL-6和IL-17的分泌（P<0.05,P<0.001,P<0.05）。与对照组比较,C-K 处理后的MDSCs
在体内促进肿瘤细胞的增殖作用明显减弱（P<0.01）。结论C-K 能促进体外培养的MDSC细胞凋亡并拮抗其免疫抑制功能,
从而抑制肿瘤细胞的生长与增殖。
     

雷公藤甲素通过抑制逆转录病毒HERV-K Np9基因转录诱导人急性T淋巴细胞白血病Jurkat细胞凋亡

目的探讨雷公藤甲素诱导人急性T淋巴细胞白血病Jurkat细胞凋亡分子机制。方法MTT检测雷公藤甲素对Jurkat细
胞的增殖抑制作用,然后用OriginPro8计算出IC50。按照0、2、4、8、16 nmol/L浓度雷公藤甲素处理Jurkat细胞48 h,然后用流式
细胞仪检测细胞凋亡变化。用半定量RT-PCR法检测加药处理后各组Np9基因mRNA的表达水平变化并用Kodak 1D 3.6软件
对条带进行定量分析。采用统计软件分析Np9转录抑制与细胞凋亡的相关性。Western Blotting检测Np9下游信号分子c-myc,
β-catenin,ERK,AKT和Notch1蛋白的变化。结果雷公藤甲素呈剂量依赖性抑制Jurkat细胞的增殖,其IC50为12.7 nmol/L。雷公
藤甲素呈剂量依赖诱导Jurkat细胞凋亡。进一步实验研究结果显示,雷公藤甲素呈剂量依赖方式抑制Jurkat细胞中Np9基因的
mRNA的转录水平。经统计分析发现Np9转录抑制与细胞凋亡之间具有显著的相关性（R2=0.907）。Western Blotting方法结果
发现雷公藤甲素在抑制Np9 mRNA转录同时伴有其下游信号分子c-myc,β-catenin,ERK,AKT和Notch1蛋白表达水平降低。
结论下调HERV-K Np9 mRNA及其下游信号分子c-myc,β-catenin,ERK,AKT和Notch1蛋白水平是雷公藤甲素诱导人急性T
淋巴细胞白血病Jurkat细胞凋亡的重要分子机制之一。
     

氯喹对哮喘小鼠气道高反应性的抑制作用

目的探讨氯喹对哮喘小鼠气道高反应性的作用及其可能机制。方法Balb/c 小鼠随机分为对照组、哮喘组、氯喹治疗组、
地塞米松治疗组、氯喹+地塞米松治疗组,除对照组外,其余各组小鼠均给予OVA致敏和激发,建立哮喘小鼠模型,于每次激发
前腹腔注射给药,对照组则于同一时间予等量PBS处理,末次激发后24 h 内小鼠肺功能仪检测小鼠气道高反应性;检测支气管
肺泡灌洗液（BALF）中细胞总数及分类计数;制作肺组织病理切片,HE 染色后光镜下观察病理变化;ELISA检测支气管肺泡灌
洗液中细胞因子IL-6、PGF2α水平。结果氯喹可明显降低哮喘小鼠气道高反应性（吸入25 mg/ml Ach 时4.5±0.4 vs 6.1±0.9,P<
0.05,吸入50 mg/ml Ach 时4.6±0.5 vs 8.2±1.0,P<0.001）;明显降低哮喘小鼠支气管肺泡灌洗液中炎症细胞数（P<0.01）;显著降
低哮喘小鼠病理评分（P<0.05）;可一定程度降低哮喘小鼠BALF中PGF2α因子水平;与地塞米松合用可明显减轻哮喘小鼠支气
管细支气管周围炎症（P<0.05）、血管周围炎症（P<0.01）、肺组织病理评分（P<0.001）,明显降低哮喘小鼠BALF中IL-6因子水平
（P<0.05）。结论氯喹可抑制哮喘小鼠气道高反应性;地塞米松与氯喹合用较单独用药效果更好,可能对中性粒细胞参与的哮
喘有效。
     

靶向VEGF的miRNA对恶性黑色素细胞增殖和凋亡的影响

目的研究靶向血管内皮生长因子（VEGF）基因的外源性miRNA对恶性黑色素瘤细胞增殖及凋亡的影响。方法根据
VEGF基因序列设计合成4对miRNA干扰片段,构建质粒真核表达载体,分别为X-26-1-3、X-26-2n-1、X-26-3-2和X-26-4-4,测
序分析鉴定插入序列的完整性;脂质体法将该4 个重组表达载体转染黑色素瘤细胞株SKmel-28,RT-PCR 检测转染细胞中
VEGF基因的mRNA表达变化,Western blotting 检测miRNA对VEGF蛋白表达水平的调控效应,明确抑制效果最为显著的
miRNA干扰序列。MTS法和流式细胞仪分别检测人工合成的靶向VEGF的miRNA对SKmel-28生长的抑制作用,以及对肿瘤
细胞凋亡的影响。结果测序分析证实4个重组体插入片段的碱基序列均完全正确,成功转染SKmel-28细胞后,均能显著抑制
肿瘤细胞VEGF mRNA和蛋白的表达,与对照组相比有显著性差异（P<0.01）。抑制效应最强的重组载体是X-26-2n-1,MTS法
和流式细胞仪检测显示,SKmel-28细胞转染X-26-2n-1后,细胞增殖受到明显抑制,增殖抑制效应具有时间依赖性,与阴性对照
组比较差异具有显著性（P<0.05）,与空白组比较细胞增殖抑制更加明显（P<0.01）;肿瘤细胞早期凋亡率、晚期凋亡率、总凋亡率
也显著高于对照组（P<0.01）。结论外源性靶向VEGF的miRNA能够显著降低黑色素瘤细胞SKmel-28 VEGF基因和蛋白的
表达水平,抑制肿瘤细胞增殖,诱导细胞凋亡。
     

大鼠肾脏细胞17β-HSD1的表达及参与性激素合成的能力

目的通过研究合成性激素的关键酶17β-HSD1在肾脏中的表达,探讨肾脏是否具备合成性激素的作用。方法基于无促
卵泡生成素（FSH）、黄体生成素（LH）培养基和有FSH、LH培养基两种条件下,Western blotting、放射免疫分析法分别检测培
养24、48 h 后肾脏细胞中17β-HSD1 的表达和性激素的分泌情况。结果培养24 h 后,大鼠肾脏细胞能够表达少量的
17β-HSD1 蛋白（0.1843±0.076）,同时能够分泌少量的雌二醇、孕酮和睾酮（分别为3.30±3.78 nmol/L,62.60±12.33 pmol/L 和
22.12±3.36 nmol/L）,而在FSH和LH的共同刺激下,大鼠肾脏细胞17β-HSD1蛋白的表达量明显升高（1.6651±0.044,P<0.01）,
同时分泌雌二醇、孕酮和睾酮的量也显著增加（分别为8.50±2.64 nmol/L,117.80±9.79 pmol/L和45.04±4.39 nmol/L,均P<0.05）,
培养24 h和48 h上述指标均无明显差异（P>0.05）。结论大鼠肾脏细胞中有17β-HSD1的表达,并且在FSH和LH的共刺激下
能够稳定分泌性激素,提示肾脏组织具备合成性激素的能力,丰富了肾脏的内分泌功能。
     

miR-20b抑制哮喘小鼠的气道炎症

目的探讨miR-20b对哮喘小鼠气道炎症的影响。方法BALB/c小鼠随机分为正常对照组、哮喘组、哮喘+miR-20b模拟
物处理组、哮喘+miR-20b模拟物对照处理组。卵清白蛋白（OVA）致敏和激发构建哮喘模型小鼠,miR-20b模拟物及其对照采用
鼻滴的方式给药干预。实验流程的第49天检测支气管肺泡灌洗液（BALF）中的细胞总数和分类计数,肺组织进行HE染色观察
病理学变化,ELISA检测BALF中血管内皮生长因子（VEGF）的浓度。结果哮喘小鼠经miR-20b模拟物处理后,BALF中细胞
总数及中性粒细胞、嗜酸性粒细胞的分类计数明显降低（P<0.01）,并且气道黏膜增厚减轻,气道腔内粘液分泌及支气管周围
炎性细胞的浸润减少。与哮喘组BALF中VEGF的含量28.55±3.42 pg/mL相比,哮喘+miR-20b 模拟物处理组的含量18.19±
3.67 pg/mL明显降低（P<0.01）。结论miR-20b对哮喘小鼠气道炎症产生抑制作用,这一效应可能是通过降低VEGF的表达来
介导。
     

腺病毒介导靶向NF-κB基因的shRNA对体外食蟹猴子宫内膜细胞增殖活性的影响

目的合成高特异性靶向NF-κB基因的shRNA腺病毒载体,观察其对体外培养的食蟹猴子宫内膜细胞的增殖活动是否具
有直接的抑制效应。方法设计携带有NF-κB-p65基因及空载基因的shRNA腺病毒载体,体外培养食蟹猴子宫内膜细胞,分成
实验组及对照组,实验组转染携带NF-κB-p65 shRNA的腺病毒,对照组转染携带空载基因的腺病毒,共培养后观察有关细胞增
殖活性如凋亡蛋白及细胞周期的改变情况。结果腺病毒载体PCR和测序结果与预期结果一致,经包装产生的病毒滴度为
1.58×1011 U/ml。NF-κB-p65-shRNA腺病毒感染食蟹猴子宫内膜细胞后,实验组子宫内膜细胞凋亡蛋白的表达水平明显高于阴
性对照组（P<0.05）;实验组凋亡细胞较对照组明显增多,进入细胞分裂期细胞数明显少于对照组（P<0.05）。结论携带NF-κB
基因的腺病毒体外感染食蟹猴子宫内膜细胞后可加速子宫内膜细胞的凋亡,并抑制子宫内膜细胞的增殖,为后期该基因在食蟹
猴子宫内膜异位症模型上的研究提供理论基础。
     

不同浓度腐胺对人皮肤成纤维细胞增殖、迁移和凋亡的影响

目的探讨不同浓度腐胺对人皮肤成纤维细胞（human skin fibroblasts,HSF）增殖、迁移、凋亡的影响。方法将体外HSF
分为腐胺组和对照组,以含腐胺浓度分别为0.5、1、5、10、50、100、500、1000 μg/ml完全培养基培养细胞设为腐胺组,不添加腐胺
设为对照组。经对照组及不同浓度腐胺组处理的HSF培养24 h后,再以四唑化合物电子耦联显色法（MTS法）测定细胞增殖能
力（用吸光度值表示）,Transwell迁移实验测定细胞的迁移能力,流式细胞技术（Flow Cytometry, FCM）Annexin V/PI标记法测
定细胞凋亡率。结果（1）细胞增殖能力（MTS）测定结果显示,0.5、1、5、10 μg/ml 腐胺组HSF的吸光度值较对照组升高（P<
0.01）,并且1 μg/ml时达峰值（0.754±0.024）;500、1000 μg/ml腐胺组HSF吸光度值较对照组降低（P<0.01）;50、100 μg/ml腐胺
组HSF的吸光度值与对照组无明显差异（P>0.05）;（2）Transwell迁移实验结果显示,1 μg/ml腐胺组穿过微孔膜的细胞数目较对
照组显著增加（P<0.01）,且达到峰值309±21;50 μg/ml及以上浓度腐胺组HSF穿过微孔膜的数目较对照组减少（P<0.05）;0.5、
5、10 μg/ml腐胺组HSF穿过微孔膜的细胞数目与对照组比较无明显差异（P>0.05）;（3）流式细胞凋亡结果显示,0.5、1、5、10 μg/ml
腐胺组HSF凋亡率较对照组显著降低（P<0.05）,而且在1 μg/ml时细胞凋亡率达最低值（11.10±0.79）%;100 μg/ml及以上浓度
腐胺组细胞凋亡率较对照组显著升高（P<0.01）,而且随着浓度增加凋亡率逐渐升高;50 μg/ml腐胺组与对照组比较细胞凋亡率
无明显差异（P>0.05）。结论微量腐胺可维持细胞正常的迁移能力,显著提高HSF的细胞增殖能力,而较高浓度的腐胺能显著
抑制HSF迁移与增殖,并诱导细胞发生凋亡,提示不同浓度的腐胺会对创面愈合起到完全不同的作用。
     

Anti-microRNA-221通过上调PTEN蛋白表达增加结直肠癌细胞的放射增敏性

目的探讨下调microRNA-221（miR-221）表达对人结直肠癌细胞的放射敏感性的影响及其分子机制。方法常规培养人
结直肠癌Caco2细胞系,以脂质体转染反义miR-221（anti-miR-221）后,应用实时荧光定量PCR（Real-time Q-PCR）检测Caco2
细胞中miR-221和PTEN mRNA表达水平,应用Western-blot分析肿瘤细胞中PTEN蛋白表达变化;不同处理组的肿瘤细胞经
照射后,流式细胞仪检测各处理组细胞的死亡情况。结果Real-time Q-PCR显示转染anti-miR-221后miR-221的表达水平明显
下调（P<0.05）,同时PTEN蛋白表达增高（P<0.05）;流式细胞仪检测可见anti-miR-221转染组及anti-miR-221转染联合照射组
死亡细胞比例均明显增多（P均<0.01）,转染anti-miR-221可明显提高Caco2细胞的放射敏感性,且此效应能被PTEN-siRNA部
分但不完全阻断。结论Anti-miR-221可通过上调PTEN蛋白表达增加结直肠癌细胞的放射敏感性。
     

沉默信息调节因子3对肝癌细胞增殖的影响

目的探讨沉默信息调节因子3（SIRT3）对肝癌细胞增殖的影响。方法Western blotting检测SIRT3在正常肝组织、永生化
肝细胞及肝癌细胞系中的蛋白表达水平;在肝癌细胞中过表达SIRT3,台盼蓝排斥实验检测过表达SIRT3对肝癌细胞增殖的影
响,EdU标记实验检测SIRT3对肝癌细胞DNA合成的影响;在肝癌细胞中过表达SIRT3,平板集落实验检测SIRT3对肝癌细胞
集落形成能力的影响;qRT-PCR验证SIRT3的沉默效率,台盼蓝排斥实验检测SIRT3沉默对肝癌细胞增殖的影响,EdU标记实
验检测SIRT3沉默对肝癌细胞DNA合成的影响。结果SIRT3在肝癌细胞系中的蛋白水平较永生化肝细胞、正常肝组织降低;
SIRT3在肝癌细胞中成功过表达,过表达SIRT3使肝癌细胞增殖数目减少了约为51%~61%（P<0.001）,使肝癌细胞DNA合成下
降了约57%（P<0.05）;过表达SIRT3抑制肝癌细胞的集落形成能力;SIRT3沉默有效,SIRT3沉默使肝癌细胞的增殖增加了约
51%~61%（P<0.01）,使肝癌细胞的DNA合成能力增强了137%~149%（P<0.01）。结论SIRT3可抑制肝癌细胞的增殖。
     

胃促生长素对人主动脉平滑肌细胞增殖及线粒体融合蛋白2表达的影响

目的 通过体外培养人主动脉平滑肌细胞(HASMCs),研究胃促生长素(ghrelin)对血管平滑肌细胞(VSMC)增殖及线粒体融合蛋白2(Mfn-2)表达的影响.方法 体外培养HASMCs,第4～6代细胞用于试验.给予不同浓度(10-9、10-8、10-7、10-6、10-5 mol/L)的ghrelin 或10-6 mol/L ghrelin不同时间(0、6、12、18、24 h)处理,用四甲基偶氮唑蓝比色(MMT)法观察其对HASMC增殖的影响.RT-PCR,Western blot方法检测不同处理方法对Mfn-2表达的影响.结果 10-7～10-5 mol/L的ghrelin可明显抑制HASMC增殖,浓度为10-6 mol/L抑制作用最为明显(P<0.01).ghrelin在6～24 h内均能明显抑制HASMC增殖,在24 h达最高峰(P<0.01).10-6 mol/L ghrelin能明显上调Mfn-2 mRNA和蛋白的表达(P<0.01).10-6 mol/L ghrelin在18 h上调Mfn-2 mRNA和蛋白表达的作用最为明显(P<0.01).结论 ghrelin可能通过上调Mfn-2的表达来抑制HASMC增殖.     

TRB3在非诺贝特抑制高糖诱导的肾小球系膜细胞增殖中的作用及其机制

目的探讨TRB3在非诺贝特抑制高糖诱导下肾小球系膜细胞增殖中的作用及作用其机制。方法将细胞分为正常对照
组（N,5.5 mmol/L 葡萄糖）、高糖组（H,25 mmom/L 葡萄糖）、高糖+不同浓度的非诺贝特组（FN,10、50、100 μmol/L）。采用
CCK-8法检测细胞增殖率,Hoechst33258染色观察细胞凋亡形态学改变,流式细胞术检测细胞周期改变,免疫细胞化学染色观
察TRB3表达,Western Blot检测细胞中TRB3、P-AKT蛋白的表达。结果高糖能够诱导肾小球系膜细胞增殖（P<0.001）;非诺贝
特能够抑制肾小球系膜细胞增殖（P<0.001）,且具有浓度依赖性。非诺贝特干预后细胞出现凋亡形态学改变;非诺贝特可以使
系膜细胞发生G1/S期阻滞;正常组、高糖组胞浆有少量TRB3蛋白表达,但高糖不能促进TRB3表达增多,随着非诺贝特浓度的
增加TRB3表达量增多,P-AKT表达逐渐降低。结论非诺贝特可以促进TRB3的表达;TRB3可能通过抑制AKt的磷酸化使肾
小球系膜细胞发生G1/S期阻滞从而抑制其增殖。
     

细胞周期正性调控因子的异常表达与甲状腺癌发生发展的关系

目的探讨细胞周期正性调控因子的异常表达与人甲状腺癌发生、发展的关系,并评价其在判断甲状腺肿瘤细胞增殖
活性和病人预后方面的应用价值。方法采用免疫组织化学SP法检测50 例甲状腺癌、30 例甲状腺腺瘤、30 例结节性甲状腺
肿及20 例正常甲状腺组织中MCM7、CDK2 及Ki-67 蛋白的表达。结果癌组中MCM7、CDK2 及Ki-67 蛋白的阳性表达率均
显著高于在腺瘤组、结甲组及正常组中的表达（均为P<0.01）,分别为100.00%(50/50)、80.00%(40/50)、84.00%（42/50）。癌组中
三者的蛋白表达两两比较,均呈正相关（均为P<0.01）。结论甲状腺癌中MCM7、CDK2 及Ki-67 蛋白的高表达可能与癌的
发生相关,三者联合应用或许可作为临床早期诊断和评价预后的生物学指标。在评价甲状腺肿瘤细胞增殖活性方面,MCM7优
于Ki-67。
     

紫草素抑制人气道平滑肌细胞的增殖

目的 研究紫草素对体外培养的人气道平滑肌细胞(HASMCs)增殖的影响.方法 组织块贴壁法原代培养传至4～8代的HASMCs,经40、20、10、5、2、1、0.5 ?mol/L及0 ?mol/L(对照组)的紫草素分别作用12、24、48 h后,应用MTS法测定紫草素对HASMCs的细胞增殖的影响;经40、20、10、5 ?mol/L及0 ?mol／L(对照组)的紫草素分别作用24 h后,应用流式细胞术分析紫草素对细胞周期的影响;经20 ?mol/L及0 ?mol/L(对照组)的紫草素分别作用24 h后,应用SP免疫细胞化学法检测紫草素对增殖细胞核抗原(PCNA)表达的影响.结果 (1)与对照组相比,20 ?mol/L和40 ?mol/L的紫草素均可有效抑制细胞增殖(均P<0.05),以48 h最为显著(抑制率分别为30.1％与42.9％),但两者之间无显著性差异(P0.05).(2)20 ?mol/L及40 ?mol/L的紫草素均可显著提高G0/G1期比例(P<0.05),阻滞细胞周期进程,但两者之间无显著性差异(P0.05).(3)20 ?mol/L的紫草素可显著下调PCNA的表达(P<0.01).结论 紫草素对HASMCs具有明确的抗增殖作用.     

姜黄素诱导Jurkat细胞凋亡时MAPKs及MMPs家族的表达

目的探讨姜黄素体外诱导人T细胞淋巴瘤Jurkat 细胞凋亡时MAPKs及MMPs家族成员的表达,揭示其可能的分子机
制。方法以不同浓度姜黄素作用Jurkat 细胞不同时间,MTT检测细胞增殖抑制率,流式细胞术检测细胞周期变化,Westernblot
检测MAPKs家族成员的表达,明胶酶谱法检测细胞培养上清中MMPs的活性。结果姜黄素呈时间-剂量依赖性抑制
Jurkat细胞增殖,使细胞阻滞于G0/G1期。以6.25、12.50及25.00 μmol/L姜黄素分别处理Jurkat细胞,胞内JNK和P-JNK的表达
均呈浓度依赖性上升（P<0.01）,而ERK1/2及P38 MAPK的表达与阴性对照组相比无明显改变。另细胞培养上清中MMP-2及
MMP-9的活性在各药物处理组中也基本不变。结论姜黄素在（6.25~25.00）μmol/L浓度范围时,可体外诱导Jurkat细胞的凋
亡,阻滞细胞于G0/G1期。其分子机制可能与激活MAPKs家族中的JNk信号通路有关,而与MMPs家族成员的活性无关。
     

FoxM1 shRNA慢病毒载体构建及感染人前列腺癌细胞的稳定细胞株筛选

目的构建携带绿色荧光蛋白（GFP）的人FoxM1 shRNA重组慢病毒载体,并构建筛选FoxM1敲低的人前列腺癌稳定细胞
株,检测FoxM1的表达及对细胞增殖能力的影响。方法设计并合成3对特异性针对人FoxM1基因的shRNA靶序列,构建到
pHBLV-U6-ZsGreen-Puro 慢病毒载体中,测序鉴定载体构建情况,利用慢病毒三质粒系统转染包装293T细胞,荧光显微镜下观
察转染效率。收集到的病毒上清转染人前列腺癌DU-145细胞,Real-time PCR检测各组细胞FoxM1 mRNA水平,经嘌呤霉素
筛选建立FoxM1敲低稳定细胞株,用Western blotting法检测细胞中FoxM1表达,并用MTT法观察稳转细胞的生长增殖活性,
流式细胞术观察稳转细胞凋亡情况,平板克隆实验观察稳转细胞的克隆形成能力。结果经测序鉴定成功构建了3对FoxM1
shRNA慢病毒载体,并进行包装,感染DU-145细胞后Real-time PCR检测结果表明第1对慢病毒载体干扰效率最佳,嘌呤霉素
抗性筛选建立了FoxM1敲低稳定细胞株,荧光显微镜观察感染效率较高,Western blotting结果显示细胞中FoxM1蛋白表达明
显受到抑制,细胞的生长增殖能力明显受限,流式细胞术结果显示FoxM1敲低组细胞凋亡率高于对照组,平板克隆实验结果表
明FoxM1敲低组细胞克隆形成能力下降。结论本研究成功构建了FoxM1 shRNA慢病毒载体,建立了FoxM1敲低稳定前列腺
癌细胞株,抑制细胞内FoxM1的表达能够抑制前列腺癌细胞DU-145的生长增殖、克隆形成能力,并能诱导细胞凋亡。