过氧化物上调人结肠癌细胞血管内皮生长因子的表达

目的　探讨过氧化氢等活性氧类对于大肠癌的进一步发展可能存在的影响。方法　以低浓度过氧化氢 (10 -5mol/L、10 -7mol/L及 10 -9mol/L)作用人结肠癌细胞系LS174T和HCT8共 2 4h ,与人血管内皮细胞系ECV 30 4共培养 ,观察过氧化氢对结肠癌细胞诱导的内皮细胞迁移的影响。以逆转录 聚合酶链反应、酶联免疫吸附分析检测相对定量过氧化氢作用下癌细胞血管内皮生长因子的表达强度 ,以放线菌素D(1 5 μg/ml)抑制癌细胞的转录观察过氧化氢产生作用的机制 ,同时以激光扫描细胞仪直接定量肿瘤细胞NF KappaB活性的变化。结果　外源性低浓度过氧化氢促进两种结肠癌细胞诱导的内皮细胞迁移 ,其中在 10 -5mol/L过氧化氢的作用下 ,LS174T诱导的迁移数为 2 0 2 6±70 2 (个 ) (与对照组比t=3 4 75 1,P =0 0 0 83) ,HCT8诱导的迁移数为 14 5 4± 6 5 3(个 ) (与对照组比t=4 4 183,P =0 0 0 84 ) ,高于同组其余各浓度引起的迁移数目。同时癌细胞血管内皮生长因子的表达也见增强 ,放线菌素D能阻断过氧化氢的这种作用。半衰期分析提示过氧化氢未影响血管内皮生长因子mRNA的稳定性。两种癌细胞NF KappaB的活性在 2 4h的过氧化氢作用后获得提高 ,这与血管内皮生长因子的增强表达情形相仿。结论　过氧化氢在一定程度上     

人结肠癌细胞中血管生成拟态与肿瘤细胞迁移和侵袭能力的关系

目的:观察人结肠癌细胞中血管生成拟态（VM）的形成及密度,阐明VM与细胞的迁移、侵袭能力之间的相关性,为结肠癌的临床治疗提供新的切入点和理论依据。方法:体外三维培养人结肠癌细胞株HCT8、HCT116、LS174T和HT29,在倒置显微镜下观察VM形成情况,计算VM密度;采用划痕实验观察4株细胞的迁移能力;Transwell小室法观察4株细胞的侵袭能力;直线相关分析法分析VM密度与肿瘤细胞迁移距离和穿膜细胞数之间的相关性。结果:HCT8和HCT116细胞在体外三维培养条件下均能够形成VM,其密度分别为（6.75±0.957）和（5.75±0.957）个/视野;LS174T和HT29细胞则不能形成VM。划痕实验,HCT8、HCT116和LS174T细胞在图片上的迁移距离分别为（3.833±0.831）、（3.967±0.975）和（0.817±0.333）cm,HT29细胞无迁移趋势。Transwell小室法,HCT8、HCT116、LS174T和HT29细胞在高倍视野下的穿膜细胞数分别为（71.6±4.506）、（22.4±1.517）、（0.6±0.894）和（0.2±0.447）个。VM密度与迁移距离呈正相关关系（r=0.934,P<0.05）,VM密度和Transwell侵袭实验中的穿膜细胞数亦呈正相关关系（r=0.853,P<0.05）。结论:人结肠癌细胞中存在VM现象,VM可能与结肠癌的迁移、侵袭能力有关联。     

SOX15基因对Caco2结肠癌细胞增殖、凋亡及迁移侵袭的影响

目的 检测SOX15在结肠癌细胞株中表达水平以及对细胞增殖、凋亡、迁移侵袭的影响.方法 应用RT-PCR检测SOX15在Cac02、SW480、HT29、HCT116结肠癌细胞以及正常结肠组织中的表达水平.通过脂质体Lipofectamine 2000将重组质粒pEGFP-N1-SOX15及空质粒pEGFP-N1转染进Caco2细胞,应用RT-PCR及Western blot分别检测SOX15在Caco2细胞中的mRNA以及蛋白表达水平;CCK-8检测SOX15对Caco2细胞活力的影响,克隆形成实验观察细胞增殖变化,Transwell检测SOX15对细胞迁移及侵袭能力的调控,流式细胞仪分析细胞凋亡率.结果 SOX15在Caco2、SW480、HT29、HCT116结肠癌细胞中mRNA及蛋白质表达明显低于其在正常组织中的表达水平(P ＜0.01).pEGFP-N1-SOX15转染组细胞mRNA(1.23 ±0.10)和蛋白(1.13±0.08)表达显著高于pEGFP-N1对照组[(0.54±0.06)、(0.19±0.03),P＜0.01]及空白对照组[(0.51±0.03)、(0.14±0.02),P＜0.01];与空白对照组及pEGFP-N1对照组相比,pEGFP-N1-SOX15转染组可明显抑制细胞增殖及迁移侵袭能力(P＜0.01),并诱导细胞发生凋亡(P＜0.01).结论 SOX15在结肠癌细胞中低表达,过表达SOX15可明显抑制结肠癌细胞Caco2的增殖及迁移、侵袭能力,并促进细胞凋亡.     

全反式维甲酸对结肠癌CW-2和LS174T细胞株增殖的抑制作用研究

目的：研究全反式维甲酸(ATRA)对结肠癌不同增殖能力细胞株生长抑制的可能机制，为ATRA应用于结肠癌的治疗提供可靠依据。方法：应用细胞观察和MTT方法，研究ATRA对结肠癌不同增殖能力细胞株LS174T和CW-2细胞的生长抑制现象。结果：LS174T的生长速度明显比CW-2细胞快。ATRA对体外培养的结肠癌细胞株LSl74T和CW-2细胞的生长有明显抑制和诱导细胞分化作用。结论：ATRA对LS174T和CW-2细胞的生长有抑制作用，抑制细胞增殖的程度与ATRA的浓度有关，ATRA对结肠癌细胞有一定的抑制癌细胞增殖和诱导癌细胞分化作用。     

miR-200a在结直肠癌细胞系中的表达及其对高转移细胞系Lovo的影响

目的检测结肠癌细胞系中miR-200a对高转移细胞系Lovo的影响。方法采用荧光定量PCR法检测6种结肠癌细胞系
HCT116、HT29, LS174T、SW480、SW620和Lovo中miR-200a的表达水平,在高转移细胞系Lovo中瞬时转染miR-200a mimics
使其高表达miR-200a,检测高表达miR-200a后Lovo细胞增殖、迁移、细胞同质黏附能力和凋亡等情况的变化。结果miR-200a
在6种细胞系中存在差异性表达,其中具有高转移潜能的Lovo中表达最低,成瘤但不转移的细胞系HCT116表达最高。在Lovo
细胞高表达miR-200a后,Lovo细胞的增殖和迁移能力明显减弱、细胞同质黏附能力增强且凋亡增加。结论miR-200a在结肠
癌细胞系中表达失常,其作用可能与结肠癌细胞的侵袭和转移有关,高表达miR-200a 能抑制Lovo细胞增殖和迁移、增强细胞
间黏附能力、促进凋亡,其分子机制有待进一步研究。
     

结肠癌细胞核受体PXR表达对CPT-11化疗效果的影响

目的:探讨结肠癌细胞核受体PXR表达的变化对CPT-11化疗效果的影响.方法:用Western blot方法检测PXR蛋白在人结肠癌细胞株LS174T、HT29和HCT116中的表达.通过莱菔硫烷、利福平分别敲低或上调PXR受体的表达,利用MMT或流式细胞术研究其表达下调或上调对细胞增殖和凋亡的影响.结果:3株结肠癌细胞株LS174T、HT29、HCT116中,LS174T细胞的PXR表达水平最高(P=0.000).莱菔硫烷处理后,LS174T细胞中PXR表达明显减弱(P=0.000),CPT-11作用后,细胞增殖明显受到抑制(P=0.013),对CPT-11敏感性增强;同时利用利福平处理后,LS174T细胞中PXR表达增强(P=0.000),CPT-11作用后,细胞增殖明显加速(P=0.019),对CPT-11敏感性降低.结论:结肠癌细胞核受体PXR表达的变化对于CPT-11化疗敏感性具有十分重要的影响,其可能在结肠癌耐药机制中具有重要作用.     

结肠癌中VEGF、NOS的表达及其与微血管形成的关系

目的 :研究血管内皮生长因子 (VEGF) ,Ⅱ型一氧化氮合酶 (iNOS)在结肠癌组织中的表达及其与肿瘤血管形成的关系。方法 :采用免疫组化方法检测 4 0例结肠癌患者手术切除及石蜡包埋标本中VEGF、iNOS的表达 ,并以抗CD34单克隆抗体显示血管内皮细胞 ,根据CD34阳性的血管内皮计数来判定微血管密度 (MVD)。结果 :VEGF在 70 .2 % (2 9/ 4 0 )的结肠癌组织表达 ,iNOS在 82 .5 %(33/ 4 0 )肠癌组织中表达。VEGF阳性的结肠癌组织MVD为 38.2± 1.4 /高倍视野 ,VEGF阴性组织中为 2 2 .1± 2 .2 /高倍视野 ,两者有显著差异 ,(P <0 .0 1)。iNOS阳性肠癌组织MVD为 36 .8± 1.2 /高倍视野 ,iNOS阴性肠癌组织为 30 .2± 2 .4 /高倍视野 ,两者亦有显著差异。 (P <0 .0 1)。结论 :结肠癌组织VEGF、iNOS与MVD形成有密切相关。     

配体活化的过氧化物酶体增殖物激活受体γ诱导结肠癌细胞凋亡

目的:探讨配体活化的过氧化物酶体增殖物激活受体γ(PPARγ)抑制结肠癌细胞生长,及诱导细胞凋亡的作用。方法:逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)及免疫杂交(Western-blot)法测定PPARγ在SW480和LS174T结肠癌细胞中的表达。MTT法检测PPARγ激动剂15脱氧前列腺素J2(15d-PGJ2)和吡格列酮(Pioglita-zone,PGZ)对结肠癌细胞生长的抑制作用。流式细胞术检测细胞凋亡率,电镜观察凋亡细胞形态。免疫细胞化学法检测凋亡相关分子Fas、bcl-XL蛋白表达的变化。结果:PPARγ在SW480和LS174T结肠癌细胞株中均有表达,15d-PGJ2和PGZ对两种细胞的生长均有抑制作用,并呈剂量依赖效应。15d-PGJ2和PGZ显著诱导结肠癌细胞凋亡率增加(P<0.05或P<0.01),电镜显示凋亡细胞特有的形态学改变。免疫细胞化学结果显示,PPARγ激动剂诱导Fas蛋白表达明显增多(P<0.01),bcl-XL蛋白表达显著降低(P<0.01),该改变与凋亡程度呈正相关。结论:PPARγ经配体活化后,通过诱导凋亡抑制结肠癌细胞增殖,该作用可能与促凋亡基因Fas抗原表达上调以及凋亡抑制基因bcl-XL表达下调相关。     

T淋巴瘤侵袭诱导基因在卵巢癌细胞株的表达及其意义

目的研究T淋巴瘤侵袭诱导基因1(Tiam1)在卵巢癌侵袭转移方面的作用.方法 RT-PCR检测Tiam1和Rac1 mRNA的表达;Westem blot法检测Tiam1蛋白质的表达;Boyden小室体外侵袭实验测定癌细胞迁移能力.结果Tiam1 mRNA和蛋白质及Rac1 mRNA在4株卵巢癌细胞A2780、Caov3、Skov3及SW626中均呈中高度表达;癌细胞平均迁移百分数分别为(27.67±3.2)%、(10±1.0)%、(22.67±2.5)%及(47.67±1.52)%.Tiam1及Rac1表达水平与癌细胞迁移潜能间均呈显著性相关,r分别为0.874和0.814,P=0.003和0.042.结论Tiam1/Rac1信号转导通路在卵巢癌细胞的侵袭和转移过程中起重要作用,为卵巢癌的基因治疗提供了新的靶点.     

重组质粒pcDNA3.0-hugl-1转染结直肠癌细胞后生物学效应的观察

目的:观察外源基因hugl-1转染对结直肠癌LS174细胞生物学行为的影响，探讨hugl-1基因与结直肠肿瘤的相关性。方法:构建重组质粒pcDNA3.0-hugl-1，转染至结直肠癌细胞株LS174细胞中，RT-PCR、Western印迹检测转染后hugl-1 mRNA及蛋白的表达;通过软琼脂集落形成试验、划痕修复试验、细胞黏附试验及Transwell细胞侵袭试验等进一步对转染后LS174细胞增殖、黏附、运动和侵袭能力进行分析，并与空质粒载体及未转染LS174细胞作对照。结果:成功构建重组质粒pcDNA3.0-hugl-1;RT-PCR、Western印迹检测结果显示，重组体pcDNA3.0-hugl-1转染细胞株中hugl-1 mRNA及蛋白表达明显高于空载体转染及未转染组细胞(P＜0.05)。重组体转染组细胞克隆形成率(32.23%)与未转染及空载体转染组细胞相比(35.76%、33.91%)无明显改变;重组体转染组LS174细胞克隆的迁移细胞数(82.14±7.62)明显低于空载体组(135.61±3.74)及未转染组细胞(142.37±6.12，P<0.05);转染后120 min，重组体转染组LS174细胞克隆黏附力明显高于空载体组及未转染组(P<0.05);重组体转染组穿膜细胞数(63.7±8.0)明显少于空载体组及未转染组(158.3±16.5、156.3±13.0，P<0.05)。结论:人hugl-1基因表达上调能降低结直肠癌细胞迁移运动和侵袭能力，增加细胞黏附能力,但对肿瘤细胞增殖能力无明显影响；其表达降低可使肿瘤细胞播散。     

RNAi沉默VEGF表达对大肠癌细胞肝转移的影响

目的:研究血管内皮生长因子(vascular endothelial growth factor,VEGF)对大肠癌肝转移的影响。方法:根据VEGF基因mRNA设计合成小干扰RNA,采用荧光实时定量PCR检测VEGF mRNA水平,分别以软琼脂集落培养试验和Boyden模型观察癌细胞锚着不依赖性增殖和癌细胞侵袭能力。以脾切除法建立大肠癌肝转移模型,以不同方法处理的癌细胞接种模型,观察对大肠癌细胞肝转移的影响。结果:转染组VEGF基因mRNA水平明显降低,且呈浓度和时间依赖性。经VEGF siRNA转染处理的癌细胞软琼脂集落形成数和穿膜细胞数明显减少,且呈浓度依赖性(P<0.05,P<0.05)。体内试验发现,对照组10只全部出现大肠癌肝转移灶,而siRNA组仅仅1只出现肝转移,差异具有显著统计学意义(P<0.01)。结论:VEGF基因在大肠癌肝转移中起着重要的作用;以RNAi技术沉默VEGF基因表达,可抑制大肠癌细胞肝转移。     

苍术素对人结肠癌LS174T细胞增殖的影响

目的: 探讨苍术素(atractylodin)对人结肠腺癌LS174T细胞增殖的影响。方法: 将人结肠癌LS174T细胞分为空白对照组、无水乙醇对照组、苍术素处理组(10,20,40,80 mg/L)。将梯次浓度苍术素作用于LS174T细胞后,分别培养24、48、72、96 h;采用倒置显微镜观察细胞形态变化;MTT法检测细胞生长状况;流式细胞仪检测细胞周期变化;液相芯片法检测细胞因子分泌的改变。结果： 作用24 h后,20,40,80 mg/L组苍术素抑制LS174T细胞增殖,且抑制作用呈时间和浓度依赖性;流式细胞术结果可见经苍术素处理后,G0/G1期细胞比例增加;液相芯片检测结果显示苍术素可抑制LS174T细胞分泌IL-6和IL-7。结论： 苍术素抑制LS174T细胞增殖,其机制可能是影响细胞因子分泌和阻断细胞周期。     

人结肠癌LS174T/5-Fu多药耐药细胞系的建立

目的建立人结肠癌多药耐药细胞系,并研究其生物学特性。方法以5-氟尿嘧啶(5-Fu)为诱导药物,LS174T细胞株为研究对象,利用浓度递增诱导法,建立LS174T/5-Fu多药耐药细胞系。MTT法测定药物敏感性,光镜、细胞计数法、流式细胞仪及RT-PCR等方法观察其生物学特征及多药耐药相关基因(MRP)mRNA表达。结果历时6个月成功建立人结肠癌多药耐药细胞系LS174T/5-Fu,对5-Fu耐药指数为40.24,且与羟基喜树碱、顺铂、依托泊苷和脱氧氟尿苷等多种化疗药物有不同程度的交叉耐药性;细胞形态发生改变;倍增时间较亲代细胞延长;细胞周期发现其G1和S期细胞增加,G2期细胞减少;MRP mRNA表达增高。结论LS174T/5-Fu细胞是一种可靠的人结肠癌多药耐药细胞系,该细胞系的建立为深入研究5-Fu诱导人结肠癌多药耐药的发生机制奠定了基础。     

华蟾素抑制结肠癌细胞增殖转移的实验研究

目的:观察华蟾素对结肠癌细胞HCT116细胞增殖、迁移的影响,探讨其可能的作用机制。方法:常规体外培养结肠癌细胞HCT116细胞系,采用CCK-8法检测不同浓度华蟾素作用不同时间对HCT116细胞增殖的抑制作用,细胞划痕实验和Transwell小室法检测华蟾素对细胞迁移能力的影响,蛋白质印迹法(Western blot)检测细胞基质金属蛋白酶(MMP)-9、MMP-2、钙黏蛋白(E-Cadherin)的表达水平。结果:CCK-8法检测结果表明,华蟾素对HCT116细胞的生长有明显抑制作用,其抑制作用随药物浓度和作用时间的增加而增强(P0.05);细胞划痕实验和Transwell小室法结果显示,随华蟾素药物浓度的增加,HCT116细胞迁移能力下降(P0.05);Western blot结果表明,华蟾素能够明显抑制HCT116细胞MMP-9的蛋白表达并上调E-Cadherin的蛋白表达(P0.01),但对MMP-2蛋白的表达无显著影响(P0.05)。结论:华蟾素能够抑制人结肠癌细胞的增殖和转移,其机制可能与其抑制MMP-9和上调E-Cadherin的蛋白表达有关。     

脂氧合酶抑制剂NDGA对HT-29结肠癌细胞转移影响的研究

12 3.宁津县中医院外科，山东 宁津 253400）目的：探讨脂氧合酶抑制剂去甲二氢愈创木酸（nordihydroguaiaretic acid，NDGA）在体外对结肠癌HT 29细胞株转移的影响。方法：应用不同浓度的NDGA处理HT 29结肠癌细胞，RT PCR检测血管内皮生长因子（vascular endothelial growth factor，VEGF）,流式细胞仪检测CD44v6表达的变化；扫描电镜观察癌细胞表面微绒毛的变化。结果：经过NDGA作用后，CD44v6、VEGF随着药物浓度的增大，表达逐步下调。扫描电镜检测NDGA处理癌细胞48?h后，癌细胞微绒毛卷曲成小球状。结论：NDGA能够抑制HT 29结肠癌细胞转移。     

二甲双胍通过mTOR信号通路促进结肠癌细胞凋亡的实验研究

目的 探讨二甲双胍对结肠癌细胞增殖以及凋亡的作用及其潜在机制。 方法 将HCT8细胞随机分为4组:对照组和二甲双胍组(5、10以及20 mM),对照组不接受任何干预措施。MTT法观察4组细胞增殖及对结肠癌细胞的抑制率,AnnexinV-FITC细胞凋亡检测试剂盒观察细胞凋亡情况,同时应用PCR以及Western-blot检测mTOR通路相关基因与蛋白的表达量。 结果 与对照组比较,不同浓度二甲双胍对HCT8均有抑制作用,并且呈剂量依赖性,20 mM二甲双胍对结肠癌HCT8细胞抑制作用最明显,与5、10 mM以及对照组差异均有统计学意义(P<0.05)。另外,随着时间的增加,二甲双胍对结肠癌HCT8的抑制作用增加,72 h后抑制率与24 h以及48 h抑制率差异均有统计学意义(P<0.05)。凋亡结果显示5、10以及20 mM二甲双胍作用于结肠癌HCT8细胞后凋亡率分别是(3.16±0.16)%、(5.12±0.39)%以及(6.11±0.15)%,均高于对照组凋亡率(1.5±0.28)%,各组之间凋亡率差异均有统计学意义(P<0.05)。二甲双胍干预后结肠癌细胞4EBP1、S6K1以及mTOR的mRNA表达量以及蛋白表达量均低于对照组,差异有统计学意义(P<0.05)。 结论 二甲双胍通过抑制mTOR信号通路抑制结肠癌细胞增殖以及促进结肠癌细胞凋亡。      

藤龙补中汤对结肠癌细胞LS174T增殖和凋亡的影响

目的：观察藤龙补中汤对结肠癌细胞LS174T增殖和凋亡的影响。 方法：用不同浓度藤龙补中汤处理人结肠癌细胞LS174T和人结肠上皮细胞CRL-1790。用细胞计数检测试剂盒检测细胞增殖,平板法检测细胞克隆形成数目并计算抑制率,流式细胞术检测细胞周期和凋亡,比色法检测细胞中半胱氨酸天冬氨酸特异性蛋白酶3（caspase-3）、caspase-8和caspase-9的活性。 结果：与对照组比较,藤龙补中汤对人结肠上皮细胞CRL-1790增殖无明显影响;1 mg/mL藤龙补中汤作用72 h,2 mg/mL藤龙补中汤作用48、72 h,5~20 mg/mL藤龙补中汤作用24~72 h均可显著抑制LS174T细胞增殖;1~20 mg/mL藤龙补中汤可显著抑制LS174T细胞克隆形成;5~20 mg/mL藤龙补中汤可诱导LS174T细胞凋亡,使LS174T细胞阻滞在G0/G1期,增强LS174T细胞caspase-3、caspase-8和caspase-9活性。 结论：藤龙补中汤可抑制结肠癌LS174T细胞增殖,阻滞LS174T细胞于G0/G1期,促进LS174T细胞凋亡;藤龙补中汤促LS174T细胞凋亡作用可能与增加caspase-3、caspase-8、caspase-9活性相关。