神经干细胞与嗅鞘细胞移植对脊髓全横断大鼠后肢运动功能的影响

目的探讨神经干细胞（NSCs）与嗅鞘细胞（OECs）移植对脊髓全横断大鼠后肢运动功能的影响．方法SD大鼠行T11脊髓全横断术后，随机分为NSCs移植组、OECs移植组、联合移植组和对照组．术后将取自绿色荧光蛋白（GFP）转基因胚胎小鼠海马和新生小鼠嗅球的、经培养鉴定后的NSCs和OECs，以明胶海绵做载体分别或联合移植到各移植组动物脊髓损伤处，对照组不移植细胞，用BBB评分法评价1～8周大鼠后肢运动功能恢复的程度．8周后移植各组动物行左心室主动脉内4％多聚甲醛灌注，取横断处上下各约1mL脊髓，连续冰冻切片（片厚20tam），置于荧光显微镜下观察切片中有无绿色荧光细胞，确定NSCs及OECs的存活情况．结果NSCs及OECs细胞在移植脊髓损伤后能存活，并向周围迁移；术后3和4周末，NSCs组、OECs组和联合移植组大鼠运动功能均较对照组有明显改善（P〈0．05）；且3周时，联合移植组和OECs组比NSCs组后肢运动功能变化显著（P〈0．05）；而联合移植组和OECs组比较后肢运动功能未见显著差别（P〉0．05）．绪论NSCs、OECs和联合移植在早期均可促进脊髓全横断大鼠运动功能恢复；OECs组、联合移植组效果均优于NSCs组；联合移植对大鼠运动功能恢复在早期没有显现最佳作用．     

嗅鞘细胞移植联合应用GDNF对大鼠脊髓损伤的治疗作用

目的：研究嗅鞘细胞（OECs)移植并联合应用胶质细胞源性神经营养因了（GDNF）对脊髓损伤的保护和促进再生作用。方法；建立成年SD大鼠脊髓T8半横断损伤模型，将体外培养纯化的OECs植入脊髓损伤处，同时局部应用GDNF，采用斜板试验和BBB联合功能评分观察大鼠运动功能恢复情况，并通过辣根过氧化物酶逆行示踪技术评价OECs和GDNF对神经元存活和纤维再生的影响。结果：（1）OECs和GDNF联合应用时对皮质和红核神经元有逆行性保护作用；可促进脊髓下行传导束再生，肢体运动功能恢复，（2）OECs和GDNF联合应用组对脊髓损伤的修复作用最强，高于GDNF或OECs单用组。结论：联合应用GDNF和OECs在脊髓损伤修复治疗中具有协同作用。     

NT-3基因修饰的嗅鞘细胞移植对自身免疫性脑脊髓炎大鼠神经修复及功能恢复的影响

目的 探讨神经营养因子-3(NT-3)基因修饰的嗅鞘细胞(OECs)对自身免疫性脑脊髓炎(EAE)大鼠神经修复及运动功能恢复的促进作用.方法 构建Lewis大鼠EAE模型,采用完全随机化法分为对照组、OECs组及OECs-NT-3组,每组20只,分别将生理盐水、OECs、OECs-NT-3移植入大鼠侧脑室内,每日进行神经功能缺损评分(NDS)评估大鼠肢体功能恢复情况,应用免疫组织化学检测及辣根过氧化物酶(HRP)逆行示踪技术对EAE神经纤维修复进行形态学观察.结果 细胞移植后,OECs-NT-3组大鼠神经功能评分明显低于OECs组,差异有统计学意义(P＜0.05);第28天,大鼠体内OECs-NT-3存活数量较多,可向病灶远端扩散、迁徙;OECs-NT-3组单位面积内的神经纤维数目[第28天,(38.8±3.4)个]明显高于OECs组[第28天,(32.5±2.8)个](P＜0.05);OECs-NT-3组HRP标记的神经元数目多于OECs组,差异有统计学意义(P＜0.01).结论 NT-3基因修饰的OECs可在EAE大鼠体内存活、迁移,并可促进神经纤维再生,减轻皮质神经元的逆行性损伤,改善EAE大鼠的运动功能.     

神经干细胞联合神经营养因子-3基因修饰的嗅鞘细胞移植对创伤性脑损伤大鼠神经功能的影响及机制

目的 探讨神经干细胞(NSCs)与神经营养因子-3(NT-3)基因修饰的嗅鞘细胞(OECs)联合移植对大鼠创伤性颅脑损伤(TBI)后神经功能的影响及机制。方法 将100只Sprague Dawley雄性大鼠按照随机数字表法分为假手术组、模型组、NSCs组、OECs组、联合治疗组，每组20只。模型组、NSCs组、OECs组、联合治疗组大鼠采用改良Feeney法构建TBI模型。造模1 d后，将不同的试剂注入各组大鼠损伤灶进行细胞移植，模型组大鼠注入10μL生理盐水，OECs组大鼠注入10μL NT-3基因修饰的OECs悬液，NSCs组大鼠注入10μL NSCs悬液，联合治疗组大鼠注入5μL NT-3基因修饰的OECs细胞悬液和5μL NSCs悬液，注射完成后继续常规饲养。分别于移植后1、7、14、28 d,各组随机取10只大鼠，采用改良神经功能缺损评分(mNSS)评估各组大鼠的神经功能缺损程度。移植后7 d,采用酶联免疫吸附试验法检测大鼠脑组织中白细胞介素(IL)-6、IL-1β及神经生长因子(NGF)水平。移植后28 d,采用苏木精-伊红染色法观察大鼠脑组织病理学改变，采用免疫组织化学染...     

口服髓鞘素对实验性变态反应性脑脊髓炎的抑制作用

目的 探讨口服髓鞘素诱导免疫耐受对实验性变态反应性脑脊髓炎（EAE）发病及组织病理变化的影响。方法 以Wistar大鼠为EAE动物模型,观察口服耐受与直接免疫组发情况及病变组织炎症细胞浸润的差别。结果 口服耐受组发病率明显降低,起病时间相对延迟,症状较轻,病理组织中炎性细胞浸润数明显减少。结论 口服抗原可有效地抑制实验性变态反应性脑脊髓炎的发病。     

嗅鞘细胞移植治疗脊髓损伤的研究进展

目的帮助广大神经外科医生系统地了解嗅鞘细胞(olfactory ensheathing cells,OECs)和OECs移植治疗脊髓损伤(Spinal cord injury,SCI)的实验性研究和临床应用的最新进展,以提高对SCI治疗策略和技术的全新认识。方法结合近年来OECs的研究、OECs移植治疗SCI的相关文献资料,分别介绍了嗅鞘细胞的生物学特性、OECs移植治疗SCI的可能机制、嗅黏膜嗅鞘细胞的研究、OECs联合移植的研究、脊髓损伤OECs移植时机的选择和OECs移植治疗SCI的临床研究。结果 OECs能促进轴突再生、营养受损神经和血管并且使轴突再髓鞘化,OECs移植到损伤的脊髓会改善其功能。结论 OECs移植治疗SCI的实验研究和早期临床应用均已证实OECs移植治疗SCI的有效性,但临床应用长期随访机制尚不够健全,缺乏系统的、客观的远期疗效评价体系,其作用的具体机制有待进一步明了。     

神经干细胞和嗅鞘细胞联合移植改善脑出血大鼠的运动功能

研究神经干细胞（NSCs）和嗅鞘细胞（OECs）联合移植对脑出血大鼠运动功能的改善效果。制作Wistar大鼠尾状核脑出血模型，3d后，分别将取材于Wistar大鼠胚胎的NSCs和OECs立体定向注入血肿中（联合移植组），并设NSCs和OECs单独移植组（NSCs组，OECs组）和生理盐水对照组，术前及术后3、7、14、30d进行神经功能缺损评分，同时对移植部位组织进行免疫组化染色观察。结果：各组大鼠术前神经功能缺损评分均〉2分，术后包括对照组在内的4个组的神经功能缺损评分均呈下降趋势，对照组只是术后30d的评分较第3d明显减低（P〈0．05），而NSCs组、OECs组及联合移植组在术后14、30d时的评分即较术后3d时明显减低（均P〈0．05），NSCs组及OECs组仅在术后30d时的评分明显低于对照组（P〈0．05）．而联合移植组在术后14d时的评分即较对照组明显减低（P〈0．05）。免疫组化染色显示，     

NSCs与OECs联合移植改善TBI大鼠运动功能

目的:探讨NSCs与OECs联合移植对TBI大鼠运动功能修复的作用。方法:85只SD成年大鼠采用经典的Feeney氏法自由落体撞击法造成TBI运动功能损伤。剔除死亡及不合格的10只,余75只大鼠随机分为损伤对照组(A组)、NSCs移植组(B组)、NSCs与OECs联合移植组(C组)。各组均咬开骨窗,显露硬膜,于造模后1、7、14、25、30天进行神经功能评分并取材行HE及免疫组化染色,比较各组行为学评分及组织染色结果。结果:各组25只大鼠均进入分析,B组、C组7天、14天、25天、30天较A组有显著差异性(P<0.05),C组在25天、30天与B组比较有显著差异性(P<0.05)。结论:NSCs联合OECs移植能改善TBI大鼠运动功能,且治疗效果优于NSCs移植。     

嗅成鞘细胞移植治疗脑梗塞大鼠的实验研究

目的探讨嗅成鞘细胞移植在皮层梗塞灶中的治疗价值。方法从成年SD大鼠嗅球取材,差异贴壁法纯化培养,移植时Hoechst33342标记;按双肾双夹方法复制RHRSP模型,RHRSP术后10周,移植组和对照组制作MCAO模型,假手术组不电凝大脑中动脉。选择皮层梗塞10d后的大鼠,在立体定向架上将Hoechst标记的嗅成鞘细胞植入皮层梗塞灶周围,对照治疗组则注入达乐伯克改良培养基,于移植前及移植术后第2周、第6周进行行为、触觉功能检查并从各组随机抽取7只大鼠处死,取大脑,制作冰冻切片用于荧光观察及生长相关蛋白-43及神经中丝免疫组化染色。结果移植后的OECs沿着胼胝体大量向梗塞灶及对侧皮层迁移;移植组和对照组大鼠均出现功能恢复,移植组大鼠运动、感觉功能恢复优于对照组(P<0.05);移植组和对照组都有神经纤维向梗塞中心区生长,移植组的神经纤维数量明显多于对照组(P<0.01);在移植后的第2周、第6周,移植组胼胝体区及梗塞灶相应的对侧皮层区出现GAP-43表达局部升高,其阳性信号值明显高于对照组(P<0.01);梗塞灶周围再生神经纤维的数量与运动功能评分之间存在正相关(r=0.93),P<0.01。结论OECs植入体内可以长时间存活,并有自我迁移能力;OECs移植具有明显促进脑梗塞后神经纤维再生和功能恢复的作用,胼胝体及梗塞灶对侧层的轴突再生也是移植组大鼠功能恢复的可能机制。     

嗅粘膜源性嗅鞘细胞移植联合NGF对脊髓损伤的修复

目的：探讨大鼠嗅粘膜嗅鞘细胞（olfactory ensheathing cells, OECs）移植联合神经生长因子(nerve growth factor, NGF)修复脊髓急性损伤的可行性和疗效,并观察二者的协同作用。方法：自成年Wistar大鼠嗅粘膜取材,采用差速贴壁和阿糖胞苷抑制纯化相结合的方法培养纯化嗅鞘细胞。建立大鼠脊髓半切模型,并随机分成对照组（A组）,OECs组（B组）和OECs＋NGF组（C组）,在不同时段进行肢体活动的BBB评分。8周后取脊髓标本进行组织学检查,评价对脊髓损伤的修复作用。结果：B组和C组2周后BBB评分高于A组（P＜0.05）,C组自4周后明显优于A组和B组（P＜0.01）。组织学检查表明,C组可明显促进轴突再生。结论:OECs联合NGF具有良好的脊髓损伤修复作用,且二者具有明显的协同作用。     

来氟米特与他克莫司合用抑制大鼠心脏移植术后IL-2的产生

目的评价他克莫司和来氟米特联合应用对大鼠心脏移植排斥反应及IL-2产生的抑制作用。方法采用套管法大鼠心脏颈部异位移植模型，将心脏移植后的大鼠随机分为对照组，他克莫司组，来氟米特组，他克莫司和来氟米特联合用药组，观察各组供心存活时间并检测血清IL-2水平。结果供心存活时间联合用药组明显长于单独用药组（P〈0．05）。术后7d，外周血IL-2水平联合用药纽明显低于单独用药组（P〈0．05）。结论他克莫司和来氟米特联合应用对大鼠心脏移植排斥及IL-2产生的抑制作用优于相同剂量下的单一用药。     

原发性高血压患者的血浆生长素水平变化

目的 探讨原发性高血压患者(EH)的血浆生长素水平(Ghrelin)的变化.方法 分为EH组和健康对照组.EH组又分为1级、2级、3级3个亚组,测定两组血浆Ghrelin值.结果 与对照组比较,EH组血浆Ghrelin水平下降(P<0.01);与1级EH组比较,2、3级EH组血浆Ghrelin水平更低(P<0.05),但2、3级EH组之间差异无显著性(P>0.05).结论 EH患者血浆Ghrelin水平降低,提示Ghrelin与EH的发生、发展过程有关,有可能作为高血压发病的一个独立危险因素.     

嗅鞘细胞移植促进大鼠坐骨神经的再生

目的:研究嗅鞘细胞(OECs)移植对大鼠坐骨神经再生的作用.方法:30只SD大鼠随机分为OECs组和对照组,每组15只; 切除3 mm右侧坐骨神经并用预先充填可吸收明胶的硅胶管套接修复,OECs组和对照组硅胶管内分别给予体外培养纯化的OECs和生理盐水; 术后4、8和12周分别行电生理和组织学检查.结果:术后4、8和12周,OECs组和对照组修复神经均有不同程度再生,OECs组运动神经传导速度、神经肌肉动作电位幅度、有髓神经纤维数目和直径均明显高于对照组(P<0.05).结论:外源性OECs移植能明显促进大鼠坐骨神经再生.     

经冠脉移植自体骨髓单个核细胞对犬心肌梗死后心功能及血管生成的影响

【目的】观察急性心肌梗死犬经冠脉移植自体骨髓单个核细胞后对心功能及血管生成的影响。【方法】结扎冠状动脉前降支建立犬急性心肌梗死模型,CM—DiI标记体外分离得到的骨髓单个核细胞bonemarrowmononuclearcell,BM—MNCs）,分为移植组（n=10）和对照组（n=6）,于心肌梗死后2h分别经冠状动脉内移植骨髓单个核细胞和生理盐水,冠状动脉结扎后2h及6周时分别测定血流动力学指标（心排m量、左心室收缩压、左心室舒张末压）。移植后6周,观察CM—Dil标记的BM—MNCs在心肌内的分布,检测心肌组织不同部位的毛细血管密度。【结果】经冠脉自体骨髓单个核细胞移植后6周,梗死边缘区和梗死中心区均可见CM—DiI标记的细胞;血流动力学指标显示,移植组左室舒张末压比对照组显著降低[（5．1±3．07）mmHgVS（11．67±3．42）mmHg,P〈0．01,1mmHg=0．1333kPa],移植组心输出量比对照组显著增加[（3．1±0．89）L／minvs（2．39±0．43）L／rain,P〈0．05];BM—MNCs移植后6周,移植组有明显的血管新生,移植组梗死边缘区血管数量明显高于对照组[（19．32±2．47）vs（9．47±1．28）,P〈0．01],梗死区血管数量移植组与对照组无显著差异[（3．44±0．51）VS（3．07±03）,P〉0．05]。【结论】经冠脉移植自体骨髓单个核细胞后,可改善急性心肌梗死后心功能,促进梗死边缘区血管生成。     

圆韧带联合骶韧带悬吊预防子宫切除术后盆底功能障碍的效果

目的：探讨圆韧带联合骶韧带悬吊预防子宫切除术后盆底功能障碍的效果及子宫切除术后发生盆底功能障碍的危险因素。方法：选取100例因子宫肌瘤、子宫腺肌病需行全子宫切除术的病人作为研究对象,随机分为观察组与对照组,各50例。对照组行常规腹腔镜全子宫切除术,观察组病人在对照组基础上行圆韧带联合骶韧带悬吊。比较2组病人手术情况(手术时间及出血量)、盆底功能障碍相关情况[盆腔器官脱垂定量系统(POP-Q)评分、盆底疾病生活影响问卷简易版7(PFIQ-7)评分及盆底器官脱垂/盆底器官脱垂/尿失禁对性功能影响的调查问卷(PISQ-12)评分]。分析子宫切除术后发生盆底功能障碍的危险因素和保护因素。结果：2组病人手术出血量及手术并发症差异均无统计学意义(P>0.05),观察组手术时间长于对照组(P<0.05)。2组术后6个月POPQ评分差异无统计学意义(P>0.05);观察组术后12个月Bb点(阴道前壁脱出距处女膜最远点)、C点(前穹隆或阴道残端距处女膜点)和Bp点(阴道后壁脱出距处女膜最远点)POPQ评分均明显高于对照组(P<0.01)。2组术前PFIQ-7评分差异无统计学意义(...     

~(125)I放射性粒子术中植入联合吉西他滨治疗局部进展期胰腺癌的临床研究

目的探讨放射性125I粒子植入联合吉西他滨治疗进展期胰腺癌的临床价值。方法2001年8月～2006年9月,64例局部进展期胰腺癌患者随机分成两组:A组32例(125I粒子 吉西他滨),B组32例(吉西他滨),分析放射性125I粒子永久植入联合吉西他滨治疗局部进展期胰腺癌的疗效,毒副反应及生存率。结果A,B两组CR PR MR SD分别为81.25%(26/32),71.88%(23/32),两组比较差异有显著性(P<0.05)。两组毒性反应率和并发症发生率基本没有差异(P>0.05)。术后6个月和12个月生存率A组为75.0%,37.5%,明显高于B组的40.0%,12.5%(P<0.05)。结论放射性125I粒子植入联合吉西他滨化疗对进展期胰腺癌能提高患者生存率,是一种安全有效的治疗手段。     

针刺百会、大椎穴对局灶性脑缺血大鼠皮层脑源性神经营养因子表达的影响

[目的]观察电针对不同时间段局灶性脑缺血大鼠缺血区皮层脑源性神经营养因子(BDNF)的影响。[方法]SD大鼠36只,随机分为6组,分别为假手术2周与5周组、缺血2周与5周模型组、电针2周与5周组;除假手术组外.其他动物均采用热凝闭大鼠大脑中动脉法复制局灶性脑缺血模型,观察缺血2周和5周后缺血区皮层BDNF的变化规律及针刺对其影响。[结果]假手术组大鼠相应区域仅见少量BDNF阳性细胞,且强度较弱;脑缺血2周及5周组大鼠缺血区BDNF的免疫阳性细胞数量比假手术组增多(P<0.01),但脑缺血2周组与5周组大鼠缺血区脑片比较,BDNF阳性细胞数量无显著性差异(P>0.05);电针2周组与5周组脑片中免疫阳性细胞数量增加,与模型组比较有显著性差异(P<0.01),但随着时间的推移,此表达呈下降趋势。[结论]电针可以通过提高BDNF在缺血区周围皮层的表达,保护缺血性脑损伤,并可能与大脑可塑性的形成有一定的关系。     

嗅鞘细胞移植后通过分泌MMP-3在RCS-P~+大鼠视网膜中迁移

目的初步研究将嗅鞘细胞(olfactory ensheathing cells,OECs)及嗅球成纤维细胞(olfactory nerve fibroblasts,ONF)混合细胞移植到皇家外科学院大鼠(Royal College of Surgeon rat,RCS-P+rat)的视网膜下腔后,OECs/ONF迁移进入视网膜的机制。方法离体实验中,取成年RCS-rdy+-P+大鼠的嗅球培养OECs/ONF至14 d行OECs/ONF的基质金属蛋白酶-3(matrix-metalloproteinase-3,MMP-3)细胞免疫荧光染色。收集5、8、11、14 d OECs/ONF培养液上清,与普通培养液超滤后进行酶联免疫吸附实验(ELISA),检测MMP-3的含量变化。在体实验中,制作40只RCS-P+大鼠单眼视网膜下腔细胞移植,并以对侧眼作为伪手术组以及相同天龄未处理大鼠作为对照组。术后7、14、21、28 d用ELISA法检测细胞移植组、伪手术组及未处理组大鼠视网膜中MMP-3含量的变化。将携带绿色荧光的慢病毒感染后的OECs/ONF移植到4只RCS-P+大鼠视网膜下腔,激光共聚焦显微镜观察移植后7、14、21 d及28 d OECs/ONF在视网膜中迁移情况。结果离体实验中,培养14 d时OECs/ONF的MMP-3免疫细胞化学染色阳性。OECs/ONF培养液上清MMP-3含量分别为5 d(2.83±0.80)、8 d(6.34±1.12)、11 d(11.65±1.35)、14 d(19.11±2.11),明显高于普通D/F12+10%FBS培养液(1.65±0.44)(P<0.01);在体实验中,移植后21 d及28 d,OECs/ONF移植组视网膜MMP-3的含量[(1.80±0.29)、(3.96±0.51)]明显高于伪手术组[(1.17±0.20)、(1.83±0.26)]和未处理组[(1.19±0.17)、(1.92±0.25)](P<0.01),伪手术组与未处理组之间无明显统计学差异(P>0.05)。激光共聚焦显微镜观察可见移植后7～28 d,OECs/ONF在视网膜中迁移,最远能够达到神经节细胞层。结论 OECs/ONF移植到RCS视网膜下腔后,可能通过分泌MMP-3在RCS-P+大鼠视网膜中迁移。     

双波混合激光消融术联合围扎悬吊治疗Ⅱ～Ⅲ度内痔

目的观察双波混合激光消融术联合围扎悬吊法治疗Ⅱ~Ⅲ度内痔的临床疗效。方法将60例Ⅱ~Ⅲ度内痔患者,随机分为观察组和对照组,各30例。观察组采用双波混合激光消融术联合围扎悬吊法治疗,对照组采用传统的内痔结扎术治疗,比较2组临床有效性及安全性。结果观察组在术后第1~3天VAS评分均低于对照组(P0.05);术后第4~5天2组VAS评分无明显的差异(P0.05);观察组术后尿潴留、肛门水肿、肛门出血的发生率低于对照组(P0.05);观察组及对照组临床有效率分别为96.67%、93.33%(P0.05)。结论双波混合激光消融术联合围扎悬吊法治疗Ⅱ~Ⅲ度内痔的临床疗效与传统的内痔结扎术疗效相当,但前者具有术后疼痛小、并发症少、恢复速度快的优势。