H_2O_2预处理对多巴胺损伤PC12细胞的适应性保护作用

目的探讨H2O2预处理对多巴胺(dopamine,DA)损伤PC12细胞的适应性保护作用。方法透射电镜、Hoechst染色和PI染色流式细胞仪(flowcytometry,FCM)观测细胞凋亡,MTT代谢率法观察细胞线粒体氧化磷酸化功能状态,Rh123染色FCM检测细胞线粒体膜电位(△Ψm)。结果50μmol·L-1DA作用PC12细胞24h后,电镜可观察到PC12细胞体积缩小,核染色质浓缩、边集,核碎裂等细胞凋亡征象。Hoechst33258染色显示,DA(50μmol·L-1)作用24h后,经H2O2预处理的PC12细胞的凋亡量较未预处理的明显减少。50、100和200μmol·L-1DA作用24h后,PC12细胞的凋亡率分别为(20.9±1.8)%、(40.5±6.4)%、(88.1±3.9)%,而经H2O2预处理的PC12细胞的凋亡率分别下降至(4.9±2.9)%、(12.0±1.4)%、(61.5±3.4)%(P<0.01)。20、40、80μmol·L-1DA作用细胞24h后,细胞MTT代谢率明显下降,而H2O2预处理抑制20、40、80μmol·L-1DA引起的PC12细胞MTT代谢率的下降(P<0.01)。50μmol·L-1DA作用24h后,PC12细胞的平均Rh123荧光强度由正常对照的(46.87±0.33)下降至(4.39±2.93),而经H2O2预处理的PC12细胞,其平均Rh123荧光强度仅下降到(10.50±0.28),下降程度明显减轻(P<0.01)。结论H2O2预处理对DA损伤PC12细胞具有适应性保护作用。     

H_2O_2预处理对NF-κB的激活作用特征及其细胞保护作用

目的探讨H2O2预处理对核转录因子-κB(NF-κB)的激活作用,并观察NF-κB在H2O2预处理诱导的适应性细胞保护中的作用。方法在PC12细胞建立H2O2预处理对抗高浓度H2O2诱导细胞凋亡的实验模型,分组如下:(1)空白对照组;(2)预处理组;(3)损伤组;(4)预处理+损伤组;(5)TPCK+预处理+损伤组;(6)TPCK组。应用碘化丙啶(PI)染色流式细胞术检测细胞凋亡率,甲氮甲唑蓝(MTT)法检测细胞存活率,免疫印迹法(Westernblot)测定NF-κB的表达水平,电泳迁移实验(EMSA)检测NF-κBDNA结合活性。结果H2O2预处理PC12细胞上调NF-κBp65的表达,增强DNA结合活性,并能明显地增加高浓度H2O2引起的NF-κBp65的表达(与损伤组比较,P<0.01)。H2O2预处理能使PC12细胞对抗高浓度H2O2引起的损伤,提高细胞存活率,降低细胞凋亡率(与损伤组比较,P<0.01)。NF-κB抑制剂甲苯磺酰苯丙氨酰氯甲酮(TPCK)可拮抗H2O2预处理对NF-κBp65的激活作用,并减弱H2O2预处理诱导的适应性细胞保护作用(与预处理+损伤组比较,P<0.01)。结论H2O2预处理对NF-κB的激活作用可能是其引起的适应性细胞保护机制之一。     

卷柏总黄酮对H_2O_2所致PC12细胞损伤的保护作用

目的观察卷柏总黄酮对H2O2所致PC12细胞损伤的保护作用。方法用H2O2损伤PC12细胞建立氧化应激损伤模型,MTT法检测细胞存活率;分光光度法测定LDH漏出量,检测细胞损伤程度;硫代巴比妥酸法测定MDA含量;黄嘌呤氧化酶法测定SOD活性。结果卷柏总黄酮能明显改善H2O2诱导的细胞损伤,与模型组相比,可使细胞存活率升高,降低LDH漏出量,降低MDA含量,提高SOD活性。结论卷柏总黄酮对H2O2所致PC12细胞损伤具有明显的保护作用。     

西洋参皂苷对H_2O_2致PC12细胞损伤的保护作用

目的研究西洋参皂苷对H2O2致PC12细胞损伤的保护作用。方法建立H2O2诱导PC12细胞损伤模型,化学比色法测定细胞培养液和细胞内丙二醛(MDA)含量及超氧化物歧化酶活性,并在显微镜下观察其形态学特征。结果200μmoL/L H2O2诱导PC12细胞,10 h呈明显损伤作用,250μg/mL西洋参皂苷对H2O2致PC12损伤的细胞有增殖作用。结论西洋参皂苷对H2O2致PC12细胞损伤具有保护作用,其作用机制可能与提高PC12细胞的抗氧能力有关。     

BDNF基因修饰淋巴细胞的蛋白表达及对PC12细胞的增殖和H_2O_2损伤的影响

目的　研究脑源性神经营养因子 (brain derivedneu rotrophicfactor,BDNF)基因修饰淋巴细胞的蛋白表达及对PC12细胞的增殖和H2 O2 损伤的影响。方法　采用Lipofec tAMINE将重组大鼠BDNFcDNA导入PA317细胞 ,获取高滴度的病毒上清转染大鼠淋巴细胞 ,流式细胞仪 (FCM)和免疫组化检测BDNF的表达 ,MTT法检测PC12细胞增殖 ,PI染色流式细胞仪 (FCM)检测PC12细胞凋亡。结果　BDNF基因修饰的大鼠淋巴细胞高表达BDNF蛋白 ,其培养上清可促进PC12细胞增殖并能抑制H2 O2 诱导PC12细胞凋亡。结论　BDNF基因修饰淋巴细胞能高表达和分泌具有生物活性的BDNF。     

浒苔多糖对H_2O_2诱导的PC12细胞损伤的保护作用

目的研究浒苔多糖对H2O2诱导的PC12细胞损伤的保护作用。方法用水提法提取浒苔多糖,除蛋白后用DE-52离子交换柱进行纯化。用MTT法检测纯化的浒苔多糖对H2O2诱导的PC12细胞损伤的保护作用。结果纯化的浒苔多糖能明显改善H2O2导致的细胞损伤,与H2O2处理组相比,浒苔多糖100,200和300μg/mL组可使细胞存活率升高。结论浒苔多糖对H2O2诱导的PC12细胞损伤具有明显的保护作用。     

ERK1/2介导H_2O_2预处理对抗氧化应激损伤的保护作用

目的探讨H2O2预处理能否激活ERK1/2及ERK1/2在H2O2预处理引起的适应性细胞保护中的作用。方法在PC12细胞,建立H2O2预处理对抗高浓度H2O2诱导细胞损伤的实验模型。应用甲氮甲唑蓝(MTT)法检测细胞存活率;碘化丙啶(PI)染色流式细胞术检测细胞凋亡率;免疫印迹法(Western blot)测定ERK1/2蛋白的表达及procaspase-3的表达。结果100μmol.L-1H2O2预处理PC12细胞90min能明显地保护PC12细胞对抗300μmol.L-1H2O2引起的损伤,使细胞存活率增加,细胞凋亡率降低及procaspase-3增多。H2O2预处理对ERK1/2具有明显的激活作用:诱导胞质ERK1/2磷酸化及促进其核转移。在H2O2预处理前30min应用ERK1/2抑制剂UO126(10μmol.L-1)可明显地阻断H2O2预处理的抗细胞毒性及抗细胞凋亡作用。结论H2O2预处理能激活ERK1/2,ERK1/2介导H2O2预处理的适应性细胞保护作用。     

槲皮素对H_2O_2损伤PC12细胞的保护效果与机制

目的研究槲皮素(quercetin)对PC12细胞增殖的影响以及降低H2O2损伤PC12的效果并初步探讨其机制。方法通过MTT比色法检测槲皮素对PC12细胞增殖的影响,并用H2O2诱导PC12细胞建立氧化损伤模型,通过MTT和LDH比色法以及TUNEL法检测分析槲皮素保护PC12细胞免受H2O2损伤的效果;对比分析槲皮素保护组和对照组PC12细胞内ROS水平和MDA的含量检测抗氧化的效果;比较分析SOD、CAT、GSH-PX活性初步探讨槲皮素的抗氧化机制。结果检测浓度范围内槲皮素对PC12细胞没有毒性;通过提高细胞内SOD、CAT和GSH-PX活性,槲皮素能够降低细胞内活性氧水平,减少MDA的产生,保护H2O2对PC12细胞的氧化损伤。结论槲皮素对PC12细胞没有毒性,能够通过减弱H2O2产生的活性氧保护PC12细胞。     

山楂叶总黄酮对H_2O_2诱导PC12细胞凋亡的保护作用

目的探讨山楂叶总黄酮(FMCL)对H2O2诱导的PC12细胞凋亡的保护作用及机制。方法用H2O2刺激PC12细胞使其发生凋亡,MTT法检测PC12细胞活性,倒置显微镜观察细胞生长状况和形态变化,琼脂糖凝胶电泳观察DNA梯状图谱,流式细胞仪检测PC12细胞亚二倍体比率及线粒体膜电位的变化。结果与模型组比较FMCL 100、30mg.L-1两组PC12细胞活性增强,贴壁生长数量增多,而圆缩脱落者减少,未见典型DNA梯状图谱,凋亡比率下降,线粒体膜电位回升,且在一定范围内存在剂量依赖关系。结论山楂叶总黄酮可抑制H2O2诱导的PC12细胞凋亡,其机制可能与抑制线粒体途径的细胞凋亡有关。     

姜黄素对H_2O_2损伤PC12细胞的保护作用

目的　探讨姜黄素 (curcumin ,Cur)对氧化应激损伤PC12细胞的保护作用。方法　以H2 O2 损伤PC12细胞为氧化应激损伤的模型 ,采用甲氮甲唑蓝 (3 [4 ,5 dimethylthia zol 2 yl] 2 ,5diphenyltetrazoliumbromide ,MTT)法检测细胞增殖状况 ,碘化丙啶 (Propidiumiodide,PI)染色流式细胞术(flowcytometry ,FCM )检测细胞凋亡 ,罗丹明 12 3(Rho damine12 3,Rh12 3)染色FCM检测细胞线粒体膜电位 (mito chondrialpotentialmembrane ,△Ψm) ,双氢罗丹明 12 3(Dihy drohodamine12 3,DHR)染色FCM检测细胞内活性氧 (reac tiveoxygenspecies,ROS)的含量。 结果　 2 0和 4 0 μmol·L-1Cur均可使 2 5～ 4 0 0 μmol·L-1H2 O2 作用 2 4h后对PC12细胞生长的抑制率下降 ,可明显抑制 10 0和 2 0 0 μmo·L-1H2 O2 作用 2 4h后对PC12细胞凋亡的诱导作用和对PC12细胞△Ψm的降低作用 ,可明显降低 10 0和 2 0 0 μmol·L-1H2 O2 作用 12h后细胞内ROS的含量。结论　Cur对氧化应激损伤PC12细胞具有保护作用 ,其机制可能与降低细胞内ROS的含量 ,进而抑制△Ψm的降低有关。     

Nuclear factor-kappaB mediates cytoprotection of hydrogen peroxide preconditioning against apoptosis induced by oxidative stress in PC12 cells

1. Cytoprotection by H(2)O(2) preconditioning against oxidative stress-induced apoptosis of PC12 cells has been demonstrated previously. In the present study, we investigated the effects of H(2)O(2) preconditioning on nuclear factor (NF)-kappaB activation and the role of NF-kappaB in the adaptive cytoprotection of H(2)O(2) preconditioning in PC12 cells. 2. The PC12 cells were preconditioned with 100 micromol/L H(2)O(2) for 90 min, followed by 24 h recovery and subsequent exposure to 300 micromol/L H(2)O(2) for a further 12 h. 3. The results showed that preconditioning with 100 micromol/L H(2)O(2) upregulated NF-kappaB expression and enhanced its nuclear translocation and DNA binding activity. In addition to its own effects on NF-kappaB expression, H(2)O(2) preconditioning also promoted the overexpression of NF-kappaB induced by a lethal concentration of H(2)O(2) (300 micromol/L). 4. N-Tosyl-l-phenylalanine chloromethyl ketone (TPCK; 20 micromol/L), an inhibitor of NF-kappaB, was administered 20 min before preconditioning with 100 micromol/L H(2)O(2). At this concenteration, TPCK blocked the overexpression of NF-kappaB induced by H(2)O(2) preconditioning, accompanied by attenuation of H(2)O(2) preconditioning-induced cytoprotection. The inhibition of NF-kappaB by TPCK enhanced caspase 3 activity induced by 300 micromol/L H(2)O(2). 5. The findings of the present study provide novel evidence for the effects of preconditioning with H(2)O(2) on constitutive activation of NF-kappaB, which contributes to the adaptive cytoprotection of H(2)O(2) preconditioning against PC12 cells apoptosis.     

复方丹参注射液对H2O2诱导的PC12细胞凋亡的保护作用

目的:探讨复方丹参注射液(ISM)对H2O2诱导的PC12细胞凋亡保护作用的机制.方法:在H2O2诱导PC12细胞凋亡模型的基础上,采用MTT比色分析测细胞存活率,Hoechst-PI荧光染色和流式细胞仪检测分析细胞凋亡情况,RT-PGR检测par-4和NF-gB P 65基因mRNA表达,Western b1ot检测Par-4和NF-κB P 65蛋白表达.结果:不同剂量ISM预处理1 h可提高PC12细胞的存活率,降低par-4和NF-κB P 65的mRNA表达以及蛋白表达.结论:ISM可剂量依赖性地对抗H2O2的神经毒性作用,其机制可能与降低凋亡基因par-4的表达有关.     

黄芩素对过氧化氢致PC12细胞损伤的保护作用研究

目的:研究黄芩素(BAI)对过氧化氢(H2O2)损伤的神经细胞的保护作用。方法:用体外细胞培养法,预先孵育24h,以500μmol·L-1H2O2复制大鼠肾上腺髓质嗜铬瘤分化细胞株(PC12)不可逆氧化损伤模型,观察BAI对其影响,并在损伤时分为移除药物和不移除药物2种情况进行分析;通过MTT微量比色法测定细胞活度,并测定培养液中乳酸脱氢酶(LDH)的含量。结果:预先给予BAI作用24h后,在造模时不论是否移除药物,BAI对损伤细胞均有显著的保护作用,尤以不移除药物的效果更为显著。镜下观察,BAI组细胞形态出现一定程度上的边缘模糊,单个细胞体积变大,有少许细胞融合的状态发生;MTT法测定细胞活度升高,培养液中LDH含量降低,与模型组比较差异显著。结论:BAI能显著减轻PC12细胞损伤,其作用机制可能在氧化-抗氧化环节,与BAI能够减轻呼吸链阻断造成的自由基堆积、抗氧化和清除自由基的能力有关。     

复方丹参滴丸对过氧化氢损伤PC12细胞的保护作用

目的 研究复方丹参滴丸对过氧化氢（H₂O₂）损伤PC12细胞的保护作用,探讨复方丹参滴丸治疗缺血性脑血管病的作用机制.方法 采用细胞培养和H₂O₂诱导细胞损伤的方法,观察复方丹参滴丸对PC12细胞的保护作用.结果 复方丹参滴丸 6.25,12.50,25.00 μg&#8226;mL^-1均可明显对抗100和500 μmol&#8226;L^-1 H2O2引起的PC12细胞凋亡（P＜0.01）.结论 复方丹参滴丸可以促进PC12细胞的营养和增殖作用,并有抗H2O2诱导细胞凋亡作用.