bFGF mRNA在穿孔鼓膜的表达及意义

目的 研究鼓膜穿孔后成纤维细胞生长因子表达的可能变化特征与规律,探讨成纤维细胞生长因子在鼓膜穿孔修复过程中的作用。方法①选择１２０只健康Ｗｉｓｔａｒ大鼠,随机分为６个序列组,分别为正常对照组,损伤后１、４、６、８、１０ ｄ组,每组动物２０只。③ＲＴ－ＰＣＲ和原位杂交方法检测 ｂＦＧＦ ｍＲＮＡ在鼓膜的表达。结果①原位杂交方法检测 ｂＦＧＦ ｍＲＮＡ的表达,定位于上皮下结缔组织层,且急性穿孔组有时效性。②ＲＴ－ＰＣＲ方法检测鼓膜穿孔后 ｂＦＧＦ ｍＲＮＡ的表达规律,同样具有明显时效性。③ｂＦＧＦｍＲＮＡ的积分光密度值急性穿孔组与正常对照组ｂＦＧＦ ｍＲＮＡ的表达量差异有显著性（Ｐ＜０．００１）。结论①ｂＦＧＦ ｍＲＮＡ在急性穿孔后的鼓膜上有明显表达,表明其在急性穿孔鼓膜的愈合过程中可能意义重大。②ｂＦＧＦ ｍＲＮＡ在急性穿孔后鼓膜上的表达具有时序性,为医疗干预时机的选择提供了时间上的可能依据。     

金雀异黄素对外伤性增生性玻璃体视网膜病变中bFGF和PCNA表达的抑制

目的 探讨金雀异黄素对兔外伤性增生性玻璃体视网膜病变(proliferative vitreoretinopathy,PVR)视网膜组织碱性成纤维细胞生长因子(basic fibroblast growth factor,bFGF) mRNA 和增殖细胞核抗原(proliferating cell nu-clear antigen,PCNA)表达的影响.方法 建立外伤性 PVR 兔模型,分为模型对照组及金雀异黄素治疗组.每组于制模后 7、14、21、28 d 分别将 2 只模型兔眼球取出制作标本,采用原位杂交法检测视网膜组织 bFGF mRNA 表达,采用免疫组织化学法检测 PCNA 表达.结果 ①外伤性 PVR 视网膜组织 bFGF mRNA 和 PCNA 表达呈现先升高后降低的动态变化,14 d 时达到峰值;②金雀异黄素治疗组在 7、14、21、28 d 时视网膜组织 bFGF mRNA 和 PCNA 表达均明显低于模型对照组,差异均有显著性意义(均P<0.05).结论 金雀异黄素能抑制外伤性 PVR 视网膜组织 bFGFmRNA 和PCNA 表达,具有防治外伤性 PVR 的潜能.     

碱性成纤维细胞因子改善鼓膜穿孔愈合的研究

在豚鼠的双侧鼓膜上制成机械性穿孔，右耳为治疗耳，每ｄ滴用碱性成纤维细胞因子 （ｂＦＧＦ）０．４８μｇ，左耳为对照耳，滴生理盐水，２１ｄ处死。病理切片显示：在穿孔愈合处，ｂＦＧＦ治疗 组的鼓膜中层厚度（４１５±３６）μｍ，对照组（１２５±３０）μｍ，两组间差异显著（Ｐ＜０．０１），治疗组鼓膜 中层成纤维细胞、胶原明显增多。提示：ｂＦＧＦ可有效改善鼓膜穿孔愈合的质量，使穿孔的鼓膜得到 最佳恢复。     

VEGFmRNA和bFGF mRNA在原发性肝癌中的表达及意义

目的 :探讨血管内皮细胞生长因子 (VEGFmRNA)和碱性成纤维细胞生长因子 (bFGFmRNA)在原发性肝癌中的表达及其意义。方法 :应用原位杂交技术检测 38例原发性肝癌VEGFmRNA和bFGFmRNA的表达情况。结果 :VEGFmRNA和bFGFmRNA阳性率与原发性肝癌门静脉和 /或胆管癌栓形成有关 ,伴癌栓病例VEGFmRNA和bFGFmRNA阳性率分别为 84 .6 %和 88.5 % ,不伴癌栓病例阳性率分别为 33.3%和2 5 .0 % ,两者比较均有显著差异 (P <0 .0 5 )。结论 :VEGFmRNA和bFGFmRNA可作为原发性肝癌的预后指标 ,可望为抑制原发性肝癌血管生成治疗提供实验依据和新线索     

碱性成纤维细胞因子改善鼓膜穿孔愈合的研究

在豚鼠的双侧彭膜上制成机械的穿孔，右耳为治疗耳，每ｄ滴用碱性成纤维细胞因子（ｂＦＧＦ）０．４８μｇ左耳为对照耳，滴生理盐水，２１ｄ处死，病理切片显示：在穿孔愈合处，ｂＦＧＦ治疗组的鼓膜中层厚度（４１５±３６）μｍ对照组（１２５±３０）μｍ两组间差异显（Ｐ〈０．０１），治疗组鼓膜中层成纤维细胞，胶原明显增多。提示：ｂＦＧＦ可有效改善鼓膜穿孔愈合的质量，使穿孔的鼓膜得到最佳恢复。     

干扰素治疗增生性瘢痕机理的研究

目的 在体外研究干扰素2b（INF α-2b）对瘢痕组织成纤维细胞转化生长因子-β1（TGF-β1）、基质金属蛋白酶-1（MMP-1）、血小板衍化生长因子-BB（PDGF-BB）以及糖基转移酶（ppGalNAc-T2）基因表达的作用，以求阐明干扰素对增生性瘢痕的作用机理。方法组织块法培养瘢痕组织成纤维细胞，传代后分成3组：①空白对照组：只加生理盐水处理；②低浓度组：用100u／ml INFα-2b处理；③高浓度组：用10000u／mlINFα-2b处理。RT-PCR检测TGF-β1、MMP-1、PDGF-BB和ppGalNAc-T2表达。结果体外培养瘢痕成纤维细胞经100u／ml及10000u／mlINFa-2b处理后。RToPCR检测TGF-β1、PDGF-BB及ppGalNAc-T2mRNA表达降低，MMP-lmRNA表达升高，呈显著差异，且具有浓度依赖性。结论 干扰素对瘢痕成纤维细胞具有抑制作用，其机理可能与多种细胞因子有关，如TGF-β1、PDGF—BB。     

羊膜抑制兔角膜眼表纤维化的研究

目的探讨羊膜移植抑制眼表纤维组织增生的机制.方法将传代的兔角膜成纤维细胞接种于羊膜基质面,分别培养1d和7d,采用吖啶橙法观察羊膜对成纤维细胞凋亡的影响.同时采用原位杂交法,观察成纤维细胞中bFGFmRNA表达的变化.结果羊膜对培养1d和7d的兔角膜成纤维细胞均有明显地抑制凋亡作用.在羊膜基质面培养1d的兔角膜成纤维细胞,其bFGFmRNA的表达与对照组相比无明显改变,而培养7d后,bFGFmR,NA的表达明显下降.结论羊膜不仅有抑制体外培养的兔角膜成纤维细胞凋亡的作用,而且还能抑制体外培养的兔角膜成纤维细胞bFGFmRNA的表达,由此可部分解释羊膜抑制纤维增生的机制.     

碱性成纤维细胞生长因子及其基因在前列腺增生组织中的表达及意义

目的：探讨碱性成纤维细胞生长因子(bFGF)及其基因在前列腺增生(BPH)组织中的分布表达情况。方法：BPH组织中bFGFmRNA的表达采用原位杂交技术检测，bFGF的检测采用免疫组化方法。结果：bFGFmRNA及bFGF在前列腺上皮细胞及间质细胞中均有表达。且间质细胞中二者的表达量均明显高于上皮细胞；在间质细胞中。阳性染色则主要分布于间质细胞核。部分位于间质细胞浆。结论：BPH间质细胞中bFGF蛋白表达增加主要是基因转录水平增多的结果。bFGF在前列腺增生的发生发展过程中起着重要的作用。     

局部应用bFGF治疗陈旧性鼓膜穿孔83例的临床观察

83例外伤性陈旧性鼓膜穿孔在3个月以上，化脓性中耳炎干耳在6个月以上，鼓膜紧张部穿孔，颞骨CT示无骨质破坏，纯音听阈为传导性聋，咽鼓管功能良好，面积为8～23mm^2。使用重组牛碱性成纤维细胞生长因子(RB-bFGF)无菌冻干粉(珠海东大生物制药有限公司产)，每瓶4000AU。方法是在鼻内窥镜下，用75％的酒精消毒外耳道，丁卡因棉球表面麻醉鼓膜后，用耳显微拨针沿穿孔边缘切除0．5～0．8mm，     

京尼平苷对慢性前列腺炎大鼠前列腺组织bFGF的影响

【目的】探讨京尼平苷对慢性前列腺炎大鼠前列腺组织碱性成纤维细胞生长因子（basic fibroblast growth factor，bFGF）表达的影响。【方法】采用前列腺内注射消痔灵方法复制慢性前列腺炎模型，随机分为模型组、阳性药组（前列康片组，2000mg／kg）及京尼平苷高、中、低剂量组（20、10、5mg／kg）。给药28d后，取大鼠前列腺组织，观察前列腺病理改变，并采用逆转录聚合酶链式反应（RT—PCR）和ELISA法分别检测各组前列腺组织bFGF表达。【结果】与模型组比较，京尼平苷高、中剂量组bFGFmRNA表达和bFGF蛋白含量明显降低（P〈0．05或P〈0．01）。【结论】京尼平苷能够降低慢性前列腺炎模型大鼠前列腺组织bFGF表达。     

羊膜抑制兔角膜眼表纤维化的研究

目的探讨羊膜移植抑制眼表纤维组织增生的机制.方法将传代的兔角膜成纤维细胞接种于羊膜基质面,分别培养1d和7d,采用吖啶橙法观察羊膜对成纤维细胞凋亡的影响.同时采用原位杂交法,观察成纤维细胞中bFGFmRNA表达的变化.结果羊膜对培养1d和7d的兔角膜成纤维细胞均有明显地抑制凋亡作用.在羊膜基质面培养1d的兔角膜成纤维细胞,其bFGFmRNA的表达与对照组相比无明显改变,而培养7d后,bFGFmR,NA的表达明显下降.结论羊膜不仅有抑制体外培养的兔角膜成纤维细胞凋亡的作用,而且还能抑制体外培养的兔角膜成纤维细胞bFGFmRNA的表达,由此可部分解释羊膜抑制纤维增生的机制.     

原位逆转录PCR检测干细胞因子mRNA在白血病细胞的表达

目的：探索应用原位逆转录PCR（RT－PCR）检测低拷贝的干细胞因子mRNA在白血病细胞表达的可行性。方法：在普通的PE480型PCR仪进行原位RT－PCR，检测干细胞因子mRNA在K562、HL－60和慢性粒细胞性白血病细胞的表达。结果：直接法和间接法原位RT－PCR法可以检测到干细胞因子mRNA在K562、HL-60和慢性粒细胞性白血病细胞表达，而常规的原位杂交则为阴性。结论：（1）干细胞因子在K562、HL－60和慢性粒细胞性白血病细胞均有表达，但是表达量较低，应用原位RT－PCR可进行检测；（2）在普通的PE480型PCR仪上可以进行原位PCR。     

创伤性鼓膜穿孔自然愈合的形态学研究及临床应用

目的探讨创伤性鼓膜穿孔自然愈合的穿孔缘形态特征及其临床意义。方法对82例创伤性鼓膜穿孔患者内镜下动态观察自然愈合过程穿孔缘的形态变化。结果 82例中,随访1周以上69例。伤3h穿孔缘毛糙、锐利;伤6h穿孔缘淤血肿胀;伤第1天穿孔缘逐渐变钝,上皮层有回缩现象;伤第2天穿孔缘肿胀逐渐消退,外翻鼓膜瓣开始坏死发黑;伤第3天起表皮层和纤维层开始有增生现象;第5~6天穿孔缘上皮增生增多,外翻鼓膜瓣结痂;1周后上皮层继续增生。其中,19例小穿孔11~16天时愈合,5例鼓膜钙化患者无纤维层增生,1例大穿孔边缘肉芽组织增生,23天时穿孔愈合。2例上皮层错向移行患者穿孔未愈合,2例感染时新生上皮层被液化。结论①根据内镜下创伤性鼓膜穿孔缘的形态特征可推断鼓膜损伤时间,指导临床评估预后;②创伤性鼓膜穿孔缘的外翻或内翻的皱褶鼓膜瓣对穿孔愈合无影响;③上皮错向移行可导致穿孔不愈。     

表皮生长因子对创伤性鼓膜穿孔愈合的临床研究

目的 探讨表皮生长因子对创伤性鼓膜穿孔愈合的作用.方法 90例创伤性鼓膜穿孔患者按接诊时间顺序分为A、B、C三组,分别采用自然修复、单纯贴片修复及表皮生长因子贴片修复,比较三组患者穿孔愈合率及愈合时间,并动态观察修复过程穿孔边缘形态变化.结果 随访2个月,A组26例定期随访,B组29例定期随访,C组27例定期随访.三组穿孔愈合率比较,差异无统计学意义(P>0.05).三组穿孔愈合时间比较,差异有统计学意义(P<0.05).A组愈合末期穿孔呈圆形或裂隙状,愈合鼓膜形态同周围鼓膜,纯音听阈(PTA)除3例外均恢复正常.B、C两组愈合末期穿孔呈圆形、裂隙状及不规则,愈合鼓膜充血肿胀、形态增厚与正常鼓膜有明显界限,3～7 d后恢复正常.愈合时PTA(12±7)dB,10～30 d后听力恢复正常.结论 创伤性鼓膜穿孔贴膜修复不增加愈合率,可缩短穿孔愈合时间,但贴膜时局部应用表皮生长因子对缩短穿孔愈合时间作用不明显.     

RNA点印迹探测碱性成纤维细胞生长因子在激光损伤后视网膜中的表达

目的：观察激光损伤家兔视网膜后碱性成纤维细胞生长因子(basic fibroblast growth factor，bFGF)表达时相的变化，探讨bFGF在视网膜激光损伤后修复过程中的地位和作用。方法：用不同剂量的YAG倍频激光（532nm）致伤有色家兔视网膜，于伤后1、3、7、14d取眼底视网膜-脉络膜组织，提取细胞总RNA进行RNA斑点印迹，用地高辛标记的bFGFcDNA探针进行核酸杂交，检测bFGFmRNA的表达水平。结果：激光损伤后眼底组织中bFGFmRNA的表达水平明显提高，且随激光致伤量的加大，bFGFmRNA的表达水平呈进行性增加。结论：激光损伤后眼底组织中bFGFmRNA的表达明显增加，提示bFGF参与了激光损伤后眼底组织的修复过程。     

16,16-二甲基前列腺素E2对大鼠肺纤维化成纤维细胞的作用

目的　探讨 16 ,16 二甲基前列腺素E2 (dmPGE2 )在博莱霉素诱导大鼠肺纤维化进程中对成纤维细胞胶原合成及分化作用的影响。方法　 4 5只Wistar大鼠随机分为 3组 ,每组 15只。模型组和干预组气管内灌注博莱霉素诱导肺纤维化 ,干预组于灌注后当天开始给予dmPGE2 肌肉注射。通过苏木素 伊红 (HE)染色及Ⅰ型胶原 (Col Ⅰ )、Ⅲ型胶原 (Col Ⅲ )、转化生长因子 β1(TGF β1)免疫组化染色来评价纤维化程度 ,用原位杂交方法检测结缔组织生长因子 (CTGF)的mRNA在肺内的表达水平 ,对肌成纤维细胞中特异表达的α 平滑肌动蛋白 (α SMA)进行免疫组化染色 ,观察成纤维细胞分化水平的变化。结果　①模型组中TGF β1、CTGFmRNA、Col Ⅰ、Col Ⅲ、α SMA表达水平较空白组明显增高 (P <0 .0 5 ) ;②干预组中CTGFmRNA和Col Ⅰ、Col Ⅲ水平与模型组比明显下降 ,α SMA阳性细胞减少。结论　PGE2 可减少博莱霉素诱导肺纤维化模型肌成纤维细胞数量 ,减轻肺纤维化程度 ,这种作用可能部分通过降低CTGFmRNA水平实现。     

碱性成纤维细胞生长因子对慢性鼓膜穿孔愈合的影响

目的 :探讨碱性成纤维细胞生长因子 (bFGF)在慢性鼓膜穿孔愈合中的作用。方法 :在豚鼠慢性创伤性鼓膜穿孔的动物模型上 ,观察应用bFGF 磷酸缓冲液 (2 5 0mg/L)治疗的鼓膜愈合率 ,用组织学检查鼓膜中层厚度 ,并与仅用磷酸缓冲液 (PBS)处理的作对照。结果 :bFGF治疗组鼓膜愈合率明显高于PBS组 (89.3%vs 37.5 % ,P <0 .0 1) ;鼓膜中层厚度bFGF组显著高于PBS组 [(30 5± 37) μmvs (10 2± 2 1) μm ,P <0 .0 1]。结论 :局部应用bFGF有明显促进慢性鼓膜穿孔鼓膜中层厚度及上皮细胞增生 ,促进鼓膜愈合的作用。     

顺铂腹腔温热化疗对SD大鼠空肠吻合口肌间神经元影响的研究

目的通过研究腹腔温热化疗（IHCP）对大鼠小肠吻合口周围的小肠神经系统中肌间神经元的影响，来探讨腹腔温热化疗临床应用价值及条件限制性。方法应用H＆E染色及硝酸铅神经染色及电镜技术观察神经细胞形态，细胞计数，RT—PCR法检测bFGFmRNA相对表达量。结果神经元细胞数平均水平第7天达最低后渐回升。bFGFmRNA表达量在第3天显著高于其他时间。对照组bFGFmRNA相对表达水平与腹腔温热灌注组、腹腔温热化疗组有显著性差异；术前温热灌注组bFGFmRNA相对表达水平与术后温热灌注组、术后温热化疗组有显著性差异。结论空肠吻合术后应用顺铂腹腔温热化疗不会影响吻合口周围神经元的再生。     

二氧化碳激光鼓膜切开术的实验研究

目的：研究CO2激光鼓膜切开术的治疗能力及鼓膜的组织学变化。方法：25只豚鼠随机分为3组行鼓膜紧张部穿孔，前2组各10只分别为圆形或肾形穿孔，左耳用CO2激光，右耳用鼓膜切开刀，比较穿孔愈合时间，并观察鼓膜穿孔愈合过程的组织学变化，第3组5只用不同功率的CO2激光，左耳直接照射，右耳鼓室内注射生理盐水后再照射。结果：CO2激光组穿孔愈合时间较鼓膜切开刀组明显延长（P〈0．01）；肾形穿孔愈合时间更长（P〈0．01）。CO2激光组穿孔边缘出现炎症反应。小剂量激光对内耳无影响，鼓室内注水可以避免或减轻对耳蜗的损伤。结论：CO2激光鼓膜切开术可用于治疗分泌性中耳炎。     

高糖环境HGF和TGF-β表达对肾成纤维细胞周期的影响

目的：探讨HGF和TGF－β对高糖作用下的肾间质成纤维细胞周期的影响，以及作用机理。方法：取肾肿瘤切除的政党极肾脏组织，贴壁法培养肾间质成纤维细胞。细胞分别培养于不同的葡萄糖培养液中，另设相同渗透压的甘露醇组。采用流式细胞仪检测细胞 ,MTT产殖，RT－PCR方法对细胞表达HGF和TGF－β进行检测。结果：高浓度葡萄糖作用早期，细胞增殖旺盛，然而随着高糖的持续刺激，细胞增殖发生停滞，同时诱导细胞发生肥大反应。同时观察到高糖作用的早期HGF表达升高，随着作用的持续时间延长，其表达量下降，而GF－β出现持续的高表达，同时外源加入HGF可以抑制TGF－β的表达。结论：高糖作用下的肾间质成纤维细胞早期出现自限性增殖后细胞增殖停滞，出现肥大。这与HGF和TGF－β的表达差异相关。