球形脂联素、葡萄糖和游离脂肪酸对胰岛β细胞单磷酸腺苷激活的蛋白激酶和乙酰辅酶A羧化酶磷酸化的影响

目的:探讨不同浓度的葡萄糖和游离脂肪酸对胰岛β细胞内单磷酸腺苷激活的蛋白激酶(adenosine-5'-monophosphate activated protein kinase,AMPK)和乙酰辅酶A羧化酶(acetyl CoA carboxylase,ACC)磷酸化的影响,以及球形脂联素对AMPK和ACC磷酸化的作用.方法:培养INS-1胰岛细胞系,用5 mmol/L葡萄糖和0.25 mmol/L游离脂肪酸处理,确定在不同时间对AMPK和ACC磷酸化的影响;观察不同浓度葡萄糖和游离脂肪酸对AMPK和ACC磷酸化的影响;在葡萄糖和游离脂肪酸存在的条件下观察AMPK的药理激活剂氨基咪唑-4-甲酰胺核苷酸(AICAR)和球形脂联素对AMPK和ACC磷酸化的影响.结果:不同浓度的葡萄糖和游离脂肪酸都能够在60 min时抑制AMPK和ACC的磷酸化水平,采用AMPK的药理激动剂AICAR能够明显升高AMPK和ACC的磷酸化水平.2.5 mg/L球形脂联素可以使基础状态的AMPK和ACC磷酸化水平分别增加23%(P＜0.05)和50%(P＜0.05).在5 mmol/L葡萄糖的基础上加用球形脂联素使AMPK和ACC磷酸化水平分别增加1.4倍(P＜0.05)和3倍(P＜0.01),在0.25 mmol/L游离脂肪酸的基础上加用球形脂联素使AMPK和ACC磷酸化水平分别增加3倍(P＜0.05)和5倍(P＜0.01).结论:在体外培养的胰岛INS-1细胞中,不同浓度的葡萄糖和游离脂肪酸能够降低AMPK和ACC的磷酸化水平,而AMPK的药理激动剂氨基咪唑-4-甲酰胺核苷酸(5'-aminoimidazole-4-carboxamide riboside,AICAR)和2.5 mg/L球形脂联素可以提高AMPK和ACC的磷酸化水平,此作用可以进一步增强胰岛β细胞内的脂肪酸氧化水平,减轻甘油三酯聚集,保护胰岛β细胞功能.     

胰岛素对高糖条件下人脐静脉内皮细胞凋亡及小窝蛋白-1表达的影响

目的:探讨不同浓度的胰岛素对高糖条件下人脐静脉内皮细胞(human umbilical vein endothelial cells,HUVEC)凋亡及小窝蛋白(caveolin,Cav)-1表达的影响?方法:体外培养HUVEC,分为A组(对照组,葡萄糖浓度5.5 mmol/L)?B组(高糖组,葡萄糖浓度33.3 mmol/L)?C组(高糖+低浓度胰岛素组,葡萄糖浓度33.3 mmol/+胰岛素浓度20 mU/L)?D组(高糖+高浓度胰岛素组,葡萄糖浓度33.3 mmol/L+胰岛素浓度1 000 mU/L)?采用流式细胞仪检测细胞凋亡比例及细胞周期,免疫组化检测HUVEC的Cav-1表达?结果:在高糖条件下,HUVEC凋亡比例显著升高,停滞于G0/G1期细胞增加,Cav-1表达减少;低浓度胰岛素使细胞凋亡比例减少,Cav-1表达增加;加入高浓度胰岛素不能改变细胞凋亡比例及细胞周期,Cav-1表达亦无明显改变?结论:低浓度胰岛素可抑制高糖导致的内皮细胞凋亡,而高浓度胰岛素无此作用,其机制可能与Cav-1表达有关?     

波动性高糖对人脐静脉内皮细胞中NO 合成的影响及作用机制

目的：探索波动性与持续性高糖对人脐静脉内皮细胞合成血管舒张因子一氧化氮（NO）的影响及其作用机制。方法：以体外培养人脐静脉内皮细胞（HUVECs）为研究对象,分别测定波动性高浓度葡萄糖(5.5 或20 mmol/L) 与持续性高浓度葡萄糖(20 mmol/L)环境下NO浓度,RT-PCR及Western印迹方法检测磷脂酰肌醇-3激酶(PI3K)、蛋白激酶B（PKB/AKT）、内皮型一氧化氮合酶(eNOS）mRNA及蛋白表达水平。结果：波动性高糖组NO均明显低于持续高糖组和正常组（P<0.05）;波动组,持续高血糖组的PI3K,PKB,eNOS mRNA及蛋白表达水平均较正常组下调（P<0.01）,而波动组又低于持续组（P<0.05）。结论：波动性高血糖较持续性高血糖可能对血管内皮细胞具有更强的损伤效应,并可能通过影响信号通路PI3K/PKB/eNOS导致NO合成减少。     

Effects of adiponectin on oxidative stress and apoptosis in human cardiac myocytes cultured with high glucose

Background  Diabetic cardiomyopathy is the major cause of morbidity and mortality in diabetic patients. Oxidative stress plays an important role in diabetic cardiomyopathy. This study aimed to investigate the effects of adiponectin on oxidative stress and apoptosis in human cardiac myocytes (HCM) cultured with high glucose. 

Methods  The cells were assigned to three group: control group, high glucose group and high glucose plus adiponectin group. After culture for 24, 48, 72 hours, oxidative stress was evaluated by detecting levels of malondialdehyde (MDA) and superoxide dismutase (SOD) in the supernatant of culture media. The expression of p66Shc and Heme oxygenase-1 (HO-1) was detected by real-time polymerase chain reaction (PCR). Flow cytometry was designed to observe and detect cellular apoptosis.

Results  Our findings showed significant increase in MDA levels and decrease in SOD activity in the high glucose group compared with the control group (P <0.05). However, MDA levels were significantly decreased and SOD activity was significantly increased in the adiponectin group compared with those in the high-glucose group (P <0.05). The mRNA expression of HO-1 in the high glucose group was significantly increased in a time-dependent manner compared with that in the control group (P <0.05).  Adiponectin further increased the mRNA expression of HO-1 induced by high glucose in a time-dependent manner (P <0.05).The expression of p66Shc was significantly increased in high glucose group compared with that in the control group (P <0.05). Adiponectin significantly suppressed the upregulation of p66Shc induced by high glucose (P <0.05). The apoptotic rate of cardiomyocytes was significantly increased in the high glucose group compared with that in the control group while the apoptotic rate in the adiponectin group was remarkably declined in comparison with that in the high glucose group．

Conclusion  Adiponectin reduces high glucose-induced oxidative stress and apoptosis and plays a protective role in myocardial cells by upregulating the HO-1 expression and downregulating p66Shc expression.

     

吡格列酮对内皮细胞功能影响及其机制的体外研究

目的了解吡格列酮(PIO)对内皮细胞(EC)功能指标的影响及其可能的作用机理。方法体外原代培养人脐静脉内皮细胞(HUVECs),分别加入5.5mmol/L葡萄糖(对照组)、30mmol/L葡萄糖(高糖组)以及30mmol/L葡萄糖 PIO(10-9mol/L、10-7mol/L、10-5mol/L)(PIO 高糖组),检测各组内皮细胞一氧化氮(NO)和可溶性细胞间粘附分子-1(sICAM-1)及细胞凋亡率,用激光共聚焦显微镜及Westernblotting杂交分别观察PKCα、PKCδ的位置变化及蛋白表达。结果高糖可诱导EC凋亡增加,NO浓度降低,sICAM-1水平增加;PIO可抑制高糖诱导的上述变化;PIO可抑制高糖诱导的HUVECs的PKCα由胞浆向胞核转移,并抑制PKCδ在高糖作用下由胞核向胞浆及胞膜转移;PIO可抑制高糖诱导的HUVECsPKCδ表达增强的作用,而高糖作用对HUVECs的PKCα表达影响不明显。结论PIO可纠正高糖诱导的EC功能异常,其保护作用可能部分是通过抑制PKCα及PKCδ的激活来实现。     

阿托伐他汀钙抑制高糖诱导的人脐静脉内皮细胞内皮微粒释放及细胞凋亡

目的：探讨阿托伐他汀钙对高糖诱导的人脐静脉内皮细胞（HUVEC）内皮微粒释放和细胞凋亡的影响.方法：取生长良好的HUVEC进行实验.将细胞分为3组：对照组（5.5mmol/L葡萄糖）、高糖组（33.3mmol/L葡萄糖）和阿托伐他汀干预组.干预组首先用不同浓度的阿托伐他汀钙（0.01～10μmol/L）分别作用lh,而后加入33.3mmol/L葡萄糖共同孵育24,48,72h.应用MTT比色法检测细胞的生存率.采用流式细胞仪分别检测HUVEC内皮微粒释放以及细胞凋亡率.应用Griess还原法检测培养细胞上清液中一氧化氮（NO）浓度.结果：阿托伐他汀钙减轻高糖对HUVEC的损伤,阿托伐他汀组细胞形态基本完好.阿托伐他汀钙降低高糖诱导的HUVEC内皮微粒释放和细胞凋亡率,且均具有浓度和时间依赖性（P均〈0.05）.阿托伐他汀钙升高高糖诱导的NO含量,使其趋于正常.此作用在0.1～10μmol/L阿托伐他汀钙浓度区间作用24～48h时效果最明显（P均〈0.05）.结论：阿托伐他汀钙抑制高糖诱导的HUVEC内皮微粒释放及细胞凋亡,并通过调节内皮微粒和NO平衡起到保护HUVEC作用.     

非酒精性脂肪肝大鼠脂联素及其受体与肝脏病理改变的关系

目的:探讨非酒精性脂肪性肝病(NAFLD)大鼠血清脂联素水平、肝脏脂联素受体(adipoR)mRNA表达与肝组织病理改变的关系。方法:喂养高脂饲料建立NAFLD大鼠模型,分别于第2、4、8、12周处死,ELISA法检测血清脂联素及其他生化指标,测肝指数,RT-PCR法检测肝脏adipoR mRNA表达,肝组织切片苏丹Ⅲ脂肪染色、H-E常规染色和Masson三色纤维染色,显微镜下观察。结果:模型组大鼠第2、4、8、12周血清脂联素水平逐步下降,均低于同期对照组(P均＜0.01);血清脂联素水平与肝指数(r=-0.383,P=0.015)、肝脏炎症评分(r=-0.475,P=0.002)、纤维化评分(r=-0.459,P=0.003)均显著负相关。模型组肝脏adipoR1 mRNA表达逐步上升,adipoR2表达逐步下降,分别于4周、2周开始与对照组相比具有统计学差异(P均＜0.01);肝脏adipoR2 表达与肝指数(r=-0.431,P=0.006)、纤维化评分(r=-0.353,P=0.025)均显著负相关。结论:NAFLD大鼠肝脏adipoR mRNA表达异常、血清脂联素水平降低,后者与肝脏脂肪性炎症、纤维化程度相关,提示血清脂联素降低,肝脏adipoR表达异常,尤其是adipoR2 mRNA降低与NAFLD密切相关。     

Mechanism of ligustrazini against thrombosis

Objective To investigate the mechanism of Chinese medicine ligustrazini against thrombosis, and the effects of ligustrazini on plasminogen activator inhibitor (PAI-1) expression in normal endothelial cells and lipopolysaccharide (LPS) stimulated endothelial cells. Methods Human umbilical vein endothelial cells (HUVECs) were cultured by trypsin digestion method. PAI-1 protein in HUVEC conditioned medium was measured by Sandwich enzyme-linked immunosorbent assay (ELISA), and PAI-1 mRNA expression was determined by Northern blot analysis. Using electrophoretic mobility shift assay (EMSA), we observed HUVEC nuclear factor-kappa B (NF-κB) nuclear translocation. Results LPS treatment of cultured HUVECs resulted in a significant increase in PAI-1 protein and mRNA expression by these cells. However, when HUVECs were incubated with LPS plus ligustrazini, the upregulation of PAI-1 by LPS was abated. Moreover, ligustrazini could decrease the basal level of PAI-1 protein and mRNA in HUVECs as compared with control. Nuclear extracts prepared from HUVECs stimulated by LPS demonstrated that binding to the NF-kB oligo nucleotide increased as compared with the unstimulated cells, but ligustrazini did not change those binding in the absence or presence of LPS. Conclusions Ligustrazini inhibited both basal and LPS-induced PAI-1 protein and mRNA expression in endothelial cells, and the modulation of PAI-1 in HUVECs by ligustrazini might have other mechanisms rather than NF-kB     

人参皂苷对波动性高糖致内皮细胞损伤ROS和HO-1表达的影响

目的 :观察人参皂苷对波动性高糖致内皮细胞损伤的活性氧(ROS)和血红素加氧酶-1(HO-1)表达的影响。方法 :体外培养人脐静脉内皮细胞(HUVECs),分为对照组、波动性高糖模型组及人参皂苷低、中、高剂量治疗组。DCFH-DA为荧光探针检测细胞内ROS水平,Western blot及RT-PCR检测各组细胞HO-1的蛋白和m RNA表达。结果:波动性高糖导致内皮细胞ROS水平上升,并上调了HO-1的蛋白和m RNA的表达。人参皂苷能显著降低波动性高糖所致的脐静脉内皮细胞ROS水平,进一步上调HO-1的蛋白和m RNA的表达。结论:人参皂苷可能通过上调HO-1的表达而发挥其抗波动性高糖所致内皮细胞损伤的氧化应激损伤作用。     

瑞舒伐他汀对高糖导致的血管形成障碍的影响

目的 探讨瑞舒伐他汀对高糖导致的血管形成障碍的影响。方法 培养原代心肌微血管内皮细胞,取1代细胞分为四组：低糖组（5.6 mmol/L葡萄糖）、高糖组（33.3 mmol/L葡萄糖）、瑞舒伐他汀组（33.3 mmol/L葡萄糖+1 μmol/L瑞舒伐他汀）和LY294002组（33.3 mmol/L葡萄糖+1 μmol/L瑞舒伐他汀+10 μmol/L LY294002）,其中LY294002为磷脂酰肌醇3-激酶（PI3K）的抑制剂。采用Matrigel、Transwell和MTT法分别观察四组微血管内皮细胞的管腔形成、迁移及增殖能力。采用Western blotting技术检测蛋白激酶B（Akt）、磷酸化Akt（Ser473）（p-Akt）、内皮一氧化氮合酶（eNOS）和磷酸化eNOS（Ser1117）（p-eNOS）蛋白的表达。结果 与低糖组相比,高糖组的内皮细胞管腔形成、迁移及增殖能力均明显降低（P<0.05）;瑞舒伐他汀组的内皮细胞管腔形成、迁移及增殖能力均明显高于高糖组及LY294002组,但仍低于低糖组,差异均有统计学意义（P<0.05）。瑞舒伐他汀组p-Akt和p-eNOS蛋白的相对表达量均明显高于高糖组和LY294002组（P<0.05）,并基本恢复至低糖组水平（P>0.05）。结论 瑞舒伐他汀可明显改善高糖导致的内皮细胞的血管形成障碍,其机制可能与激活PI3K/Akt/eNOS通路相关。     

活血注射液对ox-LDL诱导的单核-内皮细胞黏附作用的影响

目的观察活血注射液对氧化低密度脂蛋白(ox-LDL)诱导的人脐静脉内皮细胞(HUVEC)中细胞间黏附分子-1(ICAM-1)的表达及与人单核细胞黏附作用的影响。方法以培养HUVEC作为靶细胞,在内皮细胞培养基中加入ox-LDL制备细胞损伤模型。采用蛋白定量法检测HUVEC与单核细胞的黏附率;RT-PCR检测HUVEC中ICAM-1的mRNA表达;用流式细胞仪测定HUVEC中ICAM-1的蛋白表达。结果ox-LDL作用HUVEC后12、24h时,人单核细胞与HUVEC的黏附率显著升高,HUVEC中ICAM-1的mRNA和蛋白表达水平也均明显升高,均明显高于正常对照组(P<0.01),而活血注射液可明显降低人单核细胞与HUVEC的黏附率,以及显著降低ICAM-1的mRNA和蛋白的表达水平(P<0.05,P<0.01),这种作用随着剂量的增加而增强。结论活血注射液能通过下调内皮细胞表面黏附分子的表达抑制单核-血管内皮细胞黏附,从而发挥对血管内皮细胞的保护作用,有利于减少或抑制动脉粥样硬化的形成。     

高糖环境对大鼠肾小球系膜细胞AMPK表达及活性的影响

 目的 观察高糖环境下肾小球系膜细胞AMP活化蛋白激酶（AMPK）表达和活性的变化及这种变化与系膜细胞增殖的关系。  方法 实验分4组：对照组（糖浓度5.6mmol/L）,高糖组（22.0mmol/L）,低浓度5-氨基-4-氨甲酰咪唑核苷（AICAR）组（0.5mmol/L AICAR+高糖）,高浓度AICAR组（1.0mmol/L AICAR+高糖）。观察24h后,应用MTT法检测细胞增殖,流式细胞仪检测细胞周期,RT-PCR法测定AMPKα1、α2亚单位mRNA水平,Westernblot法测定总AMPKα蛋白及磷酸化AMPKα蛋白水平。  结果 与对照组比较,高糖组细胞增殖趋势明显（P＜0.01）,且S期的细胞百分数增加（P＜0.01）;RT-PCR显示,高糖组AMPKα1、α2亚单位的mRNA水平低于对照组;总AMPKα蛋白水平及磷酸化AMPKα蛋白水平亦较低;特异性AMPK激活剂AICAR可抑制高糖诱导的细胞增殖（P＜0.01）,使S期的细胞百分数下降,并能增强AMPKα1、α2亚单位的mRNA表达水平及总AMPKα蛋白水平和磷酸化AMPKα蛋白水平。 结论  高糖环境下AMPKα1、α2 mRNA表达水平低下,AMPK蛋白的表达及活性降低;高糖诱导的系膜细胞增殖与AMPK表达及活性降低有关。     

高浓度葡萄糖对培养血管内皮细胞活力和黏附分子表达的影响

目的探讨高浓度葡萄糖作用于脐静脉内皮细胞后,对脐静脉血管内皮细胞系的活力和白细胞黏附分子〔血管细胞黏附分子-1(VCAM-1)、细胞间黏附分子-1(ICAM-1)〕表达的影响,为阐明高血糖在糖尿病血管病变的早期发病中作用与机制提供依据。方法采用胎盘蓝染色法及流式细胞仪检测细胞活力和黏附分子表达。结果高浓度葡萄糖可使内皮细胞的死亡率增加,ICAM-1表达显著上调,但VCAM-1表达无明显变化。结论减少高糖诱导的ICAM-1、VCAM-1表达增加,对减少糖尿病患者慢性并发症的发生概率是一条有益的途径。     

白藜芦醇对高糖高脂处理的原代人脐静脉血管内皮细胞E-选择素表达及NO分泌的影响

目的：探讨白藜芦醇对高糖、高脂培养人原代脐静脉血管内皮细胞E-选择素mRNA表达及胰岛素刺激的一氧化氮（NO）分泌的影响。方法：原代培养人脐静脉内皮细胞,以0．1μmol／L白藜芦醇预处理4h后,以高糖（33．3mmol／L葡萄糖）＋高脂（棕榈酸0．5mmol／L）DMEM培养基培养24h,以RT—PCR法检测培养细胞E-选择素的表达。部分细胞经100nmol／L胰岛素刺激25min后,以硝酸还原酶法检测培养上清NO的含量。结果：与正常对照组相比．高糖高脂培养使内皮细胞E-选择素的表达升高,同时胰岛素刺激的NO分泌降低。而白藜芦醇预处理可以明显降低E-选择素的表达,并明显促进胰岛素对内皮细胞NO分泌的刺激作用。结论：白藜芦醇可以改善高糖、高脂诱导的血管内皮细胞胰岛素刺激的NO分泌作用,并可降低E-选择素表达,保护内皮细胞的功能,从而可能在糖尿病动脉粥样硬化的防治中具有广阔的前景。     

AMPK活化对慢性间歇缺氧大鼠胰岛素抵抗和炎症因子的影响

目的 探讨单磷酸腺苷激活蛋白激酶(AMPK)活化对慢性间歇缺氧大鼠胰岛素抵抗和炎症因子的作用及其机制.方法 建立慢性间歇缺氧大鼠模型模拟阻塞性睡眠呼吸暂停综合征(OSAS),将36只雄性SD大鼠分为常氧对照组、2周间歇缺氧组、8周间歇缺氧组.观察AMPK激动剂和AMPK抑制剂作用不同缺氧程度的大鼠体内炎症介质、血脂、脂联素、瘦素及胰岛素抵抗水平,监测大鼠脂肪组织AMPK、葡萄糖转运蛋白(GLUT4)水平,并进行统计学分析.结果 间歇缺氧大鼠总胆固醇、三酰甘油、肿瘤坏死因子-α(TNF-α)、白细胞介素(IL)-6、IL-2、核因子κB (NF-κB)、缺氧诱导因子(HIF-1)显著高于对照组(P＜0.05);脂联素、瘦素及胰岛素抵抗指数显著低于对照组(P＜0.05).使用AMPK激活剂后的大鼠体内炎症因子释放减少,脂联素、瘦素含量增加,血脂、胰岛素抵抗情况较前有改善,GLUT4水平增加.而使用AMPK抑制剂处理后大鼠体内炎症因子、脂联素、瘦素水平均上升,胰岛素抵抗更严重,GLUT4水平也进一步下降.结论 AMPK能够减少炎症介质的释放,促进脂联素、瘦素的释放,增加GLUT4水平,改善胰岛素抵抗,从而调节能量代谢及炎症介质,为临床治疗OSAS相关疾病提供新的思路与靶点.     

人参皂苷Rd对Na2S2O4致人脐静脉内皮细胞缺氧损伤的保护作用

目的建立Na2S2O4致人脐静脉内皮细胞（HUVEC）缺氧损伤模型,并观察人参皂苷Rd的保护作用。方法体外培养HUVEC,实验分为7组：空白对照组、溶媒对照组、连二亚硫酸钠（Na2S2O4）缺氧损伤组（模型组）、人参皂苷Rd不同浓度组（25μmol.L-1、125μmol.L-1、625μmol.L-1）、阳性药组（Nimodipine 50μmol.L-1）,药物干预24 h后,除空白对照组和溶媒对照组外,其余各组用8 mmol.L-1Na2S2O4诱导HUVEC损伤4 h,进行相关指标检测：①倒置显微镜下观察细胞形态。②线粒体琥珀酸脱氢酶（MTT）法检测细胞存活率。③光化学法检测培养液LDH外漏浓度。结果 8 mmol.L-1的Na2S2O4缺氧损伤4 h可明显降低HUVEC的增殖活性,增加LDH的外漏,与空白对照组比较有显著性差异（P〈0.01）,表明HUVEC Na2S2O4缺氧损伤模型成功;人参皂苷Rd能明显减轻缺氧所致细胞形态学的改变、减轻内皮细胞损伤,提高HUVEC的MTT吸光度值,减少LDH的外漏,与模型组比较有显著性差异（P〈0.01或P〈0.05）。结论人参皂苷Rd对Na2S2O4致缺氧损伤的HUVEC具有保护作用,能提高细胞的存活率及改善其形态。     

脂联素对高糖环境心肌细胞氧化应激及凋亡的影响

目的通过高糖环境培养人心肌细胞(human cardiac myocytes,HCM)建立心肌细胞氧化应激模型,观察脂联素(ad-iponectin,ADPN)对心肌细胞各氧化应激指标及凋亡的影响,从而揭示脂联素对心肌细胞可能的保护机制。方法将体外培养的人心肌细胞分为3组:对照组、高糖组、高糖+脂联素组,分别干预24、48、72h。在倒置显微镜下观察心肌细胞形态变化,采用黄嘌呤氧化酶法检测超氧化物歧化酶(superoxide dismutase,SOD)含量。用代巴比妥酸法测定丙二醛(malondialdehyde,MDA)含量,用荧光定量RT-PCR法测定衔接蛋白(adaptinP66Shc)、血红蛋白加氧酶-1(heme oxygenase-1,Ho-1)在各个时间点上的表达,通过流式细胞术检测心肌细胞的凋亡率。结果与对照组相比,高糖组SOD含量显著下降,MDA含量显著上升(P<0.05),与高糖组相比,脂联素组SOD含量显著上升,MDA含量显著下降(P<0.05),并且呈时间依赖性。与对照组相比,高糖组Ho-1 mRNA表达增高;脂联素组较高糖组表达亦增高(P<0.05)。与对照组相比,高糖组P66Shc mRNA表达增高;脂联素组较高糖组表达降低(P<0.05),呈时间依赖性。高糖组细胞凋亡率较对照组明显增加,而脂联素组细胞凋亡率较高糖组显著下降。结论脂联素可通过减少P66Shc表达、增加Ho-1表达,增加抗氧化能力,减少氧化应激反应,减少细胞凋亡,可能对糖尿病心肌细胞起保护作用。     

TGF-β_1和TL1A在高糖所致血管内皮细胞凋亡中的作用

目的:观察高糖条件下,内皮细胞分泌的TGF-β1和TL1A对细胞凋亡的影响。方法:以22.4mmol/L葡萄糖培养细胞不同时间(0h,6h,12h,24h,48h),RT-PCR和Westernblot检测内皮细胞TGF-β1和TL1A表达,Annexin V-FITC/PI双染色、流式细胞仪测定细胞凋亡率。结果:高糖条件下HUVECTGF-β1和TL1A表达增加(均P<0.01),22.4mmol/L葡萄糖培养条件下,TGF-β1的表达高峰在12h,TL1A高表达峰值在48h。高糖条件下细胞凋亡率明显增加(21.06%±3.05%vs3.09%±0.32%,P<0.01)。在正常糖培养的HUVEC中加入外源性的TGF-β1和TL1A,均导致细胞凋亡率显著增高(15.26%±2.93%,55.70%±8.91%vs3.09%±0.32%,均P<0.01),在高糖培养液中加入抗TL1A抗体能明显抑制细胞凋亡发生(4.28%±0.48%vs21.06%±3.05,P<0.01),但加入抗TGF-β1抗体却不能逆转高糖诱导的细胞凋亡(20.93%±3.21vs21.06%±3.05%,P>0.05)。结论:高糖上调内皮细胞TGF-β1和TL1A的表达,TL1A介导高糖引起内皮细胞凋亡的作用,高糖引起内皮细胞凋亡与TGF-β1无关。     

血管紧张素1-7降低脂肪细胞氧化应激增加脂联素表达

目的 研究血管紧张素（1-7）[Ang-（1-7）]/Mas轴对于高糖培养脂肪细胞氧化应激及脂联素表达的作用.方法用前脂肪细胞株3T3L1诱导分化成成熟细胞,分别在培养基中加入外源性的Ang-（1-7） 10-9mol/L,Mas受体抑制剂A779 10-6mol/L,同时加入Ang-（1-7）及A779.分别用DHE荧光探针通过流式细胞术及用NBT染色法检测脂肪细胞内活性氧（ROS）含量.实时定量PCR方法检测脂联素及炎性反应因子的表达.无血清培养基培养脂肪细胞2 h后分别加入葡萄糖氧化酶（GO）50 mU/mL、100 mU/mL作用12 h建立氧化应激模型,研究Ang-（1-7）对于脂肪细胞氧化应激的作用及对脂联素表达的影响.结果 ①Ang-（1-7）通过Mas受体降低脂肪细胞活性氧的产生.Mas受体抑制剂A779可逆转此作用.②构建氧化应激模型,脂肪细胞中的脂联素表达水平随着葡萄糖氧化酶浓度的增高而减少.③加入Ang-（1-7）可以逆转氧化应激导致的脂联素表达降低,抑制剂A779可以对抗Ang-（1-7）的这一作用.④Ang-（1-7）对于白细胞介素-6（IL-6）和肿瘤坏死因子-α（TNF-α）的mRNA表达水平没有影响.结论 Ang-（1-7）/Mas轴可以减少氧化应激产生的活性氧水平.Ang-（1-7）/Mas轴对氧化应激的保护作用可以增加抗胰岛素抵抗因子脂联素的表达.