AIDS患者合并感染耶氏肺孢子虫的 ITS1-5.8S rDNA-ITS2序列测定及基因型初步分析

目的 测定AIDS患者痰液标本中耶氏肺孢子虫的ITS1-5.8S rDNA-ITS2序列并进行基因型分析.方法 收集AJDS患者痰液标本,二硫苏糖醇(DTT)消化处理后进行六亚甲基四胺银(GMS)染色镜检;提取肺孢子虫DNA,巢式PCR扩增后进行测序,用Blast程序和DNAMAN软件对所测序列进行同源性检索和序列间比对,并和SD大鼠卡氏肺孢子虫ITS1-5.8S rDNA-ITS2序列进行比较分析.结果 GMS染色法未检测到肺孢子虫,巢式PER成功扩增出4例(31%),其ITS1-5.8S rDNA-ITS2基因序列长度为469 bp,ITS1、5.8S rDNA、rTS2基因片段分别为146、158、165 bp,与SD大鼠ITS1-5.8S rDNA-ITS2的基因同源性为86%(152/176),其中多为5.8S rDNA同源86%(136/158),ITS基因间未发现显著性同源;病例间耶氏肺孢子虫ITS1-5.8S rDNA-ITS2的基因同源性为98%～99%,其中5.8S rDNA高度保守,ITS1基因存在4个差异位点并具规律性,据此把耶氏肺孢子虫初步分为A型和B型;ITS2基因存在3个基因位点,但差异无规律性.结论 成功从AIDS患者痰液标本中获取耶氏肺孢子虫ITS1-5.8S rDNA-ITS2基因序列,其和大鼠源基因差异明显,不同人源宿主耶氏肺孢子虫可存在不同基因型.     

肺孢子菌肺炎19例临床分析

目的回顾性分析首都医科大学附属北京朝阳医院住院肺孢子菌肺炎(pneumocystis pneumon ia,PCP)患者的临床表现,探讨导致PCP的高危因素与诊断治疗和预防措施。方法回顾分析2004年4月至2008年9月19例PCP患者的临床资料。结果26.3%(5/19)的PCP患者有获得性免疫缺陷综合征;73.4%(14/19)的病例患有基础疾病。19例患者中男性12例、女性7例,平均年龄41.53±9.22岁。起病急骤7例,起病缓慢12例。11例患者肺呼吸音正常或稍粗,6例患者肺底闻及局限湿啰音,2例患者肺底闻及爆裂音(考虑与肺纤维化有关)。胸部影像学主要表现为弥漫性网状阴影、片絮影、斑片影。7例患者痰或支气管肺泡灌洗液六胺银染色找到包囊,1例支气管镜肺活检(TBLB)六胺银染色找到包囊,7例患者痰或支气管肺泡灌洗液聚合酶链反应(PCR)阳性检出PC病原体的特异性基因片段和结合临床特征而诊断,其余4例为临床诊断。100%患者服用复方磺胺甲基异恶唑片(TMP-SMZco)和84.2%(16/19)患者合并肾上腺糖皮质激素治疗,14例存活,5例死亡,其中3例死于多脏器功能衰竭,2例死于急性呼吸窘迫综合征。结论随着HIV感染越来越多,现代医学技术的发展,如器官移植肿瘤放化疗及免疫抑制剂的应用等,PCP在临床上已不属于少见病。因其临床表现无明显特异性,病死率较高,应引起临床高度重视,尤其对高危人群应考虑使用预防性治疗。     

卡氏肺孢子虫肺炎大鼠炎症反应及肺损伤研究

为研究卡氏肺孢子虫肺炎(PCP)大鼠炎症反应及肺损伤,通过皮下注射8～12周醋酸可的松免疫抑制诱导建立Sprague-Dawley大鼠PCP模型.将大鼠分为四组,Ⅰ组正常对照(n=6),为未用药的健康大鼠;Ⅱ组阴性对照(n=6),为无肺部感染的大鼠;Ⅲ组细菌性肺炎(n=11);Ⅳ组PCP(n=14).计数支气管肺泡灌洗液(BALF)中的细胞数并行分类,测定总蛋白(TP)、白蛋白(ALB)含量及碱性磷酸酶(ALP)、乳酸脱氢酶(LDH)及Ⅳ型胶原酶(MMP-2、MMP-9)活性.比较PCP及细菌性肺炎其炎症反应及肺损伤的差别.PCP其BALF中细胞总数较阴性对照组增加(P《0.01),但低于细菌性肺炎组.PCP其BALF中白蛋白(622.5±484.0μg/ml)较阴性对照组增加(35.8±16.2 μg/ml,P《0.01).PCP其BALF中ALP及LDH活性(分别为217.0±81.4 U/L,20.8±8.2U/dl)也高于阴性对照组(P《0.01).PCP大鼠BALF中Ⅳ型胶原酶活性增加(P《0.001).PCP炎症发应不同于细菌性肺炎.在PCP,肺泡毛细血管膜通透性明显增加,存在明显肺损伤.     

卡氏肺孢子虫肺炎支气管肺泡灌洗液中表面活性蛋白A和D的变化

目的为进一步明确表面活性蛋白与卡氏肺孢子虫肺炎(PCP)的关系及肾上腺皮质激素对表面活性蛋白的影响.方法通过每周两次皮下注射25mg醋酸可的松8-12周建立PCP及细菌性肺炎大模型.收集支气管肺泡灌洗液(BALF),计数BALF中有核细胞数并分类,用免疫印迹法检测表面活性蛋白A(SP-A)及表面活性蛋白D(SP-D).将大分为免疫抑制组(共三组)及正常对照组.Ⅰ组:正常对照(n=6),为健康SD大;Ⅱ组:阴性对照(n=6),为注射醋酸可的松8周以上无肺部感染的大;Ⅲ组:细菌性肺炎(n=11),为注射醋酸可的松8周以上出现细菌性肺炎而未分离到其它病原体的大;Ⅳ组:PCP(n=14),为注射醋酸可的松8-12周出现PCP而未分离到其它病原体的大.结果阴性对照组BALF中细胞总数低于正常对照组(P＜0.001).PCP组BALF中细胞总数及多形核细胞(PMNs)百分数高于阴性对照组(P＜0.01),但低于细菌性肺炎组.PCP组BALF中SP-A浓度(45.1±22.1μg/ml)显著高于阴性对照组(16.2±9.9μg/ml,P＜0.05)及细菌性肺炎组(6.2±5.6μg/ml,P＜0.001).我们也发现PCP组中SP-D相对含量(24 249±4780灰度值)显著高于阴性对照组(13 384±2887,P＜0.001)及细菌性肺炎组(11 989±2750灰度值,P＜0.001).PCP中重度组SP-A、SP-D高于PCP轻度组(分别P＜0.01,P＜0.001).阴性对照组SP-A、SP-D高于正常对照组,但无统计学差别.结论卡氏肺孢子虫特异性刺激引起BALF中SP-A、SP-D浓度增加,SP-A、SP-D增加与肺内富含卡氏肺孢子虫有关,而与肾上腺皮质激素的应用无关.     

Genotypes and polymorphisms of mutant CCR5-△32,CCR2-64I and SDF1-3’A HIV- 1 resistance alleles in indigenous Han Chinese

Objective To understand the interaction between surfactant proteins and pneumocys tis carinii pneumonia (PCP), and the impact of corticosteriods on surfactant proteins.Methods We established rat models of PCP and bacterial pneumonia induced by subcutaneous injection of 25mg cortisone acetate. At 8-12 wk, the bronchoalveolar lavage f luid (BALF) of rats was collected. Total nucleated cells of BALF were counted a nd differentiated, and the concentrations of surfactant protein A (SP- A) and su rfactant protein D (SP- D) were measured by immunoblotting assay. The rats were divided into three immunosuppressive groups and a normal control group. Group Ⅰ, normal control (n=6), consisted of healthy SD rats; group Ⅱ, negative cont rol (n=6), consisted of rats with cortisone acetate injection for over 8 wk with out lung infection; group Ⅲ, bacterial pneumonia (n=11), rats were injected wit h cortisone acetate over 8 wk that resulted in bacterial pneumonia without other pathogens isolated; and group Ⅳ, PCP (n=14), rats with injected cortisone acet ate for 8-12 wk and developed PCP without other pathogens isolated. Results Our results indicated that the total cell count in BALF in the negative control group was lower than that in the normal control group (P<0.001). During P CP infection, the total cell count and the percentage of polymorphonuclearcytes (PMNs) in BALF were signi ficantly increased (P<0.01), but were lower than those in the bacterial pne umonia group. The concentration of SP- A of BALF in PCP (45.1±22.1 μg/ml) was significantly increased in comparison with that in the negative control ( 16.2±9.9 μg/ml, P<0.05) and bacterial pneumonia groups (6.2±5.6 μ g/ml, P<0.001). We also found that the relative content of SP - D was signi ficantly higher in PCP (24 249±4780 grey values) than that in the negative control (13 384±2887 grey values, P<0.001) and that in bacterial pne u monia (11 989±2750 grey values, P<0.001). SP- A and SP- D were a lso higher in the moderate to heavy group of PCP than those seen in the mild group (P<0.01, P<0.001). SP- A and SP- D were higher in the negative contr ol group than those in the normal control group, but there was no significant di fference between the 2 groups. Conclusion These results suggest that the concentrations of SP- A and SP- D in BALF are inc reased by pneumocystis carinii specific stimulation, but the alteration is n ot related to the corticosteriod usage.     

艾滋病合并卡氏肺孢子菌肺炎一例

AIDS进展期合并的肺部感染中42％为卡氏肺孢子菌肺炎（PCP），PCP依据临床表现、胸部X线征象及痰涂片找到卡氏肺孢子菌或经聚合酶链反应（PCR）阳性而确诊，SMZ—TMP是治疗和预防的首选。本文以一例进行性呼吸困难为首发症状的AIDS合并卡氏肺孢子菌肺炎患者为例探讨AIDS合并PCP感染患者的诊治。     

纤维支气管镜在小儿难治性肺炎诊断与治疗中的应用观察

目的探讨纤维支气管镜在小儿难治性肺炎诊断与治疗中的应用效果。方法选定2017年1月～2019年1月本院收治的120例小儿难治性肺炎患者,分层随机法分为观察组60例(纤维支气管镜+基础治疗)与对照组60例(基础治疗),比较两组住院时长、影像学恢复时长、体温恢复时长、治疗有效率、家长满意率指标数据,并对BALF与痰液细菌培养结果、血清支原体抗体与BALF支原体PCR诊断结果作相应观察、分析。结果干预结束,观察组住院时长、影像学恢复时长、体温恢复时长、治疗有效率、家长满意率均优于对照组,差异均有统计学意义(P0.05);BALF与痰液细菌培养方法的阳性检出率比较,差异无统计学意义(P0.05);血清支原体抗体与BALF支原体PCR的检出率比较,差异有统计学意义(P0.05)。结论纤维支气管镜方法可有效提高小儿难治性肺炎患者临床疗效与预后质量,且诊断方面优势显著,值得推广使用。     

老年卡氏肺孢子菌肺炎的诊断和治疗

目的提高对老年人群患卡氏肺孢子菌肺炎(PCP)的诊治和认识。方法对二例老年PCP患者的诊断和治疗经过进行总结和讨论。结果二例老年PCP患者经临床体格检查、影像学检查和痰标本涂片姬姆萨(或甲紫色蓝)染色查到卡氏肺孢子菌(PC)或PCR( )而获诊。一例PCP患者选用复方磺胺甲口恶唑(SMZco)治愈,另一例初用SMZco后因为发生不良反应而改用卡泊芬净治愈。结论PCP是在老年肺癌或长期住院机械通气患者易患的机会性感染,通过痰标本PCR检测阳性或痰涂片染色查到PC而确诊,应与其他肺炎做鉴别诊断。PCP治疗首选SMZco,当SMZco发生不良反应或者失败时可改用卡泊芬净治疗。     

肺孢子菌繁殖方式的进一步研究

 目的 研究大鼠源肺孢子菌的增殖方式。 方法 从10只肺孢子菌肺炎（PCP）大鼠模型肺脏灌洗液中分离肺孢子菌,用四胺银染色法确定感染情况。用扫描电镜观察灌洗液中肺孢子菌的增殖情况;用透射电镜观察大鼠肺组织内肺孢子菌的增殖情况。结果 PCP大鼠造模成功,GMS染色下肺孢子菌阳性。扫描电镜下观察到肺孢子菌滋养体的二分裂增殖及接合生殖。透射电镜下观察到肺孢子菌滋养体的二分裂增殖、接合生殖与外出芽生殖,同时观察到包囊的内出芽生殖。结论 肺孢子菌有性生殖、无性增殖方式同时存在。在本研究中无性增殖方式包括滋养体的二分裂增殖、外出芽生殖及包囊的内出芽生殖;有性生殖方式为滋养体的接合生殖。     

艾滋病合并肺孢子虫肺炎的实验室诊断方法进展

肺孢子虫肺炎（PCP）是艾滋病常见的一种严重的至死性肺炎。由于其临床表现不具特异性，易被误诊，因此实验室诊断更显重要。该文主要介绍PCP的实验室诊断方法，包括痰液、BALF、肺组织检查形态学诊断、分子学诊断、PC培养以及免疫学诊断等。     

卡氏肺孢子虫肺炎动物模型建立及其检测方法

用皮下注射醋酸可的松法诱导大鼠卡氏肺孢子虫肺炎(PCP)模型,成功率20％。对PCP模型大鼠(n=6)进行诊断采样,结果:肺病理学检查卡氏肺孢子虫(PC)检出率为100％(6/6)。用经支气管肺活检(TBLB)法临床诊断1例早期PCP。支气管肺泡灌洗液(BALF)涂片和肺组织印片的姬姆萨染色,可见PC囊内小体及滋养体。改进的哥氏银染适用于肺组织切片,包囊壁浓染呈黑色,易于识别。对于免疫功能低下怀疑为PCP患者,应尽早作TBLB和(或)BAL检查,可以达到早期诊断。     

Accuracy of Gram's stain in identifying pneumococci in sputum.

We prospectively examined the accuracy of Gram-stained sputum for identifying pneumococci in 42 patients with community-acquired pneumonia. We considered the Gram's stain positive if a preponderant flora or more than ten Gram-positive lancet-shaped diplococci were seen per oil immersion (x1,000) field. These criteria were met in 18 (62%) of 29 specimens that actually contained pneumococci as determined by a positive quellung reaction, or culture on plates or in mice. The Gram's stain was negative in 11 of 13 specimens that did not contain pneumococci. Of the 20 specimens yielding positive Gram's stains, 18 contained pneumococci. A positive Gram-stained smear of sputum strongly suggests the presence of pneumococci, but will miss 38% of specimens containing pneumococci. Deviation from these criteria substantially reduces the overall accuracy of the test.     

双重PCR法检测痰标本对早期诊断军团菌肺炎的意义

为探讨双重PCR方法 (DPCR)检测痰标本中军团菌DNA在早期诊断军团菌肺炎方面的意义 ,采用DPCR方法对军团菌肺炎组、临床疑似军团菌肺炎组、普通肺炎组和肺结核组 4组患者留取的痰标本进行检测。DPCR过程采用根据军团菌 1 6SrRNA基因和mip基因设计的 2对引物 ,同时扩增军团菌 3 86bp 1 6SrRNA基因片段和 2 0 6bpmip基因片段。结果 :军团菌肺炎组的DPCR阳性检出率为 1 0 0 % ,明显高于其他 3组 (分别为 1 7.2 4%、0、0 ,P均 <0 .0 1 )。模拟痰标本DPCR的最低检出限为 1× 1 0 3 cfu/mL。初步研究表明 ,DPCR方法检测痰标本中的军团菌DNA具有较好的敏感性、特异性和稳定性 ,此法在临床早期诊断军团菌肺炎方面具有一定的价值     

传统与现代方法联合检测在肺结核实验室诊断中的价值

目的 探讨T-SPOT.TB、肺泡灌洗液(BALF)-TBDNA、BALF涂片、痰-TBDNA、痰涂片等传统与现代方法在诊断肺结核中的准确性以及联合检测优越性。方法 回顾性调查,对120例患者均用上述五种方法检测,对各检测结果统计对比分析。结果 BALF-TBDNA、BALF涂片阳性率分别为72.1%、33.8%,明显高于痰TBDNA(阳性率51.5%)、痰涂片(阳性率17.6%),差异有统计学意义(P＜0.05);血T-SPOT.TB敏感性为89.7%,特异性为92.3%,与BALF-TBDNA、BALF涂片三者联合检测敏感性为100.0%,阳性预测值为100.0%,阴性预测值为100%。与单项检测对比差异有统计学意义(P＜0.05)。结论 用BALF进行TBDNA和涂片检测明显优于痰标本;血T-SPOT.TB有较好的敏感度和特异度,与BALF-TBDNA、BALF涂片联合检测提高了肺结核的诊断阳性率,减少肺结核的误诊、漏诊,是一组值得推广的检测方法。     

肺孢子菌肺炎诊断研究进展

肺孢子菌肺炎(Pneumocystis pneumonia,PCP)是由耶氏肺孢子菌(Pneumocystis jirovecii,Pj)引起的肺部机会性感染,呼吸道标本染色显微镜检查和多聚酶链反应(Polymerase chain reaction,PCR)是诊断Pj感染的重要手段,但是染色镜检方法低估了Pj感染,而常规PCR方法无法区分定植和现症感染,外周血检测(1,3)-b-D-糖苷(1,3-b-D-glu-can)和抗Pj特异性Ig G和Ig M抗体的动态变化,能辅助诊断PCP。定量PCR需要进一步标准化并确定诊断PCP的阈值。Pj的培养已经成功报道,大大推动了PCP的研究。     

实时荧光定量PCR 法在检测血浆结核杆菌DNA 的应用

目的:探讨实时荧光定量PCR 法在检测血浆结核杆菌DNA 的应用及价值.方法:以我院确诊为结核病且未经治疗的患者392 例作为实验组,同时选取健康体检人群100 例作为对照组.分别对两组患者取静脉血,并对其血浆中结核分枝杆菌DNA 采用实时荧光定量PCR 法进行检测,同时对实验组患者进行痰涂片检查.结果:对照组患者实时荧光定量PCR 法检测全为阴性;实验组患者采用痰涂片检查,结果显示有80 例为阴性,其实时荧光定量PCR 法检测结果显示,痰涂片阳性的患者全为阳性,其阴性患者中有24 例为阳性,在对阳性患者抗痨治疗后有12 例患者转为阴性.实验组患者MTB DNA 为1.76×109 copies/mL.结论:本实验表明结核患者血浆中存在MTB DNA,采用实时荧光定量PCR 法可有效的对痰涂片阴性以及无痰患者进行诊断,有较好的利益价值.     

G试验水平对艾滋病合并肺孢子菌肺炎机械通气患者脱机结局的预测价值

目的 探讨G试验能否预测艾滋病合并肺孢子菌肺炎(PCP)机械通气患者的撤机.方法 回顾性分析北京佑安医院感染科监护病房2010年5月至2017年5月收治的艾滋病合并重症PCP且行机械通气治疗患者的临床资料,根据患者脱机成功与否将患者分为两组,比较两组患者G试验水平.结果 共入选49例患者,脱机成功组9例,失败组40例.两组患者基线资料比较结果显示,白蛋白、CD4计数、G试验水平差异均有统计学意义(P均＜0.05).成功组G试验水平显著低于失败组,分别为331.0 ng/L(299.0～488.7 ng/L)和267.0 ng/L(236.0～294.5 ng/L).多因素分析结果显示,血清G试验水平是影响艾滋病合并重度PCP患者能够脱机与否的独立危险因素(0R=0.978,95％CI:0.959～0.998,P=0.032).结论 G试验可以作为一项脱机结局预测指标,用来预测艾滋病合并PCP患者撤机预后.     

咽拭子及痰液标本肺炎支原体培养对支原体肺炎诊断的影响

目的通过患儿咽拭子及痰液标本肺炎支原体的培养,比较两种标本的培养结果及对儿童支原体肺炎诊断的影响。方法以2007年6月-2008年6月第四军医大学西京医院儿科住院的支气管肺炎患儿231例为研究对象;选取其中42例经ELISA法检测血清肺炎支原体阳性（急性期血清MP-IgM抗体滴度≥1：80[5]或恢复期血清MP-IgG有4倍升高）的患儿作为试验组,选取其中42例年龄及性别与试验组相匹配的ELISA法检测血清肺炎支原体抗体阴性（急性期血清MP-IgM及恢复期血清MP-IgG阴性）的患儿作为对照组,对两组患儿均同时进行咽拭子及痰液标本的肺炎支原体快速培养,并对两种标本的培养结果进行分析。结果试验组42例患儿中有26例痰液标本或咽拭子肺炎支原体快速培养阳性,阳性率61.9%（26/42例）。26例痰液标本或咽拭子肺炎支原体快速培养阳性的患儿中,18例患儿为痰液标本阳性,阳性率69.2%（18/26）,8例患儿为咽拭子标本阳性,阳性率30.8%（8/26）,其中7例患儿的痰液标本和咽拭子培养均阳性。对照组42例患儿中有1例咽拭子MP快速培养阳性。结论痰液标本MP快速培养的阳性率高于咽拭子培养的阳性率,与咽拭子相比,痰液标本是诊断支原体肺炎最佳的标本类型。对于ELISA法血清MP阳性的患儿,痰标本MP快速培养检测MP的临床意义远大于ELISA法血清MP阴性的患儿。     

肺炎支原体肺炎患儿黏液栓形成原因分析

目的　分析肺炎支原体（MP）肺炎患儿黏液栓形成与MP菌量、混合细菌或病毒感染的相关性。方法　选取2014年6月—2015年12月河北省儿童医院收治的MP感染所致肺实变患儿87例,根据支气管镜下表现,将患儿分为黏液栓组（34例）和非黏液栓组（53例）。采用实时荧光定量聚合酶链式反应对患儿肺泡灌洗液（BALF）进行MP-DNA定量;取痰液及BALF用于细菌培养;采用GeXP多重基因表达分析系统联合多重反转录-聚合酶链反应检测痰液病毒。结果　黏液栓组高菌量比例、混合病毒感染率分别为64.7%（22/34）、52.9%（18/34）,高于非黏液栓组的24.5%（13/53）、20.8%（11/53）（P<0.05）。两组混合细菌感染率比较,差异无统计学意义（P>0.05）。多因素Logistic回归分析显示,高菌量〔OR=10.682,95%CI（1.447,78.877）〕是MP肺炎患儿黏液栓形成的危险因素（P<0.05）。结论　MP肺炎患儿黏液栓的形成与MP菌量、混合病毒感染有关,而未见与患儿性别、年龄有关。     

床边纤维支气管镜检查在可疑院内获得性肺炎诊断中的意义

目的评价床边纤维支气管镜检查在可疑院内获得性肺炎诊断中的意义。方法对25例可疑院内获得性肺炎患者进行床边纤维支气管镜检查，同时进行痰标本和支气管肺泡灌洗液标本涂片细菌检测和培养。结果1例为肺出血，2例肺不张，1例肺水肿；21例为院内获得性肺炎，其中14例(72．7％)细菌培养阳性，革兰阴性杆菌占57．1％(12／21)，以铜绿假单胞菌、不动杆菌属、嗜麦芽假单胞菌、肺炎克雷伯菌最常见，革兰阳性球菌2例(9．5％)，主要是耐甲氧西林金黄色葡萄球菌。痰涂片和支气管肺泡灌洗液涂片阳性者分别为3例和10例。支气管肺泡灌洗液细菌涂片阳性率和细菌培养阳性率均高于痰标本(P=0．02和P=0．005)。结论床边纤维支气管镜检查有助除外疑似院内获得性肺炎的非感染性疾病。支气管肺泡灌洗液标本病原学检测优于痰标本。