中国东海亚硫酸杆菌属微生物的鉴定及生物学活性分析

目的:对44株中国东海来源的亚硫酸杆菌进行16S rDNA的序列测定和生物学活性的初步分析.方法:用PCR方法对细菌的16S rDNA序列进行扩增,并在GenBank上进行相似性搜索.将全部亚硫酸杆菌的16S rDNA序列运用Clustal X1.8软件进行多序列比对并用MEGA4.1绘制进化树.利用稻瘟霉菌(Pyricularia oryzae) P-2b、枯草芽孢杆菌 (Bacillus subtilis) 和大肠埃希菌 (Escherichia coli) 作为指示菌检测菌株发酵液的抗菌活性.以HL-60、HepG2细胞作为细胞毒活性指示细胞株检测菌株发酵液的细胞毒活性.采用ABTS和DPPH抗氧化模型检测菌株发酵液的自由基清除能力.结果:经与GenBank数据库比对,44株菌均与亚硫酸杆菌属有很高的相似性(97%～100%).所有菌株发酵液对指示菌未显示出抗菌活性.菌株发酵液有不同程度的细胞毒活性和清除自由基的能力.19株菌的发酵液对HepG2细胞有抑制作用,抑制率为6.8%～42.8%,18株菌的发酵液对HL-60细胞有抑制活性,抑制率为6.9%～43.6%.12株菌的发酵液对ABTS自由基有清除能力,清除率为4.49%～23.08%,8株菌发酵液对DPPH自由基有清除能力,清除率为1.23%～30.76%.结论:44株中国东海来源的亚硫酸杆菌表现出显著的细胞毒活性及抗氧化活性,具有潜在的药用价值.     

山楂叶总黄酮含量测定及抗氧化活性研究

目的:评价山西晋南地区采集的山楂叶中总黄酮的含量及体外抗氧化活性。方法:采用显色法测定总黄酮含量;通过对1,1-二苯基-2-苦基肼(1,1-diphenyl-2-picrylhydra-zyl, DPPH)、2,2-联氮-双(3-乙基苯并噻唑-6-磺酸)二铵盐(2,2′-azino-bis[3-ethylbenzothiazoline-6-sulfonic acid]diammonium salt, ABTS)和羟自由基的清除能力评价体外抗氧化活性。结果:山楂叶总黄酮含量为(79.06±2.05)mg/g。总黄酮对DPPH、ABTS自由基清除半数抑制浓度(half maximal inhibitory concentration, IC₅₀)分别为(91.63±1.75)和(64.34±4.53)μg/mL,与抗坏血酸相比,相对抗氧化活性(relative antioxidant activity, RAA)分别为40.71%和76.64%;对羟自由基清除率较低,三者均低于同质量浓度下的抗坏血酸。结论:山西晋南地区采集的山楂叶总黄酮含量较高,有较高的抗氧化活性,可...     

紫背鼠尾草抗氧化活性的研究

目的 测定紫背鼠尾草各提取部位的抗氧化能力.方法 用DPPH及ABTS.+ 测定紫背鼠尾草不同提取部位的抗氧化活性.结果 紫背鼠尾草乙酸乙酯部位对 DPPH自由基和ABTS.+ 自由基清除能力最强,在浓度为75 μg/mL时,它对DPPH自由基和ABTS.+自由基清除率分别为36.9 % 和99.8%.但紫背鼠尾草提取物对ABTS.+自由基的清除能力要大于对DPPH自由基的清除能力.结论 紫背鼠尾草乙酸乙酯部位对DPPH自由基和ABTS.+ 自由基具有一定的清除能力,该植物具有较好的抗氧化活性.     

铁皮石斛茎、叶、花中黄酮含量及其体外抗氧化活性研究

目的:探讨铁皮石斛不同部位黄酮含量以及其体外抗氧化活性,为其资源充分开发利用提供实验依据。方法:硝酸铝比色法测定黄酮含量,进行二苯基-2-三硝基苯肼(DPPH)自由基清除率、2′-联氨-双-3-乙基苯并噻唑啉-6-磺酸(ABTS)自由基清除率以及超氧阴离子清除率的测定,评价体外抗氧化活性。结果:铁皮石斛茎、叶、花黄酮在不同的体外抗氧化体系中,均表现出了不同的抗氧化活性。其中铁皮石斛花黄酮在DPPH自由基清除率、ABTS自由基清除率以及超氧阴离子清除率的测定中均表现最优。结论:铁皮石斛茎、叶、花中黄酮类成分具有较高抗氧化活性,尤其是铁皮石斛花黄酮。     

黄芪多糖抗氧化作用研究

目的:评价黄芪多糖的体外抗氧化活性。方法:通过研究黄芪多糖的DPPH·清除能力、·OH清除能力、ABTS+清除能力、O_2~-清除能力和还原能力来评价黄芪多糖的抗氧化活性。结果:在浓度为1 g·L~(-1)时,黄芪多糖对DPPH·的清除率为72.9%;对·OH的清除率为60.2%;对ABTS+的清除率为52.2%;对O_2~-的清除率为33.1%;黄芪多糖的还原能力为1.32。结论:黄芪多糖对自由基(·OH、DPPH·、ABTS+、O_2~-)均有一定的清除作用,随着浓度的增加而增加,并且黄芪多糖具有一定的还原能力。     

温肾壮骨复方及其单味药抗氧化及抗肿瘤性研究

目的:通过测定温肾壮骨复方对体外3种自由基(DPPH自由基、ABTS自由基、羟基自由基)的清除能力,探讨其抗氧化作用机制。方法:测定复方和其单味药对DPPH自由基、ABTS自由基清除率,筛选出抗氧化性较强的单味药;然后测定复方和其单味药对DPPH自由基、ABTS自由基、羟基自由基的清除率,计算其IC50值。采用MTT法测出复方和其单味药对乳腺癌骨转移细胞株MDA-MB-231BO的抑制率。结果:在初筛实验中,得出补骨脂和蛇床子是抗氧化性较强的两味单味药。在机制探讨实验中,得出温肾壮骨复方清除DPPH自由基能力和清除ABTS自由基能力与补骨脂相当,同时温肾壮骨复方及补骨脂也表现出较好的抗肿瘤性。结论:温肾壮骨复方具有一定的抗氧化和抗肿瘤性,表现出对DPPH自由基、ABTS自由基和羟基自由基清除的协同作用。     

中药白及抑制酪氨酸酶及清除DPPH自由基的有效部位筛选及其制备工艺考察

目的:对白及不同提取物的抗氧化活性和对酪氨酸酶的抑制作用进行考察,筛选具有抗氧化及美白作用的功效部位,为白及的综合利用开发提供依据。方法:采用水、70%乙醇、70%乙醇提取后水提等提取方式分别对白及进行回流提取,酪氨酸酶抑制法及DPPH自由基清除试验对各提取部位进行相关活性比较。以酪氨酸酶抑制率及DPPH自由基的清除率为指标,对醇提浓度及具体制备工艺进行考察。结果:白及水提物具有促进酪氨酸酶活性作用(-96.78%),其作用随反应时间延长而减弱,白及醇提物对酪氨酸酶具有良好的抑制率(68.36%),而醇提后水提物对酪氨酸酶呈现出先抑制后促进的作用,而后促进作用减弱;白及醇提物与水提物具有一定的清除DPPH自由基能力,其中醇提物抗氧化能力较高,为37.13%,而醇提水提物有增强自由基活性作用(为-43.73%)。综上结果得出,白及醇提物对酪氨酸酶具有良好的抑制作用,对DPPH自由基具有一定的清除作用。因此对醇提部位进行提取浓度、用量及提取时间、次数的考察,结果以95%乙醇,用量为100倍,提取时间为2 h,共提取1次,所得提取物的酪氨酸酶抑制率及DPPH自由基清除率较高。结论:白及具有一定的抗氧化及美白功效,其中具体活性成分尚需进一步研究。     

DPPH法测定粗疣合叶苔内生真菌的抗氧化活性

目的 研究粗疣合叶苔内生真菌的体外抗氧化作用.方法 以2,6-二叔丁基对甲酚(BHT)、L-抗坏血酸(vit C)为对照,采用DPPH法测定粗疵合叶苔中的49株内生真菌的抗氧化活性.结果 具有抗氧化活性的菌株6株,其中活性菌株T24、T38、T44对DPPH自由基有较强的清除作用,半数抑制浓度IC30为8.493、14.366、18.349μg/mL.结论 粗疣合叶苔含有抗氧化活性的内生真菌,是筛选天然生物活性成分或先导化合物的潜在资源.     

茯砖茶不同溶剂提取物抗氧化活性研究

目的 研究茯砖茶不同溶剂提取物体外抗氧化活性,并测定其总多酚、黄酮含量.方法 以抗坏血酸为阳性对照,采用二苯代苦味酰基（DPPH）、[2,2＇-连氨-（3-乙基苯并噻唑啉-6-磺酸）二氨盐]（ABTS）及铁离子还原/抗氧化能力（FRAP）三种抗氧化模型,评价茯砖茶80％乙醇（总提物）、石油醚、乙酸乙酯、正丁醇和水5种不同溶剂提取物体外清除DPPH、ABTS＋自由基能力和对铁离子的还原/抗氧化能力.结果 茯砖茶乙酸乙酯提取物总多酚含量最高,正丁醇提取物黄酮含量最高,分别为（291.38±5.24）、（222.86±6.12）mg/g.茯砖茶不同溶剂提取物均具有一定的抗氧化活性,清除ABTS＋自由基和铁离子还原/抗氧化能力为：总提物＞乙酸乙酯提取物＞正丁醇提取物＞水提物＞石油醚提取物;清除DPPH自由基的能力为：乙酸乙酯提取物＞总提物＞正丁醇提取物＞水提物＞石油醚提取物.茯砖茶总提物和乙酸乙酯提取物均具有良好的抗氧化活性,清除DPPH自由基能力的半清除率浓度（IC50）分别为0.048、0.043 g/L,清除ABTS＋自由基能力的IC50分别为0.025、0.027 g/L.茯砖茶抗氧化能力与总多酚含量呈正相关.结论 茯砖茶提取物具有良好的抗氧化能力,为开发功能性抗氧化剂提供科学依据.     

一株海洋芽孢杆菌的鉴定及抗菌活性研究

目的:对一株编号为ZJ8112的分离自东海海域海泥样品的细菌进行鉴定和抗菌活性研究.方法:采用传统的分类学方法观察菌株ZJ8112的形态、耐盐度,结合16S rDNA 序列分析在GenBank上进行比对以确立其进化地位.利用稻瘟霉菌(Pyricularia oryzae)P-2b、枯草芽孢杆菌(Bacillus subtilis)、大肠埃希菌(Escherichia coli)、啤酒酵母(Saccharomyces cerevisiae)、白念珠菌(Candida albicans)和黄瓜黑星病菌(Cladosporium cucumerinum)作为抗菌活性指示菌,检验ZJ8112的抗菌活性.结果:枯草芽孢杆菌ZJ8112革兰染色阳性,芽孢中生.其最佳生长盐度为10%,属于中等嗜盐菌.通过16S rDNA序列分析发现其与Bacillus subtilis F121112在进化位置上最为接近.该菌株的16S rDNA序列已经提交GenBank,接受号为EU100745.综合ZJ8112菌株的培养特性和形态特征,可认为ZJ8112是一株海洋芽孢杆菌.抗菌活性研究的结果表明其具有很强的抗稻瘟霉菌和抗大肠埃希菌活性.结论:ZJ8112为中等嗜盐的海洋细菌,其最适盐度为10%.生物学活性研究的结果表明,其发酵液具有很强的抗稻瘟霉活性和抗大肠埃希菌活性,具有潜在的抗生素研究的价值.     

Effect of an extraction solvent on the antioxidant quality of Pinus densiflora needle extract

Pinus densiflora needle extract (PDNE) is widely reported to have many pharmacological activities including antioxidant potential. However, the solvent system used for extraction greatly affects its antioxidant quality. Hence, in the present study, we investigated the effect of a different ratio (vol/vol) of ethanol to water (0–100%) in the extraction of PDNE with potent antioxidant capacity. The chemical assays, 2,2-diphenyl-1 picrylhydrazyl (DPPH) and 2,2′-azino-bis(3-ethylbenzothiazoline-6-sulfonic acid) diammonium salt (ABTS), were conducted to assess the antioxidant potential of PDNE. Subsequently, the cytoprotective effect of PDNE was determined using tert-butyl hydroperoxide (TBHP)-challenged HepG2 cellular model. The needle extracts from 40% ethanol (PDNE-40) showed greater radical scavenging activity followed by 60%, 20%, 80%, 0% and 100% ethanol extracts. EC₅₀ value of the most active extract, PDNE-40, was 8.56 ± 0.51 μg/mL, relative to 1.34 ± 0.28 μg/mL of the standard trolox (for ABTS radical), and 75.96 ± 11.60 μg/mL, relative to 4.83 ± 0.26 μg/mL of the standard trolox (for DPPH radical). Either PDNE-20 or PDNE-40 pretreatment remarkably decreased the levels of reactive oxygen species (ROS), lipid peroxides and protein carbonyls in TBHP-challenged HepG2 cells. In addition, both PDNE-20 and PDNE-40 significantly reversed the decreased ratio of reduced (GSH) to oxidized (GSSG) glutathione. Moreover, these two extracts showed a significant inhibitory effect on TBHP-induced nuclear damage and loss of cell viability. In summary, the inclusion of 40% ethanol in water for extraction of Pinus densiflora needle greatly increases the antioxidant quality of the extract.     

西青果丙酮及水提取物体外抗氧化活性初步研究

目的 探讨西青果丙酮提取物和水提取物在3种评价体系下的体外抗氧化活性.方法 采用福林酚比色法测定西青果丙酮提取物和水提取物的总酚含量;利用清除1,1-二.苯基-2-苦肼基自由基(DPPH·)、2,2-联氮基-双-(3-乙基苯并噻唑啉-6-磺酸)二铵盐自由基(ABTS+·)评价法、还原法测定西青果两种溶剂提取物的抗氧化活性.结果 西青果丙酮提取物和水提取物总酚含量分别为(622.19±1.35)mg/g和(457.43±0.96) mg/g;两种溶剂提取物均表现出良好的抗氧化活性,对DPPH、ABTS自由基清除率的IC50值分别为8.427、19.575 μg/mL和20.273、33.064 μg/mL;对Fe3+均有一定的还原能力,其结果与浓度呈良好的量效关系,丙酮提取物还原效果最为明显.结论 西青果丙酮提取物和水提取物具有较强的抗氧化活性.     

巴戟天不同炮制品抗氧化作用比较研究

目的 比较巴戟天及其不同炮制品不同极性部位的抗氧化作用。方法 采用清除苯代苦味肼基（DPPH）自由基,清除[2,2''-连氨-（3-乙基苯并噻唑啉-6-磺酸）二氨盐]（ABTS）自由基及铁离子还原/抗氧化能力（FRAP）测定法,以Trolox、Vc等为阳性对照,对巴戟天生品、炮制品、不同的极性部位进行抗氧化活性评价。结果 巴戟天生品及炮制品均有一定的抗氧化活性,巴戟天及其不同炮制品的乙酸乙酯提取部位清除ABTS自由基能力和清除DPPH能力最强;总多糖部位清除ABTS自由基能力较强,巴戟天生品总多糖的IC₅₀值为0.197mg/ml;剩余水部位的还原铁离子能力最强。结论 不同炮制方法对巴戟天抗氧化活性具有不同程度的影响。     

抑癌基因Runx3增强顺铂致肝癌细胞的凋亡效应

目的:探讨腺病毒介导的Runx3基因(Ad-Runx3)与化疗药物顺铂(DDP)联合应用对肝癌细胞HLE增殖的抑制效果.方法:检测肝癌细胞HLE中Runx3基因启动子区域甲基化状态及表达情况.通过Ad-Runx3感染肝癌细胞HLE,利用RT-PCR方法检测Runx3基因在肝癌细胞中的转录,用Ad-Runx3联合化疗药物...     

植物内生真菌抗稻瘟病菌活性菌株的筛选

目的筛选具有抗稻瘟病菌活性的植物内生真菌菌株。方法以稻瘟病（Magnaporthe grisea）菌株GUY11为靶标菌,对分离自南方红豆杉的56株内生真菌菌株进行抗稻瘟病菌活性筛选。结果共有16株菌株发酵液对GUY11孢子萌发的ID50在10以上,且对其附着胞形成的ID50在50以上,占总菌株数的28.6%;活性菌株主要分布在拟青霉属（Paecilomyces sp.）和木霉属（Trichoderma sp.）,分别是9株和2株;不同内生真菌的发酵液对孢子萌发和附着胞形成的抑制作用是不同的。结论红豆杉内生真菌对稻瘟病菌具有较高的抑制活性。     

中药桑叶固体发酵前后抗氧化活性的研究

目的 探讨桑叶固体发酵前后70％乙醇提取物的体外抗氧化活性.方法 应用“药用真菌固体发酵工程”的原理和方法,以桑叶为药性基质,冠突散囊菌为发酵菌种,在一定条件下进行固体发酵,对发酵物用70％乙醇进行提取.并以维生素C（Vc）和乙二胺四乙酸（EDTA）为阳性对照,以清除1,1-二苯基-2-三硝基苯肼（DPPH）、2,2-联氮-二（3-乙基-苯并噻唑-6-磺酸）二铵盐（ABTS）、＆#183;OH自由基、铁还原能力及与Fe2＋螯合能力5个指标对发酵前后桑叶体外抗氧化活性进行评价;同时对发酵前后总黄酮、总酚酸含量进行测定.结果 未发酵桑叶70％乙醇提取物清除自由基能力及铁还原能力优于固体发酵7d后桑叶的70％乙醇提取物,但对于Fe2＋螯合能力而言,发酵后的桑叶70％乙醇提取物较未发酵前有所升高.其中未发酵桑叶70％乙醇提取物DPPH、ABTS、Fe2＋螯合能力的IC50值分别为：4.69、2.03、20.89 mg/mL,而固体发酵7d后的桑叶70％乙醇提取物三者的IC50值分别为：17.63、1.87、9.20 mg/mL;同时含量测定结果显示,发酵后桑叶中总多酚含量较发酵前明显下降,而发酵后桑叶中总黄酮含量却高于发酵前总黄酮含量.其中发酵前桑叶中总黄酮、总酚酸含量分别为4.39、3.95 mg/mL,而发酵后桑叶中总黄酮含量上升至5.37 mg/g,总酚酸下降为1.55 mg/g.结论 固体发酵7d,能够降低桑叶清除自由基的能力及铁还原能力,但却能升高其螯合能力.     

不同相对分子质量的黑根霉胞外多糖的生物活性

目的 探讨不同相对分子质量黑根霉胞外多糖的抗氧化、抗肿瘤和免疫调节活性。方法 通过分级醇沉从黑根霉的发酵液中分离得到3种不同相对分子质量的多糖,分别命名为RPS-1,RPS-2和RPS-3,检测3种多糖对DPPH、ABTS和羟自由基的清除活性。体外培养小鼠前胃癌细胞MFC、人非小细胞肺癌细胞A549和小鼠巨噬细胞RAW 264.7,给药48 h或24h后CCK-8法检测各组细胞存活率,一氧化氮试剂盒检测RAW 264.7细胞上清液中的NO水平,流式细胞仪检测3种多糖对A549细胞凋亡率的影响。结果 RPS-1,RPS-2和RPS-3均具有较好的抗氧化活性,中等相对分子质量多糖RPS-1对DPPH和ABTS自由基的清除活性显著高于RPS-2和RPS-3（P<0.05）,低相对分子质量多糖RPS-3对羟自由基的清除活性显著高于RPS-1和RPS-2（P< 0.01）。3种多糖均能够抑制MFC细胞和A549细胞的增殖,激活巨噬细胞RAW 264.7,诱导A549细胞凋亡。高相对分子质量多糖RPS-2对MFC和A549细胞增殖的抑制活性高于RPS-1和RPS-3（P>0.05）,RPS-2处理后A549细胞的凋亡率显著高于RPS-1和RPS-3（P<0.05）。高相对分子质量多糖RPS-2促进RAW 264.7细胞增殖的活性显著高于RPS-1和RPS-3（P<0.05）,RPS-2处理后的RAW 264.7细胞释放的NO含量显著高于RPS-1和RPS-3（P<0.01）。结论 3种不同相对分子质量的多糖均具有抗氧化、抗肿瘤和免疫调节活性,低、中相对分子质量多糖RPS-1和RPS-3具有较好的抗氧化活性,高相对分子质量多糖RPS-2具有较好的抗肿瘤和免疫调节活性。     

牡丹花蕊水提取液抗氧化功能研究

目的 探讨牡丹花蕊水提取液的抗氧化功能.方法 采用AlCl₃比色法测定牡丹花蕊水提取液的总黄酮含量,采用福林酚法测定总多酚含量;通过ABTS和DPPH自由基清除法评价牡丹花蕊水提取液的体外抗氧化能力.通过一次性灌胃50%乙醇(12 mL/kg)诱导过氧化小鼠模型,并测定血清和肝脏超氧化物歧化酶(SOD)、谷胱甘肽过氧化物酶(GSH-Px)活力及丙二醛(MDA)含量,评价牡丹花蕊水提取液的体内抗氧化作用.结果 牡丹花蕊水提取液总黄酮含量为(15.81±2.66) mg芦丁/g;总酚酸含量为(46.63±5.05) mg没食子酸/g.牡丹花蕊水提取液具有较强的清除ABTS和DPPH自由基的作用.动物实验表明灌胃给予500 mg/(kg·d)牡丹花蕊水提取液30 d能显著提高乙醇诱导的过氧化损伤小鼠血清和肝脏抗氧化酶活力(P<0.05),显著抑制MDA含量的升高(P<0.05).结论 牡丹花蕊水提取液含有生物活性物质黄酮和总酚酸,其在体内外抗氧化功效中发挥重要作用.     

A Comparative Study on Rat Intestinal Epithelial Cells and Resident Gut Bacteria （ii） Effect of Arsenite

Objective In order to use facultative gut bacteria as an alternate to animals for the initial gastrointestinal toxicity screening of heavy metals, a comparative study on rat intestinal epithelial cells and resident gut bacteria was undertaken. Methods in vitro growth rate of four gut bacteria, dehydrogenase （DHA） and esterase （EA） activity test, intestinal epithelial and bacterial cell membrane enzymes and in situ effect of arsenite were analysed. Results Growth profile of mixed resident population of gut bacteria and pure isolates of Escherichia coli, Pseudomonas sp., Lactobacillus sp., and Staphylococcus sp. revealed an arsenite （2-20 ppm） concentration-dependent inhibition. The viability pattern of epithelial cells also showed similar changes. DHA and EA tests revealed significant inhibition （40%-72%） with arsenite exposure of 5 and 10 ppm in isolated gut bacteria and epithelial cells. Decrease in membrane alkaline phosphatase and Ca^2＋-Mg^2＋-ATPase activities was in the range of 33%-55% in four bacteria at the arsenite exposure of 10 ppm, whereas it was 60%-65% in intestinal epithelial villus cells, in situ incubation of arsenite using intestinal loops also showed more or less similar changes in membrane enzymes of resident gut bacterial population and epithelial cells. Conclusion The results indicate that facultative gut bacteria can be used as suitable in vitro model for the preliminary screening of arsenical gastrointestinal cytotoxic effects.