志贺菌属和肠出血性大肠杆菌感染的分子发病机制

志贺菌属 有关志贺菌感染的分子致病机理包括四部分:a.侵入细胞;b.细胞内增殖;c.细胞内和细胞之间的播散;d.杀死宿主细胞。弗氏痢疾杆菌进入细胞内和内部化需消耗细菌和宿主细胞产生的能量,并与220～240kb质粒有关。志贺菌侵入细胞受多个基因的控制,其位于侵入质粒30kb片     

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以下四种发病机理与哪种疾病有关?(a)渗透性(b)分泌性(c)损伤的粘膜(d)动力学1.阿米巴性肠炎     

STAT5基因沉默对支气管哮喘小鼠T细胞增殖的影响

目的 探讨STAT5a/b基因沉默对支气管哮喘(简称哮喘)小鼠T细胞增殖功能的影响.方法 将20只雌性BALB/c小鼠按随机数字法分为正常组和哮喘组,哮喘组按处理因素不同分别分为空白对照组、STAT5a沉默组、STAF5b沉默组及错义链对照组,采用免疫磁珠法筛选出正常及哮喘模型小鼠的脾脏T细胞,利用RNA干扰(RNAi)沉默T细胞内STAT5a/b基因.荧光定量PCR检测STAT5a/b基因沉默前后STAT5a/b的mRNA表达变化;蛋白免疫印迹法检测STAT5a/b基因沉默前后的蛋白含量的变化;CCK-8检测T细胞RNA干扰前后增殖率的变化;流式技术检测T细胞RNA干扰前后细胞增殖周期及早期凋亡率的变化.结果 (1)哮喘小鼠气道病理结果显示明显炎症改变.(2)哮喘组小鼠脾脏淋巴细胞STAT5a/b mRNA表达量较正常组小鼠明显增高(T值分别为11.71、33.04,均P＜0.05).(3)与空白对照组比较:特异性siRNA转染哮喘小鼠T细胞后,STAT5a和STAT5b沉默组的mRNA表达明显降低(T值分别为35.014、14.553,均P＜0.01);STAT5a和STAT5b沉默组蛋白表达也明显降低(T值分别为- 10.958、- 14.706,均P＜0.01);STAT5a和STAT5b沉默组T细胞增殖率明显降低(T值分别为8.692、10.540,均P＜0.01);STAT5a和STAT5b沉默组增殖期T细胞均明显降低(T值分别为-6.975、-5.567,均P＜0.05);STAT5a和STAT5b沉默组T细胞凋亡率明显升高(T值分别为-6.404、-6.038,均P＜0.05).结论 RNA干扰能特异性降低哮喘小鼠STAT5 a/b表达,抑制T细胞的增殖并促进T细胞凋亡.     

抑癌基因miR-302b在恶性肿瘤中的调控机制

微小RNA是一类具有调控蛋白翻译功能的细胞内源性非编码RNA分子,对生物的生长、发育、衰老,以及细胞的增殖、分化、凋亡,甚至癌症等疾病的发生起到重要的调控作用.miR-302b可参与多种基因的表达调控,在恶性肿瘤的发生发展侵袭转移等过程中发挥抑癌基因功能.本文就miR-302b在恶性肿瘤中的表达形式、所发挥的生物学功能及其分子机制进行述评.     

抑癌基因p33ING1b对人胚肺二倍体成纤维细胞衰老进程影响的机制研究

目的 探讨衰老相关基因p33^ING1b对p16^INK4a以及细胞衰老进程影响的内在分子机制。方法 以人胚肺二倍体成纤维细胞（2BS）为对象，采用RT—PCR、Western blot、结构域分析、启动子分析以及相关衰老生物学指标检测等手段对p33^ING1b对细胞衰老进程的影响进行研究。结果 在2BS细胞中，无论在mRNA水平还是蛋白质水平，p33^ING1b的表达均随代龄俱增，老年细胞p33^ING1b蛋白表达水平是青年细胞的10倍；而且该基因具有促进p16^INK4a表达的作用；通过结构域分析发现，C端的植物同型结构域（PHD）删除体（p33ΔC）较野生型p33^ING1b具有更为明显的促进p16^INK4a表达以及诱导细胞衰老的作用。具体表现在p33ΔC使p16^INK4a表达上调，细胞生长曲线变缓（P〈0．05），细胞传代次数减少10代以上。结论 p33^ING1b具有诱导衰老的作用，而且p33^ING1b的不同结构域的作用也有所不同，PHD结构域似有延缓衰老、约束或拮抗分子内其他部分的作用。     

miR-146a调控人脐静脉内皮细胞的衰老及机制

目的探究miR-146a在人脐静脉内皮细胞衰老中的调节作用,并初步探究其机制。方法以人脐静脉内皮ECV-304细胞为研究对象,连续传代建立ECV-304细胞复制性衰老模型,衰老相关β-半乳糖苷酶(SA-β-gal)法检测不同代次(P2、P6、P9、P12、P15代)细胞中衰老细胞比例,实时定量PCR法检测不同代次(P2、P6、P9、P12、P15代)细胞中miR-146a表达。靶基因预测软件预测miR-146a靶基因。细胞转染建立miR-146a表达上调的P12代细胞(Pre-miR146a组)和miR-146a表达下调的P12代细胞(Anti-miR146a组),并建立相应对照组,SA-β-gal法检测衰老细胞比例,Western blot检测NADPH氧化酶4(NOX4)蛋白表达。结果 P6、P9、P12和P15代细胞的衰老细胞比例明显高于P2代细胞(P0.05),miR-146a表达则明显低于P2代细胞(P0.05)。靶基因预测miR-146a的靶基因为NOX4;转染后,Pre-miR146a组衰老细胞比例明显低于对照组(P0.05),Anti-miR146a组衰老细胞比例明显高于对照组(P0.05); Pre-miR146a组NOX4蛋白表达明显低于对照组(P0.05),Anti-miR146a组NOX4蛋白表达明显高于对照组(P0.05)。结论 miR-146a在衰老的人脐静脉内皮细胞ECV-304中表达下降,上调miR-146a表达能够抑制ECV-304衰老,其机制与调节NOX表达有关。     

丙型肝炎病毒不同基因型核心蛋白对肝母细胞瘤细胞凋亡影响的比较

目的比较HCV不同基因型核心蛋白(core)在肝母细胞瘤细胞凋亡中的作用。方法构建6a基因型HCV core的表达载体pcDNA3.1/myc-His(-)-core(6a)[pCore(6a)];分别将1b、3a和6a基因型HCV core质粒以及空质粒pcDNA3.1/myc-His(-)(pNC)瞬时转染HepG2细胞,48小时后利用流式细胞术检测细胞凋亡发生的情况;利用Real-time PCR检测胱冬肽酶-3的mRNA水平变化;利用化学发光法检测胱冬肽酶-3的活性变化,比较HCV不同基因型core对细胞凋亡作用的差异。结果成功构建了6a基因型HCV core的表达载体pcDNA3.1/myc-His(-)-core(6a)[pCore(6a)];与pNC组相比,表达1b、3a和6a基因型HCV core的HepG2细胞中,Annexin V+细胞数均显著减少,其中6a基因型core较1b和3a基因型core作用显著(P=0.000、0.001);同时实验组中凋亡效应分子胱冬肽酶-3的mRNA水平及其活性较对照组均降低;其中与1b和3a基因型core相比较,6a基因型core显著降低胱冬肽酶-3的mRNA水平,而在抑制胱冬肽酶-3活性方面无显著差别。结论 HCV不同基因型core对细胞凋亡的作用不同;基因6a型core对细胞凋亡的抑制作用更为显著;HCV基因6型核心蛋白可能更易导致肝癌的发生,有待进一步研究。     

心肌梗死患者直接血管成形和支架植入术前使用Abciximab对急性期和长期随访的影响

ADMIRAL作　　者　 (a)MontalescotG ,BarraganP ,WittenbergO等(b)EcollannP ,MontalescotG ,DeLaCoussayeJE ,VaqueJ ,BollaerPB等(c)MontalescotG ,BarraganP ,WittenbergO等题　　目　 (a)直接血管成形术及支架植入术联合Abciximab治疗急性心肌梗死 :ADMIRAL研究 ,30d结果(b)ADMIRAL研究中院前给以Abciximab(c)直接血管成形术及支架植入术联合Abciximab治疗急性心肌梗死 :ADMIRAL研究 ,30d最后结果　　参考文献　 (a)EurHeartJ ,1999,2 0 :170(b)Circulation ,1999,10 0Suppl ;1:1～ 86(c)Circulation ,1999,…     

肝癌转移相关的微小RNAs在不同转移潜能肝癌细胞系的定量研究

目的 研究与转移密切相关的微小RNAs(miRNAs)在不同转移潜能肝癌细胞系的表达水平,探讨其在肿瘤转移过程中的生物学功能.方法 提取细胞系MHCC97H、MHCC97L、HepG2、L02的总RNA,通过反转录获得特异miRNA(miR-122a、miR-124a、miR-148a、miR-148b、miR-15a、miR-219、miR-30c、miR-338、miR-34a、Let-7g、miR-9)的cDNA,并应用TaqMan MGB探针法对其进行定量检测.采用AB17500系统软件V1.3.1采集Ct值,并使用miRNA内参基因RNU6B校正,相对定量计算公式RQ=2-△Ct,A Ct=CtmiRNAs-CtRNu6B.数据均经SPSS13.0统计软件包处理,采用t检验或非参数检验. 结果 转移相关的miRNAs(miR-124a除外)在MHCC97H与MHCC97L中表达,差异均有统计学意义.HepG2中miR-30c、miR-338、miR-34a和Let-g的表达水平明显高于L02,分别为miR-30c(8.41±0.40比6.82±0.29),miR-338(3.14±0.29比-2.36±0.32),miR-34a(0.71±0.40比-2.95±0.26),Let-7g(-4.07±0.55比-6.98±0.56),t值依次为2.948,12.656,7.484,3.684,P值均＜0.05,差异有统计学意义.而miR-148b,miR-9的表达则显著低于正常肝细胞,分别为miR-148b(1.96±0.51比3.76±0.28),miR-9(-4.38±0.86比-1.10±0.53),t值依次为-3.073,-3.324,P值均＜0.05,差异有统计学意义.miR-148家族中miR-48b在所测细胞系中的表达(5.46±1.21)均显著强于miR-148a的表达(1.29±0.35),Z=-5.097,P=3×10-7,差异有统计学意义.结论 可以利用肝癌细胞系列细胞平台进一步研究肝癌转移相关miRNAs在肿瘤转移过程中的生物学功能.     

循环miR-19a/b作为心肌缺血再灌注损伤标志物的研究

目的:探讨miR-19a/b在调节心肌缺血再灌注损伤中的作用及临床意义。方法:实时荧光定量聚合酶链式反应(PCR)检测miR-19a/b在经过10 h缺氧、2 h复氧后的H9c2心肌细胞中的表达,通过荧光素酶实验分析miR-19a/b的潜在靶基因。同时,以40例健康者的血清作为对照,采集40例急性心肌梗死(AMI)患者发病24 h内的外周血标本,分离血清后采用实时荧光定量PCR法检测血清中miR-19a/b表达水平,并采用化学发光免疫分析法检测血心肌肌钙蛋白I(c Tn I)含量;免疫抑制法测定肌酸激酶同工酶(CK-MB)的酶活力。结果:miR-19a和miR-19b在经过10 h缺氧、2 h复氧的H9c2心肌细胞中的表达比在正常H9c2细胞中分别增加了5.876倍和2.761倍(P均0.01)。转染miR-19a/b类似物和miR-19a/b抑制剂分别上调和下调细胞中miR-19a/b的表达。荧光素酶报告基因实验发现,miR-19a/b与第10号染色体缺失的磷酸酶及张力蛋白同源基因(PTEN)蛋白3'UTR区有靶向作用关系。转染miR-19a/b类似物上调miR-19a/b的表达后,PTEN的表达降低;转染miR-19a/b抑制剂下调miR-19a/b的表达后,PTEN的表达增加。与健康受试者比较,miR-19a/b在AMI患者血清中的表达增加(P均0.01);AMI患者胸痛发作后0~3 h开始升高,6~12 h达高峰;血清CK-MB酶活力和c Tn I水平在AMI发作后2~6 h开始升高,24 h左右达高峰。结论:miR-19a/b在心肌缺血再灌注过程中高表达,PTEN是miR-19a/b的潜在靶基因;循环miR-19a/b可作为心肌缺血再灌注损伤新的无创性诊断标志物。     

松果菊苷对大鼠Leydig细胞衰老模型AXL和wnt2b基因的影响

目的探讨松果菊苷对大鼠Leydig细胞衰老模型AXL和wnt2b基因的影响。方法选用原代大鼠睾丸间质(Leydig)细胞为研究对象,主要分为正常组,衰老组和松果菊苷用药组,采用实时荧光定量聚合酶链式反应(PCR)和甲基化特异性PCR检测AXL和wnt2b基因的表达水平和甲基化水平。结果松果菊苷用药组AXL mRNA表达水平明显低于衰老组(P0.05),wnt2b甲基化水平明显高于衰老组(P0.05)。结论松果菊苷可以通过降低AXL mRNA表达水平,提高wnt2b基因的甲基化水平,抑制Leydig细胞的衰老状态。     

Vα24 NKT细胞的细胞因子生成调控

目的:评价细胞因子培养体系对经α-半乳糖酰基鞘氨醇(α-GalCer)体外扩增的NKT细胞的细胞因子生成的影响.方法:每份正常人外周血单个核细胞(MNC)标本分为3～4组:a[IL-2加IL-15,n=6]、b[IL-2加IL-15加IL-12加γ干扰素(IFN-γ),n=6]、c[IL-2加IL-15加IL-7,n=6]、d[IL-2加IL-15加IL-7加粒细胞集落刺激因子(G-CSF),n=4].培养中加入α-GalCer和相应细胞因子,12 d后用流式细胞计数法测定NKT细胞及其亚群数量,并用细胞胞内染色法测定细胞因子生成.结果:①扩增的NKT细胞CD4 亚群中IL-4 细胞比例高于CD4-亚群(P<0.01);2亚群中IFN-γ 细胞比例相当(P＞0.05).②各组NKT细胞中,b组IL-4 比例低于a组(P＜0.01),c和d组均高于a组(均P＜0.05),d和c组结果相当(P＞0.05);而b组IFN-γ 比例略高于a组,但P＞0.05,d组低于a组(P＜0.05),c组与a组的结果相近(P＞0.05).③各组CD4 NKT细胞亚群中,b组IL-4 细胞比例低于a组(P＜0.01),c和d组高于a组(均P＜0.01),而c和d组之间差异无统计学意义(P＞0.05);各组CD4-NKT细胞中,IL-4 细胞比例的差异无统计学意义(P＞0.05);各组CD4 NKT细胞中,IFN-γ 细胞比例的差异无统计学意义(P＞0.05);各组CD4-NKT 细胞中,IFN-γ 细胞比例的差异无统计学意义(P＞0.05).结论:不同细胞因子组合的培养体系,能调节经α-GalCer扩增的Vα24NKT细胞IL-4和IFN-γ的生成,IL-7和G-CSF有助于IL-4的生成,而IL-12和IFN-γ有助于IFN-γ的生成.     

PAI-1基因启动子区4G/5G基因多态和Enos第4内含子a/b基因多态与糖尿病肾病的相关性研究

为探讨 PAI- 1基因启动子区 4 G/ 5 G基因多态性、一氧化氮合酶 (e NOS)第 4内含子 2 7bp插入 /缺失 (a/b)多态性与糖尿病肾病 (DN)的相关性 ,采用发色底物法测定 PAI- 1活性 ;等位基因特异性引物 PCR扩增技术测定 PAI- 1基因 4 G/ 5 G多态性 ;聚合酶链反应测定 e NOS基因第 4内含子 2 7bp的 a/ b多态性。结果显示 ,Hb A1c、SBP、TC、e NOS基因第 4内含子 a/ b多态均属 DN的独立危险因素。早期糖尿病肾病组 (DN+组 ) a等位基因及 ab基因型频率显著高于糖尿病非肾病组 (DN-组 ) (P<0 .0 5 )。DN+组血浆 PAI- 1活性明显高于 DN-组 (P<0 .0 5 ) ;4 G纯合子组 PAI- 1活性明显高于 4 G/ 5 G杂合子及 5 G纯合子组 (P<0 .0 0 5 )。2型糖尿病患者中 ,4 G纯合子和a/ b杂合子携带者 DN的相对风险明显增加 (P<0 .0 5 ) ,4 G杂合子携带者 DN的相对风险增加不明显 (P>0 .0 5 )。当 a/ b杂合子和 4 G纯合子基因多态并存时 DN的发病风险明显增加。认为 PAI- 1基因启动子区 4 G/ 5 G基因多态、e NOS基因第 4内含子 a/ b多态与 DN的发生、发展有关。两种基因多态同时存在时 ,DN的发病风险明显增加     

衰老与胰岛β细胞功能

胰岛β细胞衰老导致的胰岛功能衰退在2型糖尿病的发病机制中起重要作用.衰老的胰岛β细胞复制受限.出现形态及功能改变,即细胞体积增大、小规则,胰岛素分泌模式受损.导致B细胞衰老的机制复杂,包括端粒缩短学说、氧化应激敛DNA损伤学说、致癌基因表达上调学说等.新近研究发现,β-半乳糖苷酶活性增加、p16 1NK4a表达上调及衰老相关的异染色质位点(SAHF)等可作为胰岛β细胞衰老的非特异性生物学标记物,可能对早期预测胰岛β细胞功能衰退、预防2型糖尿病起重要作用.     

苦参碱对胃癌SGC7901/DDP细胞耐药相关miRNA表达的影响和靶点分析

目的探讨苦参碱对化疗药物的增敏作用和机制。方法以非毒性剂量的苦参碱联合长春新碱、阿霉素、5-氟尿嘧啶干预胃癌SGC7901/DDP细胞,观察苦参碱对胃癌SGC7901/DDP细胞耐药性的增敏作用;采用实时荧光定量PCR观察苦参碱干预后耐药相关miRNA的表达,并应用生物信息学方法预测和分析相关miRNA的靶基因和信号通路,应用GO分析方法进行了靶基因的功能注释。结果苦参碱可以增强胃癌SGC-7901/DDP细胞对化疗药物的敏感性,逆转耐药;苦参碱可以剂量依赖性上调耐药相关mir-7、mir-125b、mir-200a、mir-200b、mir-200c、mir-146a的表达,生物信息学方法预测和分析了其靶基因和相关信号通路,并筛选出耐药相关miRNA靶向调控的耐药基因和DNA修复基因,为苦参碱克服胃癌化疗多药耐药提供了靶点。结论苦参碱可以增强胃癌SGC-7901/DDP细胞对化疗药物的敏感性;其作用可能与苦参碱可以上调耐药相关mir-7、mir-125b、mir-200a、mir-200b、mir-200c、mir-146a的表达,并通过miRNA靶向调控的耐药基因和DNA修复基因有关。     

衰老相关的T细胞生物学研究进展

T细胞衰老是导致机体衰老、衰老相关疾病以及和寿命直接相关的重要因素。T细胞在免疫系统中处于核心地位 ,参与各种免疫应答 ,执行各种免疫功能 ,抵抗疾病 ,直接或间接地参与细胞免疫和体液免疫。所以 ,研究T细胞衰老是研究人体衰老的重要内容。目前 ,人们在进行衰老生物学研究时 ,常用T细胞作为模型研究基因表达、细胞间通讯及体内平衡调节等 ,其他多细胞生物很少具有T细胞的优点。我们在此主要讨论引起T细胞衰老的因素 (机制 )、由衰老而引起的T细胞功能的相关变化及检测衰老T细胞的常用方法。　　一、引起T细胞衰老的因素　　 1.复制…     

线粒体DNA突变与衰老的关系研究进展

衰老机理的研究目前已从整体水平、器官水平、细胞水平发展到分子水平 ,生物学家们提出了各种学说〔1〕,从不同角度阐述衰老的机理 ,尤其是线粒体ＤＮＡ(ｍｔＤＮＡ)突变与衰老关系研究异常活跃 ,己成为国内外研究衰老机理的热点之一。本文提供近年来国内外对ｍｔＤＮＡ突变与衰老关系研究的发展信息。1　ｍｔＤＮＡ的结构与功能线粒体属于半自主性细胞器 ,有自己的ＤＮＡ及独立的蛋白质合成体系 ,参与细胞的遗传和分化。人类线粒体基因是一环状双链的核外ＤＮＡ〔2〕,具有自我复制、转录和翻译的功能 ,两条链中重链富含Ｇ碱基 ,轻链富含Ｃ…     

急性Stanford A型主动脉夹层围术期急性肺损伤与D-二聚体相关性的探讨

目的:探讨急性Stanford A型主动脉夹层围术期急性肺损伤(ALI)的发生与D-二聚体(DD)的相关性。方法:2011年6月至2012年5月,连续收治59例急性主动脉夹层患者,均行全弓置换+支架象鼻手术。根据围术期发生ALI的情况分组:a组(10例):术前、术后均发生ALI;b组(17例):术前未发生ALI,但术后发生ALI;c组(32例):术前术后均未发生ALI。各组间结果比较采用方差分析,各因素与氧合指数的相关性采用多元线性回归分析。结果:三组术前DD比较:a组与b组、a组与c组P<0.05;b组与c组均P>0.05。术后24 h、48 h DD比较:a组与c组、b组与c组均P<0.05,a组与b组P>0.05。多元线性回归分析DD升高水平与PaO2/FiO2呈负相关性(γ=-0.032,P<0.001)。三组术后呼吸机使用时间和ICU停留时间比较:a组与c组、b组与c组均P<0.05;a组与b组P>0.05。术后有3例患者死亡,2例术后二次开胸探查,6例术后存在并发症,此11例术后均为ALI患者。结论:急性夹层围术期发生ALI的患者,有一个高的DD水平,且DD与PaO2/FiO2呈负相关性;术后发生ALI的患者,呼吸机使用时间与ICU停留时间显著延长。     

衰老与细胞凋亡

衰老过程(Ageing)是从生物生殖成熟后才开始或加速的,具有累积性、普遍性、渐进性、内生性和危害性的生命过程。在衰老过程中机体各组织器官功能逐渐丧失,易感染疾病,最终死亡。细胞凋亡(Apoptosis B)又称程序性细胞死亡(Programmed cell death),是指为维护内环境稳态,由基因控制的细胞自主的有序性死亡。近年细胞凋亡与衰老关系的研究已成为热点。因细胞凋亡与衰老过程中组织器官功能的退化、衰老相关疾病的发生发展密切相关,本仅就近年来的这些研究成果作一扼要综述。     

对人类衰老生物学研究现状及其前景的几点看法

笼统地说 ,衰老生物学是一门旨在研究生物衰老发生与发展机理的科学。具体地说 ,人类衰老生物学的目的 ,是要研究人类衰老以及老年性疾病发生和发展机理 ,为人类的健康长寿和老年病的预防、诊断与治疗提供理论依据。分子生物学的兴起 ,在理论和技术上促进了衰老生物学领域的研究。最近 ,人类基因组计划草图 (即基因组的结构或结构基因组学 )的完成 ,为人类衰老生物学的研究带来了新的曙光。但是 ,生物衰老 ,尤其是人类衰老是一个极其复杂的过程 ,是几亿年生物进化的结果。生物的寿命是由多种因素决定的 ,人类尤其如此。因为人的寿命不仅受生…