中药远志提取物体外杀精子效果与机制研究

目的:通过精子低渗肿胀(HOS)实验结合改良伊红染色法观察中草药远志粗提物体外杀精活性及机制。方法:HOS实验结合伊红-姬姆萨(EG)染色(HOS-EG)判断精子膜完整性,将精子分为A(HOS+-EG-)、B(HOS-EG-)、C(HOS+-EG+)、D(HOS-EG+)4型。精子染色质扩散实验(SCD)检测精子DNA碎片。制备远志粗提物,并判断其体外杀精子活性。壬苯醇醚-9(N-9)作为标准参照物,生理盐水为对照组。结果:远志粗提物浓度为50.0mg/ml和20.0mg/ml时体外20s内即可完全杀灭精子(与精液1:1混合)。对照组、远志粗提物组及N-9组精子DNA碎片比例各组比较无差异。对照组A、B、C和D型精子百分比分别为(69.0±8.3)%、(3.4±0.5)%、(10.2±1.7)%和(17.4±2.1)%。远志粗提物组及N-9组精子膜完整性全部被破坏,无A型和B型精子,C型精子较对照组明显减少,D型精子比对照组明显增加(P<0.001)。精子复活实验显示远志粗提物组和N-9组均无活动精子恢复。结论:HOS-EG实验可以同时判断一条精子头膜或尾膜损伤。远志粗提物在体外通过破坏精子膜使精子快速失活。     

氟化钠对人成骨肉瘤Saos-2细胞PI3K/Akt信号表达及凋亡的影响

目的观察氟化钠(NaF)对人成骨肉瘤Saos-2细胞磷脂酰肌醇-3-激酶/蛋白激酶B(PI3K/Akt)信号表达及凋亡的影响。方法采用成组设计,按NaF剂量将Saos-2细胞分为0(对照)、5、10、20、40 mg/L染氟组(n=3)。体外培养24、48 h后收集细胞,采用蛋白免疫印迹(Western blot)法检测PI3K、Akt和线粒体凋亡途径相关分子Forkhead转录因子(FoxO)1的蛋白表达,采用流式细胞仪检测Saos-2细胞的凋亡水平。结果体外培养24、48 h时,各组Saos-2细胞PI3K、Akt蛋白表达比较,差异均无统计学意义(P均>0.05)。24 h时,5、10、20、40 mg/L染氟组磷酸化PI3K(p-PI3K)蛋白表达(0.40±0.06、0.45±0.02、0.37±0.06、0.32±0.06)均高于对照组(0.28±0.04,P均<0.05);48 h时,5、10 mg/L染氟组p-PI3K蛋白表达(0.46±0.06、0.58±0.03)均高于对照组(0.29±0.04,P均<0.05),而40 mg/L染氟组(0.21±0.03)低于对照组(P<0.05)。24 h时,5、10、20 mg/L染氟组磷酸化Akt(p-Akt)蛋白表达(0.27±0.01、0.30±0.03、0.27±0.03)均高于对照组(0.20±0.02,P均<0.05);48 h时,5、10 mg/L染氟组p-Akt蛋白表达(0.42±0.04、0.60±0.02)均高于对照组(0.27±0.01,P均<0.05),而40 mg/L组(0.18±0.02)低于对照组(P<0.05)。24 h时,10、20、40 mg/L染氟组FoxO1蛋白表达(0.38±0.07、0.41±0.06、0.47±0.08)均高于对照组(0.34±0.04,P均<0.05);48 h时,5、10、20、40 mg/L染氟组FoxO1蛋白表达(0.36±0.08、0.37±0.10、0.54±0.04、0.73±0.04)均高于对照组(0.28±0.04,P均<0.05)。24、48 h时,对照组和5、10、20、40 mg/L染氟组细胞凋亡率分别为(2.867±0.583)%、(3.647±0.035)%、(3.773±0.095)%、(5.440±0.325)%、(7.203±0.476)%,(3.707±0.286)%、(4.023±0.241)%、(4.970±0.368)%、(12.473±0.949)%、(19.387±1.892)%。24 h时,40 mg/L染氟组凋亡水平高于对照组(P<0.05);48 h时,20、40 mg/L染氟组凋亡水平均高于对照组(P均<0.05)。结论氟可以直接激活成骨细胞内的PI3K/Akt信号通路,进而产生抗凋亡作用。     

胡萝卜素降解物体外对小鼠H_(22)肝癌细胞的抑制作用

目的以胡萝卜素降解物为对象,探讨其在体外对小鼠H22肝癌细胞的抑制作用。方法采用MTT法测定肿瘤细胞增殖抑制作用、HE染色观察细胞形态结构、PI/Hoechst双染检测细胞凋亡、Annexin-V-FITC/PI定量分析细胞凋亡率和流式细胞术检测细胞周期变化。结果在200 g/ml质量浓度下培养48h后,可使65.47%的H22细胞凋亡;流式结果显示胡萝卜素降解物主要将H22细胞阻滞在G0/G1期。结论胡萝卜素降解物在体外对H22细胞有抑制作用。[营养学报,2013,35(2):162-166]     

粗壮女贞提取物的体外抑菌作用研究

目的 研究粗壮女贞提取物对10种常见细菌的体外抑菌效果.方法 采用纸片扩散法和96孔板微量肉汤稀释法,对金黄色葡萄球菌、大肠杆菌、白色念珠菌、沙门菌、志贺菌、副溶血性弧菌、蜡样芽孢杆菌、产气荚膜梭菌、小肠结肠炎耶尔森菌和铜绿假单胞菌进行体外抑菌实验,测定其抑菌环直径、最小抑菌浓度(MIC)和最低杀菌浓度(MBC).结果 实验菌株对粗壮女贞提取物呈不同程度的敏感,MIC和MBC分别为:产气荚膜梭菌0.20 mg/ml和0.20mg/ml,金黄色葡萄球菌、蜡样芽孢杆菌、小肠结肠炎耶尔森菌均为3.13 mg/ml和3.13 mg/ml,副溶血性弧菌6.25 mg/ml和6.25 mg/ml,白色念珠菌MIC为1.56 mg/ml,其他细菌MIC均大于25 mg/ml.结论 粗壮女贞提取物对上述10种细菌均有不同程度的抑菌作用,值得进一步开发利用.     

连花清瘟联合美罗培南对耐药菌株的体外抑菌实验

目的评价连花清瘟联合美罗培南对临床分离菌株及耐药菌株的体外抑菌活性。方法配制连花清瘟浸膏粉溶液,采用96孔板微量肉汤稀释法,对金黄色葡萄球菌、大肠埃希菌、铜绿假单胞菌进行体外抑菌实验。采用微量棋盘稀释法,测定连花清瘟、美罗培南对耐碳青霉烯类铜绿假单胞菌(CR-PA)、耐碳青霉烯类鲍氏不动杆菌(CR-AB)的体外抑菌浓度,计算抑菌指数(FIC)并进行比较。结果连花清瘟对金黄色葡萄球菌、大肠埃希菌、铜绿假单胞菌的最小抑菌浓度(MIC)分别为2、128、64mg/ml,最低杀菌浓度(MBC)分别为8、128、128mg/mL;联合用药后,能够提高CR-AB对连花清瘟和美罗培南的敏感性,其中有协同效果的组合浓度分别为连花清瘟16mg/ml、美罗培南16μg/ml。结论连花清瘟对临床常见致病菌均有抑菌作用。连花清瘟联合美罗培南对CR-AB有协同作用,可为临床治疗耐药菌感染提供依据。     

桔梗皂苷D的杀精效果及促凋亡研究

目的:研究中药桔梗的单体化学成分桔梗皂苷D(PD)对人精子的杀伤效果,初步探索其杀精机制。方法:将同一健康男性的精液均分为4份,分别用生理盐水、0.15mmol/LPD、0.20mmol/LPD及0.31mmol/L壬苯醇醚-9(N-9),阳性对照处理样本2min。用计算机辅助的精液分析系统(CASA)检测PD对人精子的杀伤效果,并通过AnnexinⅤ-FITC检测精子凋亡。结果:生理盐水对照组、0.15mmol/LPD组、0.20mmol/LPD组、N-9对照组的精子活率分别为67.97±21.76%,36.68±28.23%,24.18±7.72%,42.74±25.62%。各处理组与生理盐水对照组间差异有统计学意义(P<0.001),N-9与两个PD剂量组之间差异无统计学意义(P>0.05)。细胞凋亡检测结果显示,PD主要引起精子的晚期凋亡,0.15mmol/LPD、0.20mmol/LPD、0.25mmol/LPD组的晚期凋亡指数分别为181.7±46.0、246.0±52.8、272.8±57.3,PD各剂量组的晚期凋亡率与对照组之间差异有统计学意义(P<0.001)。结论:PD对人精子有显著的瞬间杀灭效应,它主要引起精子的晚期凋亡,可能与PD对精子膜的损伤有关。PD将来可能作为一种有潜力的临床杀精剂。     

油茶皂素不育剂对鼠类抗生育功能的实验研究

目的研究油茶皂素不育剂对鼠类的抗生育功能。方法测定不同浓度油茶皂素不育剂对雄性小鼠的体外杀精效果和体内抗生育能力。结果油茶皂素不育剂对雄性小鼠呈现出较优的剂量依赖性体外杀精活性,3 min时的最低杀精浓度为0.05 mg/ml,与人用杀精剂壬苯醇醚相当,比扁桃酸(0.1 mg/ml)和柠檬酸(0.25 mg/ml)低。与生理盐水对照组比较,125 mg/(kg.d)油茶皂素不育剂灌胃给药4周后,可以明显降低雄性小鼠的活精子数(92.1%)和精子活力(52.6%),可以显著减少雌性小鼠的妊娠率(64.0%)和活胎数(67.4%)。结论油茶皂素不育剂具有较强的体外杀精活性和体内抗生育功能,可进一步开发成体外杀精避孕药和环境友好型鼠类抗生育药剂。     

一种低渗肿胀试验预测男子生育力

低渗肿胀试验(HOS)为一种测定人精子膜功能的简易方法。虽然常规精液检查可以测定精液性质,但不能确定精子功能。目前测定精子功能最常见的是精子穿透试验(SPA),然而SPA费时,实验步骤较复杂,与之相比的HOS为一种测定精子膜完整性及部分精子功能的相对简单的方法。手淫法采集精液,精子活动率(>30%)前向运动(>2.0)和密度(2×10~7/ml)均在正常范围内,只有正常形态的百分率未限定。将精液置于室     

清温败毒饮的体外抗菌实验

目的观察清温败毒饮、黄连解毒汤对金黄色葡萄球菌和大肠埃希菌的药理作用。方法对清温败毒饮、黄连解毒汤的水煎提取液进行体外抗菌试验,体外抗菌试验用试管两倍稀释法,观察给药前后清温败毒饮、黄连解毒汤最低杀菌浓度(MBC)示其杀菌活性的变化。结果清温败毒饮对金黄色葡萄球菌的最低抑菌浓度(MIC)为15·6mg/ml,MBC为31·2mg/ml,对大肠埃希菌的MIC为7·8mg/ml,MBC为15·6mg/ml;黄连解毒汤对大肠埃希菌、金黄色葡萄球菌的MIC为15·6mg/ml,MBC为31·2mg/ml。结论清温败毒饮、黄连解毒汤具有抗金黄色葡萄球菌及大肠埃希菌的作用。     

壬苯醇醚—9外用避孕药药理和毒理研究

壬苯醇醚-9最低有效杀精子浓度0.2～0.25mg/ml。小鼠ip的LD_(50)为128.5±7.7mg/kg、大鼠阴道给药的LD_(50)>500mg/ml。33倍人用剂量亚急性试验给药组与空白对照组无明显差异(P>0.05)。100mg/ml浓度不抑制阴道乳酸杆菌。1mg/皿进行的Ames试验结果阴性。家兔阴道刺激试验结果总分值为6.63,在可接受范围。     

苦参碱联合阿霉素对耐药白血病K562／AO2细胞株凋亡及Bel-2表达的影响

目的研究苦参碱联合阿霉素对耐药白血病细胞系K562／AO2体外增殖的抑制、诱导凋亡及对Bcl-2表达的影响。方法实验分对照组,阿霉素组,苦参碱组（又分为0．50mg／ml、0．75mg／ml、1．0mg／ml3个不同的浓度组）和苦参碱＋阿霉素组（也根据苦参碱的浓度不同分为0．50mg／ml、0．75mg／ml、1．0mg／ml3个不同的浓度组）,共分为8个组。取对数生长的肿瘤细胞,1×10^6／孔,分别加入阿霉素、不同浓度的苦参碱,不同浓度的苦参碱联合阿霉素予以处理,对照组只加等体积的培养基不加药物。加入药物后继续培养48小时。以MTr法检测肿瘤细胞增殖的抑制率,流式细胞术检测肿瘤细胞凋亡、Bcl-2表达。结果单纯阿霉素组、单纯苦参碱组、苦参碱＋阿霉素组对K562／A02细胞系均有抑制作用;随苦参碱浓度的增高,抑制作用增强,各组间差异有统计学意义（P〈0．01）;苦参碱＋阿霉素组的细胞抑制率均显著高于单纯苦参碱组和单纯阿霉素组,差异有统计学意义（P〈0．01）。苦参碱组及苦参碱联合阿霉素组K562／A02细胞凋亡率较对照组明显升高,差异有统计学意义（P〈0．01）;苦参碱＋阿霉素组的细胞凋亡率较单纯苦参碱组及单纯阿霉素组均显著升高,差异有统计学意义（P〈0．01）,并且随苦参碱浓度的增加,细胞凋亡率增加。各单纯组及联合组细胞Bcl-2的阳性表达率与对照组相比均明显下调,差异有统计学意义（P〈0．05）;苦参碱＋阿霉索组细胞Bcl-2表达率与单纯苦参碱组、单纯阿霉素组相比均明显下调,差异有统计学意义（P〈0．05）。结论苦参碱与阿霉素联合能增强对K562／AO2细胞的抑制作用,促进其凋亡,明显降低Bcl-2表达。     

Chenopodium album seed extract: a potent sperm-immobilizing agent both in vitro and in vivo

PURPOSE: Aqueous decoction of Chenopodium album seeds (CAD) was assessed for its sperm-immobilizing and contraceptive efficacy in laboratory mammals. METHOD: Spermicidal efficacy was evaluated in vitro by a modified Sander-Cramer test. The mode of spermicidal action was assessed by (a) supravital and double fluoroprobe staining of sperm, (b) hypoosmotic swelling tests and (c) transmission electron microscopy. Contraceptive efficacy was evaluated by intrauterine and vaginal application of CAD in rats and rabbits, respectively, followed by their mating and evaluation of pregnancy outcomes. RESULTS: The minimum effective concentration of CAD that induced instantaneous immobilization of rat spermatozoa in vitro was 2 mg/mL. The mechanism of CAD action involved disintegration of sperm plasma membrane and dissolution of acrosomal cap causing sperm death. Fertilization of oocytes and establishment of implantation were prevented in the uterine horn that was administered with CAD, while these events occurred unhindered in the untreated contralateral side. In rabbit, intravaginal application of CAD significantly blocked the establishment of pregnancy. CONCLUSION: CAD possesses appreciable spermicidal potential, which may be explored as an effector constituent of vaginal contraceptive.     

洁泽2号体外杀精及大鼠阴道避孕实验

目的:观察中药复方药液洁泽1号(Jieze NO.1,JZ1)对外用杀精剂壬苯醇醚(N-9)的杀精增效作用及洁泽2号(Jieze NO.2,JZ2,JZ1与N-9混合制剂)凝胶大鼠阴道内用药的避孕(抗生育)效果。方法:采用改良的Sander-cramer方法观察JZ2中N-9的最低杀精浓度对正常人精子前向运动率、活动率和存活率的影响;大鼠阴道内给予JZ2药物凝胶后雌雄合笼,分别于交配后1 min、3 min、5 min、10 min观察阴道内精子活动情况,并观察各组避孕率。结果:N-9 20 s、3 min最低杀精浓度均为0.25 mg/ml,与洁泽1号混合(即JZ2)后,N-9最低杀精浓度分别为0.125 mg/ml、0.062 5 mg/ml。交配后1 min,各单纯N-9及JZ2凝胶组大鼠阴道内均未见活动精子。N-9(12%及以上浓度)、JZ2(含10%及以上浓度N-9)各组均有较高的避孕率,与自然对照组及空白凝胶组之间的差异均有极显著统计学意义(P<0.01)。JZ2(含14%、12%N-9)药物凝胶组抗生育率均可达100%,与14%N-9作用相当。JZ2(含10%N-9及8%N-9)抗生育率分别为90%、40%,与自然对照组之间有统计学差异。JZ2(含12%N-9和10%N-9)凝胶组对大鼠的避孕作用强于相同浓度的N-9组,且比较差异有统计学意义(P<0.05)。结论:由剂量-反应关系曲线可以看出JZ1对N-9的杀精作用具有协同作用,两药混合后(即JZ2)可以减少N-9的剂量;JZ2凝胶大鼠阴道内用药具有较好的抗生育作用,在相同避孕效果下可减少N-9的用量。     

精子细胞凋亡率与胚胎停育相关分析

目的:研究精子凋亡率与胚胎停止发育的相关性。方法:胎停育患者丈夫55例(胎停育组),年龄31.69±4.16岁;23名正常生育男性(对照组),年龄32.28±5.56岁。所有对象均留取精液标本并进行精液常规分析,采用抗活性半胱氨酸蛋白酶3标记精子,使用流式细胞仪检测精子细胞凋亡率,以无抗体标记的精子作为空白对照。对测得的所有数据进行统计学分析。结果:胎停育组与对照组的精子细胞凋亡率分别为0.85±0.33%,0.19±0.12%。两组间比较差异具有统计学意义(P<0.05)。ROC曲线分析,精子细胞凋亡率预测胎停育发生灵敏度为67%,特异度为70%。胎停育组与对照组精子浓度、活动率、活动力、正常形态率均有统计学差异(P<0.05)。结论:精子细胞凋亡率增加、精子质量下降可能与配偶胚胎停止发育有关。     

神经生长因子诱导肝星状细胞凋亡及其相关机制的研究

目的观察神经生长因子（nerve growthfactor,NGF）对大鼠肝星状细胞（hepatic stellatecell,HSC）凋亡的影响,并探讨其可能的作用机制。方法体外培养大鼠肝星状细胞株HSC—T6,将HSC—T6与100ng／mlNGF孵育24h后,流式细胞术检测细胞凋亡;细胞免疫化学法检测HSC中凋亡相关基因P^53、Bcl-2、Caspase-3蛋白表达的情况;免疫荧光法检测NGF、神经生长因子低亲和力受体p75NTR表达的情况。结果NGF作用HSC后凋亡率较对照组明显增高[（22．364±9．51）％VS（5．88±1．36）％,P〈0．05]。凋亡相关蛋白P^53、Caspase-3的阳性细胞百分率与对照组比较明显增高[（78．41±4．00）％、（39．26±1．57）％VS（34．96±3．84）％、（9．27±1．01）％,P〈0．05],而Bcl-2表达实验组阳性细胞百分率较对照组降低[（18．12±1．38）％vs（91．53±2．98）％,P〈0．05]。NGF作用HSC后NGF表达增多（6．53±1．40vs1．77±0．17,P〈0．05）,而p75NTR表达无明显变化（3．52±0．36VS4．24±0．38,P〉0．05）。结论NGF可能通过使凋亡相关基因p、Caspase-3表达上调、Bcl-2表达下调,而诱导HSC凋亡。NGF作用HSC后可作为始动因子和效应因子增加NGF的表达,而对p75NTR表达无影响。     

小剂量舒芬太尼联合曲马多用于术后静脉镇痛的观察

目的:评价小剂量舒芬太尼联合曲马多用于术后静脉自控镇痛(PCIA)的有效性和安全性。方法:选择90例下腹部横切口剖宫产手术患者,ASAⅠ~Ⅱ,无特殊病史。所有患者采用腰硬联合麻醉,按照PCI用药方法随机分为:T组,曲马多1000mg+格拉司琼5mg;S组,舒芬太尼150ug+格拉司琼5mg;S+T组,曲马多500mg+舒芬太尼50ug+格拉司琼5mg;均用生理盐水稀释到100ml。术毕给予首剂量5ml,背景输注2ml/h,PCA 1ml/次,锁定时间15min。记录术后4h、8h、12h、24h、36h、48h各时间点镇痛、镇静评分和不良反应。结果:镇痛、镇静评分在各时间点组间比较差异无统计学意义(P>0.05),S+T组不良反应发生率明显下降,组间比较有统计意义(P<0.05)。结论:小剂量舒芬太尼联合曲马多术后静脉镇痛不仅能减少药物用量而且能取得满意效果,降低不良反应的发生率,提高镇痛的安全性。     

二乙基亚硝胺对人胎肝干细胞的毒性效应

目的探讨二乙基亚硝胺(Diethylnirtosamine,DENA)对人胎肝干细胞的毒性效应,为评价其遗传毒性提供理论依据。方法用不同质量浓度DENA(0、450、900、1350、1800、2250μg/ml)处理人胎肝干细胞后,应用MTT法检测DENA对体外培养的人胎肝干细胞增殖的抑制作用及量效关系;通过单细胞凝胶电泳实验检测不同剂量DENA处理后人胎肝干细胞DNA的损伤情况;利用Hoechst 33258染色方法检测DENA诱导后人胎肝干细胞凋亡的情况。结果人胎肝干细胞经900、1350、1800μg/ml的DENA处理48 h后,细胞存活率低于阴性对照组,差异有显著性(P0.01);人胎肝干细胞经DENA处理24 h后,出现染色体固缩、浓染等细胞凋亡表现;单细胞凝胶电泳实验发现,当DENA为900和1350μg/ml时,具有致DNA断裂的作用,尾部DNA含量分别达到(18.44±4.99)%和(17.33±3.29)%,明显高于对照组的(0.015±0.004)%,差异有显著性(P0.01),但在1800和2250μg/ml时,彗星拖尾程度明显降低,差异有显著性(P0.01)。结论 DENA对人胎肝干细胞具有直接毒性效应,引起DNA损伤,具有潜在遗传毒性。     

氟哌利多复合地塞米松对曲马多镇痛致恶心呕吐的防治作用

目的观察氟派利多复合地塞米松对曲马多镇痛所致恶心呕吐的防治作用。方法 80例硬膜外麻醉下剖腹产病人,随机分为4组,每组20例;术后行曲马多病人自控硬膜外镇痛（PCEA）。对照组（A）给予曲马多500mg＋生理盐水至100ml;氟哌利多组（B）给予曲马多500mg＋氟哌利多5mg＋生理盐水至100ml;地塞米松组（C）给予曲马多500mg＋地塞米松20mg＋生理盐水至100ml;氟哌利多复合地塞米松组（D）给予曲马多500mg＋氟哌利多5mg＋地塞米松20mg＋生理盐水至100ml。观察24h镇痛情况（VAS评分）及恶心呕吐发生情况。结果组间镇痛效果视觉模拟评分法（VAS）无明显差异;A组恶心呕吐发生率为35%,明显高于B组（15%）和C组（15%）;D组恶心呕吐发生率为5%,与A组比较,P〈0.05。结论氟哌利多与地塞米松单独使用均能有效减少曲马多镇痛所致恶心呕吐反应,两药联合使用防治恶心呕吐作用进一步增强。