美金刚保护缺血神经元分子机制的研究

目的 探讨N-甲基-D-天门冬氨酸（NMDA）受体非竞争性抑制剂美金刚（memantine）对脑缺血再灌注（I/R）损伤的影响及其分子机制.方法 制备四动脉结扎（4-VO）大鼠全脑缺血模型.实验分为4组（n=6）：假手术组（sham组）,缺血/再灌注组（I/R组）,美金刚处理组和生理盐水组.在缺血后立刻腹腔注射美金刚或生理盐水.焦油紫染色观察海马CA1区神经元的存活情况,免疫印迹检测大鼠海马中p-ERK1/2的表达.结果 与sham组相比,I/R组神经元死亡增加,p-ERK1/2表达下调;与I/R组相比,美金刚处理组显著降低了神经元的死亡率,同时也明显升高了p-ERK1/2的表达.结论 美金刚抑制了I/R引起的神经元死亡.其机制可能与美金刚抑制突触外NMDA受体的过度激活进而激活ERK通路有关.     

雌激素对大鼠脑缺血再灌注后的神经保护作用

目的 探讨雌激素对大鼠脑缺血再灌注的保护作用.方法 建立大鼠脑缺血再灌注模型.按照Zea-longa评分法测定脑缺血再灌注后神经功能评分及观察免疲组化染色标本.结果 雌激素治疗组的神经功能评分及神经元损伤明显低于缺血再灌注组.结论 雌激素对大鼠脑缺血再灌注损伤有一定的神经保护作用.     

尼古丁保护脑缺血再灌注大鼠神经损伤

目的：观察尼古丁对全脑缺血再灌注大鼠模型神经损伤是否具有保护作用。方法：改良的Pulsinelli四血管闭塞法制作全脑缺血再灌注模型,用尼氏染色方法观察并计数尼古丁对大鼠海马CA1区神经元存活数目的影响。结果：通过腹腔注射尼古丁能够显著减少全脑缺血再灌注引起的海马CA1区神经元死亡数,提高神经元存活数目。结论：尼古丁减轻脑缺血再灌注大鼠神经损伤。     

局灶性脑缺血再灌注大鼠神经元凋亡及七叶皂甙钠干预的研究

目的:观察七叶皂甙钠在大鼠脑缺血再灌注后神经元细胞凋亡过程中的作用。方法:运用大鼠右侧大脑中动脉缺血再灌注模型,比较正常对照组、假手术组、缺血3h组、缺血3h再灌注3h/6h/12h/24h/48h/72h组、缺血3h再灌注β-七叶皂甙钠药物干预后3h/6h/12h/24h/48h/72h组等大鼠脑组织中的神经元凋亡情况。结果:七叶皂甙钠干预治疗后,缺血组缺血侧凋亡阳性细胞减少。结论:七叶皂甙钠有明显抑制大鼠脑缺血再灌注后神经元细胞凋亡的作用。     

益肾降浊汤对脑缺血再灌注大鼠海马CA1区神经元形态学的影响

目的:观察益肾降浊汤对大鼠脑缺血再灌注后海马CA1区神经元形态学的影响.方法:用HE染色在光镜下进行观察.结果:与正常对照组相比,模型大鼠术后1天神经细胞水肿,核深染现象明显;7天后神经元密度减轻(P＜0.05),15天时以上病理损伤逐渐加重.治疗组在第1、7、15天海马CA1区神经元病理损伤均轻于模型组,神经元密度较模型组显著增加(P＜0.05).结论:益肾降浊汤可明显减轻脑缺血再灌注后的神经元损伤,对神经元有保护作用.     

糖尿病大鼠局灶性脑缺血再灌注海马区Tau蛋白的表达及意义

目的 观察Tau蛋白在糖尿病大鼠脑缺血再灌注海马区神经元的表达,探讨Tau蛋白异常磷酸化神经元毒性作用与神经元损伤的关系.方法 健康雄性Wister大鼠60只,随机分为4组:①正常对照组;②假手术组;③脑缺血再灌注组(NIR组);④糖尿病脑缺血再灌注组(DIR组).采用STZ诱导糖尿病和线栓法建立大脑中动脉闭塞(MCAO)模型,HE法观察海马CA1神经元缺失,用免疫组化方法检测Tau蛋白在糖尿病大鼠脑缺血再灌注海马区神经元的表达.结果 HE染色:正常对照与假手术组未见神经元缺失,即未发生神经细胞凋亡;DIR组与NIR组均见神经元缺失,即发生了神经细胞凋亡,而且DIR组发生神经元缺失严重,与NIR组比较有明显差异(P<0.05).Tau蛋白染色:正常对照与假手术组极少见Tau免疫染色阳性细胞,DIR组与NIR可明显见到Tau免疫染色阳性细胞,而且DIR组Tau免疫染色阳性细胞数比NIR组更多,比较有明显差异(P<0.05).结论 Tau异常磷酸化神经元毒性作用与糖尿病加重脑缺血再灌注海马神经元损伤有关.     

茶多酚对缺血-再灌注大鼠p38信号通路及细胞凋亡的影响

目的:研究全脑缺血再灌注后茶多酚对p38信号转导通路蛋白的表达及对大鼠海马CA1区细胞凋亡的影响,探讨其对脑缺血再灌注损伤的保护作用。方法:126只雄性健康清洁SD大鼠随机分为3组,缺血再灌注组(IR,n=42),假手术组(PO,n=42),茶多酚干预组(TP,n=42)。经典四血管阻塞法建立全脑缺血再灌注损伤模型,TP组给予腹腔注射茶多酚200mg/kg,时间在全脑缺血再灌注结束之后,其余两组则给予等剂量生理盐水腹腔注入。各组均在再灌注后2、6、12、24、48、72h处死大鼠,提取脑组织制备病理切片,免疫组化染色观察磷酸化p38蛋白的表达;HE染色观察海马CA1区神经元形态结构的改变;TUNEL染色计算阳性细胞凋亡指数。结果:脑缺血再灌注损伤后凋亡细胞在海马CA1区PO组少量表达,IR组显著表达(P<0.05),TP组凋亡细胞表达在各时间点介于IR组和PO组之间(P<0.05);与PO组比较,IR组在再灌注后各时点p38蛋白表达显著增强(P<0.05),TP组较PO组表达增强但较IR组表达减弱(P<0.05)。结论:茶多酚可抑制大鼠全脑缺血/再灌注损伤时的p38蛋白活性,进而减少海马椎体细胞凋亡,对脑缺血/再灌注损伤具有保护作用。     

δ阿片受体激动剂DADLE对全脑缺血再灌注大鼠大脑组织病理影响

目的:观察δ阿片受体激动剂DADLE对全脑缺血再灌注大鼠大脑组织结构病理变化的影响,探讨DADLE在脑复苏中的神经保护作用.方法:50只SD大鼠随机分为5组,每组各10只:①假手术组(N):不制模不干预;②模型组(I/R):单纯制作全脑缺血再灌注模型;③DADLE预处理组(D1):在缺血前给予DADLE;④DADLE缺血后处理组(02):在缺血后给予DADLE;⑤DADLE再灌注期处理组(D3):在再灌注早期给予DADLE.实验结束后,取大脑组织进行形态学检查.结果:全脑缺血再灌注大鼠大脑出现大量神经元坏死、胞浆浓缩、核固缩现象.DADLE各处理组缺血再灌注损伤的病理改变明显减轻.模型组和DADLE各处理组海马神经元细胞密度均低于假手术组(P<0.01),而DADLE各处理组海马神经元细胞密度高于模型组(P<0.01),DADLE各处理组之间海马神经元细胞密度差异没有统计学意义(P>0.05).结论:δ阿片受体激动剂DADLE对大鼠全脑缺血再灌注损伤具有一定的保护作用.     

Hemin对全脑缺血大鼠海马迟发型神经元死亡的影响

目的观察Hemin对全脑缺血大鼠海马迟发型神经元死亡的影响。方法 24只雄性Wistar大鼠采用4血管闭塞法制造大鼠全脑缺血或再灌注模型,低、高剂量的Hemin于脑缺血后给药,硫堇染色下对海马CA1区锥体神经元的迟发型死亡（DND）进行评估。结果全脑缺血再灌组CA1区发生明显DND。低高剂量Hemin治疗组海马CA1区神经元DND与全脑缺血或再灌组相比未见明显改善（P〉0.05）。结论治疗性给予Hemin不能有效发挥对全脑缺血或再灌注大鼠海马的神经保护作用。     

转bcl-2基因大鼠全脑缺血再灌注后海马CA1区P-P38的表达

目的 观察转bcl-2基因大鼠全脑缺血组再灌注后P-P38蛋白在海马回CA1区的表达. 方法 90只健康雄性SD大鼠,随机分为三组:假手术组(SO组,n=30),暴露血管而不夹闭;缺血再灌注组(IR组,n=30),采用4-VO法建立全脑缺血再灌注模型,5 min缺血后给予再灌注;转bcl-2基因组(bcl-2组,n=30):大鼠经转基因处理后再缺血再灌注.各组动物于再灌注后2,6,12,24,48,72 h处死,将脑组织切片进行HE染色,免疫组化染色及TUNEL染色,观察海马回神经元形态改变,凋亡细胞数量及P-P38在CA1区表达. 结果 HE染色显示:IR组全脑缺血再灌注后48 h CA1区神经元数目减少,排列紊乱,核膜界限不清,结构模糊;bcl-2组变化不明显.免疫组化染色显示:P-P38在SO组基本呈阴性着色;IR组CA1区2h出现,48 h达高峰,72 h略有下降;bcl-2组P-P38表达趋势同IR组,但各时间点表达强度弱于IR组.TUNEL染色显示:SO组可见到少量凋亡细胞;IR组全脑缺血再灌注后48 h凋亡细胞数达高峰;bcl-2组再灌注后12-72 h凋亡细胞数量较IR组均明显减少. 结论 全脑缺血再灌注后海马CA1区P-P38表达增加,bcl-2可通过抑制P-P38表达抑制脑缺血再灌注后的细胞凋亡.     

Memantine对大鼠局灶性脑缺血损伤的长期神经保护效应

目的：探讨N-甲基-D-天门冬氨酸盐（NMDA）受体拮抗剂美金刚（MEM）对大鼠局灶性脑缺血损伤的长期神经保护作用.方法：将70只SD大鼠随机分为假手术组（n=6）和对照组,MEM5,10,20mg/kg组（n=16）.除假手术组外,其余各组动物均行线栓法阻闭大脑中动脉（MCAO）120min.MEM各组分别在脑缺血后15min腹腔注射MEM5,10,20mg/kg,对照组在脑缺血后15min腹腔注射等容积生理盐水.再灌注7d后进行神经功能评分,处死动物后行2,3,5-氯化三苯四唑（TTC）染色,测定脑梗死容积百分比,酶联免疫法检测脑组织肿瘤坏死因子α（TNFα）,白细胞介素-6（IL-6）含量.结果：再灌注7d后,神经功能评分MEM10,20mg/kg组均明显优于对照组,MEM20mg/kg组优于MEM10mg/kg组（P〈0.01）,MEM5mg/kg组与对照组相比较差异无显著性.脑梗死容积MEM10,20mg/kg组明显小于对照组,MEM20mg/kg组小于MEM10mg/kg组（P〈0.01）,MEM5mg/kg组与对照组相比较差异无统计学意义.脑组织中炎症因子TNFα,IL-6含量对照组较假手术组显著升高（P〈0.01）,MEM10,20mg/kg组较对照组明显降低（P〈0.01）.MEM5mg/kg组较对照组TNFα,IL-6含量差异无统计学意义.结论：MEM对大鼠局灶性脑缺血损伤有长期神经保护效应,此神经保护效果呈剂量依赖性,其机制可能与降低脑组织TNFα,IL-6含量相关.     

三七三醇皂苷对局灶脑缺血再灌注大鼠不同恢复时期脑组织Nogo-A mRNA和蛋白表达的影响

目的:观察局灶性脑缺血再灌注后Nogo-A mRNA和蛋白表达的动态变化,以及三七三醇皂苷(PTS)对其影响。方法:将健康雄性SD大鼠随机分为假手术组、模型组和药物干预组(PTS组),采用Longa线栓法制备大脑中动脉阻塞与再灌注大鼠短暂局灶性脑缺血模型。药物干预后,采用RT-PCR结合免疫组织化学技术检测大鼠缺血再灌注后不同时期(3 d,7 d)脑组织Nogo-A mRNA和蛋白的表达。结果:模型组Nogo-A mRNA和蛋白表达在缺血再灌注损伤后3 d时下降,7 d时上升。PTS组在3 d时大脑皮层和海马Nogo-A表达比模型组低,但差异无显著性意义(P0.05);7 d时Nogo-A表达明显低于模型组,差异有显著性意义(P0.01)。结论:PTS可使缺血再灌注大鼠的Nogo-A表达下降,这可能是其发挥脑保护作用的机制之一。     

迷迭香干预三重脑震荡大鼠焦虑行为变化

目的 用迷迭香干预多重脑震荡 (multiple cerebral concussion, MCC) 大鼠, 观察其抗焦虑治疗作用.方法 用单摆打击装置复制大鼠三重脑震荡 (3MCC) 模型.将损伤大鼠随机分成迷迭香高、中、低3个剂量组、吐温溶剂组、3MCC组和正常对照组 (C组) .伤后连续给药16 d后, 进行旷场实验 (OFT) , 评估其焦虑样行为改变情况.结果 (1) 与正常组比较:各实验组在旷场中央区活动时间均减少, 在旷场周围区活动时间增加, 除高剂量组外, 其余各组差异均有统计学意义 (P<0.05) ;各实验组在总穿格数、中央穿格数均减少, 且差异有统计学意义 (P<0.05) ;在周边穿格数检测中, 除中剂量组外, 其余各组均减少, 且低剂量组、3MCC组、吐温组差异有统计学意义 (P<0.05) ; (2) 与3MCC组比较:各药物干预组在旷场中央区活动时间、总穿格数均明显多于损伤组, 在旷场周边区活动时间明显少于损伤组, 差异有统计学意义 (P<0.05) ;在旷场中央与周围穿格数中除低剂量组外, 均明显多于损伤组, 差异有统计学意义 (P<0.05) .在大鼠直立次数中各实验组差异无统计学意义 (P>0.05) .结论 三重脑震荡大鼠伤后17 d出现了明显的焦虑样行为改变, 迷迭香伤后早期干预可明显改善多重脑震荡大鼠的伤后焦虑样行为.     

康脑液对皮质区干细胞因子基因表达的影响

目的：在康脑液方剂干预下观察皮质区内源性神经细胞干细胞因子（SCF）mRNA在大鼠脑缺血再灌注损伤后不同时间的表达情况。方法：成年SD大鼠,以线栓法建立大脑中动脉缺血再灌注模型,随机分为模型组、药物干预组和假手术组。原位杂交技术检测脑缺血1.5h再灌注1～14d后,脑皮质区SCFmRNA表达情况。结果：脑缺血再灌注后,药物干预组、模型组SCFmRNA的表达在皮质区均明显高于假手术组,于第7天达高峰,第14天下降。结论：药物干预后脑缺血再灌注脑皮质区SCFmRNA表达在不同时间点与模型组具备相同的表达规律,两组SCFmRNA的表达无显著性差异。     

环孢霉素A对脑缺血再灌注损伤的保护作用

目的：探讨环孢霉素A（Cyclosporin,CsA）对局灶性脑缺血再灌注损伤大鼠的神经保护作用。方法：雄性SD（Spregue-Dawley）大鼠随机分组，测定脑组织含水量的大鼠分为治疗组、损伤对照组和正常对照组。测定脑梗死灶面积的大鼠分为治疗组和损伤对照组。采用改良的Longa法制作脑缺血再灌注动物模型。术后1h予以再通。2治疗组大鼠均于损伤前5d（包括损伤当天）臀股内按15mg(kg.d）注入CsA生理盐水溶液，2损伤对照组大鼠均注和相同剂量的生理盐水，正常对照组未损伤，未用药。术后24h行TTC染色测定大鼠脑梗死区面积。术后48h测定梗死区脑组织水量。结果：CsA治疗组和对照组相比，梗死灶面积缩小（P＜0．01），脑水肿减轻（P＜0．01）。结论：CsA对脑缺血再灌注损伤大鼠有明显的神经保护作用。     

贝科能对心肺复苏后大鼠心、脑、肾的保护作用

目的:研究贝科能(复合辅酶)对心肺复苏大鼠心、脑、肾的保护作用.方法:SD大鼠24只,采用窒息合并冰氯化钾停跳液致大鼠心跳骤停5 min后开始心肺复苏的动物模型,随机分为对照组(仅行假手术)、常规复苏组和贝科能治疗组,每组8只.复苏后24 h采取组织标本,采用比色法测定心、脑、肾组织中丙二醛(MDA)含量及超氧化物歧化酶(SOD)、Na -K - ATPase活力,采用透射电镜观察心、脑、肾细胞超微结构.结果:常规复苏组与对照组相比,心、脑、肾组织中MDA含量明显增高,SOD及Na -K -ATPase活力显著降低(P<0.05);贝科能治疗组各项指标检测均比常规复苏组好(P<0.05).透射电镜下可见对照组大鼠心、脑、肾细胞超微结构形态正常,常规复苏组各器官细胞线粒体肿胀、嵴断裂、空泡变性,贝科能治疗组细胞超微结构改变较轻.结论:贝科能对心肺复苏大鼠的心、脑、肾细胞具有保护作用.     

粒细胞集落刺激因子治疗大鼠局灶性脑缺血再灌注损伤

OBJECTIVE: To study the therapeutic effects of granulocyte colony-stimulating factor (G-CSF) on focal cerebral ischemia-reperfusion injury in rats. METHODS: Adult male SD rats were subjected to transient (2 h) middle cerebral artery occlusion (MCAO) and scored 48 h later for such neurological functions as spontaneous movement, paresis, forelimb motor function, climbing ability, pain sensation, and position sense. Twenty rats with the total score less than 12 were divided equally into two groups to receive daily subcutaneous injection of 20 microg/kg of G-CSF for 19 days or the same dose of saline injection (control group). The rats in the two groups were also given intraperitoneal injection of Brdu10 mg/kg for 19 days. The neurological functions of the rats in both groups were examined on a weekly basis after MCAO and on day 21, the rats were killed to prepare frozen sections of the brain tissues for double immunohistochemical staining with Brdu and glial fibrillary acidic protein antibody to identify the neural cells newly evolved from the stem cells. RESULTS: The rats in G-CSF group showed better neurological function recovery than the control rats 3 weeks after MCAO (P<0.05). Obvious regeneration of the neural cells was observed around the infarction area in the rats receiving G-CSF treatment. CONCLUSION: G-CSF promotes neurological function recovery and neural cell regeneration after cerebral infarction in rats and can be effective for intervention of focal cerebral ischemia-reperfusion injury.     

盐酸美金刚对血管性痴呆大鼠海马神经元保护作用的研究

目的 探讨盐酸美金刚对血管性痴呆(vascular dementia,VD)大鼠海马CA1区神经元的保护作用. 方法 36只Wistar雄性大鼠随机分为假手术组、模型(VD)组、美金刚组各12只,双侧颈总动脉结扎法制备动物模型,Y-型迷宫测试学习记忆能力,HE染色观察大鼠海马神经元的形态学变化,免疫组化染色检测nNOS、Caspase-3的表达,TUNEL法检测神经元凋亡数量百分比.结果 盐酸美金刚组大鼠的学习记忆成绩优于模型组,但不及假手术组[学习成绩依次为:(63.16±1.75)次,(79.25±2.01)次,(50.83±1.80)次,F =707.91,P <0.01;记忆成绩为:(53.17±1.85)次,(69.17±1.70)次,(40.67±1.83)次,F =762.43,P <0.01];nNOS、Caspase-3的表达低于模型组,但高于假手术组[nNOS的平均灰度值依次为:(140.23±2.30),(175.87±3.34),(105.63±3.52),F =1539.67,P <0.01;Caspase-3平均灰度值为:(132.78±5.36),(162.78±5.25),(99.54±5.06),F =439.37,P <0.01];神经元凋亡数量百分比少于模型组,但多于假手术组[依次为(33.75±2.70)%,(56.17±3.56)%,(6.33±3.65)%,F =672.91,P <0.01].结论 盐酸美金刚可改善VD大鼠的空间记忆能力,并且能通过降低nNOS、Caspase-3的过度表达,减少其海马CA1区神经元的凋亡.     

大鼠脑缺血再灌注后Caspase-3的表达及胰岛素的影响

目的探讨Caspase-3在缺血再灌注大鼠脑皮质神经元中的表达及胰岛素干预的影响。方法将动物随机分为假手术组、缺血组及干预组,参照ZeaLonga线栓法建立大鼠左侧大脑中动脉闭塞（MCAO）局灶性脑缺血再灌注模型,干预组大鼠在脑缺血即刻给予胰岛素及葡萄糖腹腔注射,分别在缺血2小时再灌注后不同时间点断头取脑,免疫组化法测定脑皮质神经元Caspase-3的表达。结果缺血组大鼠脑皮质Caspase-3的表达较假手术组显著增强（P〈0.01）,给予胰岛素处理后,Caspase-3的表达较缺血组减弱（P〈0.05）,但仍显著高于假手术组（P〈0.01）。结论短暂的脑缺血再灌注可导致脑皮质神经元Caspase-3的表达增加,胰岛素可抑制脑皮质神经元Caspase-3的表达。