冬凌草甲素诱导C6脑胶质瘤细胞凋亡的初步研究

目的:研究冬凌草甲素对大鼠C6脑胶质瘤细胞的抑制增殖及诱导凋亡的作用。方法:不同浓度的冬凌草甲素在不同的时间间隔内作用于C6脑胶质瘤细胞,用冬凌草甲素浓度时间生存曲线来测试冬凌草甲素对C6脑胶质瘤细胞的作用。用流式细胞技术来分析细胞周期的分布情况及凋亡细胞的百分数。结果:生存曲线结果证实冬凌草甲素诱导增殖抑制呈浓度依赖和时间依赖。Hochest 33258斑点染色及流式细胞技术揭示冬凌草甲素诱导C6脑胶质瘤细胞凋亡及抑制其进入细胞周期的G2/M相。结论:冬凌草甲素能够抑制C6脑胶质瘤细胞增殖,诱导细胞凋亡。     

冬凌草甲素对骨肉瘤细胞的凋亡诱导效应的研究

目的：考察冬凌草甲素是否能诱导MG-63细胞凋亡。方法：用不同浓度的冬凌草甲素作用于MG-63细胞,用Hochest33258染色鉴定MG-63细胞凋亡的形态学特征;用流式细胞仪分析MG-63早期凋亡细胞的百分率;用Caspase-8蛋白印迹分析证明MG-63细胞凋亡发生的分子特征。结果：凋亡细胞形态学鉴定、流式细胞仪检测均有力证明冬凌草甲素能以浓度依赖性方式诱导MG-63细胞凋亡;冬凌草甲素诱导MG-63细胞凋亡伴有Caspase-8蛋白表达上调和裂解激活。结论：冬凌草甲素能以浓度依赖性方式诱导MG-63细胞凋亡。     

冬凌草甲素通过抑制Akt通路诱导人雄激素非依赖性前列腺癌细胞DU145细胞凋亡

目的:观察冬凌草甲素对人雄激素非依赖性前列腺癌细胞DU145细胞增殖、凋亡的影响,并分析可能的作用机制。方法:体外培养的DU145细胞,用不同浓度冬凌草甲素(浓度0、10、20、40、80、100μmol/L)处理24、48、72 h,MTT法测定其对DU145细胞增殖的影响;冬凌草甲素(浓度分别为0、20、40、80μmol/L)处理DU145细胞48 h后,采用流式细胞仪检测细胞凋亡,Western blot法检测Akt、p-Akt、p-GSK-3β、Bax及Bcl-2蛋白的表达情况。结果:冬凌草甲素对DU145细胞的增殖具有抑制作用,且呈剂量、时间依赖性;DU145细胞经冬凌草甲素作用48 h后,细胞凋亡率显著增加;Bax表达上调,而Bcl-2表达下调;p-Akt及其下游蛋白p-GSK-3β的表达降低。结论:冬凌草甲素可通过抑制DU145细胞增殖并促进其凋亡,其作用机制可能与抑制Akt信号通路激活,继而上调Bax并下调Bcl-2有关。     

冬凌草甲素诱导人脑胶质瘤U251细胞的凋亡及其机制

目的 研究冬凌草甲素对人脑胶质瘤U251细胞体外生长抑制及诱导凋亡的作用及其机制。方法 MTT法检测冬凌草甲素对U251细胞的生长抑制作用;倒置显微镜法和荧光显微镜Annexin V-FITC/PI双染色法观察细胞的形态学变化;流式细胞仪Annexin V FITC/PI双染色法检测细胞凋亡率;Realtime PCR法检测冬凌草甲素作用U251细胞后的bcl 2、bax及caspase-3基因表达水平的变化。结果 冬凌草甲素对U251细胞有明显的生长抑制作用（P<0.05）,呈明显的时间和浓度效应关系。冬凌草甲素作用U251细胞24h后出现明显的细胞凋亡形态学改变。随着冬凌草甲素作用浓度增加,凋亡和坏死细胞数均增加,浓度越高,诱导细胞凋亡的作用越明显（P均 <0.05）。随着冬凌草甲素作用时间延长,U251细胞的bax和caspase-3基因的表达逐渐增强,bcl-2基因的表达逐渐减弱（P均<0.05）。结论 冬凌草甲素能诱导人脑胶质瘤U251细胞凋亡,其凋亡机理可能与bax和caspase 3基因表达的上调,bcl-2基因表达的下调相关。     

冬凌草甲素对神经母细胞瘤抗肿瘤的作用研究

目的 在体内体外水平探讨冬凌草甲素（oridonin）对神经母细胞瘤的抗肿瘤作用。方法 CCK-8法检测冬凌草甲素对细胞增殖的影响;AO/EB双荧光染色后荧光显微镜观察细胞凋亡情况;免疫印迹检测细胞内活化的caspase-3和剪切的PARP表达水平;构建SHSY-5Y神经母细胞裸鼠异种移植瘤模型,Ki-67免疫组化染色分析冬凌草甲素对肿瘤组织增殖的影响。结果 冬凌草甲素作用HSY-5Y和SK-N-MC细胞24h后,可以剂量依赖性抑制细胞增殖。不同浓度冬凌草甲素处理24h后AO/EB双荧光染色显示,随着药物浓度增加细胞凋亡明显增多。免疫印迹结果证实冬凌草甲素可以浓度依赖性增加活化的caspase-3和剪切的PARP蛋白的表达。冬凌草甲素处理组裸鼠移植瘤体积增量显著小于对照组,Ki-67免疫组化显示冬凌草甲素处理组肿瘤组织增殖细胞比率较对照组显著降低。结论 冬凌草甲素可以抑制SHSY-5Y和SK-N-MC细胞增殖并诱导其凋亡,并在动物水平抑制裸鼠移植瘤的生长。     

冬凌草甲素对体外培养的前列腺癌PC-3细胞生长的影响

目的观察冬凌草甲素对前列腺癌PC-3细胞生长活性的影响,并对其可能机制进行探讨。方法 10、20、40、60μg/mL浓度冬凌草甲素分别作用于前列腺癌PC-3细胞12、24、36h（阳性对照药物为阿霉素）,应用MTT法检测各组OD值,并计算抑制率;流式细胞术检测60μg/mL冬凌草甲素作用于PC-3细胞36h的细胞周期分布情况。结果与空白对照组相比较,冬凌草甲素组与阳性对照组的抑制率都显著增加,呈时间与剂量依赖性（P〈0.05）。与阳性对照组相比较,冬凌草甲素组抑制率无明显变化（P〉0.05）。与空白对照组相比较,冬凌草甲素组与阳性对照组的细胞在G0/G1期显著减少,G2/M期明显增加（P〈0.05）。与阳性对照组相比较,冬凌草甲素组细胞在G0/G1期和G2/M期无明显变化（P〉0.05）。结论冬凌草甲素能显著抑制PC-3细胞活性,由于毒性更低,副作用更小,其在治疗前列腺癌方面具有较好的临床应用及开采价值。     

冬凌草甲素作用PI3K/AKT通路诱导HeLa细胞凋亡

 【目的】研究冬凌草甲素诱导HeLa细胞凋亡的作用及其机制。【方法】MTT法测定冬凌草甲素对HeLa细胞的生长抑制实验,Hoechst 33342荧光染色等观察细胞核形态学变化;LDH法研究细胞死亡的途径。流式细胞仪检测细胞的凋亡,免疫印迹实验检测相关蛋白的表达。【结果】25μmol/L以上的冬凌草甲素对宫颈癌HeLa细胞具有明显的生长抑制作用,并能诱导细胞发生凋亡,随着药物浓度的增加和作用时间的延长,细胞的生长抑制率及细胞凋亡率均明显升高,冬凌草甲素抑制细胞生长及诱导细胞发生凋亡的过程中,细胞端粒酶Akt、FKHRL、GSK3表达水平及活性显著降低。【结论】冬凌草甲素能够通过诱导人子宫颈癌HeLa细胞发生凋亡而发挥抑制HeLa细胞生长作用,抑制Akt和GSK3的活性是冬凌草甲素体外诱导人子宫颈癌HeLa细胞发生凋亡的重要作用机制之一。     

冬凌草甲素对HL-60细胞凋亡及Survivin表达的影响

目的 探讨冬凌草甲素对人白血病细胞株 HL-60 细胞生长抑制作用及其机制.方法 收集经不同浓度冬凌草甲素干预的HL-60细胞,制成细胞涂片,光学显微镜下观察细胞形态.采用MTT比色法观察不同浓度冬凌草甲素对HL-60细胞增殖的抑制作用,通过凋亡试剂盒Annexin V-FITC标记,流式细胞仪检测细胞凋亡率,并以RT-PCR检测凋亡抑制基因 Survivin的表达.结果 冬凌草甲素在10～25 μmol/L范围内可抑制HL-60细胞的生长,且呈时间和浓度依赖性.并可诱导HL-60细胞发生凋亡,表现出特异性的凋亡形态学改变.流式细胞仪分析显示,冬凌草甲素处理后凋亡细胞比例增多,且随着药物浓度的增加而逐渐增加.RT-PCR检测结果显示, 20 μmol/L冬凌草甲素作用后,与对照组相比, HL-60细胞Survivin mRNA水平下降,且随时间延长表现得更为明显.结论 冬凌草甲素能抑制人白血病细胞株HL-60细胞的生长增殖,并可诱导其发生凋亡, 其作用机制可能与凋亡抑制基因Survivin的下调有关.     

冬凌草甲素通过激活ATR通路诱导HEPG_2细胞凋亡实验研究

目的:探讨冬凌草甲素抑制HEGP_2肝癌细胞增殖及其机制研究方法:MTT法检测抑制率、结晶紫检测冬凌草甲素诱导HEPG_2肝癌细胞抑制增殖作用、Western blotting检测不同浓度冬凌草甲素作用HEPG_2肝癌细胞后ATR、H_2AX、γ-H_2AX、P53等蛋白的变化。结果:MTT法、结晶紫法显示冬凌草甲素对HEPG_2肝癌细胞能够明显抑制,且抑制作用在一定浓度范围内呈计量依赖性;Western blotting结果显示冬凌草甲素在诱导细胞凋亡过程中ATR、P-P53、γ-H_2AX表达水平及活性显著增强。结论:冬凌草甲素诱导HEPG_2肝癌细胞发生凋亡可能是通过引起H_2AX蛋白磷酸化进一步激活ATR信号通路引起细胞凋亡。     

冬凌草甲素诱导膀胱癌MB49细胞凋亡及机制研究

目的研究冬凌草甲素对膀胱癌MB49细胞株的生长抑制及诱导凋亡作用及其机制。方法MTT法检测冬凌草甲素对MB49细胞的生长抑制作用;Hoechst 33258染色法观察细胞的形态学变化;流式细胞仪检查Annexin V-FITC-PI双染色法检测细胞凋亡率;分光光度法检测caspase-3、caspase-8和caspase-9活性变化;Western blotting检测Bcl-2和Bax蛋白表达的变化。结果冬凌草甲素对MB49细胞有明显的生长抑制作用,呈明显的时间-效应关系和浓度-效应关系。随着冬凌草甲素作用浓度增加,凋亡细胞数和坏死细胞数均增加,浓度越高,坏死细胞的比率增加越多。随着冬凌草甲素作用时间延长,MB49细胞的Caspase-3和Caspase-9活性均升高;Bcl-2蛋白的表达逐渐减弱,Bax蛋白的表达逐渐增强,但Caspase-8未见明显变化。结论冬凌草甲素对膀胱癌MB49有明显的抗肿瘤作用。冬凌草甲素可能主要通过Fas/FasL-线粒体途径上调Bax、下调Bcl-2,导致MB49细胞凋亡的发生。     

冬凌草甲素诱导前列腺癌PC-3细胞自噬作用的实验观察

目的 观察冬凌草甲素(ORI)诱导前列腺癌PC-3细胞自噬,探讨ORI抗前列腺癌的可能机制.方法 实验应用MTT检测细胞存活率、扫描电镜和透射电镜观察细胞超微结构变化、AO染色法观察细胞胞质中酸性泡囊(acidic vesicular organells,AVO)、Western印迹检测MAPI-LC3蛋白水平、RT-PCR技术检测自噬基因beclin 1 mRNA水平.结果 MTT结果显示ORI能有效抑制PC-3细胞增殖,并呈现显著的剂量和时间依赖效应,15 μmol/LORI作用细胞24 h,增殖抑制率达(39.95±3.05)%,48 h后达(51.28±2.91)%.浓度增加至25 μmol/L,抑制率达到(67.94±4.78)%.ORI处理细胞24 h,扫描电镜下观察到细胞缩小变圆,表面微绒毛消失.透射电镜发现细胞核固缩,染色质边集,且胞质中出现大量双层膜包裹形成的自噬体,内含细胞器或胞质.AO染色可见胞质中AVO的形成.Western印迹结果显示ORI促进LC3-Ⅰ向LC3-Ⅱ的转化,ORI处理后LC-Ⅱ蛋白水平升高,LC3-Ⅰ/LC3-Ⅱ比值下降.RT-PCR结果显示自噬抑制剂3-MA能阻止ORI引起的beclin 1 mRNA水平上调.结论 冬凌草甲素能抑制前列腺癌PC-3细胞增殖,并通过上调beclin 1的mRNA水平诱导细胞发生自噬.本课题为冬凌草甲素抗肿瘤机制研究提供了新思路.     

Altered gene expression reveals molecular mechanisms underlying oridonin-induced apoptosis of multiple myeloma LP-1 cells

Objective: To investigate the effect of oridonin on proliferation and invasion of human multiple myeloma LP-1 cells and the underlying mechanism. Methods: LP-1 cells in culture medium in vitro were treated with oridonin at the different concentration. Cell proliferation was measured by Microwave Theory and Techniques (MTT) assay and cell apoptotic rate was detected by flow cytometry. Morphology of cell apoptosis was observed by transmission electron microscope. Expressions of Bax, Bcl-2, Caspase-3, NF-κB as well as I-κB mRNA were detected by real-time PCR. Results: The MTT assays and flow cytometry revealed that oridonin could inhibit the growth of LP-1 cells and cause apoptosis significantly; the suppression was both in time- and dose-dependent manner. Marked morphological changes of cell apoptosis were found under a transmission electron microscope after the cells were treated with oridonin at 25 μmol/L for 24 h. Along with the apoptotic process, Bcl-2, Caspase-3,NF-κB gene expressions were down-regulated (P<0.05). On the contrast, the Bax and I-κB gene expressions were up-regulated (P<0.05). Conclusion: Oridonin could inhibit the proliferation of LP-1 cells via inducing apoptosis. We concluded that oridonin induces apoptosis in LP-1 cells via activation of caspase-3 as well as down-regulation of Bcl-2 and up-regulation of Bax expression. The results suggested that oridonin could induce apoptosis of LP-1 cells through mitochondria- and caspase3-dependent pathways. Meanwhile, the inhibition of NF-κB and the activation of I-κB indicate pro-apoptotic stimuli. In one word, oridonin might be an important potential anti-myeloma reagent.     

Tumor Necrosis Factor-related Apoptosis Ligand Induces Apoptosis in Prostate Cancer PC-3M Cell Line

Summary： To study the effect of tumor necrosis factor-related apoptosis inducing ligand （TRAIL） on PC-3M cell line, PC-3M cell line was incubated with gradient concentrations of TRAIL for 4-24 h. Annixin-V fluorescence staining and TUNEL method were employed to detect the apoptosis of PC-3M cells. The morphology of apoptotic PC-3M cells was observed by electron microscopy. The relationship between TRAIL concentrations and the percentage of apoptotic cells was evaluated by flow cytometry. The proliferation inhibitory ratio was calculated by using MTT colorimetry. Our results showed that apoptosis of PC-3M cells could be induced by treatment with TRAIL for at most 4 h. The results of flow cytometry and MTT colorimetry demonstrated a time-and concentration-dependent relationship between cell apoptosis rate and TRAIL concentration. It is concluded that apoptosis of PC-3M cells can be induced by TRAIL. Because of the selective killing effect of TRAIL on tumor cells, it may become a potential alternative for the treatment of advanced prostate cancer.     

冬凌草甲素对膀胱癌T24细胞生长抑制作用的研究

目的探讨冬凌草甲素对膀胱癌T24细胞的生长抑制作用及机制。方法以不同浓度的冬凌草甲素作用于体外培养的T24细胞,MTT法检测细胞生长抑制率,并应用Hoechst33258荧光染色法以流式细胞仪观察细胞凋亡情况。结果冬凌草甲素可显著抑制T24细胞的生长,诱导细胞凋亡,并呈现出明显的剂量-效应与时间-效应关系。结论冬凌草甲素对膀胱癌具有明显的体外抗肿瘤作用,诱导细胞凋亡可能是其重要作用机制。     

原花青素诱导前列腺癌PC-3细胞凋亡的机制研究

目的：探讨原花青素在体外诱导人前列腺癌PC-3细胞凋亡的机制。方法：体外培养人前列腺癌PC-3细胞株,用100,200,300μg／ml原花青素作用24h。荧光素标记的连接素V（Annexin V—fluoresein isothiocyanate,Annexin V—FITC）和碘化吡啶（propidium iodide,PI）双染检测原花青素对PC-3细胞凋亡的影响,采用流式细胞术检测以不同浓度原花青素作用后PC-3细胞线粒体膜电位（△ψm）的变化。结果：100μg／ml原花青素作用细胞24h,5．64％的细胞出现早期凋亡,84．7％的P03细胞呈现线粒体膜电位降低;300vg／ml原花青素组P＆3细胞凋亡率和坏死率分别为44．86％、50．81％。结论：源花青素可在体外诱导PC-3细胞凋亡,其机制与降低线粒体膜电位有关。     

地前素M抗前列腺肿瘤活性的初步探讨

目的  检测苔藓植物联苄类化合物地前素M的抗肿瘤活性,并初探其对前列腺癌细胞的作用机制。方法  MTT法检测地前素M对人白血病细胞株（K562）、人肝癌细胞株（HepG2）、人乳腺癌细胞株（MCF-7）、人前列腺癌细胞株（LNCaP、DU145及PC 3）和人正常视网膜色素上皮细胞株（hTERT-RPE1）的增殖影响;溴脱氧尿嘧啶核苷（BrdU）掺入法检测地前素M对PC-3细胞增殖的作用,流式细胞术检测细胞周期和凋亡的变化;Western blotting检测细胞周期相关蛋白的表达;4′,6 二脒基-2 苯基吲哚 (DAPI)染色法检测PC-3细胞核的变化。结果  地前素M可抑制K562、HepG2、MCF-7、LNCaP、DU145、PC 3细胞的增殖,其对PC-3细胞增殖的抑制作用尤为显著,而对hTERT-RPE1细胞增殖的抑制作用较弱。BrdU结果显示,地前素M能够降低BrdU在PC 3细胞中的掺入;流式细胞术示,地前素M将PC 3细胞阻滞在G0-G1期,且出现明显的subG1峰,并伴随周期相关蛋白的变化;DAPI示,细胞核发生凋亡的特征性变化。结论  地前素M具有抑制肿瘤细胞增殖的活性,并引起PC-3细胞周期阻滞,诱导细胞凋亡。     

苦参碱对胰腺癌PC-3细胞凋亡及Bcl-2和bax表达的影响

目的探讨苦参碱对人胰腺癌PC-3细胞增殖和凋亡及凋亡相关基因Bcl-2和bax的影响,为苦参碱在抗肿瘤临床应用提供理论基础。方法应用MTT法检测苦参碱对人胰腺癌PC-3细胞增殖的影响,流式细胞仪检测苦参碱对PC-3细胞凋亡的影响,RT-PCR检测苦参碱对PC-3细胞Bcl-2和bax表达的影响。结果 MTT结果显示苦参碱对PC-3细胞的生长抑制作用呈现明显的浓度依赖性和时间依赖性（P〈0.01）。苦参碱能诱导PC-3细胞凋亡（P〈0.01）。苦参碱能明显的抑制PC-3细胞Bcl-2基因mRNA的表达;诱导bax基因mRNA的表达（P〈0.01）。结论苦参碱呈现浓度依赖性和时间依赖性抑制PC-3细胞的生长,诱导细胞凋亡,其作用与抑制PC-3细胞Bcl-2和bax基因mRNA的表达密切相关。