Value of Fluorescence in Situ Hybridization in the Diagnosis and Treatment of Acute Promyelocytic Leukemia

目的 探讨FISH法检测PML-RARa融合基因在急性早幼粒细胞白血病(APL)中的临床应用价值.方法 对21例疑诊APL患者应用FISH技术检测PML-RARa融合基因.结果 21例疑诊患者中最后确诊为APL 15例,排除APL 6例.15例APL患者中PML-RARa融合基因阳性14例,PML-RARa融合基因阴性者1例,该患者经最后确诊为APL变异型,经诱导治疗后效果不佳.6例疑诊患者PML-RARa融合基因均为阴性,确诊为急性髓细胞白血病-M2.结论 FISH法检测PML-RARa融合基因敏感、可靠,对APL的确诊及指导治疗有重要价值.     

急性早幼粒细胞白血病PML/RARα融合基因的检测

目的 探讨荧光原位杂交技术(FISH)在检测急性早幼粒细胞白血病(APL)患者PML/RARα融合基因中的价值.方法 对初诊的30例及20例疑似APL的患者进行FISH技术检测PML/RARα融合基因,对治疗过程中PML/RARα融合基因阳性细胞比例进行动态观察,进而协助诊断和指导治疗.结果 30例APL中PML/RARα融合基因阳性率90%(27/30),1例AML1/ETO融合基因阳性,确诊为AML-M2;20例未确诊者中AML1/ETO融合基因阳性率15%(3/20),PML/RARα融合基因阳性率50%(10/20),其余7例未检测到以上两种融合基因.达到完全缓解(CR)后有7例融合基因阴性,随访至CR后2年,发现7例PML/RARα融合基因阳性比例较高患者分别于1~3个月后复发.结论 FISH技术对APL的诊断具有高灵敏度和高准确度,并精确定位复杂核型中融合信号的位置,可用以确定白血病类型,指导临床治疗和进行治疗后的疗效监测.     

急性早幼粒细胞自血病PML／RARα融合基因的检测

目的探讨荧光原位杂交技术（FISH）在检测急性早幼粒细胞白血病（APL）患者PML／RARα融合基闪中的价值。方法对初诊的30例及20例疑似APL的患者进行FISH技术检测PML／RARα融合基因,对治疗过程中PML／RARα融合基因阳性细胞比例进行动态观察,进而协助诊断和指导治疗。结果30例APL中PML／RARα融合基因阳性率90％（27／30）,1例AML1／ETO融合基因阳性,确诊为AML-M2;20例未确诊者中AML1／ETO融合基因阳性率15％（3／20）,PML／RARα融合基因阳性率50％（10／20）,其余7例未检测到以上两种融合基因。达到完全缓解（CR）后有7例融合基因阴性,随访至CR后2年,发现7例PML／RARα融合基因阳性比例较高患者分别于1-3个月后复发。结论FISH技术对APL的诊断具有高灵敏度和高准确度,并精确定位复杂核型中融合信号的位置,可用以确定白血病类型,指导临床治疗和进行治疗后的疗效监测。     

阿利新蓝染色检测柴捆状Auer小体与APL遗传学标志相关性的研究

目的研究阿利新蓝染色检测柴捆状Auer小体与急性早幼粒细胞白血病（APL）遗传学标志的相关性。方法选取骨髓涂片检查中原粒、早幼粒均〉20%的初诊急性髓细胞白血病（AML）患者21例。R显带法检查染色体,逆转录聚合酶链式反应（RT-PCR）检测PML-RARa融合基因。骨髓涂片行阿利新蓝染色,光镜下检测柴捆状Auer小体。结果阿利新蓝染色检测柴捆状Auer小体阳性8例,遗传学检查均显示t（15;17）和PML-RARa融合基因,其中附加其他染色体异常3例。其余13例阴性,其APL遗传学标志均阴性。结论阿利新蓝染色检测柴捆状Auer小体结果与APL遗传学标志具有显著的相关性,为APL的诊断和鉴别诊断提供了一项重要指标。     

实时定量PCR检测白血病融合基因的应用研究

目的探讨实时荧光定量RT-PCR(RQ-PCR)检测融合基因在慢性粒细胞性白血病(CML)及急性早幼粒细胞白血病(APL)诊疗中的应用价值。方法采用RQ-PCR方法,对15例拟诊CML和17例拟诊APL的患者,在诊断及治疗过程中分别进行融合基因BCR/ABL、PML/RARa的检测,并且观察CML经羟基脲+干扰素(Hu+IFNα)与伊马替尼(IM)不同药物治疗的疗效差别。结果 15例拟诊CML患者中12例经融合基因检测确定诊断;17例拟诊APL患者中15例经融合基因检测确定诊断。动态观察,两种疾病在治疗的6个月、12个月时融合基因表达量明显下降,与初诊比较差异有统计学意义(P<0.01),其中CML两种不同治疗方案间差别显著(P<0.05)。两种疾病在血液学进展或复发前可发现融合基因显著升高。结论融合基因检测对于CML、APL的诊断、疗效观察和微小残留病的监测有重要价值。     

PML/RARα融合基因及染色体检测在急性早幼粒细胞白血病诊断中的应用

目的:探讨PML/RARα融合基因检测及染色体分析对急性早幼粒细胞白血病(APL)诊断的价值。方法:骨髓细胞24h培养后,采用FISH法检测PML/RARα融合基因,同时染色体R显带法分析是否存在t(15;17)。结果:41例确诊的APL患者中FISH检测发现所有病例均存在PML/RARα融合基因,检出率为100%,染色体核型分析发现典型t(15;17)38例,复杂核型1例,正常核型2例,检出率为92.7%。结论:PML/RARα融合基因检测和染色体分析是诊断APL的可靠方法,而PML/RARα融合基因检测灵敏度更高,可作为细胞遗传学的重要补充。     

白血病患者融合基因检测

目的 测白血病患者融合基因水平,评估实时定量RT-PCR技术在辅助白血病临床诊断和药物疗效判定方面的价值.方法 30例慢性粒细胞白血病(CML)患者,15例急性早幼粒细胞白血病(APL)患者,实时定量RT-PCR技术检测骨髓或外周血单个核细胞中白血病融合基因M-bcr/abl或PML/RARα的表达,结合临床资料进行分析.结果 1)30例CML患者的 bcr/abl融合基因检测阳性率为93.3%(28/30);检测15例APL患者的PML/RARα融合基因检测阳性率为96.7%(13/15).2)3例CML患者应用甲磺酸-伊马替尼治疗后定量检测bcr/abl 融合基因的拷贝数较治疗前明显降低或转阴(2/3).15例APL患者融合基因检测阳性经亚砷酸+化疗治疗后PML/RARα融合基因的拷贝数较治疗前明显降低或转阴(7/15).结论 实时定量RT- PCR 技术操作简便,检测白血病融合基因的准确性高,在辅助临床诊断和白血病患者药物疗效判定方面都有较大的应用价值.     

三氧化二砷治疗难治复发急性早幼粒细胞白血病的分子生物学疗效观察

目的:观察三氧化二砷(AS2O3)治疗难治复发急性早幼粒细胞白血病(APL)的分子生物学疗效.方法:0.1%AS2O3注射液静脉滴注,连续28天为一疗程,并动态检测PML-RARa融合基因.结果:15例患者再次分子学完全缓解(CR)13例,CR率为86.7%,随访中2例再次出现PML-RARa融台基因阳性,给予AS2O3获得再次CR.结论:AS2O3诱导治疗难治复发APL患者分子生物学缓解率高,与化疗交替使用能进一步清除微小残留病.     

FISH技术在儿童ALLTEL-AML1融合基因检测中的应用价值

目的探讨双色间期荧光原位杂交（I-FISH）技术在儿童急性淋巴细胞白血病t（12;21）形成的TEL-AML1融合基因检测中的应用价值。方法联合双色间期FISH和常规染色体核型分析技术（CCA）对31例儿童初治ALL的骨髓有核细胞进行t（12;21）TEL-AMLI融合基因检测。结果7例患儿经FISH检测发现TEL-AML1融合基因,占总病例的22．6％;而CCA检测均未发现有叮疑的t（12;21）。结论FISH技术较常规染色体核型分析技术特异性强、敏感度高,可以有效检测出TEL-AML1融合基因,从而为儿童ALL的诊断确立、采用个体化治疗方案提供重要的依据。     

急性早幼粒细胞白血病染色体易位联合R显带和间期荧光原位杂交技术分析

目的探讨荧光原位杂交(FISH)及常规细胞遗传学染色体核型分析技术对急性早幼粒细胞白血病(APL)患者PML/RARa融合基因检测的灵敏度和特异度及其在临床中应用价值。方法选取51例APL患者,应用常规细胞遗传学染色体核型分析方法及FISH技术检测患者PML/RARa融合基因的表达情况。结果在进行常规染色体核型分析的51例患者中41例(80.4%)为t(15;17)(q22;q21)易位的核型异常,其中38例(74.5%)为单纯t(15;17)(q22;q21)易位的核型异常,3例(5.9%)为伴t(15;17)(q22;q21)易位的复杂核型异常;10例(19.6%)无t(15;17)(q22;q21)易位的核型异常中1例(2.0%)为不伴t(15;17)(q22;q21)易位的复杂核型异常,1例(2.0%)为t(11;17)(q13;q21)易位的核型异常,3例(5.9%)为正常核型,5例(9.8%)未见分裂相。在进行FISH检测的51例患者标本中48例(94.1%)有PML/RARa融合基因异常,同时进行常规染色体核型分析和FISH检测的41例患者同时存在t(15;17)(q22;q21)易位的核型异常和PML/RARa融合基因异常,两者符合率为100%;在15例正常骨髓标本的FISH检测中15例标本结果均未发现有PML/RARa融合基因,提示FISH检测技术具有较高的敏感度和特异性。结论对于初发的APL患者,常规染色体核型分析和间期荧光杂交技术结合分析APL患者细胞遗传学特征是诊断该病的有力工具,FISH技术操作更为简单,省时直观。     

双诱导联合蒽环类抗生素治疗初治急性早幼粒细胞白血病疗效观察

目的观察以全反式维甲酸（all-trans retinoic acid,ATRA）和亚砷酸（As2O3）双诱导,联合蒽环类抗生素（anthracycline,ATC）为主的治疗方案治疗急性早幼粒细胞白血病（APL）的疗效。方法对初治APL患者以ATRA和Asz03进行双诱导,联合DA方案化疗,达完全缓解（CR）后,以ATC为主的方案巩固化疗6疗程,以后以化疗、ATRA、As2O3交替序贯维持治疗,化疗方案中仍以ATC为主。总治疗时间3年。14例患者接受了PML／RARα融合基因监测。结果21例初治APL患者中,除2例早期死亡外,其余19例诱导治疗后均达CR,经巩固、维持治疗,此19例患者至今均为持续完全缓解（CCR）状态,其中CCR5年以上2例,3年以上6例。无患者出现严重或不可逆的毒副反应。接受PML／RARα融合基因检测的14例患者,初诊时均为阳性,巩固治疗结束时均转为阴性,在以后监测中无一例转阳。结论双诱导联合ATC治疗初治APL,疗效可靠,毒副反应小。     

全仅式维甲酸(ATRA)和三氧化二砷(As2O3)对APL细胞组织因子表达的影响

目的　探讨全反式维甲酸 (ATRA)和三氧化二砷 (As2 O3)在体内外对急性早幼粒细胞性白血病 (APL)细胞组织因子 (TF)表达的影响。方法　利用复钙时间测定、ELISA和RT PCR等方法 ,分别检测了ATRA和As2 O3 治疗前后APL患者骨髓单个核细胞的促凝活性、TF抗原及其mRNA的转录水平 ,同时还检测了使用ATRA和As2 O3 处理APL细胞株NB4细胞和NB4 R1细胞以及转染PML RARa融合基因的U937细胞的促凝活性、TF抗原及其mRNA的转录水平。结果　ATRA和As2 O3 在体内和体外均可以时间依赖的方式下调NB4细胞的促凝活性、TF抗原水平以及TFmRNA的转录。转染PML RARa融合基因的U937细胞与仅转染逆病毒载体的U937细胞相比 ,其TF表达水平显著升高 ;使用ATRA或As2 O3 分别处理转染PML RARa和转染逆病毒载体的U937细胞 ,其TF抗原水平均显著降低。结论　ATRA和As2 O3均可下调APL细胞TF的表达并降低其PCA ,As2 O3在诱导APL细胞凋亡的同时有可能通过下调APL细胞TF的表达而改善APL患者与DIC相关的出血症状。结果还提示APL细胞染色体易位产生的融合蛋白PML RARa可能对TF的异常表达有一定的影响 ,而ATRA和As2 O3对TF的下调作用可能不依赖于对融合蛋白PML RARa的降解。     

初治APL患者PMURARα融合基因表达

目的检测初治急性早幼粒细胞白血病（APL）患者PML／RARα融合基因异构体类型及表达水平,建立检测微小残留病的标准拷贝数基线。方法应用实时定量RT-PCR方法,采用Taqman探针技术测定32例APL初治患者骨髓标本的PML／RARα融合基因mRNA3种异构体表达水平,并比较异构体之间临床特征有无差异。结果32例PML/RARα融合基因阳性的APL初治患者中21例为PMI／RARa融合基因长型异构体,11例为融合基因短型异构体,初治患者融合基因表达量中住数为1．44％（1．29％±1．46％）。长型及短型异构体标准拷贝数（normalized copy number,NCN）中位数分别为1．40％（1．46％±1．18％）和1．28％（1．39％＋1．51％）,无明显统计学差异,P〈0．05,融合基因长型异构体患者在发病时外周血白细胞总数为6．08±13．21（×10^9／1）明显低短型患者15．11±20．26（×10^9／l）,P〈0．01。结论建立了检测APL微小残留病的高敏感性、高特异性的实时定量RT—PCR方法,对分析治疗过程的病情变化和指导治疗方案具有重要意见。     

维甲酸和三氧化砷对急性早幼粒细胞性白血病细胞组织因子表 …

目的 探讨全反式维甲酸（ＡＴＲＡ）和三氧化二砷（Ａｓ２Ｏ３）在体内外对急性早幼粒细胞性白血病（ＡＰＬ）细胞组织因子（ＴＦ）表达的意义。方法 利用复钙时间测定、ＥＬＩＳＡ和ＲＴ－ＰＣＲ等方法,分别检测了ＡＴＲＡ和Ａｓ２Ｏ３治疗前后ＡＰＬ患者（２３例）骨髓单个核细胞的促凝活性、ＴＦ抗原及其ｍＲＮＡ的转录水平,同时还检测了使用ＡＴＲＡ和Ａｓ２Ｏ３处理ＡＰＬ细胞株ＮＢ４－Ｒ１细胞以及转染ＰＭＬ－ＲＡＲａ融     

筑巢式PCR检测白血病bcr—ablmRNA

应用筑巢式逆转录酶聚合酶链反应（ＲＴＰＣＲ）方法检测了２６例慢性粒细胞性白血病及１０例急性淋巴细胞白血病患者的ｂｃｒａｂｌｍＲＮＡ，在２１例ｐｈ阳性的慢粒和２例ｐｈ阳性的急淋患者中，检出两种ｂｃｒａｂｌ融合基因ｍＲＮＡ（１６５ｂｐ或９０ｂｐ），５例ｐｈ阴性的慢粒中，４例阳性，１例阴性，经治疗后ｐｈ染色体消失，ＲＴＰＣＲ仍能检出ｂｃｒａｂｌ融合基因。本方法具有高度敏感性，可从１０６个正常细胞ＲＮＡ中检出１个白血病细胞。是对慢粒和部分急淋的诊断及监测的一种快速、灵敏、特异的方法     

应用FISH检测儿童ALL TEL-AML1与E2A/PBX1融合基因

目的探讨TEL-AML1与E2A/PBX1融合基因在儿童急性淋巴细胞白血病（ALL）的检测方法及其临床应用价值。方法在形态学、免疫分型、细胞遗传学基础上,应用荧光原位杂交技术（FISH）检测63例ALL患儿TEL-AML1和E2A/PBX1融合基因阳性率。结果 FISH技术可以显著提高TEL-AML1和E2A/PBX1融合基因的检出率,TEL-AML1融合基因在初发ALL儿童中的阳性率为25.4%（16/63）,E2A/PBX1融合基因在初发ALL儿童中的阳性率4.8%（3/63）。结论 t（12;21）形成TEL-AML1融合基因和t（1;19）形成E2A/PBX1融合基因,是儿童ALL常见的染色体易位,常规染色体核型分析极难发现,需用FISH分子生物学检测方法加以证实。     

染色体原位杂交检测28例急性早幼粒细胞白血病残留病变

目的:应用荧光染色体原位杂交(FISH)方法检测急性早幼粒细胞白血病(acutepromyelocyticleukemia,APL)患者完全缓解(completeremission,CR)期微小残留病变(minimalresidualdisease,MRD),并探讨MRD的动态变化与复发的关系。方法:对28例具有t(15;17)的APL患者在CR期应用中期分裂相FISH方法,进行了监测。结果:11例在CR的不同时期检出了不同比例的t(15;17)细胞,其中3例复发。17例在追踪的标本中均未检出异常细胞,目前均持续缓解。观察时间分别为10～33个月和15～44个月。结论:FISH追踪MRD较传统细胞遗传学更加快速和敏感,并具有可定量的优点,可作为APL患者CR期监测MRD的常规手段。FISH检测到MRD有增长趋势时,更有预示复发的价值。     

PML-RAR_α融合基因检测方法学的建立

应用筑巢式逆转录聚合酶链式反应（ＲＴ－ＰＣＲ）方法检测２３例急性早幼粒白血病（ＡＰＬ），早幼粒白血病基因ＰＭＬ维甲酸受体α融合基因（ＰＭＬ－ＲＡＲα），肯定了２例与急非淋白血病Ｍ２不易鉴别的不典型ＡＰＬ。１５例缓解在２年以内ＡＰＬ此融合基因均阳性，其中Ｌ型８例，Ｓ型７例，Ｌ型中尚发现一个变异型。８例缓解在３年以上ＡＰＬ，此融合基因４例阳性，其中Ｌ型３例，Ｓ型１例，Ｌ型１例已有复发倾向，而缓解超过４年ＡＰＬ此融合基因均为阴性。     

Diagnostic role of conventional cytogenetics and fluorescence in situ hybridization (FISH) in chronic myeloid leukemia patients

Introduction: The limitation of cytogenetic analysis is that the Ph chromosome cannot be detected in clumped metaphase or in interphase cells. Fluorescence in situ hybridization (FISH) is a highly sensitive molecular genetic technique, which enables to detect break point cluster region - Abelson (BCR-ABL) complex and minimal residual disease in all Ph positive CML patients not only in metaphase but also in interphase cells. Aims: To detect Ph chromosome in CML patients by the use of conventional cytogenetics and FISH. Material and methods: The bone marrow samples were collected in heparinised syringe from 35 diagnosed CML patients and transported to cytogenetic laboratory for chromosomal analysis. Conventional karyotype was prepared by direct harvesting and short-term culture. The FISH analysis was carried out on interphase cells of two patients to confirm the cytogenetic diagnosis. Results: Out of 35 CML patients, 17 (49.9%) were 100% Philadelphia positive, 10(28.5%) were 50-70% Ph+ mosaics and 3(9%) were 100% Ph negative. In 5 patients (14.25%) cytogenetic analysis failed to confirm the presence or absence of Ph chromosome. FISH was carried out in interphase cells from bone marrow preparations of two patients. The signals for BCR-ABL fusion gene was absent in Ph- negative CML patients. In Ph positive patients, the FISH analysis detected BCR-ABL fusion gene seen as a yellow signal on interphase cells. Conclusion: Conventional cytogenetics is a useful method for detection of Ph chromosome in metaphase stage of cell division. FISH can be used in interphase stage of cell division for the same purpose. Key words: CML, FISH, Chromosomal analysis, Philadelphia chromosome.