Establishment of Cell Engineering Laboratory of Blood Cells Polymorphism

目的 建立稀有型血细胞永生化细胞株,探讨血细胞多态性细胞工程实验室建立的方法.方法 采用EB病毒转化技术,把携带稀有血型抗原的红细胞、已知抗原特异性的粒细胞,罕见特异性抗原的血小板及CD36缺失型的血小板的外周血淋巴细胞转化成永生化淋巴母细胞株,采用培养法和PCR法对细胞株进行支原体检测,染色体核型分析细胞株的稳定性.结果 共建立稀有型血细胞LCLs 211株,其中稀有红细胞血型抗原LCLs 64株、已知抗原特异性的粒细胞抗原LCLs 8株、罕见特异性抗原的血小板LCLs 15株及CD36缺失型血小板LCLs 124株,总转化成功率为91%;所有的细胞株传代、冻存和复苏均成活,无基因突变、无支原体污染.经20代传代后未发现染色体突变.结论 传代培养、细胞冻存、复苏和支原体污染防范等一整套技术过程基本满足建库要求,为血细胞多态性细胞工程实验室的建立提供科学依据.     

细胞工程开放性实验室在专业人才培养中的作用

细胞工程是现代生物工程中涉及面最为广泛的生物技术之一,其内容涵盖的知识面多,与其他学科交叉渗透广泛,发展非常迅速[1].细胞工程实验课是培养生物技术专业大学生综合能力的一个重要平台.在生物技术专业人才培养中需突破传统实验教学的局限,充分利用实验室资源,推行开放性实验室建设,积极开展实验教学改革,努力培养下得去、留得住、用得上、有作为的应用型人才.     

噬血细胞综合征实验室诊断标准探讨

目的研究噬血细胞综合征（Hemophagocytic Syndrome,HS）患者实验室检测结果的主要表现,探讨噬血细胞综合征的实验室诊断标准。方法结合相关资料,研究分析1例噬血细胞综合征患者的各项实验室检测结果及其主要临床表现。结果该例患者的多项实验室检测结果与大量资料报道的噬血细胞综合征相符,有着其特殊的表现。结论综合多方面资料,笔者认为诊断噬血细胞综合征的实验室标准主要有以下几点：①全血细胞三系减少或至少二系减低;②骨髓增生一般无异常,多呈活跃现象,骨髓涂片中易见噬血细胞且噬血细胞≥1％,⑤肝功能异常（血清LDH≥正常均值＋3SD,一般≥1000U／L）及凝血功能障碍;④临床出现高热超过1周,高峰可达38．7＂C。     

全血细胞减少实验室诊断分析98例

目的 探讨全血细胞减少实验室诊断的意义及引起全血细胞减少的疾病.方法 2005年1月～2005年11月在我室收治的98例全血细胞减少患者,对其骨髓及外周血进行系统实验室检测及分析.结果 98例全血细胞减少患者的实验室系统检测结果表明,引起全血细胞减少的疾病以再生障碍性贫血(AA)和骨髓增生异常综合征(MDS)最为常见,合计55例(56.1%),其次为急性白血病(AL)14例(14.2%)、免疫相关性全血细胞减少(IRP)6例(6,1%)、巨幼细胞贫血5例(5.1%),淋巴瘤和PNE各4例(4.1%).结论 系统的实验诊断能提高临床诊断的准确率;减少误诊提高治愈率.     

噬血细胞综合征的实验室诊断与临床分析

目的探讨实验室检查对早期诊断噬血细胞综合征的临床应用价值。方法对18例噬血细胞综合征患者进行相关的实验室检查,并进行综合分析。结果临床表现为持续高热、肝脾肿大、肝功能异常、凝血功能障碍、全血细胞减少、低纤维蛋白原血症,骨髓涂片中找到噬血细胞。本组患者中1例为家族性,10例与感染相关,5例与自身免疫性疾病引起的非感染相关的噬血细胞综合征,1例为伴噬血细胞综合征的T细胞淋巴瘤,1例为不明原因的噬血细胞综合征。结论通过相关实验室检查可快速诊断噬血细胞综合征,为临床治疗提供可靠的证据。     

噬血细胞综合征的实验室诊断及临床分析

目的探讨噬血细胞综合征(HPS)的临床特征、实验室检查及骨髓细胞形态特点。方法对16例确诊为HPS患者的临床症状、体征、实验室检查及骨髓细胞形态进行分析。结果 16例患者均有发热和不同程度的肝、脾、淋巴结肿大及肝功能异常,外周血细胞减少,骨髓涂片均可见组织细胞增生并伴有吞噬血细胞现象。结论 HPS的临床特征实验室检查和骨髓细胞形态具有一定的普遍性和特异性,有助于临床诊断。     

细胞工程教学改革尝试

通过增加总课时,调整理论课与实验课比例;选择适合教材,优化教学内容;严抓实验教学,熟练掌握基本操作;改革考核方式,加大平时成绩所占比重等措施,激发了学生学习细胞工程的兴趣,提高了学生综合素质和操作能力。达到了预期效果。     

宁夏回族永生B淋巴细胞株的建立及保存

目的永久地保存现有的回族遗传资源。方法以EB病毒（Epstein—barr virus，EBV）转化同时加入环孢霉素A的方法建立永生细胞。结果成功建立了10株宁夏回族永生B淋巴细胞株。结论该永生细胞地建立为回族遗传资源的永久保存以及今后在细胞和分子水平上深入开展回族遗传病的研究奠定了基础。     

中国人群出生缺陷核心家庭永生细胞株的建立

EB病毒(Epstein-Barr virus)转化人外周血B淋巴细胞,使其成为能连续分裂永久生存的类淋巴母细胞(lymphoblastoid),利用这一特点建立各种疾病人群永生细胞株(immortalized cell lines),可永远传代,并且保存了每个个体的完整基因组,其生化和分子生物学特性不发生变化,可作为建立生物标本库的首选方法.     

血细胞分析仪检测有核红细胞的临床应用评价

目的分析Sysmex XE-2100全自动血细胞分析仪对有核红细胞(NRBC)提示信息的可靠性,以及仪器自动计数外周血NRBC的性能评价。方法收集XE-2100血细胞分析仪报警信号(Q-Flag)有NRBC的标本85例和无NRBC的标本200例,用XE-2100血细胞分析仪及显微镜计数法计数其外周血中NRBC数量。结果85例提示有NRBC中,镜检37例有NRBC,其阳性符合率为43.5%。其中,71例有NRBC的同时有未成熟粒细胞(Imm Gran)、原始细胞(Blasts)、异型/异常淋巴细胞(Aty/Abn Ly)以及核左移(Left)中的1项或多项提示。71例中,镜检36例标本有NRBC阳性反应,阳性符合率为50.7%。200例无NRBC报警提示的标本中,镜检提示2例有NRBC,假阴性率为1.0%。在36例NRBC阳性标本显型,XE-2100与显微镜计数法计数外周血中NRBC数量有极好的相关性(r=0.974),且两者计数结果无显著性差异(P>0.05)。而另有32例NRBC阳性标本,在使用或未使用NRBC计数通道检测时,WBC计数结果有显著性差异(P<0.05)。结论Sysmex XE-2100血细胞分析仪检测出现NRBC,提示且同时伴有其他白细胞异常提示时,与人工镜检阳性符合率较好,可信度较高,发挥了仪器对NRBC的良好过筛功能。且仪器对NRBC计数结果快速、准确,可替代人工显微镜方法计数NRBC。并且可在NRBC增高的标本中准确计数白细胞数量。     

CD 3700血细胞分析仪形态异常细胞警示的可信性分析

目的分析Abbott Cell-DYN 3700（CD3700）全自动血细胞分析仪对形态异常细胞报警的可信性。方法对用仪器测定有报警信号的195份标本和60份无报警信号的标本进行镜检对比分析。结果以镜检结果为标准,CD3700血细胞分析仪对形态异常细胞：幼稚细胞（Blast）、未成熟粒细胞（IG）、杆状核粒细胞（BAND）、有核红细胞（NR-BC）、异常淋巴细胞（VarLYM）的符合率分别为87.5%、73.8%、74.2%、27.2%、32.4%。结论CD3700血细胞分析仪对血细胞的检测具有良好的技术性能,对形态异常细胞的警示具有较高的可信性,但不能完全代替显微镜检查。     

体外细胞培养技术评价实验动物塑料笼具的毒性

用塑料薄片直接浸渍和直接接触两种体外细胞培养相结合方式,进行实验动物塑料笼具的细胞毒性试验,并作扫描电镜观察。钙塑盆和再生塑料盆均有明显毒性,塑料笼具有1/4样品表现轻微毒性。扫描电镜观察表明,塑料的毒性强弱直接影响细胞表面的超微结构损伤程度。     

脐带血树突状细胞疫苗体外诱导杀伤人肝癌细胞

目的 :制备人脐带血来源的树突状细胞 (DC )疫苗 ,并观察其在体外对人肝癌细胞的杀伤活性。方法 :rhGM CSF10 0 μg/mL、rhTNF α 5 0u/mL诱导人脐带血CD3 4+ 干细胞向DC分化 ,用超声破碎的人肝癌细胞BEL 740 2裂解物冲击DC ,制备DC疫苗。活细胞计数和中性红比色法检测DC疫苗致敏的脐带血或外周血淋巴细胞在体外对BEL 740 2的杀伤活性。结果 :脐带血CD3 4+ 细胞在细胞因子诱导下 ,细胞体积增大 ,变为不规则形 ,细胞数量增多 ,形成细胞集落。在培养后期集落周围的细胞伸出长的树枝状突起并不断从集落脱落下来。活细胞计数和中性红比色法显示负载肿瘤抗原的DC致敏的淋巴细胞在体外对BEL 740 2的杀伤活性明显强于未致敏的淋巴细胞 (P <0 0 1) ,DC致敏的脐带血来源淋巴细胞和DC致敏的外周血来源淋巴细胞的杀伤活性分别为 44 0 9%和 47 92 % (P >0 0 5 )。结论 :人脐带血干细胞在细胞因子的诱导下扩增并分化为DC。经肝癌细胞裂解抗原致敏、人脐带血来源的DC疫苗 ,能增强淋巴细胞对相应人肝癌细胞的体外杀伤效应 ,而且DC疫苗对脐带血来源的初始型淋巴细胞和外周血来源的淋巴细胞有同样的激活作用     

组织工程学中的种子细胞移植免疫学问题研究

组织工程是应用组织与器官修复与功能重建的的新兴交叉学科,是研究异基因种子细胞的来源与由此而产生的细胞移植免疫学问题,从其免疫反应发生的类型特点与检测方法,免疫耐受诱导与建立,以及降低异基因种子细胞免疫原性的方法等方面的问题。特别对采用组织工程方法,纯化细胞培养去除抗原呈递细胞和杂细胞的方法,以及通过酶消化使细胞表面抗原变性或减弱、深低温冻存降低细胞表面活性、添加生长调节因子对免疫反应产生抑制作用、采用微孔支架和微囊包被等对细胞起到免疫隔离作用、基因治疗技术等移植前细胞处理降低免疫原性的方法进行了进一步的探讨,展示了异基因种子细胞在组织工程研究中的应用前景。     

门腔转流对血液有形成分的影响

针对门脉重建这一困难，提出门腔转流下门脉重建，探讨门脉民１５分钟，３０分钟，６０分钟及同时采用硅胶管进行门腔转流有形成分的影响。结果表明，门腔转流能较好解决门脉重建肠道血液淤积，对红、白细胞影响较轻，对血小板数量和功能影响较大，其变化与转工短密切相关，在临床应用值得注意。     

骨组织工程中种子细胞与细胞支架复合培养的研究进展

骨组织工程的研究热点主要集中在种子细胞、支架材料和骨组织构建3个方面,其中种子细胞与细胞支架复合体的体外培养既是骨组织工程的基础,也是其研究的重点。细胞只有有效与支架材料充分的黏附,并在支架中良好的迁移、扩增和分化,才能形成具有骨组织修复功能的细胞-支架复合体。文章对骨组织工程中细胞-支架复合体的体外构建作一综述,为骨组织工程的研究及细胞的三维立体培养提供参考。     

人白细胞L－myc遗传多态性分析

从人白细胞中分离ＤＮＡ，经ＥｃｏＲＩ酶切后，进行Ｌ－ｍｙｃＳｏｕｔｈｅｒｎ杂交，得出人Ｌ－ｍｙｃ限制性内切酶片段长度多态性（ＲＦＬＰ）图谱。结果发现，经ＥｃｏＲＩ酶切产生Ｌ－带（１０ｋｂ）及Ｓ－带（６ｋｂ）。对Ｌ－ｍｙｃＲＦＬＰ与肺癌恶变与预后的关系进行了讨论。     

金鸡菊提取物降血脂作用的动物实验研究

目的：研究金鸡菊提取物对高血脂模型小鼠的降血脂作用。方法：Wister小鼠随机分为正常对照组、模型组、血脂康阳性对照药组、金鸡菊总提物组、氯仿萃取物组、乙酸乙酯萃取物组和正丁醇萃取物组共7组,每组10只。除正常对照组外,其余6组给予造模乳剂灌胃,0.5ml/只。4h后,正常对照组和模型组给予等体积的生理盐水,各给药组给予相应剂量的药物。连续给药2周,末次给药后,禁食不禁水12h,颈动脉取血、离心、制备血清,测定各组小鼠血清总胆固醇（TC）、甘油三酯（TG）、高密度脂蛋白胆固醇（HDL-C）的含量。结果：与正常对照组比较：模型组TC和TG明显升高（P〈0.01）,HDL-C明显降低（P〈0.01）;与模型组比较：总提取物组TC降低（P〈0.05）,HDL-C升高（P〈0.05）;氯仿提取物组TC明显降低（P〈0.01）,TG降低（P〈0.05）,HDL-C明显升高（P〈0.01）;乙酸乙酯组TC降低（P〈0.05）,TG明显降低（P（0.01）,HDL-C明显升高（P〈0.01）;正丁醇组TC、TG均降低（P〈0.05）。结论：金鸡菊提取物有较好的降血脂作用,值得进一步开发研究。