荧光PCR对从业人员肠道致病菌筛查的评价

目的评价荧光PCR法用于食品及公共场所从业人员肠道致病菌的筛查。方法随机采集12780份从业人员肛拭子标本用荧光PCR检测,以传统分离培养方法作为“金标法”进行对照,分析灵敏性和特异性。结果在12780份标本中,荧光PCR检测出沙门菌阳性14份,阳性率为1.10‰,培养法检测出10份,阳性率为0.78‰,沙门菌荧光PCR检测法的灵敏度为100％,特异性为99.97％。荧光PCR检测出志贺菌18份,阳性率为1.41‰,培养法检测出3份,阳性率为0.23‰,志贺菌荧光PCR法的灵敏度为100％,特异性为99.88％。结论荧光PCR法灵敏度性高,特异性强,简便快速,为从业人员健康检查提供了一套快速的筛查方法,值得广泛推广应用。     

实时荧光PCR技术在肠道沙门氏菌快速检测中的应用研究

目的探讨实时荧光PCR技术应用于肠道沙门氏菌快速检测中的可行性。方法随机采集从业人员健康体检肛拭子标本,用实时荧光PCR法进行检测,并以传统分离培养方法作为"金标准"进行对照实验,比较两者间的差异。结果在1 346份标本中,实时荧光PCR法检出沙门氏菌阳性13份,阳性率为9.66‰;培养法检出5份,阳性率为3.71‰。经统计学分析,两者对沙门氏菌检测的阳性数的差异有统计学意义(χ~2=6.125,P0.05);荧光PCR检测法灵敏度为100.00%,特异性为99.40%。结论实时荧光PCR法灵敏度高、操作简便,可降低工作强度,缩短检测时间,可作为快速检测肠道沙门氏菌的方法在从业人员健康检查中广泛推广应用。     

荧光PCR快速检测艰难梭菌

艰难梭菌（clostridium difficile,CD）又称难辨梭状芽孢杆菌,是一种厌氧革兰染色阳性芽孢杆菌,广泛分布于自然环境及动物和人的粪便中,主要通过粪-口途径传播[1-2]。艰难梭菌是引起医源性腹泻的重要病原菌,与大量抗生素使用有关,     

荧光定量PCR在结核菌快速检测中的应用分析

目的探讨荧光定量PCR在结核菌快速检测中的应用效果。方法选取安阳市结核病防治所2014年6月至2014年12月就诊的100例呼吸系统疾病患者(临床阳性痰分离株100份),应用荧光定量PCR技术检测。结果荧光定量PCR检测准确率为97%,菌种鉴定特异性实验符合率为100%。结论结核菌快速培养法如荧光定量PCR技术经济、简单,结果可靠,特异度和敏感性均居较高水平,鉴别诊断能力较强,实验室可据自体条件对不同的检测方法进行选择。     

1192例食品公共场所从业人员肠道致病菌检测结果分析

１９９７年对部分食品、公共场所从业人员粪便进行肠道致病菌检测,现将１１９２人份粪便检测结果报告如下。材料与方法１标本来源本站门诊体检标本,这些标本来源于省级企事业单位食品公共场所从业人员粪便。２检测方法２．１培养基ＳＳ琼脂、双糖铁琼脂、ＳＦ增菌干燥培...     

桃源县服务行业从业人员肠道致病菌检测结果

目的:了解和分析桃源县近年来城区和公共场所从业人员肠道致病菌携带情况和菌型分布状况。方法:对从业人员粪便及肛拭子进行肠道菌增菌分离、实验室检查及血清学分型鉴定。结果:合计检测标本25 897份,共检出阳性菌101份,检出率为0.39%,其中检出沙门菌91株,检出率为0.35%;志贺菌8株,检出率为0.03%;金黄色葡萄球菌2株。结论:平常需要加强对饮食卫生人员的管理,定期进行体检,及早预防,及早发现带菌者,并及时对症处理,以将危险性降低到最低。     

实时荧光PCR检测方法在肠道致病菌检测方面的应用

目的比较实时荧光PCR检测方法和传统法对于从业人员体检中检测肠道致病菌方法的结果一致性和优劣。方法对5600份体检标本同时进行PCR方法检测和传统方法检测。结果两法结果在灵敏度和特异性上都良好。结论PCR检测方法可以用于肠道致病菌的初筛检测。     

荧光定量RT—PCR快速检测A、B型流感病毒的研究

目的利用荧光定量RT-PCR技术建立一种快速检测A、B型流感病毒的方法。方法根据A型流感M基因和B型流感HA基因的相对保守序列,分别设计一对引物及其相应的Taqman探针,建立、优化单一和双重反应体系后,利用10倍稀释法对已知滴度的流感病毒进行梯度稀释,检验方法的灵敏度并建立相对定量标准曲线。结果A、B型流感病毒双重反应的灵敏度为分别为2·56×10-5和5·0×10-5TCID50,标准曲线相关系数分别为0·997和0·998,扩增效率分别为114·1%和107·8%,说明双重反应中A、B型的引物、探针、模板之间无相互干扰,具有很好的稳定性和重现性。结论研究建立的荧光定量RT-PCR技术可以准确同时检测A、B型流感病毒,不仅灵敏度高、稳定性好,而且可以对病毒滴度进行定量检测。     

实时荧光PCR方法快速检测空肠弯曲菌方法的建立

目的建立实时荧光PCR快速检测空肠弯曲菌的方法。方法以空肠弯曲杆菌HipO基因的保守序列为模板设计特异性引物探针,建立一种能快速检测样本中空肠弯曲杆菌的实时荧光PCR方法;对方法的特异性和敏感性进行评价,并以正常人粪便为空白样本,添加一定量空肠弯曲菌标准株菌液进行检测,以对方法的检测效果进行初步评价。结果该实时荧光PCR方法只对空肠弯曲杆菌进行特异扩增,同种属的结肠弯曲菌及其他常见食源性病原菌均不能扩增;整个检测过程只需要80min,对空肠弯曲菌菌悬液可检测至5个细菌,对加标粪便样本可检测至10～100个细菌。结论本研究建立的实时荧光PCR检测空肠弯曲菌方法不仅能实现对空弯菌的快速检测,而且还为空弯菌的快速诊断及其引起的食源性疾病的监控溯源提供有意义的参考。     

荧光定量PCR检测220例乙肝病毒DNA结果分析

目前,临床常用ELISA方法进行HBV-M的检测和PCR方法进行HBV-DNA的定性检测来判断HBV的感染或疗效。而传统的定性PCR由于它的易污染、假阳性高、操作者要接触强致癌物等缺点,正逐渐地被荧光定量聚合酶链反应(FQ-DNA)替代。我们采用FQ-DNA法和ELISA法对照检查了220例标本,以研究两     

利用荧光定量RT-PCR和PCR方法检测结核分枝杆菌复合群

目的 建立一种新的检测结核分枝杆菌复合群的荧光定量试验方法 （R/P分析）,探讨R/P分析检测临床标本中结核分枝杆菌复合群的应用价值.方法 根据结核分枝杆菌复合群基因保守序列设计引物和探针构建质粒标准品.运用R/P分析检测54例确诊结核病人临床样本,检测的结果 同时与培养法、荧光定量PCR法进行比较.结果 不同临床标本用R/P分析诊断结核病,其敏感性高于荧光定量PCR法和培养法,阳性检出率分别为96.3%、83.3%和55.6%.结论 R/P方法 是一种快速、特异的直接检测方法,它可以区分结核分枝杆菌复合群的死菌与活菌,因此可以更好的指导医生进行治疗,更准确地做出公共卫生决策.     

HMGB1基因SNP位点实时荧光PCR检测方法的建立

目的建立基于Taq Man探针实时荧光PCR技术的高迁移率族蛋白1(high mobility group box-1 protein,HMGB1)基因单核苷酸多态性(single nucleotide polymorphism,SNP)检测方法。方法收集2014年4月在深圳口岸医院体检的健康人群样本20份,选择HMGB1基因上的2个SNP位点设计常规PCR和实时荧光PCR扩增引物和Taq Man探针,采用基因测序和实时荧光PCR方法对样本进行SNP分型。结果实时荧光PCR方法SNP分型结果显示,在20份样本中的HMGB1基因rs1412125位点检测到TT基因型11例,CC基因型1例,TC基因型8例;HMGB1基因rs3742305位点检测到GG基因型15例,GC基因型5例,未发现CC基因型。这一结果与基因测序方法结论完全一致。结论基于Taq Man探针技术的实时荧光PCR方法进行HMGB1基因SNP分型简单、快速、高效,可用于人群大规模样本的SNP筛查,具有广泛应用的价值。     

实时荧光定量PCR检测原发性肝癌中CDK4基因的表达

目的：应用实时荧光定量PCR法检测原发性肝细胞癌中CDK4基因的表达。方法：提取手术切除人肝癌和癌旁组织总RNA并逆转录为cDNA。应用实时荧光定量PCR法观察人肝细胞癌组织及癌旁组织中cDK4的表达水平。结果：20例肝细胞癌标本中有18例肿瘤组织中CDK4基因表达明显高于癌旁肝组织，其中7例高出4倍以上。结论：实时荧光定量PCR可以准确定量测定基因的表达；CDK4基因在肝细胞癌的发生、发展中可能起重要作用。     

实时荧光定量PCR在铁路运输动物携带甲型流感病毒检测中的应用

目的探讨应用实时荧光PCR对铁路运输动物携带甲型流感病毒进行快速检测的可行性,为制定铁路系统有效的流感监测方案奠定基础。方法采集死禽咽喉部和泄殖腔拭子,活体动物用拭子涂抹泄殖腔外周,粪便和毛用拭子涂抹表面。依据《全国流感监测实施方案》、甲型流感病毒核酸检测试剂盒(PCR-荧光探针法)说明书以及ABI7500F型实时荧光定量PCR的SDS软件操作。结果共采集广州中铁快运货场动物样本250份,检出甲型流感病毒核酸阳性11份,阳性率4.4%,其中以鸽类样本的阳性检出率最高,鹅次之,鸭最低。结论实时荧光PCR检测方法适合铁路运输的实际要求,结合进一步病毒分型和病毒基因测序,对掌握病毒流行趋势,做好预防控制工作具有重要意义。     

实时荧光定量PCR检测贝氏柯克斯体方法的建立

目的建立检测贝氏柯克斯体的Real-Time PCR方法。方法根据贝氏柯克斯体特有的htpAB基因相关重复序列（IS1111a）进行PCR扩增片断485bp,以克隆的IS1111a基因片断作标准DNA模板,建立Real-Time PCR检测方法。结果建立的Real-Time PCR标准曲线的循环阈值（Ct）与模板拷贝数呈良好的线性关系（r=0.999）;重复性测试Ct变异系数CV≤6.1%;其灵敏性约为普通PCR的10倍;以其它相关立克次体和病原菌DNA为模板应用于该方法,结果均为阴性。结论所建立的Real-Time PCR方法具有很好的特异性、灵敏性和重复性,可代替普通PCR用于贝氏柯克斯体的感染早期的快速定性、定量检测。     

实时荧光定量PCR检测CD258在前列腺癌组织中的表达

目的 应用实时荧光定量PCR(RQ-PCR)法检测CD258(肿瘤坏死因子14,TNFSF14)在前列腺癌(PCa)组织中的表达,以探讨CD258基因与PCa的关系.方法 提取正常前列腺组织、良性前列腺增生(BPH)组织及经病理确诊的PCa组织中的总KNA,并逆转录为cDNA,应用RQ-PCR.法检测CD258的表达.结果 在正常前列腺、BPH及PCa组织,CD258的阳性表达率均为100%.在正常前列腺组织中,CD258基因平均相对表达强度为(10.2±1.53),BPH组织中为(9.91±2.01),而在PCa组织中为(3.14±1.72).BPH组及正常对照组比较无统计学差异(P＞0.05),Pca组与BPH组及正常对照组比较有统计学意义(P＜0.05).结论 CD258在PCa组织中出现较低的表达强度,提示其有可能与PCa的发病相关.     

建立实时定量PCR检测临床样品中的麻风杆菌DNA

目的探讨建立实时定量PCR检测麻风病的方法,评价该方法对于麻风病的诊断价值。方法用17种可培养的分枝杆菌和4种常见球菌和杆菌检测RT-PCR的特异性,并系列稀释已知量的菌液至10-9以检测RT-PCR的敏感性。临床标本40例,包括TT 2,BT 17,BL 17,LL 1,I 3例。其中取皮损组织26份,常规组织液27份及血液样品34份。结果 RT-PCR最低检测限约为4.9个麻风菌/反应,17种其他分枝杆菌和4种细菌常见球菌和杆菌DNA均未扩增出RLEP片段。检测皮损、组织液和血液三种标本,发现皮损标本中麻风菌量最多;BI值与皮损中麻风菌DNA的Ct值之间存在负性相关,提示RT PCR可作为参考值用于定量患者麻风菌载量。结论用RLEP RT-PCR定量麻风菌细菌负荷,该方法敏感性高、特异性强,具有临床参考价值。     

FQ-PCR检测小鼠肝癌模型中Cyclin E mRNA方法的建立

目的:建立SYBR Green Ⅰ实时荧光PCR定量检测小鼠肝癌模型中细胞周期蛋白cyclin E mRNA的方法。方法:以cyclin E和β-actin的PCR产物为阳性模板,分别将二者cDNA产物进行10倍梯度稀释,建立双标准曲线,应用SYBR Green Ⅰ实时荧光定量PCR检测cyclin E和β-actin mRNA含量,对熔解曲线进行分析确定扩增产物的特异性。结果:建立的标准曲线线性关系良好,相关系数r均为-1.00,cyclin E和β-ac-tin扩增效率分别为0.91和0.93,熔解曲线分析显示均为单峰,特异扩增产物的Tm值分别为(81.84±0.28)℃和(89.15±0.26)℃。10-4Cyclin E和β-actin cDNA标本日间变异系数(CV)和批内CV分别为1.02%、1.45%和0.90%、1.48%。结论:SYBR Green I实时荧光PCR定量检测cyclin E mRNA是一种方便快捷、经济实惠、灵敏度高、特异性好的方法,为cyclin E的进一步研究奠定方法学基础。     

实时荧光定量PCR检测乙型肝炎病毒DNA的临床应用价值

目的: 探讨实时荧光定量PCR(F Q-PCR)检测乙型肝炎病毒DNA的临床应用价值。方法: 采用FQ-PCR方法检测196例患者血清中HBV-DNA。结果: 112例HBeAg(+)/HBeAb(-)标本中FQ-PCR均阳性,HBV-DNA拷贝数1.08×107/ml;68例HBeAg(-)/HBeAb(+)标本中,平均拷贝数6.12×105/ml,其阳性率为66.2%;16例HBeAg(-)/HBeAb(-)标本中,平均拷贝数为2.72×104/ml。结论: 实时FQ-PCR可以实现准确定量,是了解HBV在体内复制和判断疗效的有利手段。