甲醛灭活工艺对By型流感病毒的灭活效果及其抗原稳定性的影响

目的 评价终浓度为100μg/ml甲醛、2～8℃、10 d灭活工艺对2022年四价流感病毒裂解疫苗生产用By(B/Phuket/3073/2013/BVR-1B)病毒毒株灭活的适用性。方法 病毒收获液（鸡胚病毒培养产物）经过澄清过滤,控制蛋白浓度<800μg/ml,温度2～8℃,添加甲醛溶液至终浓度100μg/ml,对病毒收获液进行灭活。在灭活第0、1、2、3、4、5、10天取样,采用鸡胚半数感染剂量（median infective dose,EID50）法检测病毒滴度,采用Reed-Muench法计算lgEID50/ml;采用直接血凝法检测流感病毒血凝滴度;对灭活10 d的样品进行病毒灭活验证试验;灭活10 d后的病毒液经超滤、离心、层析等工艺提纯,取样进行透射电镜观察病毒颗粒完整性。结果 病毒收获液灭活第0、1、2、3、4、5、10天的病毒滴度分别为（8.5±0.4）、（4.2±0.5）、（1.3±0.4）、0、0、0、0 lgEID50/ml,血凝滴度结果均在1∶256～1∶512;病毒灭活验证试验显示,经过10 d的灭活,病毒均已全部灭活;透射电镜观察显示,所得的病毒均...     

甲型流感病毒的研究进展

甲型流感病毒感染包括野生鸟类、驯养家禽、猪、马和人等温血动物。通过转换宿主,在新宿主体内变异产生新类型的毒株。在变异过程中,产生了甲型流感病毒的新抗原,使人群对其普遍敏感,从而导致流感的广泛流行。有关流感流行的记录已超过百年,流行的间隔约为40年。     

流感病毒RNA聚合酶的分离与纯化

目的：建立分离、纯化流感病毒RNA聚合酶PB1、PB2和PA 3P蛋白的有效方法,为进一步研究3P蛋白的结构和功能奠定基础。方法：用甘油、CsCll及CsTFA不同介质的密度梯度超速离心法进行分离,用SDS-PAGE电泳及Western blot法检测3P蛋白,用尿素变性PAGE检测vRNA。结果：用甘油密度梯度离心,可从病毒粒子中分离由NP、3P和RNA组成的RNP。将纯化的RNP用CsCl和甘油双组分不连续密度梯度离心,可形成NP和3P-RNA两部分,使NP与3P-RNA分离。进一步将3P-RNA在CsTFA-甘油双组分不连续密度梯度介质中进行超速离心,可有效地将3P与RNA分离,获得较纯的3P蛋白。3P位于离心管的上半部分,而RNA则位于离心管的近底端部可有效地将3P与PNA分离,获得较纯的3P蛋白。3P位于离心管的上半部分,而RNA则位于离心管的近底端部分。结论：用甘油、CsCl-甘油和CsTFA-甘油分步超离心法可有效地从流感病毒粒子中纯化出离纯度的流感病毒RNA聚合酶。     

AT-2灭活HIV-1病毒及纯化回收鉴定

目的 制备具备完整空间构型且纯度在90%以上的灭活HIV-1病毒,用于HIV疫苗研究.方法 应用化学制剂2,2'-dlthiodipyridine(aldrithiol-2;AT-2)灭活HIV-1病毒,对灭活的病毒超速离心浓缩并洗涤去除灭活用的化学制剂AT-2.采用分子筛技术去除灭活病毒中残存的杂质蛋白质.结果 250μmoL/L AT-2与HIV-137℃作用1 h可以彻底灭活病毒的感染性,同时保留病毒的免疫原性.灭活的病毒纯化后检测不到AT-2的残留,检测牛血清蛋白残余量低于50 ng/mL.结论 灭活的HIV-1病毒经过纯化后纯度达到95.6%,可以满足作为HIV疫苗研究的免疫刺激剂的使用要求.     

次氯酸钠消毒剂对脊髓灰质炎病毒灭活效果观察

观察次氯酸钠消毒剂对脊髓灰质炎病毒灭活效果，采用悬液法进行检测，结果在20～22℃，相对湿度为54％～65％的条件下，次氯酸钠消毒剂有效氯含量为250．0mg／L，加入病毒悬液作用1min后，对脊髓灰质炎病毒平均灭活对数值为2．89；加入病毒悬液作用5min、10min后对脊髓灰质炎病毒平均灭活对数值≥4．00。     

板蓝根不同提取物抗甲型流感病毒的实验研究

目的:观察板蓝根不同提取物抗甲型流感病毒的作用.方法:采用用血凝滴度640以上的甲型流感病毒A/PR/8/34的尿囊液30μ1滴鼻感染小鼠,观察小鼠感染甲型流感病毒后发病及死亡情况.结果:板蓝根提取物2号1.0 g/kg剂量组和板蓝根提取物3号1.67g/kg剂量组可明显延长甲型流感病毒感染小鼠存活天数和降低死亡率,与病毒对照组比较具有显著性差异(P<0.05,P<0.01).板蓝根提取物1号0.67g/kg剂量组和板蓝根提取物4号1.12g/kg剂量组可显延长甲型流感病毒感染小鼠存活天数,与病毒对照组比较具有显著性差异(P<0.05).结论:板蓝根提取物2号组和板蓝根提取物3号组具有较好的抗甲型流感病毒的作用.     

正柴胡饮体外抗甲型流感病毒和乙型流感病毒作用的研究

为探讨中药复方正柴胡饮(柴胡、陈皮、防风、芍药、甘草、生姜等)的抗病毒作用,从体外抗病毒实验对其抑制甲型流感病毒(FM1)和乙型流感病毒(昆科70B)的作用进行了研究。结果显示:中药复方正柴胡饮在无毒浓度1.56g/L、6.25g/L分别对FM、昆科70B有明显的抑制病毒致细胞病变作用。     

板蓝根颗粒对甲型流感病毒小鼠的作用

目的测定板蓝根颗粒抗流感病毒的药效作用。方法 A/California/7/2009(CA7)病毒滴鼻感染BALB/c小鼠观察14d,观察板蓝根对甲型H1N1流感病毒感染小鼠的保护作用,计算小鼠存活率、存活天数以及延长生命率。感染的小鼠第5天每组小鼠处死一半,取肺组织,观察板蓝根对甲型H1N1流感病毒感染小鼠肺组织的保护作用。结果板蓝根可明显延长甲型H1N1流感病毒感染小鼠的存活天数并提高存活率,病理结果显示板蓝根对甲型H1N1流感病毒感染的小鼠的肺组织有一定程度的保护作用,与模型组比较差异显著(P0.05)。结论板蓝根颗粒对甲型H1N1流感病毒感染的小鼠有较好的保护作用。     

泰州地区流感病毒病原学检测分析

目的研究泰州地区近期流感病毒的流行情况，为制定防治决策提供实验室依据。方法在流感监测点和爆发点采集流感样病例鼻咽拭子，用狗肾传代细胞培养技术对采集标本进行病毒分离培养，用“O”型人血红细胞检测培养物的血凝活性，血凝试验阳性且滴度大于1：8的毒株送江苏省疾病预防控制中心确认和分型。结果从泰州145份流感样病例鼻咽拭子标本中成功分离出21株流感病毒，分离率为14．5％。经江苏省疾控中心鉴定H1N1型9株，B型12株。结论泰州市流感流行毒株型别与江苏省内其他监测点相符；病毒分离培养是流感实验室监测中敏感且准确的方法之一。     

7692例呼吸道感染患儿甲乙流病毒检测现况分析

目的 了解贵州省人民医院白云分院呼吸道感染患儿甲乙流病毒检测情况。方法 回顾性分析2019年4～12月在贵州省人民医院白云分院进行甲乙流病毒检测的患儿检测结果及其流行病学特点。结果 共有7692例患儿进行了甲乙流病毒检测,检出阳性率为15.95%,其中甲型流感病毒和乙型流感病毒检出率分别为13.38%和2.57%。检出阳性率存在年龄和季节分布特点,5岁以上的儿童检出率最高,冬季检出率可高达22.20%。结论 呼吸道感染患儿流感病毒检测阳性率较高,并且具有一定的年龄易感性和季节分布特点,医院、社区、学校和家庭应根据其特点做出针对性防治策略。     

2009～2010年深圳市福田区甲型H1N1流感病毒监测分析

目的检测深圳市福田区2009-2010年流感监测样本,分析甲型H1N1流感病毒的流行病学特点。方法采用实时荧光定量（Real Time RT-PCR）进行核酸检测和型别鉴定,同时进行病毒分离和血凝实验。结果 2009年8月-2010年12月共检测467份咽拭子样品,核酸检测阳性129份,阳性率为27.62%;病毒分离毒株101株,阳性率为21.63%。结论在2009年8月份甲型H1N1流感开始流行并成为流行的优势毒株,并持续到2010年3月份;5～59年龄人群甲型H1N1流感病毒分离率较高,而5岁以下及≥60岁年龄组分离率反而较低。     

110例住院患者甲型流感血清抗体水平分析

目的分析呼吸道感染住院患者甲型流感病毒（FluA）抗体水平。方法采集2009年10月1日~2011年2月1日收住北京军区总医院呼吸科110例住院患者的双份血清,应用血凝抑制试验（HI）测定双份血清FluA的血凝抑制（HI）抗体。结果呼吸道感染住院患者新型甲型H1N1流感确诊病例主要集中在2009年10月~12月,随后以混合感染形式与季节性H3N2和季节性H1N1散发存在。新型H1N1的检出率为3.6%（4/110）,季节性H1N1检出率2.7%（3/110）,季节性H3N2检出率6.4%（7/110）,FluA混合感染检出率4.5%（5/110）。抗体滴度≥4倍增高患者仅表现为原有肺部疾病加重者占8/19,抗体滴度2倍增高患者仅表现为原有肺部疾病加重占10/23。结论在流感大流行期间,季节性流感不容忽视;不仅要关注流感样病例,更应注意有基础肺病患者原有症状加重可能是感染流感的唯一表现。     

荧光定量RT-PCR快速检测A型流感病毒的研究

目的利用荧光定量RT-PCR技术建立一种快速检测A型流感病毒的方法。方法根据A型流感M基因的相对保守序列分别设计一对引物及其相应的Taqman探针,建立、优化反应体系后,利用10倍稀释法检验方法的灵敏度并建立相对定量标准曲线;特异性检验后利用临床标本与传统的血凝抑制法进行比较。结果A型流感病毒检测反应的灵敏度为2.56×10-6TCID50,标准曲线相关系数为0.999,扩增效率为108.5%,5种非A型流感病毒病原体检测均为阴性,说明此方法只有很好的稳定性、重现性和特异性。结论本研究建立荧光定量RT-PCR技术可以准确检测A型流感病毒,不仅灵敏度高、稳定性好,而且可以对病毒滴度进行定量检测。     

335例甲型H1N1流感病例流行病学分析

目的 探讨甲型H1N1流感的流行病学特征.方法 回顾性分析2009年6月至2010年1月确诊的335例甲型H1N1流感患者的流行病学资料,分析普通型与危-重型患者的流行病学特点.结果 2009年10月前患者多有甲型H1N1流感接触史,病情轻;2009年11月至2010年1月患者少有甲型H1N1流感接触史,危-重型患者增...     

A型流感病毒核蛋白全套单链抗体库的构建

目的　构建A型流感病毒核蛋白全套单链抗体库。　方法　利用全套噬菌体抗体表面展示技术 ,从A型流感病毒核蛋白免疫的BALB/c小鼠脾淋巴细胞中提取总RNA ,利用抗体可变区PCR混合引物进行全套抗体重、轻链基因的扩增。经重叠延伸反应 ,在体外随机装配成单链抗体。将其克隆到噬菌粒载体PCANTAB5E中 ,电转化TG1细菌 ,以辅助噬菌体M13 K0 7超感染噬菌体文库 ,构建全套ScFv抗体库。　结果　成功利用噬菌体表面展示技术 ,构建了A型流感病毒核蛋白全套单链抗体库 ,库容量达到 8 2× 10 7。　结论　构建全套A型流感病毒核蛋白全套单链抗体库 ,为利用亲和富集筛选技术 ,获得具有A型流感病毒核蛋白结合活性的完整重组噬菌体克隆奠定了基础。     

干扰素对甲型流感病毒感染的JEC细胞增殖的影响

目的探讨干扰素-α2a（IFN—α2a）对甲型流感病毒post—infected感染的JEC细胞增殖的影响。方法采用不同浓度的IFN—α2a作用于H3N2感染0、1、4h的JEC细胞，用MTT比色法在病毒感染后24h进行检测。结果IFN-α2a作用于病毒感染0h、1h后的JEC组OD值升高，而病毒感染4h后的JEC组的OD值却降低。结论IFN-α2a可促进流感病毒H3N2感染初期JEC的增殖，但却抑制感染后期JEC的生长。     

板蓝根提取液体内抗流感病毒作用的研究

目的:研究板蓝根提取液抗甲1型流感病毒鼠肺适应株的作用及其对机体免疫力的影响。方法:用鸡胚培养法观察板蓝根提取液灭活甲1型流感病毒鼠肺适应株;以病毒滴鼻感染小鼠,建立病毒感染小鼠的模型,观察肺指数、病毒致小鼠死亡率,无菌进行脾T、B淋巴细胞增殖实验。结果:(1)鸡胚实验显示,板蓝根提取液能明显灭活病毒。(2)动物实验表明,经过板蓝根提取液治疗的小鼠死亡率明显降低,肺脏病变减轻,免疫细胞增多。结论:板蓝根提取液具有一定的抗甲1型流感病毒鼠肺适应株和增强机体免疫力的作用。     

2004-2005年宁夏A(H1N1)亚型流感病毒基因特性研究

目的了解宁夏流行的A(H1N1)亚型流感病毒血凝素基因变异情况。方法对分离的A(H1N1)亚型毒株随机选取5株进行血凝素基因HA1区核苷酸序列测定并推导出其氨基酸序列,然后进行基因进化特性分析。结果HA1区核苷酸序列和氨基酸序列分析表明,宁夏2004年分离到的A(H1N1)亚型流感病毒株有以下位点发生变异,35 D>N、152 G>R、182 P>S、221 D>G,其中152、221位氨基酸位于抗原决定簇;2005年分离到的A(H1N1)亚型流感病毒株有以下位点发生变异,82 T>K、94 Y>H、119 K>N、145 R>K、165 V>A、208 R>K、251W>R、266 T>N,其中165位氨基酸位于抗原决定簇。结论宁夏2004-2005年分离的A(H lN1)亚型流感毒株基因特性和抗原性已开始发生变异。