Fmr1基因敲除对小鼠生长发育的影响

目的：Fmr1基因敲除对小鼠生长发育的影响.方法：挑选10周龄FVB小鼠和Fmr1基因敲除小鼠各20只（雌、雄各半）,采取1∶1同居,全同胞兄妹近交繁殖,测定子代生长发育指标,进行统计分析.结果：Fmr1基因敲除小鼠体质量与体长分别为：0 d,（1.25.4±0.21）g,（38.99±1.74）mm;21 d,（8.17±2.26）g,（122.81±11.42）mm;60 d,（22.93±2.93）g,（180.19±7.46）mm;FVB小鼠体质量与体长分别为：0 d,（1.33±0.23）g,（40.53±3.05）mm;21 d,（7.75±1.56）g,（118.73±7.85）mm;60 d,（21.11±1.99）g,（176.43±5.73）mm.两个品系的小鼠体质量与体长的增长差异无统计学意义（P〉0.05）.结论：Fmr1基因敲除不影响小鼠正常的生长发育.     

Fmr1基因敲除小鼠脏器重量和脏器系数的比较分析

目的 通过对Fmr1基因敲除小鼠雌雄两性和FVB小鼠的脏器重量和脏器系数进行比较分析,了解其脏器重量的差异,探讨Fmr1基因对动物生长发育等方面的影响.方法 分别测定Fmr1基因敲除小鼠雌雄两性和FVB小鼠内脏器官的绝对重量和脏器系数,并进行统计学处理和分析.结果 相同年龄的Fmr1基因敲除小鼠雄性的体重、心、肺、肝和肾的绝对重量均极显著的大于雌性(P＜0.01).雌雄间脏器系数除肾脏(P＜0.05)和脑(P＜0.01)外,其余无显著差异.与FVB小鼠比较,Fmr1基因敲除小鼠心脏较轻(P＜0.01),肾脏(P＜0.01)、体重和脑较重(P＜0.05).脏器系数肾脏较大(P＜0.01),心脏(P＜0.01)、脑和脾(P＜0.05)较小.结论 Fmr1基因可影响动物的某些脏器重量和脏器系数.     

Fmr1基因敲除对小鼠生理发育和繁殖性能的影响

目的对清洁级FVB.KO和FVB的生理发育指标和繁殖性能进行分析比较,探讨Fmr1基因敲除对小鼠生理发育和繁殖性能的影响。方法挑选10周龄清洁级FVB.KO和FVB各20只(雌雄各半),采取1∶1同居,全部同胞兄妹近交繁殖,测定新生仔鼠生理发育指标和品系繁殖性能。结果 FVB.KO在耳廓分离、体毛长出、门齿萌发、眼睑开裂等生理发育指标上和FVB比较接近,在平均每窝产仔数和离乳率等方面偏低,在雌雄比例上有显著差异。结论 Fmr1基因敲除对小鼠生理发育和繁殖性能影响较小,对后代雌雄比例可能有一定的影响。     

Fmr1基因敲除小鼠血清雌性激素含量的比较研究

目的 测定不同周龄和超排前后雌性Fmr1基因敲除FVB小鼠和背景FVB小鼠血清生殖激素雌二醇(E2)、孕酮(P)、促黄体生成激素(LH)和促卵泡生成激素(FSH)含量,比较不同周龄和不同状态下敲除基因动物的血清性激素水平,研究敲除基因对动物的发育和生殖生理等方面的影响.方法 用放射免疫分析法测定上述动物不同周龄和超排前后血清E2、P、LH和FSH的含量,测定Fmr1基因敲除小鼠不同周龄时的超排卵数,进行统计学分析.结果 6周龄的雌性Fmr1基因敲除小鼠与FVB小鼠比较,LH、FSH值差异无显著性(P＞0.05),E2的P值差异有显著性(P＜0.05).10周龄的两组动物间血清生殖激素水平和超排卵数均差异无显著性(P＞0.05).10周龄Fmr1基因敲除小鼠的超排卵数与6周龄动物比较差异有显著性(P＜0.05).结论 敲除Fmr1基因对动物雌性激素的分泌有影响,该基因与动物的生殖生理有一定的关联.     

雄性Fmr1基因敲除小鼠血液生理生化指标及性激素水平的比较研究

目的比较雄性Fmr1基因敲除小鼠和FVB小鼠血液生理生化值和血清性激素水平，探讨Fmr1基因对动物生长发育和生殖生理等方面的影响。方法分别测定血液生理指标、血清生化指标、血清电解质和血清E2、LH、FSH、T和PRL的含量，并进行统计学处理和分析。结果雄性Fmr1基因敲除小鼠与FVB小鼠比较，血液生理指标中MCV和PCT有显著差异（P〈0．05），而RBC、HCT、HGB、MCH和WBC等无显著差异（P〉0．05）；血清生化指标中除TBIL、[IP^3＋]、[Mg^2＋]（P〈0．05）和AIP、BUN（P〈0．01）外，TPROT、GLB、A／G、BUN、CREAT、[K^＋]、[Na^＋]等项均无显著差异（P〉0．05）。性激素水平E2、LH值差异无显著性（P〉0．05），FSH、T、PRL差异极显著（P〈0．01）。结论Fmr1基因可影响动物的某些生理生化及激素水平。     

Fmr1基因敲除小鼠耳蜗的GABAa1受体的表达

目的 对4周龄Fmr1基因敲除小鼠耳蜗的GABAa1受体表达进行观察,探讨耳蜗GABAa1受体的表达是否受FMRP的影响。方法使用PCR技术对Fmr1基因敲除小鼠鉴定后,对4周龄的Fmr1基因敲除小鼠和野生型小鼠进行耳蜗的GABa1受体免疫组织化学的表达观察,数据采用多因素方差分析处理。结果耳蜗HE染色结果：4周龄组KO鼠较WT鼠形态学观察无差异。4周龄KO小鼠的耳蜗中GABAa1受体表达的平均阳性细胞数均低于WT小鼠,P〈0.01,差异具有统计学意义。结论GABAa1受体表达的降低可能与FMR1基因KO小鼠听源性惊厥发病有关。     

Fmr1基因敲除小鼠耳蜗的GABAα1受体的表达

目的 对4周龄Fmr1基因敲除小鼠耳蜗的GABAα1受体表达进行观察,探讨耳蜗GABAα1受体的表达是否受FMRP的影响.方法 使用PCR技术对Fmr1基因敲除小鼠鉴定后,对4周龄的Fmr1基因敲除小鼠和野生型小鼠进行耳蜗的GABAα1受体免疫组织化学的表达观察,数据采用多因素方差分析处理.结果 耳蜗HE染色结果:4周龄组KO鼠较WT鼠形态学观察无差异.4周龄KO小鼠的耳蜗中GABAα1受体表达的平均阳性细胞数均低于WT小鼠,P＜0.01,差异具有统计学意义.结论 GABAα1受体表达的降低可能与FMR1基因KO小鼠听源性惊厥发病有关.     

m6A识别蛋白Ythdf1在精子发生中的作用研究

目的：构建YTH N6甲基腺苷RNA结合蛋白1（YTH N6?methyladenosine RNA binding protein 1,Ythdf1）的基因敲除小鼠,研究其在小鼠精子发生中的作用。方法：利用CRISPR/Cas9敲除技术及原核注射技术构建Ythdf1基因敲除小鼠模型,通过免疫荧光、HE染色对敲除小鼠睾丸及附睾进行形态学分析,通过交配实验进行生殖力测试,研究Ythdf1基因对雄性小鼠精子发生的影响。结果：RT?PCR结果显示,Ythdf1在1~8周龄雄鼠睾丸中均有表达;成功构建Ythdf1基因敲除小鼠;成年敲除小鼠精子发生、附睾及生育力均无异常。结论：在正常饲养情况下,敲除Ythdf1基因对雄性小鼠精子发生无影响。     

SPF级KM、NIH、Balb/c小鼠生长指标的测定与比较

目的测定SPF级KM、NIH、BALB/c小鼠体重、体长、胸围并比较。方法分六批次对三种品系小鼠进行交配,获得仔鼠后分别于1d,14d,21d,28d,35d,42d,49d,56d,63d用电子天平精确称重,软尺测量体长和胸围。结果与结论 KM小鼠与NIH小鼠相比,体重、体长、胸围差别不大,而BALB/c小鼠与两者都有较大差别。     

雄性小鼠香烟烟雾染毒对子代生长发育影响的研究

目的探讨香烟烟雾染毒对雄性小鼠生育能力及子代生长发育的影响。方法雄性KM小鼠40只,随机分为对照组和暴露组。暴露组采用呼吸道静式染毒,每日1次,每次1 h,连续染毒8周。观察香烟烟雾染毒对雄性小鼠脏器系数及精子畸形率的影响,暴露组与对照组雄性小鼠与未染毒雌性小鼠按雌雄1∶1合笼交配,怀孕雌性小鼠自然分娩,观察仔鼠生长发育情况。结果暴露组小鼠睾丸、附睾、前列腺系数与对照组比较均显著降低,差异有统计学意义(t_(睾丸)=2.864,P0.05,t_(附睾)=2.313,P0.05,t_(前列腺)=3.294,P0.01);暴露组小鼠精子畸形率较对照组显著升高,差异有统计学意义(t=3.110,P0.01)。与暴露组小鼠交配的雌性小鼠受孕率及正常分娩率均较对照组低,但差异无统计学意义(χ_(受孕率)~2=1.059,P0.05,χ_(正常分娩率)~2=1.195,P0.05);死仔率暴露组与对照组比较显著升高,差异有统计学意义(χ~2=5.304,P0.05),出生存活率暴露组较对照组低,但差异无统计学意义(χ~2=0.772,P0.05);哺育存活率暴露组较对照组显著降低,差异有统计学意义(χ~2=4.284,P0.05)。仔鼠体重增长暴露组较对照组显著降低,差异有统计学意义(t_(14 d)=2.182,P0.05,t_(21 d)=2.209,P0.05);暴露组张耳、门齿萌出和开眼的阳性率低于对照组,除开眼的阳性率差异无统计学意义(χ~2=2.901,P0.05)外,其余均有统计学意义(χ_(张耳)~2=3.904,P0.05,χ_(门牙萌出)~2=5.375,P0.05)。结论香烟烟雾暴露对雄性小鼠生殖系统具有毒性作用,并会对仔鼠体重增长和生理发育产生抑制作用。     

Fmrl基因敲除小鼠血清雌性激素含量的比较研究

目的测定不同周龄和超排前后雌性Fmrl基因敲除FVB小鼠和背景FVB小鼠血清生殖激素雌二醇（R）、孕酮（P）、促黄体生成激素（LH）和促卵泡生成激素（FSH）含量，比较不同周龄和不同状态下敲除基因动物的血清性激素水平，研究敲除基因对动物的发育和生殖生理等方面的影响。方法用放射免疫分析法测定上述动物不同周龄和超排前后血清E2、P、LH和FSH的含量，测定Fmrl基因敲除小鼠不同周龄时的超排卵数，进行统计学分析。结果6周龄的雌性Fmrl基因敲除小鼠与FVB小鼠比较，LH、FSH值差异无显著性（P〉0．05），E2的P值差异有显著性（P〈0．05）。lO周龄的两组动物间血清生殖激素水平和超排卵数均差异无显著性（P〉0．05）。lO周龄Fmrl基因敲除小鼠的超排卵数与6周龄动物比较差异有显著性（P〈0．05）。结论敲除Fmrl基因对动物雌性激素的分泌有影响，该基因与动物的生殖生理有一定的关联。     

锂恢复脆性X综合征小鼠模型的跳台行为及糖原合成酶激酶3β的活性

目的 探讨氯化锂治疗是否能改善Fmr1 基因敲除小鼠（ko鼠）学习跳台行为及糖原合成酶激酶3β（GSK3β）的活性。方法 采用30日龄的Fmr1 基因敲除小鼠（ko鼠）及同日龄的野生型小鼠（wt鼠）,分别用生理盐水（用药0）组;用药组：30mg/kg、60 mg/kg、90 mg/kg、120 mg/kg、200 mg/kg。观察用药后ko鼠及wt鼠分别在行为学跳台实验中的潜伏期和错误次数。 同时用免疫印迹观察ko及wt鼠的海马和皮层的GSK3β和磷酸化GSK3β（P-GSK3β）的表达。结果 与未治疗的wt鼠比较,未治疗的ko鼠跳台实验中的潜伏期时间短,错误次数增加,存在学习跳台障碍;免疫印迹实验结果：ko鼠P-GSK3β表达比wt鼠少。锂治疗能够恢复ko鼠的学习跳台行为及增加P-GSK3β的表达量。氯化锂最佳使用剂量30mg/kg和60 mg/kg。结论 锂能改善ko鼠的学习跳台能力,可能与锂改善的P-GSK3β的表达增加有关,对FMR1基因敲除小鼠有治疗作用。     

Fmr1基因敲除小鼠悬尾实验的观察

目的：对不同周龄的 KO 小鼠与 WT 小鼠进行悬尾实验进行观察,探讨 KO 小鼠与 WT 小鼠的行为差别。方法采用健康的试验动物180只分两组：①KO 组（4、6、8周龄,各周龄30只,雌雄各半,共90只）②WT 组（4、6、8周龄,各周龄30只,雌雄各半,共90只）;通过悬尾实验观察性别,年龄对不动时间的影响。结果同龄 KO 雌性小鼠比雄性小鼠的静止时间差别不大;随着年龄增大,静止时间增长。同龄同性别的 KO 鼠比 WT 鼠的不动时间长。P ＜0．05;同龄雄性小鼠比雌性小鼠的不动时间短;随年龄增长各种系小鼠不动时间增长,KO 鼠的不动时间比 WT 鼠长,P ＜0．05。结论 KO 小鼠存在抑郁行为表型。     

Caveolin-1敲除对C57BL/6小鼠繁殖性能及子代离乳前体质量的影响

目的探讨小窝蛋白Caveolin-1敲除对C57BL/6小鼠离乳前繁殖性能及体质量的影响。方法分别对Caveolin-1基因敲除小鼠和同源C57小鼠进行体质量、初产日龄、胎次间隔时间、平均产仔数及离乳存活率的观察及分析。结果 C57BL/6小鼠鼠仔平均体质量均高于Caveolin-1基因敲除鼠,在1、7、14 d时两者比较差异无统计学意义(P>0.05);21 d时,两者差异具有统计学意义(P<0.05);两组初产日龄、胎次间隔时间及平均产仔数差异无统计学意义(P>0.05),但C57BL/6小鼠离乳存活率明显高于基因敲除鼠,两者差异具有统计学意义(P<0.05)。结论 Caveolin-1敲除小鼠的体质量下降、繁殖性能下降。     

光信号对Fmr1 KO小鼠睡眠-觉醒的调控作用

目的 探讨光授时信号对脆性 X 智力低下基因型(Fmr1 KO)小鼠睡眠-觉醒的影响.方法 采用小鼠脑立体定位技术埋置脑电和肌电电极,记录和分析在不同光照条件下Fmr1 KO小鼠和野生型(WT)小鼠的睡眠-觉醒节律的变化.结果 Fmr1 KO 小鼠和 WT 小鼠在正常光照(12 h:12 h明暗,即8:00 am开灯,8:00 pm关灯)条件下的觉醒和睡眠均呈现一致的昼夜节律现象,且二者之间差异无统计学意义;与正常光照的同样时间段相比较,9:00 am～11:00 am关灯期间,Fmr1 KO小鼠和WT小鼠的觉醒量均显著增加(P＜0.05),且在9:00 am～10:00 am变化极显著(P＜0.01),但Fmr1 KO小鼠觉醒的增加量明显低于WT小鼠(P＜0.05);与正常光照的同样时间段相比较,9:00 am ～11:00 am关灯期间,Fmr1 KO小鼠和 WT小鼠的慢波睡眠(SWS) -觉醒(W)、W-SWS和SWS-快波睡眠( FWS)时相转换量都显著增加(P＜0.05),其中在9:00 am～10:00 am极显著增加(P＜0.01).结论 相比于WT小鼠,Fmr1 KO小鼠的睡眠-觉醒受光信号改变的影响有所减弱.     

Deletions are easy detectable in cochlear mitochondrial DNA of Cu/Zn superoxide dismutase gene knockout mice

目的：探讨ROS对各种组织mtDNA的损伤情况,耳蜗mtDNA是否为ROS损伤的标靶。方法：应用套式PCR及分子克隆测序技术对10只Sod1基因敲除小鼠及5只同系野生型小鼠耳蜗、脑、肝脏、肾脏、心脏及皮肤组织进行研究。结果：1.各组mtDNA可检测到3种缺失,常见的缺失为mtDNA3867bp和mtDNA3726bp缺失,mtDNA4236bp缺失不常见。2.mtDNA缺失在不同组织的含量有明显的不同,肝脏和肾脏组织含量最高,耳蜗、心脏和大脑组织其次,脾脏及皮肤组织含量最低。与野生型小鼠比较,Sod1基因敲除小鼠mtDNA在不同组织的缺失量是野生型小鼠的3-20倍,其中耳蜗组织mtDNA缺失量约是WT小鼠的15倍。结论：缺乏Sod1的保护,ROS可以攻击各种组织mtDNA,但具有明显的组织特异性,耳蜗mtDNA是其损害的敏感标靶。     

肝细胞条件性Eva1a/Tmem166基因敲除小鼠的表型分析

目的 应用Cre-LoxP技术构建自噬相关基因Eva1a肝细胞条件性敲除小鼠初步探讨Eva1a基因敲除对小鼠表型的影响。方法 LoxP标记的Eva1a^flox/+小鼠与Alb-Cre工具鼠通过多次繁殖杂交,构建纯合型肝细胞条件性Eva1a基因敲除(Eva1a^flox/flox: Alb-Cre)小鼠模型。选取Eva1a^flox/flox: Alb-Cre小鼠与同窝野生(Eva1a^flox/flox)小鼠雌雄进行体质量、肝指数、肝脏组织学、肝功能、糖脂代谢以及细胞自噬等表型分析。结果 Eva1a纯合型基因敲除小鼠无胚胎致死现象,出生后一般生理状况良好。常规饲养条件下,肝脏Eva1a基因条件性敲除在小鼠体质量、肝脏外观以及组织结构、肝指数、肝功能、糖脂代谢及自噬等与野生型小鼠差异无统计学意义。结论 肝细胞条件性Eva1a基因敲除对小鼠生理条件下的表型无显著影响,为进一步探讨Eva1a在肝脏疾病状态下的作用及分子机制提供了动物模型。     

ZBTB20基因敲除小鼠出生后肝脏甲胎蛋白基因持续高表达的病理学意义

目的探讨出生后肝脏甲胎蛋白(AFP)基因异常高表达在ZBTB20基因敲除小鼠生长发育障碍、严重低血糖和未成年死亡等表型中可能的病理作用。方法将ZBTB20单基因敲除小鼠与AFP单基因敲除小鼠杂交,建立ZBTB20与AFP的联合基因敲除小鼠模型,观察并监测其与ZBTB20单基因敲除小鼠在生长发育、存活率及血糖水平上的差异。结果 ZBTB20/AFP双基因敲除小鼠繁殖成功后,通过观察和监测发现其在生长发育、生存率及血糖代谢等方面与ZBTB20单基因敲除小鼠相比无明显差异。结论 ZBTB20单基因敲除小鼠生长发育障碍、严重低血糖和未成年死亡等表型与其AFP基因出生后异常开放无显著关系。     

Cu/ZnSOD基因敲除小鼠耳蜗易于出现mtDNA缺失突变-ROS对组织损伤的特异性研究

目的　探讨ROS对各种组织mtDNA的损伤情况 ,耳蜗mtDNA是否为ROS损伤的标靶。方法　应用套式PCR及分子克隆测序技术对 10只Sod1基因敲除小鼠及 5只同系野生型小鼠耳蜗、脑、肝脏、肾脏、脾脏、心脏及皮肤组织进行研究。结果　 1 各组织mtDNA可检测到 3种缺失 ,常见的缺失为mtDNA386 7bp和mtDNA372 6bp缺失 ,mtDNA4 2 36bp缺失不常见。 2 mtDNA缺失在不同组织的含量有明显的不同 ,肝脏和肾脏组织含量最高 ,耳蜗、心脏和大脑组织其次 ,脾脏及皮肤组织含量最低。与野生型小鼠比较 ,Sod1基因敲除小鼠mtDNA在不同组织的缺失量是野生型小鼠的 3- 2 0倍 ,其中耳蜗组织mtDNA缺失量约是WT小鼠的 15倍。结论　缺乏Sod1的保护 ,ROS可以攻击各种组织mtDNA ,但具有明显的组织特异性 ,耳蜗mtDNA是其损害的敏感标靶。