健脾化瘀方对肝癌HepG2细胞生物行为学的影响

目的：本研究旨在探讨：①健脾化瘀方体外对人肝癌细胞株HepG2增殖、黏附和侵袭的生物行为学影响;②健脾化瘀方体外对人肝癌细胞株HepG2凋亡的影响。方法：①采用MTT法、黏附实验、Transwell小室侵袭迁移实验,观察不同浓度的健脾化瘀方对人肝癌细胞株HepG2增殖、黏附和侵袭的影响;②利用流式细胞仪,AnnexinV/PI双染色法,研究不同浓度健脾化瘀方对人肝癌细胞株HepG2早期凋亡的诱导作用。结果：①健脾化瘀方有抑制人肝癌细胞株HepG2增殖的作用,并呈一定的浓度依赖性：同一时间不同浓度各组细胞的生长抑制率有明显差异（P〈0.01）。②健脾化瘀方高、中浓度（2、1mg/mL）作用HepG 2细胞40、60和120min时,细胞的黏附能力明显降低（P〈0.01）。健脾化瘀方作用HepG 2细胞24h后,侵袭的细胞数减少（P〈0.05）。③健脾化瘀方对人肝癌细胞HepG2作用48h后,有诱导人肝癌细胞株HepG2凋亡的作用（P〈0.05）。结论：①健脾化瘀方对人肝癌细胞株HepG2的增殖具有抑制作用;②健脾化瘀方能抑制人肝癌细胞株HepG2的黏附能力和侵袭能力;③健脾化瘀方有诱导人肝癌细胞株HepG2凋亡的作用。     

慢病毒介导的FHIT基因过表达调控人肝癌细胞株生长实验研究

［摘要］目的　探讨过表达FHIT基因对FHIT基因含量不一致的人肝癌细胞株HepG2、Hep3B 和 Huh7的增殖、凋亡和细胞侵袭以及细胞周期的影响,以期证实FHIT基因在肝癌细胞株的表达差异与肝癌细胞的分化有密切相关性．方法　体外成功构建pLVX-IRES-FHIT慢病毒重组载体转染FHIT基因含量不一致的肝癌细胞株HepG2、Hep3B 和 Huh7,以MTT法、FCM法、Annexin V/PI双染色法、细胞周期检测技术和Transwell侵袭实验分析过表达的FHIT基因对三系肝癌细胞的增殖活性、凋亡、细胞侵袭性和细胞周期的影响机制及其生物学效应与时间梯度的关系．结果　体外成功构建重组慢病毒载体pLVX-IRES-FHIT转染FHIT含量不一致的肝癌细胞株HepG2、Hep3B 和 Huh7．（1）MTT法检测显示三系肝癌细胞株的pLVX-IRES-FHIT组细胞增殖活性明显降低,且随时间推移细胞增殖抑制效果更为显著,在48 h达到高峰,此后到72 h进入平台期,对照组细胞增殖抑制不明显（P＜0.05）．AnnexinV/PI双染色法检测发现pLVX-IRES-FHIT组三系肝癌细胞48 h凋亡率较对照组差异无统计学意义（P＞0.05）．三系肝癌细胞中对pLVX-IRES-FHIT组转染致FHIT基因过表达抑制增殖活性大小的顺序依次是HepG2＞Hep3B＞Huh7;（2）经过Transwell侵袭实验表明对FHIT基因过表达对三系肝癌细胞的pLVX-IRES-FHIT组侵袭性均有明显的抑制作用（P＜0.05）,而对照组未见明显差异（P＞0.05）．三系肝癌细胞的侵袭性顺序依次为HepG2＞Hep3B＞Huh7;（3）细胞周期检测发现pLVX-IRES-FHIT组G0/G1期细胞增多,S期细胞减少,增殖指数减低,在HepG2细胞中与对照组间有统计学意义（P＜0.05）,在HepB和Huh7细胞中与对照组间无统计学意义（P＞0.05）．FHIT基因的过表达对三系肝癌细胞的细胞周期影响为细胞周期停滞于S期,且G0/G1期细胞增多的顺序依次是HepG2＜Hep3B＜Huh7．结论　FHIT基因在肝癌细胞株中的表达差异可能与肝癌细胞的恶性分化有密切正相关性,FHIT基因有可能成为原发性肝癌的基因治疗的基因靶标之一．     

茅苍术提取物诱导HepG2细胞凋亡的研究

目的：探讨茅苍术提取物对体外培育人肝癌细胞株HepG2凋亡的影响。方法：采用MTT法考察茅苍术提取物对HepG2增殖的抑制作用，普通光镜观察、荧光染色法观察细胞形态的改变及细胞凋亡，流氏细胞仪（FCM）观察细胞周期变化和凋亡峰的出现。结果；0．4～1．6mg／mL茅苍术提取物对HepG2增殖产生抑制作用，且呈明显的时-效果、量-效关系（P＜0．05）。光镜观察可见贴壁细胞数量明显减少，细胞碎片和悬浮细胞数目明显增加，荧光染色显示细胞核显著收缩，呈致密浓染。FCM结果表明16mg／mL茅苍术提取物处理细胞24h后使HepG2出现明显的凋亡峰，并将细胞周期阻滞于S期和G2／M期。结论；茅苍术提取物能诱导诱导HepG2细胞凋亡。     

姜黄素诱导人肝癌HepG2细胞发生凋亡及对细胞生长周期的影响

目的研究中药姜黄素在体外诱导人肝癌HepG2细胞发生凋亡的机制及对细胞生长周期的影响。方法体外培养人肝癌HepG2细胞,用不同浓度的姜黄素（0.5、1.0、2.0、4.0、8.0和16.0μmol/L）刺激人肝癌HepG2细胞24、36和48h,MTT法及台盼蓝拒染法检测姜黄素对人肝癌HepG2细胞生长增值的影响并绘制生长曲线图,流式细胞术（FCM）检测其对细胞生长周期的影响。结果MTT法结果表明姜黄素对人肝癌细胞HepG2的生长具有抑制作用,2.0μmol/L浓度组在24h与对照组比较便具有统计学意义（P〈0.05）,16μmol/L浓度组与HepG2细胞作用48h后对HepG2细胞的生长抑制作用最强（54.78±2.35）%,台盼蓝拒染法发现细胞存活率与姜黄素浓度间具有剂量和时间效应;流式细胞仪检测结果表明8.0μmol/L姜黄素诱导了人肝癌HepG2细胞发生凋亡,并对细胞生长的S期有明显的阻滞作用。结论姜黄素在体外能阻滞HepG2细胞的生长增值,诱导了人肝癌HepG2细胞发生凋亡。     

银杏叶总黄酮对人肝癌HepG2细胞增殖和凋亡的影响

目的银杏叶总黄酮具有诸多药用价值,文中通过其对体外培养的人肝癌细胞株HepG2的增殖与凋亡的影响,探讨银杏叶总黄酮的抗肿瘤活性及其作用机制。方法不同浓度的银杏叶总黄酮体外作用于人肝癌细胞株HepG2不同时间,用四甲基偶氮唑盐比色法（MTT法）检测银杏叶总黄酮对HepG2细胞增殖的影响,以脱氧核酸末端转移酶介导的缺口末端标记（TUNEL）法观察银杏叶总黄酮对HepG2细胞凋亡的影响。结果人肝癌HepG2细胞经银杏叶总黄酮处理一定时间后,增殖比率明显下降（P〈0.01）,且具有剂量依赖效应;细胞凋亡明显增加（P〈0.01）,也具有剂量依赖效应。结论银杏叶总黄酮对人肝癌HepG2细胞增殖有抑制作用,并能诱导细胞凋亡。     

叶下珠复方Ⅱ号对HSC—T6增殖及TIMP—lmRNA表达的影响

目的观察叶下珠复方Ⅱ号对肝星状细胞（HSC～T6）增殖及基质金属蛋白酶抑制因子mRNA（TIMP—lmRNA）表达的影响，探讨叶下珠复方Ⅱ号抗肝纤维化效果和作用机理。方法体外培养HSC—T6，随机分为对照组和叶下珠复方Ⅱ号5．00、2．50和1．25mg／ml组。加药后用MTT法检测各组HSC—T6增殖变化，且采用RT—PCR方法测定各组HSC—T6的TIMP—lmRNA表达。结果叶下珠复方Ⅱ号各剂量组药物对HSC—T6的增殖有明显的抑制作用，且TIMP—lmRNA表达都低于正常对照组。结论叶下珠复方Ⅱ号能押制HSC—T6增殖和TIMP—lmRNA表达，从而减弱TIMP—l对基质金属蛋白酶的抑制作用，促进ECM的降解，这可能是叶下珠复方Ⅱ号抗肝纤维化的作用机制之一。     

叶下珠复方Ⅱ号对HSC—T6增殖及TIMP—lmRNA表达的影响

目的观察叶下珠复方Ⅱ号对肝星状细胞（HSC～T6）增殖及基质金属蛋白酶抑制因子mRNA（TIMP—lmRNA）表达的影响，探讨叶下珠复方Ⅱ号抗肝纤维化效果和作用机理。方法体外培养HSC—T6，随机分为对照组和叶下珠复方Ⅱ号5．00、2．50和1．25mg／ml组。加药后用MTT法检测各组HSC—T6增殖变化，且采用RT—PCR方法测定各组HSC—T6的TIMP—lmRNA表达。结果叶下珠复方Ⅱ号各剂量组药物对HSC—T6的增殖有明显的抑制作用，且TIMP—lmRNA表达都低于正常对照组。结论叶下珠复方Ⅱ号能押制HSC—T6增殖和TIMP—lmRNA表达，从而减弱TIMP—l对基质金属蛋白酶的抑制作用，促进ECM的降解，这可能是叶下珠复方Ⅱ号抗肝纤维化的作用机制之一。     

丁酸钠对HepG2细胞诱导凋亡的作用及机制

目的探讨丁酸钠（sodium butyrate，SB）对HepG2细胞的诱导凋亡作用及与端粒酶活性的关系。方法采用MTT法检测5mmol／L丁酸钠在不同时间对HepG2细胞的增殖抑制作用；流式细胞仪检测丁酸钠作用于HepG2细胞后的凋亡情况，及细胞周期的改变；TRAP-ELISA法检测细胞端粒酶活性。结果丁酸钠能明显抑制HepG2细胞增殖，并且这种抑制作用具有时间依赖性。丁酸钠处理HepG2细胞48h凋亡率明显提高（P〈0．01），S期细胞比例显著下降（P〈0．05），G0／G1期细胞比例显著升高（P〈0．05）。实验组端粒酶活性为1.16±0．12，对照组端粒酶活性为3．58±0．33，实验组端粒酶活性明显降低（P〈0．05）。结论丁酸钠具有诱导HeoG2细胞凋亡的作用，其机制与抑制端粒酶活性有关。     

大黄素联合3’-叠氮-3’-脱氧胸腺核苷对人肝癌HepG2细胞增殖的协同抑制作用

目的观察大黄素联合3’-叠氮-3’-脱氧胸腺核苷（AZT）对人肝癌细胞HepG2增殖及凋亡的影响。方法采用四唑蓝比色试验（MTT）检测大黄素、AZT及二者固定浓度比例联合在不同作用时间对HepG2细胞增殖的影响,应用Calcusyn 2.0软件计算药物半数抑制浓度（IC50）及联合用药指数（CI）;流式细胞术（FCM）测定给药后细胞凋亡情况。结果大黄素与AZT联合作用比两药单用能显著抑制HepG2细胞的增殖,不同浓度的联合在不同作用时间联合指数（CI值）均小于1。联合用药组细胞凋亡率显著高于对照组和单一用药组（P〈0.05）。结论大黄素/AZT联合用药具有比单用大黄素或AZT能更显著地在体外抑制HepG2细胞增殖并诱导细胞凋亡,表现出明显的协同效应。     

西瑞香素对人肝癌HepG2细胞增殖、凋亡及细胞周期的影响

目的 探讨西瑞香素对人肝癌HepG2细胞增殖、凋亡及细胞周期的影响.方法 用不同浓度的西瑞香素作用于体外培养的HepG2细胞,采用四甲基偶氮唑蓝法（MTT）检测西瑞香素对HepG2细胞增殖抑制能力;采用AnnexinV/PI双染流式细胞术测定西瑞香素对HepG2细胞凋亡的影响;采用PI单染流式细胞术检测西瑞香素对HepG2细胞周期的影响.结果 西瑞香素可抑制HepG2细胞的增殖,且存在明显的浓度和时间依赖关系;流式细胞术检测显示西瑞香素作用48 h后,实验组细胞未出现明显的早期凋亡细胞群.但实验组处于S期的细胞数较对照组明显减少（P＜0.05）,G0/G1期的细胞较对照组明显增多（P＜0.05）.结论 西瑞香素对人肝癌HepG2细胞的体外增殖具有抑制作用,可能与阻滞细胞周期有关.     

ω-3多不饱和脂肪酸对人肝癌细胞HepG2增殖及SOD、MDA的影响

目的 本研究探讨不同浓度ω-3多不饱和脂肪酸（EPA、DHA）对人肝癌细胞HepG2增殖和脂质过氧化的影响。方法采用MTT法测定肿瘤细胞存活率,黄嘌呤氧化酶法测定总SOD活力,TBA法测定MDA含量。结果60、80和100 μg／mL的EPA或DHA可抑制肿瘤细胞的存活率（P〈0．01）,且呈一定的剂量依赖性,同时,上述剂量的EPA和DHA处理后,总SOD活力明显下降（P〈0．05）、而MDA含量明显升高（P〈0．05）。结论ω-3多不饱和脂肪可通过影响细胞脂质过氧化来抑削人肝癌细胞HepG2的增殖。     

大黄素对化疗药诱导肝癌细胞凋亡的增强作用

目的 观察大黄素对化疗药5-氟尿嘧啶（5-Fu）诱导肝癌细胞HepG2凋亡的影响。方法 不同浓度大黄素单用或与5-Fu联合作用HepG2细胞，以流式细胞仪（FCM）及末端脱氧核苷酸转移酶介导的dUTP缺口末端标记（TUNEL）法检测细胞凋亡；免疫组织化学（sP）法检测Bax、Bcl-2、凋亡诱导因子（AIF）蛋白表达的改变。结果 2、4μg／m1大黄素分别与5-Fu联用，作用细胞16、24、48h后，时间依赖性地诱导HepG2细胞凋亡，且随大黄素浓度的增加细胞凋亡率有增加的趋势。联用组细胞凋亡率及Bax、Bcl-2、AIF蛋白表达与5-Fu单用组相比差异均有极显著性意义（均P〈0．01）。各组细胞凋亡率与Bax蛋白表达呈正相关（r=0．881，P〈0．05），与Bcl-2蛋白表达呈负相关（r=-0．942，P〈0．01），与AIF蛋白表达呈正相关（r=0．900，P〈0．05）。结论 大黄素可显著增强5-Fu诱导HepG2细胞凋亡的作用，可能与调控Bax、Bcl-2、AIF蛋白表达有关。     

槲皮素对人肝癌SMMC-7721细胞生长的抑制及细胞凋亡的诱导作用

目的探讨槲皮素体外对人肝癌SMMC-7721细胞的生长抑制作用及诱导细胞凋亡的作用机制。方法以10、30、60、100#mol／L槲皮素作用于体外培养的SMMC-7721细胞,MTT法检测细胞生长抑制率,Annexi—V／PI双染流式细胞仪检测细胞凋亡情况,免疫组化染色法检测bcl-2、bax蛋白表达的变化。结果30、60、100umol／L槲皮素可显著地抑制SMMC-7721细胞的生长（P〈0．01）,诱导细胞发生凋亡（P〈0．01）,并呈现量墩和时-效关系;槲皮素作用48h后,免疫组化染色法检测显示bcl-2蛋白表达降低和bax蛋白表达上调。结论槲皮素体外通过引起人肝癌SMMC-7721细胞bcl-2蛋白表达下调和bax蛋白表达上调诱导细胞发生凋亡,抑制细胞生长,槲皮素可能成为一种潜在的抗肝癌药物。     

解毒消瘕饮对肝癌细胞株HepG2线粒体膜电位的影响

目的 探讨中药复方解毒消瘕饮诱导肿瘤细胞凋亡的机制。方法采用体外培养人肝癌细胞株HepG2,用解毒消瘢饮含药血清干预24h,MTT法检测细胞增殖情况;流式细胞术检测线粒体膜电位的改变。结果解毒消瘕饮含药血清组与对照组和空白血清组比较,细胞增殖明显抑制,线粒体膜电位明显下降,差异有统计学意义（P〈0．05）。结论解毒消瘢饮诱导人肝癌细胞株HepG2凋亡的机制可能是通过崩溃线粒体跨膜电位,从而引发细胞早期凋亡。     

叶下珠复方Ⅱ号对肝星状细胞TGF-β1及Ⅰ型胶原的影响

目的观察叶下珠复方Ⅱ号体外对肝星状细胞（HSC-T6）TGF-β1mRNA、Ⅰ型胶原mRNA表达及其蛋白合成的影响,进一步探讨叶下珠复方Ⅱ号抗肝纤维化的作用机制。方法体外培养HSC-T6细胞,分为对照组、叶下珠复方Ⅱ号高剂量组（3.60mg/ml）、中剂量组（1.80mg/ml）和低剂量组（0.9mg/ml）,采用MTT法检测药物对HSC-T6细胞增殖的影响,SYBR染料法实时荧光定量PCR检测药物处理后HSC-T6细胞TGF-β1及Ⅰ型胶原mRNA的表达变化,Western Blot法检测I型胶原蛋白表达的改变。结果叶下珠复方Ⅱ号处理HSC-T6细胞后,高、中、低各剂量组对HSC-T6细胞增殖、TGF-β1mRNA及Ⅰ型胶原合成呈现显著的抑制作用,与细胞对照组比较,差异均有统计学意义（P〈0.05和0.01）,而且随着药物浓度的增加其抑制作用明显加强。结论叶下珠复方Ⅱ号能显著抑制HSC-T6细胞增殖、明显降低TGF-β1mRNA、Ⅰ型胶原mRNA的表达及其蛋白合成,具有明显的抗肝纤维化作用。     

得力生对肝癌HepG2细胞株凋亡的影响及机制

目的：探讨中药得力生对肝癌HepG2细胞株凋亡率的影响及可能的分子机制．方法：以MTT法检测不同浓度得力生作用不同时间后肝癌HepG2细胞的增殖抑制率的变化,用流式细胞仪检测细胞周期及凋亡,用免疫细胞化学法、Western Blot法分别观察细胞凋亡相关因子Caspase-3,Caspase-9及Bcl-2（B细胞淋巴瘤2）的表达．结果：得力生对肝癌HepG2细胞株的增殖抑制作用随药物作用时间和浓度增大而增加;主要使HepG2细胞株阻滞于S期;与对照组比较,实验组细胞凋亡率增高（P〈0．01）;Caspase-3和Caspase-9在实验组表达增加,Bcl-2表达减少．结论：得力生可以增加HepG2细胞株凋亡率,其作用机制可能与线粒体凋亡通路有关．     

重楼水提物对肝癌细胞HepG2增殖及凋亡的影响

目的 探讨重楼水提物对人肝癌HepG2细胞株增殖和凋亡的影响.方法 以体外培养的肝癌HepG2细胞为研究对象,MTT法检测重楼对肝癌HepG2细胞增殖的抑制作用,流式细胞仪Annexin V/PI 双染法检测重楼对其凋亡的影响,ELISA法检测Bcl-2、Bax 蛋白表达的情况.结果 不同浓度重楼水提物能有效抑制HepG2细胞的增殖,且呈时间及浓度依赖性,作用效果在12 μg/ml时抑制效果最好（P〈0.01）.12 μg/ml重楼水提物作用HepG2细胞24 h、48 h后,结果表明HepG2随着重楼水提物作用时间的延长,细胞凋亡率增加,与阴性对照组相比,差异有统计学意义（P〈0.01）.12 μg/ml重楼水提物作用HepG2 细胞24 h后,Bcl-2蛋白表达降低,Bax蛋白表达增加,与阴性对照组相比,差异有统计学意义（P〈0.05）.结论 重楼水提物能抑制HepG2细胞的体外增殖,抑制作用表现出时效关系,其机制可能与促进细胞凋亡、降低Bcl-2蛋白表达、增加Bax蛋白表达有关.     

白芍总苷对HepG2细胞增殖的抑制作用

目的 探讨白芍总苷（TGP）对人肝癌细胞株HepG2的增殖抑制作用。方法 采用Mtt法检测TGP对HepG2细胞增殖的影响;应用荧光显微镜观察药物作用后的细胞形态;用流式细胞术检测TGP对细胞凋亡及细胞周期的影响。结果 TGP（1．0～5．0g／L）能抑制HepG2细胞生长,且呈浓度依赖性;TGP（1．5、2．5g／L）分别作用72h后,HepG2细胞出现体积缩小,荧光染色增强,胞核或胞质中可见致密浓染的块状或颗粒状黄绿色荧光染色;TGP（1．0、1．5g／L）药物作用72h后,流式细胞仪可检测到细胞凋亡现象并发现显著的S期阻滞。结论 TGP在体外能够抑制人肝癌细胞HepG2的增殖,并能诱导细胞凋亡。     

斑蝥酸钠对肝癌细胞HepG_2增殖抑制作用的研究

目的研究斑蝥酸钠（cantharidin,CTD）对人肝癌细胞HepG2增殖的抑制作用和机制。方法采用免疫组化染色法（I mmunohistochemistry,I H）和33528染色法观察斑蝥酸钠对HepG2细胞增殖的抑制作用,并观察肝癌细胞凋亡的形态学变化及不同剂量斑蝥酸钠对HepG2细胞凋亡率的影响。结果 1.0 mg/L以上斑蝥酸钠对人肝癌细胞HepG2的增殖有显著抑制作用（P〈0.01）,最高凋亡率（47.24%）出现于高剂量组（5.0 mg/L）。结论斑蝥酸钠对人肝癌细胞HepG2的增殖有显著抑制作用,是治疗肝癌较理想的药物之一。     

番茄红素抑制人脑胶质瘤U251细胞生长的实验研究

目的探讨番茄红素对体外培养的人脑胶质瘤U251细胞增殖及诱导凋亡的作用。方法用CCK-8法检测不同浓度番茄红素作用于U251细胞24h、48h及72h后细胞的存活率;应用流式细胞术（FCM）检测细胞周期。结果番茄红素能抑制人脑胶质瘤U251细胞的生长,呈量-效及时-效关系（P〈0．01）;FCM检测表明,细胞主要被阻滞在G0／G1期;番茄红素诱导细胞凋亡率较对照组明显增加（P〈0．01）,具有浓度依赖性。结论番茄红素能抑制U251细胞增殖,诱导细胞凋亡。