夏秋季腹泻便中气单胞菌属的分离与鉴定

20 0 1年 7月～ 10月采集了崇文区 2 10份急性腹泻患者粪便 ,除开展了致病性大肠杆菌 ,沙门氏菌 ,志贺氏菌 ,金黄色葡萄球菌的检测外。还开展了气单胞菌属的检测 ,共检出阳性菌株 32株。其中沙门氏菌 3株(鼠伤寒沙门氏菌 1株 ,都伯林沙门氏菌 2株 ) ,志贺氏菌 6株 (宋内氏菌 4株 ,福氏Y变种 2株 )致病性大肠杆菌 4株 ,金黄色葡萄球菌 2株。分离到气单胞菌属的细菌 14株 ,检出率为 6 .6 7% ,其中豚鼠气单胞菌 8株 ,温和气单胞菌 5株 ,嗜水气单胞菌 1株 ,结果表明夏秋季感染性腹泻气单胞菌属亦属常见 ,应引起临床及实验室的重视 .     

大鲵感染温和气单胞菌的实验研究

目的分离大鲵感染的病原菌并进行菌株鉴定和药敏实验。方法从患病大鲵的心脏血和腹水中分离培养到可疑菌落，采用法国梅里埃全自动微生物分析仪进行鉴定和药敏试验。根据药敏试验结果指导养殖场进行治疗。结果经法国梅里埃全自动微生物分析仪鉴定为温和气单胞菌，药敏试验证实对庆大霉素、复方新诺明、丁胺卡那霉素、氨曲南、头孢替坦、头孢曲松和头孢唑啉等敏感。结论本次引起大鲵感染的是温和气单胞菌。该菌对庆大霉素、复方新诺明等抗菌药物敏感。     

腹泻患者粪便弧菌属及气单胞菌属分离鉴定结果分析

作者从１３５６例腹泻患者粪便中分离出１－２株弧菌科病原菌，分离率为７．５％，其中：弧菌属８６株，分离率为６．３％，共１０个菌种；气单胞菌属１６株，分离率为１．２％，共３个菌种。均发经生化反应和血清试验证实。结果表明：弧菌属和气单胞菌属是嘉兴地区感染性腹泻的常见病原菌。     

云南战区部队驻地腹泻患者中首次检出温和气单胞菌

目的 对从腹泻患者粪便中分离出的温和气单胞菌进行鉴定,并做毒素原性及致病性研究和建立药敏谱.方法 碱性蛋白胨水增菌,接种碱性琼脂和TCBS平板分离培养,使用弧菌科细菌生化编码系统(第二代GYZ-9V系列)和API-20E生化编码系列对分离菌株进行鉴定,电子显微镜观察形态.毒素原性研究用溶血试验检测溶血素,小白鼠腹腔注射测定致病性,药敏试验采用纸片扩散法.结果 从587例腹泻患者粪便标本分离出9株温和气单胞菌,毒素原性检测具有溶血素,致病性测定,该菌株毒力较强.所做的18种抗生素药敏试验,对13种敏感,2中度敏感,3种耐药.结论 云南战区部队驻地存在温和气单胞菌感染,毒力试验证实,该分离菌是具有较强毒力的菌株,能使小白鼠发病死亡.药敏试验为部队驻地治疗此菌感染时的临床用药提供重要参考.     

气单胞菌基因种分离鉴定及耐药性研究

目的：探讨气单胞菌基因种与表型生化反应关系。方法：建立气单胞菌基因种鉴定方法;本实验采用被筛选的9种表型生化反应,鉴定45株气单胞菌基因种;采用MicroScan Gram Negative Panel 21微量液体稀释法报告气单胞菌基因种体外对名种抗生素的敏感性。根据NCCLs文件报告MIC、敏感、耐药。结果：本地区气单胞菌基因种主要是HG1、HG4、HG9、HG12、HG13;未见HG2、HG3、HG5、HG6、HG7、HG8、HG10、HG11。结论：气单胞菌基因种对头胞噻肟、头胞曲松、环丙沙星、替卡西林、复方新诺明敏感性为100%,对头孢噻吩耐药,对其它抗生素呈现不同程度的耐药。     

贵州省腹泻病例气单胞菌分离株种型鉴定及药物敏感性检测分析

目的对贵州省2012-2014年腹泻病例中气单胞菌分离株进行种型鉴定及其药物敏感性检测。方法运用传统生化方法和多重PCR方法,对从腹泻病例粪便标本中分离的可疑气单胞菌进行种型鉴定,并采用K-B法对气单胞菌株进行10种抗生素药物敏感性检测。结果贵州省18株气单胞菌分离株经传统生化方法鉴定为气单胞菌,进一步采用多重PCR方法进行种型鉴定,15株菌鉴定为豚鼠气单胞菌,占83.33%;2株维氏气单胞菌,占11.11%;1株嗜水气单胞菌,占5.56%。药敏试验显示气单胞菌株对庆大霉素的敏感性最高,为94.44%;对环丙沙星、头孢噻肟及氯霉素敏感率均为83.33%;对头孢噻吩的敏感率仅为27.78%;多重耐药占27.78%。结论贵州省腹泻病例气单胞菌感染以豚鼠气单胞菌为主,对庆大霉素的敏感性较高,对氨苄西林和头孢噻吩耐药严重,存在多重耐药。     

腹泻标本中同时分离类志贺邻单胞菌和豚鼠气单胞菌1例

0　引言　腹泻标本中同时检出类志贺邻单胞菌和豚鼠气单胞菌 ,在国内尚未见报道 .现报告如下 .1　临床资料　患者 ,女 ,45岁 .主诉于 12 h前因食不洁冷冻鱼类食品后 ,出现腹痛伴腹泻 ,为黄色稀水便转为血水样便 ,9次 / d,每次量约 2 0 0 m L.伴轻度乏力、恶心、里急后重 .腹痛以上腹部及左下腹部为著 ,呈持续隐痛伴有阵发性加重 .于2 0 0 0 - 0 3- 2 7就诊 .体检 :T37.2℃ ,P78次 / min,R16次 /min,BP13/ 8KPa.实验室检查 :WBC10 .8× 10 9· L- 1 ,N0 .84,L 0 .16 .大便常规 :RBC +++/ HP,WBC 3- 9/ HP,便隐血阳性 .取粪便送检做…     

弧菌,气单胞菌及邻单胞菌编码鉴定研究

采用编码技术对医学常见的弧菌属、气单胞菌属及邻单胞菌属的１２ 个菌种进行编码,建立了７ 位数编码鉴定法。并用此法鉴定了２０８ 株标准菌株,与常规鉴定法比较,两法无显著统计学意义（χ２ ＝０－４４ ,Ｐ＞０－０５）,符合率为９５－６７％ 。此鉴定法快捷、可靠、操作简便、判定结果简单、适合于临床、卫生及基层微生物实验室推广应用。     

嗜水气单胞菌分离株的鉴定与菌株肠毒素及致病性研究

目的对嗜水气单胞菌进行鉴定并进行肠毒素检测与致病性分析。方法采用常规法分离培养，电子显微镜观察形态，用法国梅里埃VITEK32全自动微生物鉴定仪进行系统鉴定。乳鼠灌胃法测定热稳定性肠毒素（ST），小白鼠腹腔注射法测定其毒力。结果检出的嗜水气单胞菌均产热稳定性肠毒素（ST），具备较强的致病性。结论分离的嗜水气单胞菌具有较强毒力，与致病性密切相关。     

腹泻大便培养分离鉴定气单胞菌42例及药敏结果分析

目的了解本地气单胞菌在腹泻中的感染率及易感年龄.方法应用碱性蛋白胨水、麦康凯琼脂、TCBS琼脂分离气单胞菌,应用天地人微生物鉴定系统等方法鉴定及药物敏感试验.结果在781例腹泻大便标本中检出气单胞菌42例,检出率5.38%.本菌在16～30岁年龄组阳性率较高.本菌对选试的抗生素大多敏感.结论气单胞菌是本地腹泻的重要病菌之一.     

肠出血性大肠埃希菌O157:H7菌影生物学活性的初步研究

目的制备肠出血性大肠埃希菌O157∶H7细菌菌影,在细胞及动物水平对其生物学活性进行初步评价。方法将包含噬菌体phiX174裂解基因E的重组质粒pLSE转化肠出血性大肠埃希菌O157∶H7 EDL933及大肠埃希菌DH5α,42℃诱导制备菌影。利用间接免疫荧光实验观察菌影主要抗原结构,并利用电镜观察菌影对Hep-2细胞的黏附。将菌影免疫小鼠后,采用间接ELISA法检测小鼠特异性抗体,并通过小鼠攻毒实验考察菌影的保护效果。结果成功构建了重组质粒pLSE,制备出O157∶H7及DH5α菌影。O157∶H7菌影保留了病原菌的主要外膜抗原,能紧密黏附细胞Hep-2但并不侵入细胞。O157∶H7菌影免疫雄性BALB/c小鼠诱导特异性IgG抗体的产生。攻击试验结果显示小鼠对致死剂量O157∶H7 EDL933强毒株的保护率达到80%。结论 O157∶H7菌影的成功制备及生物学活性的初步析为研制O157∶H7菌影疫苗奠定了基础。     

寡核苷酸阵列芯片快速鉴定大肠杆菌O157:H7初步研究

目的设计、制作一种微型化寡核苷酸阵列芯片，评价快速鉴定肠出血性大肠杆菌O157：H7的效果。方法多重PCR扩增大肠杆菌O157：H7七个特异性基因位点（rfbE、flicH7、intimin、Shiga-like toxins Ⅰ and Ⅱ、hemolysin A和uidA）．通过PCR反应掺入SpectrumOrang^TM-dUTP获取荧光标记的靶序列，与制备的芯片寡核苷酸探针杂交。结果寡核苷酸阵列芯片检测结果与试验预期相符，获取的杂交图分辨效果明显优于多重PCR琼脂糖凝胶电泳。结论基于玻片的寡核苷酸阵列芯片制作简便，鉴定病原菌检测细菌毒力因子快速、灵敏、特异，有良好的应用前景。     

肠出血型大肠埃希菌免疫PCR检测方法的建立

目的建立检测肠出血型大肠埃希菌O157：H7的免疫PCR技术,确定该方法的灵敏度和特异性。方法链亲和素桥联生物素化的二抗和双链DNA指示分子,构建桥联系统,进而建立免疫PCR技术,通过PCR扩增指示分子检测O157：H7。结果免疫-PCR技术最少可检测到10 CFU/ml的纯培养菌,灵敏度较ELISA提高103倍,非O157：H7菌株检测结果均为阴性。结论免疫-PCR技术具有较高的灵敏度和特异性,操作简便、快速,可作为肠出血型大肠埃希菌O157：H7的检测方法。     

河南省肠出血性大肠杆菌(EHEC O157:H7)感染之流行与基因特征研究

目的 :了解河南省肠出血性大肠杆菌 (enterohemorrhagicescherichiacoli,EHEC)的流行状况与流行菌株的志贺毒素基因型。方法 :采集河南省 14个监测点上腹泻病人、家畜家禽粪便和肉食品等标本分离E HEC菌株。应用分子生物学技术检测EHEC菌株的rfbO157、rfbO111、hlyA、eaeA、stx2 和stx1等毒力基因和志贺毒素基因亚型 ,应用细胞培养技术检测菌株Vero细胞毒性。结果 :从腹泻病人、家畜家禽、肉食品、苍蝇、蜣螂中均分离出EHECO15 7:H7菌株 ,波尔山羊的带菌率最高达到 2 9.8%。 13 8株携带志贺毒素基因的菌株中 ,EHECO15 7:H7计 95株 ,占产毒菌株的 68.8% ;EHEC非O15 7菌株 43株 ,占 3 1.2 %。菌株可分为 5种毒素基因型 ,EHECO15 7:H 7仅含stx2 基因 ,以stx2 vha亚型为主 ,不含有stx1基因。EHEC非O15 7血清型毒素基因型较复杂。携带stx1和 /或stx2 的菌株均具有Vero细胞毒性。结论 :河南省腹泻病人和家畜家禽中存在EHEC感染。EHECO15 7:H7血清型是优势菌型 ,羊是主要宿主动物。目前河南省EHECO15 7:H7菌株毒素基因型为stx2 并以stx2 vha亚型为主。     

肠出血性大肠杆菌O157:H7志贺样毒素Ⅱ毒素亚单位Stx2A的表达与纯化

目的克隆表达肠出血性大肠杆菌(Enterohemorrhagic Escherichia coli,EHEC)O157:H7志贺样毒素A亚单位(Shiga-like toxin,Stx2A),并对其初步纯化.方法设计引物采用PCR法自EHEC O157:H7基因组扩增Stx2A的编码基因stx2a,T-A克隆后构建原核表达质粒pET-11c(+)-stx2a,经测序鉴定后转化E.coli.BL21(DE3),IPTG诱导表达,以SDSPAGE和Westen blot分析目的蛋白的表达,并采用固相镍离子亲和层析纯化重组蛋白.结果扩增的stx2a基因约950bp;原核表达质粒pET-11c(+)-stx2a经酶切和测序鉴定与预期序列一致;并在E.coli.BL21(DE3)中得到高效表达,蛋白表达率约30%;PAGE初步测定目的蛋白的相对分子质量约31×103;经固相镍离子亲和层析纯化后,蛋白纯度可达92.3%.结论EHEC O157:H7 Stx2A的高效表达与初步纯化,为探讨O157:H7菌的感染机制奠定基础.     

大肠埃希菌O157：H7分离鉴定及毒素基因多重PCR检测

目的了解大肠埃希菌O157：H7（EHEC O157：H7）在云南战区感染性腹泻患者及猪粪便中检出情况。方法将标本接种mEC增菌液中增菌,免疫磁珠磁珠富集后,分别接种科玛嘉显O157显色琼脂和山梨醇麦康凯（S-MAC）琼脂平板培养,MUG初筛,肠杆菌科细菌生化鉴定编码系列（API-20E）和VITEK32全自动微生物生化分析仪鉴定。应用多重PCR扩增检测志贺毒素1、2（SLT1/SLT2）和侵袭相关基因。小白鼠腹腔注射法测定其毒力。K-B法做抗生素药敏试验。结果从腹泻患者和猪中均检出EHEC O157：H7,具有志贺毒素SLT1/SLT2和侵袭相关基因的三个毒素基因。毒力试验使小白鼠发病死亡。药敏试验对14种抗生素敏感。结论云南战区存在EHEC O157：H7感染。建立和优化的多重PCR方法,能快速、敏感特异的检测EHEC O157：H7毒素基因,为重大食源性疾病处理、诊治及流行病学调查提供了强有力的技术手段。     

大肠埃希菌O157:H7 Tir基因的生物信息学分析

目的扩增和测序肠出血型大肠埃希菌O157:H7 tir基因,利用生物信息学预测分析其结构和功能特征,以探讨Tir作为疫苗候选抗原的可能性。方法利用PCR技术扩增tir基因并测序,应用生物信息学网站在线分析工具和vector NT Isuite软件分析Tir蛋白结构和生物学功能,预测B细胞抗原表位。结果该基因全长1674bp,编码558个氨基酸,蛋白质总体亲水性高,有稳定的理化性质。含有3个结构和功能域,两段穿膜结构,多个磷酸化位点,预测20个B细胞线性表位。结论Tir毒力因子是很有前景的疫苗候选抗原,为肠出血型大肠埃希菌O157:H7的疫苗研究提供了理论依据。     

肠出血性大肠杆菌O157:H7志贺毒素ⅡA1亚单位单克隆抗体的制备和生物学特性鉴定

目的 制备出高效价的抗志贺毒素ⅡA1亚单位(STX2A1)的单克隆抗体.方法 以重组GST-SIX2A1融合蛋白作为免疫抗原,免疫BALB/c小鼠,运用细胞杂交瘤技术制备,以天然STX2毒素为筛选抗原,采用间接ELISA法筛选产生针对STX2A1的单克隆抗体细胞株;以体内诱生法产生腹水,并采用Protein A-Sepharose柱对其纯化,快速定性试纸鉴定McAb的Ig亚类,采用间接ELISA相加实验鉴定抗原识别表位.结果 获得3株产生针对STX2A1的单克隆抗体细胞株STX2-1A3、STX2-1E10、STX2-3A7,Ig亚类分别为IgG1λ型、IgG1κ型和IgG3κ,亲和力常数分别为5.76×109、1.21×109和3.97×108.结论 成功制备3株稳定分泌抗STX2A1的杂交瘤细胞株,产生的单克隆抗体特异性好,亲和力高,能与天然STX2A亚单位反应.     

肠出血型大肠埃希菌O157:H7 EspF蛋白多克隆抗体的制备和初步纯化

目的制备肠出血型大肠埃希菌(EHEC)O157:H7EspF蛋白多克隆抗体并初步纯化。方法生物信息学方法分析EHECO157:H7EspF蛋白的柔韧性、亲水性、表面可能性及抗原表位,选取1条由15个氨基酸残基组成的多肽为半抗原,在其C端偶联钥孔血蓝蛋白(KLH),免疫新西兰大白兔制备抗血清。ELISA测定抗血清效价,免疫印迹法鉴定其特异性,辛酸-硫酸铵法初步纯化抗血清,SDS-PAGE检测抗体纯度。结果选择EspF蛋白抗原指数最高的肽段72-TPSRPAPPPPTSGQA-86(0.506)为半抗原,合成抗原多肽经高效液相色谱鉴定,纯度为95.78%,经质谱分析其分子量为1563.76Mr,与目的多肽分子量一致;加强免疫3次后,EHECO157:H7EspF蛋白的抗血清效价达1:2048000;该血清对EHECO157:H7野生株和espF突变株(△espF)的EspF蛋白均有特异性,并经辛酸-硫酸铵法获得一定纯度的抗体。结论成功地制备了效价高、特异性强的EHECO157:H7EspF蛋白多克隆抗体。