骨形成蛋白2,4在胃黏膜疾病中的表达及意义

骨形成蛋白（bone morphogenetic、proteins，BMPs）构成了一个结构功能相似的多肽因子家族，除BMP-1外同为转化生长因子β（TGF—β）超家族的成员。近期研究表明BMPs除了可在异位诱导骨、软骨形成外，对靶细胞的生长、分化及凋亡，对机体胚胎发育的全过程都发挥着重要的作用。此外，还发现BMPs不仅与部分骨肿瘤的发生、发展密切相关，还与涎腺、前列腺和卵巢肿瘤等上皮性肿瘤的生物学行为有关。但BMP与胃肠道疾病苊其是胃黏膜疾病发生、发展的关系尚不明了：为此，本研究采用免疫组化及原位杂交的方法检测BMP-2，4在不同类型胃黏膜疾患中蛋白质和mRNA表达，探讨其与临床病理参数之间的关系，     

骨形态发生蛋白在自身免疫病中的研究进展

骨形态发生蛋白(bone morphogenetic protein,BMP)是多功能的生长因子,除BMP-1外均属于转化生长因子(TGF)-β超家族,在胚胎发育、个体形成、骨和软骨的修复过程中具有重要作用,并参与免疫系统T、B细胞增殖与分化的调控.BMP通路主要通过Smad蛋白发挥其生物学效应,近期研究显示BMP参与免疫调节过程[1-2].本文就BMP的生物学作用以及在自身免疫病中的研究进展进行综述.     

BMP-7水平与肾移植慢性排异患者肾功能的关系

目的探讨肾移植慢性排异患者血清和尿液中骨形态发生蛋白（BMP）-7水平与肾功能的相关性。方法采用ELISA法检测肾移植慢性排异患者的血、尿BMP-7及转化生长因子-β1（TGF-β1）表达,比较其在不同肾功能分期中的表达。结果随着肾功能分期升高,肾移植慢性非异患者血清和尿液BMP-7水平呈降低趋势,TGF-β1呈增高趋势（P均〈0.05）。结论肾移植慢性排异患者血清和尿液BMP-7水平变化与肾功能损伤程度呈反比,可作为评价肾移植慢性排异的疗效及预后的指标。     

BMP-7对油酸诱导肾小管上皮细胞转分化的影响

目的观察骨形态发生蛋白（BMP）-7对油酸（OA）诱导的人肾小管上皮细胞转分化的拮抗作用。方法应用体外细胞培养技术培养人肾小管上皮细胞株HK-2。分别用不同浓度BMP-7（0、1、5、10、50ng／ml）和一定浓度的OA（400μmol／L）共刺激体外培养的HK-2 48h,收集细胞,采用ELISA法和RT-PCR法检测转化生长因子（TGF）-β1蛋白、mRNA的水平和表达变化,采用RT-PCR法检测α-平滑肌动蛋白（SMA）mRNA的表达变化。结果BMP-7可以显著减少OA诱导的HK-2中TGF-β1和α—SMA mRNA的表达（P〈0．01）。结论BMP-7可以拮抗OA诱导的肾小管上皮细胞转分化。     

BMP-2表达与乳腺癌骨转移的关系

目的探讨骨形成蛋白-2（BMP-2）表达与乳腺癌骨转移的关系。方法选取临床及病理资料完整的126例乳腺癌患者,其中88例未发生骨转移（未转移组）,38例发生骨转移（转移组）。采用免疫组织化学法检测两组患者乳腺组织的BMP-2。结果转移组54例、未转移组48例乳腺癌组织BMP-2表达阳性,两组BMP-2阳性表达率相比P〈0.01。结论发生骨转移的乳腺癌患者乳腺癌组织中BMP-2阳性表达率较低。BMP-2可能抑制乳腺癌骨转移。     

Smad蛋白家族与骨形态发生蛋白信号传导

Smad蛋白直接参与转化生长因子（TGF－β）、骨形态发生蛋白（BMP）和活化素的信号传导，TGF－β和BMP是调节骨代谢的信息转导是由Smad蛋白家族成员承担的。在已经鉴定的8种Smads成员中，与骨代谢密切相关的是Smad 1、Smad 5及Smad 4。实验证明在成骨细胞系Smad是BMP信号转导的关键因子，对Smad蛋白家族的了解将有助于对TGF－β和BMP参与成骨细胞分化调节机制的研究。     

更年甘露饮加小剂量雌激素对成骨细胞增殖及BMP-2表达的影响

目的通过观察复方中药更年甘露饮加小剂量雌激素对成骨细胞增殖及骨形成蛋白（BMP）-2的影响,探讨一种治疗绝经期骨质疏松的新方法。方法分别用模型血清、更年甘露饮血清、更年甘露饮血清加1/8、1/4、1/2最佳量雌激素及模型血清加最佳量雌激素用于第3代成骨细胞,用MTT法检测成骨细胞增殖,用ELISA及免疫组化法检测成骨细胞BMP-2的表达。结果更年甘露饮加入1/8、1/2、1/4最佳量雌激素时均可提高对成骨细胞的作用,加入1/4与1/2最佳量雌激素时作用更明显,增殖较最佳量雌激素组明显,BMP-2表达与最佳量雌激素组相近。结论更年甘露饮加小剂量雌激素可明显提高成骨细胞增殖及BMP-2蛋白表达,此方法可能作为一种治疗绝经后骨质疏松的治疗方法。     

氟骨症骨转换过程中转化生长因子-β超家族成员的表达

目的探讨氟中毒大鼠的骨转换调控过程,分析转化生长因子-β(transforming growth factor-β, TGF-β)超家族成员骨形态发生蛋白(BMP)在氟骨症骨转换过程中的作用。方法4周龄雄性Wistar大鼠随机分为对照组和氟化钠组,氟化钠组饮用含氟(F-)150 mg／L的水溶液,对照组饮用自来水。每4周处死一批动物,共计6次,采用RT-PCR方法、免疫组织化学方法以及Western blot等方法,分析氟中毒大鼠长骨组织TGF-β超家族成员BMP-2、BMP-7、TGF-β1 mRNA及蛋白的表达情况。结果氟中毒大鼠骨组织中BMP-2、BMP-7、TGF-β1mRNA表达持续高于对照组,蛋白主要表达在骺板软骨增生期和肥大期细胞、关节软骨细胞、成骨细胞以及韧带细胞等部位。结论氟中毒大鼠骨组织中TGF-β超家族成员通过调控成骨过程而参与了骨转换过程     

生长因子联合诱导大鼠间充质干细胞向软骨分化的实验研究

目的探索在体外培养条件下，转化生长因子（TGF）-β1、胰岛素样生长因子（IGF）-Ⅰ和骨形成蛋白（BMP）-2诱导间充质干细胞（MSCs）向软骨细胞分化的最佳组合。方法在体外单层培养条件下，利用TGF-β1、IGF-Ⅰ、BMP-2的组合作为诱导因子进行培养，用反转录聚合酶链反应（RT—PCR）检测细胞表达Ⅱ型前胶原mRNA水平，阿新蓝染色检测蛋白聚糖合成情况。结果BMP-2＋IGF-Ⅰ组、TGF-β1组、TGF-β1＋IGF-Ⅰ组、TGF-β1＋BMP-2组、TGF-β1＋IGF-Ⅰ＋BMP-2组Ⅱ型前胶原mRNA水平分别为0．147±0．062、0．478±0．069、0．489±0．022、0．653±0．013、0．807±0．051；而各组阿新蓝染色均阳性。结论TGF-β1、IGF-Ⅰ、BMP-2三者合用时诱导MSCs向软骨分化的效应最大。     

积雪草颗粒对TGF-β1诱导的肾小管上皮细胞BMP-7表达的影响

目的观察积雪草颗粒（CAG）对转化生长因子β1（TGF-β1）诱导的肾小管上皮细胞NRK52E骨形态发生蛋白-7（BMP-7）及TGF-β1表达的影响。方法将体外培养的NRK-52E分为正常对照组（N组）、TGF-β1刺激组（T组）和CAG小（C1组）、中（C2组）、大（C3组）及蒙诺组（M组）。细胞培养48h后取出,采用RT—PCR技术和细胞免疫化学技术检测其BMP-7、TGF-β1 mRNA及蛋白。结果与N组比较,T组BMP-7mRNA及蛋白的表达明显减少,TGF-β1 mRNA及蛋白的表达均明显增加（P〈0．05）;C2、C3、M组TGF-β1 mRNA及蛋白表达水平均显著低于T组（P均〈0．05）,BMP-7 mRNA及蛋白表达水平均显著高于T组（P均〈0．05）;G3、M组BMP-7 mRNA及蛋白和TGF-β1 mRNA及蛋白表达水平与N组比较,P均〉0．05。结论CAG可通过直接抑制NRK52E中TGF-β1的表达并维持BMP-7的表达,而发挥抗肾间质纤维化的作用。     

HIF-1α对乳腺癌MCF-7细胞增殖的影响及其机制探讨

目的 观察缺氧诱导因子1α（HIF-1α）基因对乳腺癌MCF-7细胞增殖的影响,并探讨其可能的机制.方法 构建并筛选HIF-1 α基因的RNAi表达质粒,以脂质体LipofectamineTM 2000介导转染MCF-7细胞.转染后48h,采用实时定量RT-PCR技术检测转染细胞中HIF-1α mRNA的转录水平,筛选有效的HIF-1 αRNAi质粒;CCK-8法比较转染前后乳腺癌细胞增殖变化,实时定量RT-PCR检测顺滑蛋白（SMO）mRNA表达.结果 成功构建含HIF-1α短发夹状RNA（shRNA）1～4的RNAi表达质粒,其中HIF-1 αshRNA-4干扰抑制效率为74％,干扰效果最强（P均＜0.05）.HIF-1 αshRNA-4干扰48、72、96 h后,MCF-7细胞的生长抑制率明显升高（P均＜0.05）.HIF-1αshRNA-4转染后MCF-7细胞SMO mRNA的相对表达量为0.56 ±0.06,低于转染前的1.07 ±0.16（P ＜0.05）.结论 HIF-1α表达可促进乳腺癌细胞增殖,可能与其参与调控SMO的表达有关.     

乳腺癌患者外周血CD4^＋CD25^＋ Treg细胞及Th1/Th2类细胞因子水平测定及意义

目的探讨乳腺癌患者外周血CD4＋CD2＋5调节性T细胞（CD4＋CD2＋5Treg）水平变化在肿瘤发生、发展中的作用及机制。方法流式细胞术检测45例健康人（对照组）、44例乳腺良性增生患者（增生组）、61例乳腺癌患者（乳腺癌组）外周血CD4＋CD2＋5Treg水平,ELISA法检测三组Th1类细胞因子IL-2、IFN-γ、TNF-α和Th2类细胞因子IL-6水平;分析CD4＋CD2＋5Treg与肿瘤临床病理特征及细胞因子的关系。结果乳腺癌组TNM分期Ⅲ、Ⅳ期患者外周血CD4＋CD2＋5Treg细胞水平显著高于0~Ⅱ期患者、对照组和增生组,且术后水平显著低于术前（P均〈0.05）;乳腺癌组TNM分期Ⅲ、Ⅳ期患者血清IL-2、IFN-γ、TNF-α水平明显低于0~Ⅱ期患者、对照组和增生组,IL-6水平则反之（P均〈0.05）;乳腺癌组外周血CD4＋CD2＋5Treg细胞水平与IL-2、IFN-γ、TNF-α水平呈负相关（r=-0.579、-0.607、-0.691）,与IL-6呈正相关（r=0.804）,P均〈0.05。结论外周血CD4＋CD2＋5Treg细胞水平与乳腺癌发生、发展有关,可能机制为通过调节Th1/Th2细胞因子平衡参与机体免疫应答。     

曲古抑菌素A对乳腺癌细胞株MDA-MB-231增殖的影响

目的探讨曲古抑菌素A（TSA）对乳腺癌细胞株增殖的影响。方法培养乳腺癌细胞株MDA-MB-231,用组不同浓度TSA分别作用于细胞,于24、48、72、96h用MTT比色法观察细胞生长情况,流式细胞术检测S期细胞的比例和周期素（Cyclin）D1、A2表达。结果72h内和4μmol／L的浓度范围内,乳腺癌细胞生长受到抑制,并有一定的时效关系;TSA作用后周期素Cyclin A2表达下降,Cyclin D1表达上升（P均〈0．05）。结论TSA能抑制乳腺癌细胞生长,周期素Cyclin D1、Cyclin A2参与了抑制剂对细胞增殖周期的调控。     

肺动脉高压对内皮祖细胞与骨形成蛋白-2的影响

目的分析特发性肺动脉高压（IPAH）对血浆骨形成蛋白2（BMP-2）的浓度和外周血内皮祖细胞（EPC）数量的影响以及BMP-2与肺动脉压（PAP）及EPC的关系。方法选取经右心漂浮导管检测肺动脉压确诊的IPAH住院患者28例为试验组;同时选取健康志愿者20例为对照组。采用酶联免疫吸附法（enzyme linked immunosorbent assay,ELISA）法测定血浆BMP-2的浓度,同时显微镜下计数外周血EPC。统计分析两组差异并对BMP-2与PAP和EPC的相关性进行分析。结果 IPAH患者血浆BMP-2水平高于对照组,差异有统计学意义[（0.1294±0.0292）μg/mlvs.（0.0898±0.0295）μg/ml,P〈0.01],外周血EPC数量低于正常对照组,EPC数量具差异有统计学意义[（26.75±5.87）个vs.（42.65±8.37）个,P〈0.01]。BMP-2与PAP呈正相关,与EPC数量呈负相关。结论血浆BMP-2升高及EPC数量下降可能参与IPAH的发病过程;且BMP-2与PAP和EPC均有关。     

腋窝淋巴结阴性乳腺癌组织中PTEN、p-Akt、P-gp表达及意义

目的进一步探讨磷酸化Akt（p-Akt）、人第10号染色体缺失的磷酸酶及张力蛋白同源的基因（PTEN）及多药耐药蛋白P-糖蛋白（P-gp）在乳腺癌发生、发展中的作用。方法采用免疫组化法检测81份腋窝淋巴结阴性（LNN）乳腺浸润性癌组织标本中p-Akt、FIEN及P-gp表达,采用四格表的,检验、确切概率法和Cox比例风险模型分析三者与乳腺癌临床病理因素的关系。结果LNN乳腺癌组织中p-Akt阳性表达率明显高于癌旁组织（P=0．034）;PTEN阳性表达率显著低于癌旁组织（P=O．001）;p-Akt过表达与PTEN低表达均与肿瘤分化、雌激素受体（ER）阴性、复发转移和5年生存率有关。P-gp在LNN乳腺癌组织中阳性表达率为39．5％,与肿瘤复发转移显著有关。多因素分析发现,p-Akt和PTEN是影响预后的独立因素,且p-Akt与P-gp表达呈正相关（r=0．548,P=0．045）。结论p-Akt、PTEN及P-gp均参与了乳腺癌的发生、发展,检测三者水平有助于患者预后判断。     

5-杂氮-2′-脱氧胞苷对乳腺癌MCF-7细胞体外迁移能力的影响及机制探讨

目的观察5-杂氮-2′-脱氧胞苷（5-Aza-CdR）对非浸润性人乳腺癌MCF-7细胞体外迁移能力的影响,并探讨其机制。方法将MCF-7细胞分两组,观察组用含5.0μM5-Aza-CdR的培养液处理4 d,对照组加入等体积的DMSO。采用细胞划痕实验观察细胞体外迁移能力,采用RT-PCR、甲基化特异性PCR（MSP）法检测CXC趋化因子受体-4（CXCR4）、乳腺癌转移抑制基因-1（BRMS1）mRNA及其启动子区甲基化状态。结果与对照组比较,观察组36、48 h细胞划痕愈合率明显升高,MCF-7细胞的CXCR4 mRNA表达量明显增加（P〈0.05）;5-Aza-CdR使CXCR4启动子区甲基化的CpG岛1完全去甲基化,BRMS1启动子区CpG岛B的非甲基化状态亦无明显改变。结论 5-Aza-CdR增强了MCF-7细胞的体外迁移能力,可能与其去甲基化机制上调了促转移基因CXCR4表达有关。     

多西紫杉醇联合顺铂治疗乳腺癌肺转移32例的临床观察

目的观察多西紫杉醇联合顺铂治疗乳腺癌肺转移的临床疗效和毒副作用。方法32例乳腺癌肺转移患者，多西紫杉醇2550mg／m^2，静脉滴注1小时，第1、8、15日给药；顺铂20mg／m^2，第2～4日。28天为1个周期，完成2个周期后评价疗效。化疗前1天口服地塞米松8mg，2次／天，连服三天以防水潴留。结果32例患者完全缓解（CR）10例（31．2％），部分缓解（PR）11例（34．5％），稳定（SR）7例（21．8％），进展（PD）4例（12．5％），总有效率（CR＋PR）65．7％。不良反应主要是骨髓抑制及胃肠道反应，对症处理获得缓解。结论多西紫杉醇联合顺铂治疗肺转移性乳腺癌疗效较好，不良反应患者能耐受。     

Bone morphogenetic protein 2 exerts diverse effects on cell growth in vitro and is expressed in human pancreatic cancer in vivo

BACKGROUND & AIMS: Bone morphogenetic proteins (BMPs) belong to the transforming growth factor beta superfamily of signaling molecules. We characterized the expression of BMP-2 and its receptors in human pancreatic tissues and pancreatic cancer cell lines and examined the effects of BMP-2 on mitogenesis. METHODS: Expression of BMP-2 and its receptors was determined by Northern blot analysis using specific complementary DNA probes. Distribution of BMP-2 in pancreatic cancers was examined by immunohistochemistry and in situ hybridization. Effects of BMP-2 on mitogenesis were assessed by monitoring cell proliferation and activation of mitogen-activated protein kinase (MAPK). RESULTS: Compared with the normal pancreas, pancreatic cancers showed a 12.5-fold (P < 0.01), 2-fold (P < 0.01), and 8-fold (P < 0.01) increase of BMP-2, BMP receptor (R)-IA, and BMPR-II messenger RNA levels, respectively. By immunohistochemistry and in situ hybridization, BMP-2 was expressed in the cancer cells within the tumor mass. There was a significant correlation between the presence of BMP-2 immunostaining in the tumors and shorter postoperative survival. Pancreatic cancer cell lines expressed variable levels of messenger RNA encoding BMP-2 and its receptors. BMP-2 stimulated the growth of two pancreatic cancer cell lines (ASPC-1 and CAPAN-1). This mitogenic effect was associated with MAPK activation and blocked by the MAPK inhibitor PD98059 in CAPAN-1 but not in ASPC-1 cells. In both cell lines, expression of wild-type Smad4 abolished the BMP-2-mediated growth stimulation. BMP-2 inhibited the growth of COLO-357 cells, an effect that was blocked by expressing a dominant negative Smad4. BMP-2 had no effect in three cell lines that underexpressed either the BMP receptors or Smad1. CONCLUSIONS: These findings indicate that BMP-2 has the capacity to act as a mitogen when Smad4 is mutated and suggest that it might play a role in the pathobiology of human pancreatic cancer.