胰腺癌中人RUNT相关转录因子3基因启动子区甲基化及其临床意义

目的检测胰腺癌人RUNT相关转录因子3(RUNX3)基因启动子的甲基化情况并探讨其临床意义。方法采用甲基化特异性聚合酶链式反应(MSP)检测56例胰腺癌组织及癌旁组织、14例正常胰腺组织、3株人胰腺癌细胞株(PANC1、CFPAC-1、SW1990)、1株正常肝细胞株(HL-7702)中RUNX3基因启动子区CpG岛甲基化状态。检测用甲基化抑制剂5-氮杂-2’-脱氧胞苷(5-Aza-cdR)处理前后胰腺癌细胞株RUNX3 mRNA的表达。分析RUNX3异常甲基化与胰腺癌临床特征的关系。结果56例胰腺癌组织中,51.79%(29/56)存在RUNX3基因启动子区CpG岛的异常甲基化,癌旁胰腺组织有10.7%(6/56)存在异常甲基化,而正常胰腺组织中未检测到RUNX3基因异常甲基化。RUNX3基因异常甲基化与患者病理分化程度(r=0.314,P=0.018)、淋巴结转移(r=0.370,P=0.005)显著相关。在5-Aza-cdR处理前,胰腺癌细胞株PANC1、CFPAC-1、SW1990的RUNX3 mRNA无表达或低表达,经5-Aza-cdR处理后各胰腺癌细胞株RUNX3 mRNA恢复表达。结论胰腺癌组织及胰腺癌细胞株均存在RUNX3基因CpG岛异常甲基化;RUNX3启动子的高甲基化与其基因表达降低有关,与胰腺癌组织分化程度、淋巴结转移相关。     

应用BSP联合TA克隆测序检测胰腺癌中RASSF1A基因启动子区异常甲基化

目的:检测Ras相关区域家族1A(Ras association domain family 1A,RASSF1A)在胰腺癌细胞株中的甲基化和表达状态,探讨其启动子异常甲基化在胰腺癌发病过程中的作用?方法:采用重亚硫酸盐测序PCR(bisulfite genomic sequencing PCR,BSP)联合TA克隆测序检测胰腺癌细胞株PANC-1及胰腺癌组织?癌旁组织及正常胰腺组织中RASSF1A启动子区CpG岛的甲基化状态,以甲基化酶抑制剂5-aza-2-deoxycitydine(5-aza-dC)处理PANC-1,观察处理前后甲基化率变化情况,逆转录PCR观察RASSF1A 的mRNA表达情况?结果:在PANC-1细胞中RASSF1A启动子的甲基化率平均为100.00%,在正常胰腺?癌旁及癌组织中平均分别为1.79%?93.75%和100.00%,与正常胰腺组织相比,胰腺癌旁及癌组织的RASSF1A启动子甲基化率明显增高(P < 0.01),而癌旁及癌组织之间无明显差异(P > 0.05)?在PANC-1细胞?胰腺癌组织及癌旁组织中RASSF1A基因无表达,在正常胰腺组织中RASSF1A基因呈阳性表达;PANC-1细胞经5-aza-dC处理后,RASSF1A的甲基化率下降(88.89%,P < 0.05),mRNA表达无变化?结论:胰腺癌细胞株PANC-1及癌组织?癌旁组织RASSF1A基因表达与启动子区甲基化状态有关,启动子区的高甲基化导致PANC-1中RASSF1A基因的表达沉默?该基因异常甲基化有望成为胰腺癌的早期诊断指标和治疗靶点?     

雌激素受体β1和β2在乳腺癌组织中的表达及其意义

目的探讨乳腺癌组织中雌激素受体(ER)β1、ERβ2基因和蛋白的表达及其临床意义。方法应用Western印迹法检测乳腺癌组织、癌旁组织及正常组织中ERβ1和ERβ2蛋白的表达情况,荧光定量聚合酶链反应(PCR)检测ERβ1、ERβ2mRNA的表达情况。结果乳腺癌组织和癌旁组织中的ERβ1mRNA、ERβ2mRNA检出率与蛋白检出率相同。乳腺癌组织中的ERβ1蛋白检出率显著低于癌旁组织(P=0.029)和正常组织(P=0.029);乳腺癌组织中的ERβ1蛋白表达量为47.06±8.94,显著低于癌旁组织中的55.33±9.59及正常组织中的54.47±9.65(P=0.009及0.019)。乳腺癌组织中的ERβ1mRNA检出率显著低于癌旁组织(P=0.029);乳腺癌组织中的ERβ1mRNA表达量为0.026±0.014,显著低于癌旁组织中的0.041±0.020(P=0.015)。乳腺癌组织中,ERβ1mRNA与蛋白表达量的相关系数为0.635(P=0.008),ERβ2mRNA与蛋白表达量的相关系数为0.714(P=0.004);癌旁组织中,ERβ1mRNA与蛋白表达量的相关系数为0.506(P=0.012),ERβ2mRNA与蛋白表达量的相关系数为0.926(P=0.000),ERβ1mRNA、ERβ2mRNA与蛋白水平之间存在相关性。结论全长野生型ERβ1可能是避免乳腺癌发生的保护性因子,ERβ1有助对乳腺癌预后的预测。     

NPTX2基因在透明细胞性肾细胞癌中的表达及其临床意义

目的检测并分析神经元正五聚体蛋白2(neuronal pentraxin 2,NPTX2)基因在透明细胞性肾细胞癌(clear cell renal cell carcinoma,ccRCC)中的表达情况及其临床意义。方法运用q PCR、western blot或免疫组织化学法分别从mRNA水平和蛋白质水平上对ccRCC细胞系和组织中NPTX2基因的表达情况进行检测。对体外培养细胞系(人肾小管正常上皮细胞系HK-2、人肾透明细胞癌原发灶细胞系786-O和胸水转移灶细胞系ACHN):采用q PCR和western blot法检测NPTX2在细胞系中的mRNA及蛋白的表达情况,并分析其在正常与癌细胞系中的表达差异。对组织标本:(1)c DNA芯片(15例ccRCC癌及对应癌旁正常组织):采用q PCR法检测并分析NPTX2 mRNA在两者中的表达情况及差异;(2)新鲜组织(4例ccRCC癌及对应癌旁正常组织):采用western blot法检测并分析NPTX2蛋白在两者中的表达情况及差异;(3)组织蜡块(70例ccRCC癌及对应癌旁正常组织):采用免疫组化En Vision法进一步验证NPTX2蛋白在两者中的表达情况及差异,并分析NPTX2蛋白表达与ccRCC患者的重要临床参数及预后之间的关系。结果在ccRCC细胞系及癌组织中,NPTX2的mRNA水平和蛋白质水平均明显高于正常细胞系及癌旁正常组织,其差异有统计学意义(P<0. 05)。NPTX2蛋白表达水平与ccRCC肿瘤WHO/ISUP病理分级相关(P<0. 05),与患者的性别、年龄、TNM分期和肿瘤大小尚不能认为相关(P>0. 05)。Kaplan-Meier单因素分析及log-rank检验显示NPTX2蛋白表达水平高低与患者的生存相关(P=0. 04):高表达组患者同期生存率低于低表达组,预后较差。结论 NPTX2在ccRCC癌组织中异常高表达,与ccRCC肿瘤WHO/ISUP病理分级及患者的预后相关,可作为潜在的ccRCC诊断及判断预后的生物标志物。     

HSPA2在胰腺癌中的表达及其临床意义

目的 检测并对比热休克蛋白A2(HSPA2)在胰腺癌及癌旁胰腺组织中的表达水平,分析HSPA2蛋白在胰腺癌标本中的表达水平与其临床病理参数之间的相关性.方法 采用实时定量PCR、Western blot法检测并对比胰腺癌及癌旁胰腺组织中HSPA2蛋白和mRNA的表达水平,采用免疫组织化学染色方法测定胰腺癌患者组织中HSPA2蛋白的表达,并探讨其表达与临床病理特征之间的关系.结果 与癌旁胰腺组织相比,胰腺癌组织中HSPA2 mRNA和蛋白表达水平均明显升高.HSPA2蛋白在胰腺癌组织中的阳性表达率为68.8%(55/80).HSPA2蛋白表达量与胰腺癌的分化程度、血管侵犯、TNM分期差异有统计学意义(P=0.011、0.005、0.012),而与患者性别、年龄、肿块大小及位置、血清CA199水平差异无统计学意义.结论 HSPA2在胰腺癌组织中的表达明显高于与之相应的癌旁胰腺组织,且HSPA2的高表达与胰腺癌的恶性进展、侵袭和转移等事件密切相关.     

Artemin、GFRα3在胰腺癌中的表达及其与胰腺癌神经浸润转移的相关性

目的 探讨artemin、GFRα3在胰腺癌中表达的意义及其与胰腺癌神经浸润转移的相关性.方法 应用免疫组化链酶菌抗生素蛋白-过氧化物酶法和RT-PCR检测胰腺癌组织、癌旁组织和正常胰腺组织中artemin、GFRα3的表达,观察artemin、GFRα3 的阳性表达率与胰腺癌神经浸润转移之间的相关性.结果 胰腺癌组织中artemin和GFRα3阳性表达率分别为72.09%和67.44%,均显著高于癌旁组织中表达水平(18.19%,22.73%).Artemin、GFRα3在有神经浸润的胰腺癌组织中阳性表达率均明显高于无神经浸润癌组织(χ2=11.11,11.78, P<0.01),胰腺癌组织artemin mRNA 表达量(0.741±0.014)明显高于正常组织(0.101±0.031) (P<0.05),有神经浸润癌组织artemin mRNA 表达量(0.843±0.012)明显高于无神经浸润癌组织(0.512±0.017)(P<0.05).结论 Artemin、GFRα3的表达在胰腺癌神经浸润转移过程中起着重要作用,可能为反应胰腺癌生物学行为的重要指标.     

乳癌组织TSLC1基因mRNA表达及启动子甲基化状态

目的探讨乳癌组织中非小细胞肺癌抑制因子(TSLC1)基因mRNA表达及其启动子甲基化状态。方法应用实时荧光定量PCR和甲基化特异性PCR,分别检测39例人乳癌组织及对应癌旁组织中TSLC1基因mRNA表达及其启动子甲基化状态,并探讨二者之间的关系。结果乳癌组织中TSLC1mRNA的表达量是癌旁组织的0.44倍。乳癌组织及癌旁组织中TSLC1基因甲基化率分别为56.4%、10.3%,乳癌组织中TSLC1基因甲基化率明显高于相应癌旁组织(χ2=16.673,P<0.01)。甲基化的癌组织中TSLC1mRNA的表达量是非甲基化者的0.60倍,表达TSLC1mRNA的癌组织的甲基化率为50%,不表达者为100%,两者之间差异有显著性(P=0.046)。结论 TSLC1基因异常甲基化是其在乳癌组织中表达缺失或下调的原因之一,在乳癌的发生发展中起一定作用,可能成为乳癌的早期诊断及治疗靶点基因之一。     

肺癌组织中线粒体转录因子A的表达与线粒体DNA拷贝数变化的关系

目的 探讨肺癌组织中线粒体转录因子A的表达与线粒体DNA拷贝数变化的关系.方法 采用实时荧光定量PCR和RT-PCR方法 ,对肺癌及相应正常肺组织中mtTFA mRNA的表达及其与线粒体DNA拷贝数变化的关系进行了检测和分析.结果 癌组织和癌旁正常组织mtTFA mRNA 的表达量之间无明显差异(P= 0.221).线性回归分析结果 表明,癌旁正常组织中,mtTFA mRNA 的表达量和线粒体DNA拷贝数之间有直接的相关性(r=0.910,P＜0.01);而在癌组织中,线粒体DNA拷贝数和mtTFA mRNA 的表达水平无关(r=0.135,P＞ 0.05).结论 mtDNA转录、复制的核调节因子mtTFA的表达水平和肺癌线粒体DNA拷贝数之间无相关性.     

酪氨酸激酶Syk在胰腺癌中的表达检测及其临床意义

目的:探索酪氨酸激酶Syk(spleen tyrosine kinase,Syk)基因的表达与胰腺癌生长、转移的影响,以及与病理特点的关系。方法:用RT-PCR检测25例胰腺癌瘤体标本、癌旁正常胰腺组织中Syk mRNA的表达,并同时作免疫组化检测上述P53蛋白的表达。结果:癌旁正常胰腺组织都有Syk基因的表达,而25例胰腺癌组织中只有7例表达,正常胰腺组织与胰腺癌组织中Syk基因表达差异有显著性(P<0.05)。有淋巴结转移的14例胰腺癌标本中,2例有Syk基因表达,无淋巴结转移的11例胰腺癌患者中有5例检测到Syk mRNA的表达,有淋巴结转移的胰腺癌Syk mRNA的表达率低(P<0.05),Syk mRNA表达与P53蛋白的表达呈正相关。结论:Syk基因的表达缺失与胰腺癌的生长及转移相关。     

启动子甲基化调控胰腺癌他扎罗汀诱导基因1表达的研究

目的 研究他扎罗汀诱导基因1(tazarotene-induced gene-1,TIG1)在胰腺癌中的表达情况及启动子在胰腺癌细胞中的甲基化状态。 方法 收集67组胰腺癌和对应癌旁组织,用SP法进行TIG1蛋白检查并分析TIG1在癌、癌旁组织的表达差异。培养胰腺癌细胞株PANC1、BxPC3和SW1990,提取细胞总DNA,甲基化修饰后亚硫酸盐测序PCR(BSP)分析启动子CpG岛甲基化状态;筛选细胞总RNA,用实时定量PCR(real-time PCR)依次测各细胞株、经5-杂氮-2-脱氧胞嘧啶(5-aza-dC)干预前后TIG1 mRNA的表达差异。 结果 TIG1在癌组织中的表达低于癌旁组织(P<0.05)。TIG1的表达与胰腺癌的大小、分期无相关性,但与部位存在相关性(P<0.05)。TIG1在BxPC3和SW1990细胞中存在高甲基化状态,分别为(92±2)%和(86±2)%,在PANC1细胞甲基化率为(40±2)%。TIG1甲基化的BxPC3和SW1990细胞经5-aza-dC处理后TIG1表达明显上调(P<0.05),而甲基化的PANC1细胞经同样处理后TIG1的表达变化不明显。 结论 癌组织中TIG1的表达显著低于癌旁组织。不同部位胰腺癌TIG1的表达存在差异。TIG1基因在BxPC3和SW1990胰腺癌细胞中的低表达与甲基化有关。TIG1基因甲基化可能是调控胰腺癌细胞TIG1表达的重要分子机制之一。      

胰腺癌血清学标记物在胰腺癌初期诊断中的研究进展

胰腺癌是目前最难诊断和治疗的恶性肿瘤之一,研究开发方便实用的血清标记物筛查早期胰腺癌有重要的临床意义。目前,胰腺癌血清学标记物的研究主要包括胰腺癌特异表达的分子、基因突变、异常甲基化DNA、micro RNA和循环肿瘤细胞。联合多种血清学标记物有助于其早期诊断,未来的研究应侧重于筛选胰腺癌高危人群,形成高度敏感性和特异性的标记物,提高胰腺癌早期诊断水平。     

胰腺癌的新辅助治疗

胰腺癌的治疗仍然是非常棘手的临床问题,传统治疗方法疗效有限.从外科手术的角度进行分类,病变可分为局限性病变、局部进展期病变和转移性病变.手术切除是主要治疗手段,5年生存率在20%左右.但手术主要适用于局限性病变,此类病例仅占15%～20%.大部分病例接受姑息治疗,中位生存期不到6个月,5年生存率低于4%.提高胰腺癌疗效需要探索新的治疗方法,实体肿瘤的新辅助治疗在乳腺、胃肠道肿瘤已经逐渐得到认可,本文综述了新辅助治疗在胰腺癌中的应用历史、现状、理论优势和实际问题.     

家族性胰腺癌的早现遗传

背景：先前的家族性胰腺癌早现遗传研究多为小样本研究，且存在一定的偏倚。该研究拟调查大量欧洲家族以确定相关的早现遗传证据。患与方法：选取106个家庭的1223例个体（其中264例已受累），最近一代年龄超过39岁的所有个体即为第3代（G3），而上两代分别定义为第2代（G2）和第1代（G1）。结果：在80例受累的父代一子代组合中，子代死亡的中位数年龄较父代早10岁（四分位极差为7—14岁），而G1、G2、G3因胰腺癌死亡的年龄中值分别是70岁（四分位间距59—77岁）、64岁（四分位间距57岁-69岁）、49岁（四分位间距44岁-56岁），这些早现遗传征象有可能为偏倚所致。采用Kaplan—Meier分析法将年龄截断在60岁来校正随访时间误差，配对统计分析显示存在显的早现遗传。为进一步减小误差，采用迭代分析法预测肿瘤患人数，结果发现没有一项单一危险因素分类可用来预测每一代肿瘤患的人数。而应用3项危险因素分类法（前代无胰腺癌的为低风险组，前代中仅一代发病的为高风险组，连续两代均发病的为极高风险组）则发现发病率无显性差异。     

胰头癌胰腺外分泌功能的临床研究

目的研究胰头癌患者胰腺外分泌功能的变化及影响因素。方法确定3个试验组分别为对照组:8例患者,慢性胰腺炎(chronicpancreatitis,CP)组:12例患者,胰头癌(pancreaticcancer,PC)组:24例患者。对3组分别进行PFD试验,通过测定尿液中PABA的排泄率来了解3组的胰腺外分泌功能并进行比较,总结出胰头癌患者胰腺外分泌功能的变化特点。同时通过ERCP测定胰头癌患者的胰管直径(x1),超声内镜(EUS)和胰腺CT测肿块的大小(x2),并一步研究胰头癌患者PABA的排泄率(y)与上述变量之间的关系。结果胰头癌患者胰腺外分泌功能明显减低,PABA排泄率为(48.83±15.63)%,明显低于对照组(78.88±15.88)%,而重度胰腺炎患者胰腺外分泌功能(48.5±11.39)%也明显低于对照组。胰头癌患者胰腺外分泌功能与有关因素(胰管直径,胰头肿块大小)成线性关系。并按其对胰腺外分泌功能的影响大小排序为:胰管直径,胰头肿块大小。结论胰头癌患者胰腺外分泌功能明显减低,减低的程度与胰管直径、胰头肿块大小成负相关。其中主胰管直径对胰腺外分泌功能的影响最大,其次为胰头肿块大小。     

胰腺癌干细胞作为胰腺癌治疗靶点的研究进展

胰腺导管腺癌(PDAC)是胰腺癌最常见的类型,其总体生存期为6～12个月,5年生存率低于7％,这主要是由于该肿瘤的早期局部侵袭和转移,以及肿瘤内存在的一种高度可塑性的肿瘤干细胞(CSCs).CSCs是肿瘤内具有干细胞特性的一个小亚群,在PDAC中,占胰腺所有肿瘤细胞的不到1％,但其可使PDAC产生化疗耐药、增强致瘤能力,并且还和肿瘤的发生、发展、转移有着密切的联系.越来越多的证据支持CSCs作为PDAC诱导细胞的存在,并且正在努力开发针对这些细胞的治疗策略.该文总结了目前对胰腺癌干细胞(PCSC)的认识及近年来的研究进展,概述以PCSC为靶点治疗PDAC的研究现状.     

MRP3在胰腺癌及胰腺癌细胞系的表达及意义

目的探讨多药耐药相关蛋白3（MRP3）在胰腺癌标本及多种肿瘤细胞中的表达及意义。方法利用免疫组织化学的方法检测30例胰腺癌与癌旁组织中MRP3的表达,同时通过RT—PCR检测7种肿瘤细胞及人胚肾293T细胞在mRNA水平的表达情况,采用抗MRP3的单克隆抗体通过流式细胞仪检测MRP3蛋白的表达。结果在各种胰腺癌标本中,MRP3在细胞核中的表达阳性细胞较正常组织明显增多（尸=0．03）,表达强度明显增强（P=0．015）,而在胞浆上二者表达差异无统计学意义（P=0．472）;MRP3mRNA在3种人胰腺癌细胞中皆有表达,在其他5种细胞无表达,MRP3蛋白在胰腺癌细胞系BxPC-3及AsPC-1中阳性率较高（分别为68．5％和33．6％）,而在PANC-1细胞中仅有5．4％表现为MRP3阳性。结论MRP3在胰腺癌中的表达与正常胰腺组织的差别主要在细胞核,而在培养细胞中可能以组织特异性的方式表达不同,BxPC-3细胞系是体外胰腺癌耐药研究的一种选择。     

超声引导下胰腺占位穿刺在胰腺癌诊断中的应用

目的探讨超声引导下胰腺占位穿刺在诊断胰腺癌中的应用价值。方法将我院肝胆胰外科于2015年3月～2017年6月收治的55例疑似胰腺癌患者作为研究对象,所有患者均在超声引导下行胰腺占位穿刺活检,对上述所有患者的临床病历资料进行回顾性分析。结果 55例患者均接受超声引导下胰腺占位穿刺活检,53例患者成功获取病理组织样本,穿刺成功率为96.36%,其中44例患者的穿刺活检取样标本长度超过5 mm,取材满意率为83.02%。41例患者经胰腺占位穿刺活检发现癌细胞,最终经术后病理证实全部明确为恶性肿瘤。胰腺头部、胰腺颈部、胰腺体部、胰腺尾部的穿刺成功率分别为94.74%、100.00%、100.00%、93.75%。病灶直径在1.0～2.0 mm、2.0～3.0 mm、3.0 mm以上的穿刺成功率分别为100.00%、97.22%、92.31%。不同病灶部位、不同病灶直径之间的胰腺肿瘤的穿刺成功率比较差异无统计学意义(P0.05)。超声引导下胰腺占位穿刺在诊断胰腺癌的阳性预测值、阴性预测值分别为100.00%、58.33%,敏感度、特异度和准确度分别为89.13%、100.00%、90.57%。穿刺活检后,13例患者出现上腹疼痛,经长期随访未见腹腔或穿刺道种植等其他严重并发症发生。结论超声引导下胰腺占位穿刺在诊断胰腺癌上具有定位准确、安全性较好等特点,能够使多数患者获得明确的病理诊断,值得在临床上积极推广。     

胰腺癌线粒体DNA突变研究

目的研究线粒体DNA（mtDNA）突变在胰腺癌发病中的作用。方法用PCR与直接测序相结合的方法,对比分析2株胰腺癌细胞株（SW1990、JF-305）和1株原代培养的正常胰腺细胞mtDNA D环区的突变位点。结果 2株胰腺癌细胞和1株正常的胰腺细胞的mtDNA D-loop区均存在不同程度的点突变,SW1990共检测到8个突变位点,JF-305共检测9个突变位点。其中73位A-G、16223位C-T和16358位C-T这3个突变位点在2株癌细胞和正常胰腺细胞中均检测到,考虑为多态性变化;16211位C-T和16311位T-C2个相同的突变位点在2株胰腺癌细胞中均检测到,考虑为特征性突变。结论胰腺癌细胞mtDNAD环区具有多态性和突变性,其突变可能与胰腺癌的发生、发展密切相关。