亚麻木酚素联合硼替佐米诱导肺腺癌A549细胞凋亡的机制研究

目的:探讨亚麻木酚素(SDG)联合蛋白酶体抑制剂硼替佐米(Bortezomib,Bor)对肺腺癌A549细胞凋亡的影响及其机制。方法:MTT法检测细胞增殖;Annexin V-FITC/PI双染流式细胞法和Hoechst 33258荧光染色法检测细胞凋亡;比色法检测半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶-3(Caspase-3)活性;Real Time PCR检测Caspase-3、BCL-2、BAXmRNA的表达;Western Blot检测BCL-2、Bax及p-JNK的蛋白表达。结果:SDG联合Bor能明显抑制细胞生长,上调Caspase-3活性,促进p-JNK、BAX mRNA和蛋白的表达,抑制BCL-2 mRNA和蛋白的表达,诱导细胞凋亡。结论:SDG联合Bor可显著诱导肺腺癌A549细胞的凋亡,其机制可能与其激活JNK信号通路有关。     

桑葚花色苷诱导人胃癌SGC-7901细胞自噬凋亡的研究

目的:观察桑葚花色苷对人胃癌SGC-7901细胞自噬和凋亡的作用及机制。方法:MTT法检测桑葚花色苷对SGC-7901细胞增殖的作用;流式细胞术分析桑葚花色苷对SGC-7901细胞凋亡的影响;Hoechst33342/PI活细胞染色观察凋亡细胞核形态学变化;透射电镜观察SGC-7901细胞的超微结构变化。Western blot检测SGC-7901细胞自噬分子标记物LC3、Beclin1和凋亡蛋白BAX、BCL-2及Caspase-8的表达。结果:桑葚花色苷能抑制SGC-7901细胞增殖,流式细胞术及Hoechst33342/PI双染结果显示桑葚花色苷可诱导SGC-7901细胞凋亡。透射电镜观察显示桑葚花色苷干预后的SGC-7901细胞发生自噬。Western blot证实桑葚花色苷可提高SGC-7901细胞LC3-Ⅱ/LC3-Ⅰ,BAX/BCL-2比值以及Beclin1、Caspase-8的表达。结论:桑葚花色苷能抑制人胃癌SGC-7901细胞的增殖,诱导细胞出现凋亡和自噬,其机制与上调SGC-7901细胞LC3-Ⅱ/LC3-Ⅰ,BAX/BCL-2比值及Beclin1、Caspase-8的表达有关。     

丹酚酸B对波动高糖诱导人脐静脉内皮细胞凋亡的影响

目的:观察丹酚酸B对波动高糖诱导的人脐静脉内皮细胞(HUVECs)凋亡的影响,并探讨其可能机制。方法:HUVECs与丹酚酸B孵育24 h后暴露于波动高糖(5.5 mmol/L 12 h,33.3 mmol/L 12 h)72 h。MTT法检测HUVECs活力,比色法检测NO、细胞总抗氧化能力(T-AOC)、丙二醛(MDA)及Caspase-3水平,流式细胞术检测细胞凋亡,荧光显微镜观察细胞内活性氧(ROS)水平,Western blot法检测NOX4、p-e NOS、BAX及BCL-2蛋白水平。结果:丹酚酸B可显著抑制波动高糖诱导的HUVECs凋亡,增强细胞活力,上调p-e NOS蛋白水平,促进NO释放,上调BCL-2蛋白表达,下调BAX蛋白水平,降低Caspase-3活性,提高细胞总抗氧化能力,降低NOX4蛋白表达水平,降低细胞内ROS水平和MDA含量(P0.05或P0.01)。结论:丹酚酸B可显著减轻波动高糖诱导的HUVECs损伤与凋亡,其机制与改善氧化应激状态、调节BCL-2/BAX蛋白表达水平,进而下调Caspase-3活性有关。     

芝麻素含药血清对血管紧张素Ⅱ诱导大鼠心肌细胞凋亡的影响

目的:观察芝麻素含药血清对血管紧张素Ⅱ(AngⅡ)诱导大鼠心肌细胞凋亡的影响,并探讨其可能机制。方法:培养H9C2大鼠心肌细胞,与芝麻素含药血清或空白血清预孵12 h后,加入AngⅡ孵育24 h。MTT法检测心肌细胞活力,流式细胞术检测细胞凋亡率,Western blot法检测BCL-2、BAX、Caspase-3、SOD和p47phox蛋白表达水平,比色法测定细胞总抗氧化能力、细胞内活性氧(ROS)水平和丙二醛(MDA)含量。结果:芝麻素含药血清预孵可显著改善AngⅡ诱导的心肌细胞凋亡和活力损伤(P0.05或P0.01),下调BAX、Caspase-3及p47phox蛋白表达,上调BCL-2、SOD蛋白表达水平(P0.05或P0.01)。此外,芝麻素含药血清可显著提高心肌细胞总抗氧化能力降低细胞内ROS和培养上清MDA含量(P0.05或P0.01)。空白血清对上述指标均无显著影响。结论:芝麻素可显著抑制AngⅡ诱导的心肌细胞凋亡和活力损伤,其机制与改善氧化应激状态、调节BCL-2/BAX蛋白表达水平,进而下调Caspase-3蛋白表达有关。     

葛根黄连有效组分配伍抗2型糖尿病机制初步研究

目的:考察葛根总黄酮-黄连总生物碱3∶8配伍防治2型糖尿病的作用机制。方法:建立链脲佐菌素(STZ)复合高脂饲料致2型糖尿病大鼠模型,给药后检测血清还原型谷胱甘肽(GSH)、超氧化物歧化酶(SOD)、丙二醛(MDA)、一氧化氮合成酶(NOS)、一氧化氮(NO)水平;免疫组化检测大鼠胰腺组织BAX、BCL-2、Caspase-3蛋白表达。结果:葛根黄连有效组分能显著提高2型糖尿病大鼠血清GSH、SOD活性,降低血清MDA、NOS、NO水平,并能显著提高胰腺组织BCL-2蛋白表达,降低胰腺组织BAX与Caspase-3蛋白表达。结论:"葛根总黄酮-黄连总生物碱"组分配伍对2型糖尿作用机制可能为减轻氧化应激损伤,抑制胰岛β细胞凋亡有关。     

黄连素诱导人肝癌HepG_2细胞凋亡及其机制研究

目的:探讨黄连素诱导人肝癌HepG2细胞凋亡的作用及其机制。方法:不同浓度的黄连素处理人肝癌HepG2细胞,采用MTT法检测黄连素对HepG2细胞的抑制率,用流式细胞仪检测黄连素对HepG2细胞凋亡的影响,Western blot法检测细胞p53和BCL-2蛋白的表达。结果:黄连素可显著的降低HepG2细胞的存活率,流式细胞仪表明在黄连素作用48h后,HepG2细胞的凋亡率显著增加,同时给药组细胞中的p53蛋白表达显著升高,BCL-2蛋白表达显著降低。结论:黄连素可通过上调p53蛋白表达、下调BCL-2蛋白表达来诱导HepG2细胞凋亡。     

芍药苷对黑素细胞氧化损伤分子机制的研究

目的 观察芍药苷各组抑制B16黑素细胞氧化损伤的分子机制。方法 体外细胞实验分为对照组、模型组、不同浓度芍药苷干预组。采用流式细胞仪检测细胞凋亡率,Hoechst 33342观察凋亡细胞的核变化,激光共聚焦显微镜观察细胞线粒体膜电位,底物荧光法检测Caspase-3/9的活性,Western blot法测定细胞凋亡Bcl-2、Cyt-c蛋白的表达。结果 (1)与正常对照组相比,模型组凋亡率明显增高(P<0.01);Caspase-3/9的活性显著增高;Cyt-c蛋白表达量升高;Bcl-2蛋白表达量降低。(2)与模型组相比,芍药苷各组凋亡率明显降低(P<0.01);Caspase-3/9的活性降低,Cyt-c蛋白表达量降低,Bcl-2蛋白表达量升高,均以芍药苷高剂量组最好。结论 该文揭示了线粒体信号转导通路可能是芍药苷干预氧化应激诱导B16黑素细胞凋亡的调控机制之一。     

伤肌宁胶囊对抗阿霉素所致心肌细胞凋亡及其相关基因BCL-2 BAX蛋白表达影响

目的：观察含伤肌宁胶囊的大鼠血清（SJNXQ）,对阿霉素（ADR）所致心肌细胞凋亡的抑制作用及其对相关基因BCL-2、BAX蛋白表达的影响。方法：血清药理学方法制备＂伤肌宁胶囊＂含药血清（SJNJN）;SD乳鼠心肌细胞做原代培养,复制ADR损伤心肌细胞模型,并运用流式细胞仪检测细胞凋亡及其相关BAX和BCL-2蛋白的表达。结果：心肌细胞给予ADR后,心肌细胞凋亡指数明显升高,BAX蛋白表达升高;BCL-2蛋白表达明显降低。含伤肌宁胶囊的血清,能显著抑制心肌细胞凋亡,降低BAX蛋白表达,提高BCL-2蛋白的表达水平,其效应呈剂量依赖关系。结论：伤肌宁胶囊具有拮抗阿霉素所致心肌细胞凋亡作用,其机制可能与SJNXQ提高BCL-2/BAX比值特性有关。     

花旗松素对人宫颈癌Hela细胞的体外抗肿瘤活性及其机理研究

目的观察和探索花旗松素对人宫颈癌Hela细胞的体外抗肿瘤活性及其作用机理。方法结晶紫染色法检测花旗松素对人宫颈癌Hela细胞的增殖抑制作用;RT-PCR法检测与肿瘤细胞凋亡相关基因的表达。结果花旗松素能够抑制人宫颈癌Hela细胞的增殖,呈剂量依赖关系;花旗松素不能诱导Bcl-2 mRNA和Bax mRNA的表达,但能使P53和P21的mRNA表达量增加。结论花旗松素具有良好的体外抑制人宫颈癌Hela细胞增殖作用;花旗松素诱导Hela细胞死亡与细胞凋亡相关,其分子机制可能与升高P53和P21mRNA表达有关,而与Bcl-2和Bax的蛋白转录无关。     

青蒿琥酯对肝癌HEPG-2细胞Caspase-3和P53蛋白的影响实验研究

目的 研究青蒿琥酯(artesunate,Art)对肿瘤细胞增殖的影响和机制.方法 MTT法测定青蒿琥酯对HEPG-2细胞增殖的影响, ELISA方法研究Caspase-3的活性,DNA电泳观察细胞DNA的变化,免疫组化研究凋亡相关蛋白p53,bcl-2,bax的表达.结果 青蒿琥酯作用细胞48 h后可明显诱导HEPG-2细胞凋亡,并影响Caspase-3,p53,bcl-2蛋白的表达.结论 青蒿琥酯可明显抑制HEPG-2细胞的增殖,促进HEPG-2细胞的凋亡,其机制可能是通过激活Caspase-3的活性,以及调节p53,bcl-2蛋白的表达而实现的.     

青蒿素半乳糖苷对人宫颈癌HeLa细胞株的增殖抑制作用

目的研究青蒿素半乳糖苷的酶催化合成工艺及其抗癌活性。方法选择半乳糖作为糖基给体,双氢青蒿素经半乳糖糖基转移酶催化制得半乳糖基化青蒿素衍生物,对其结构进行NMR和IR表征,并应用MTT法、Hoechst33342及PI染色法初步观察了其对癌细胞的增殖抑制活性及细胞毒性作用。结果合成了纯度较高的青蒿素半乳糖苷,抗癌实验表明其对HeLa细胞具有明显的增殖抑制作用并能诱导细胞的凋亡,效果显著高于青蒿素。结论优选的青蒿素半乳糖苷酶催化合成工艺简便,效率高;目标产物的抗癌效果显著,值得进一步研究。     

Panax ginseng ginsenoside-Rg2 protects memory impairment via anti-apoptosis in a rat model with vascular dementia

ETHNOPHARMACOLOGICAL RELEVANCE: Ginsenosides, the major active ingredients of Panax ginseng, produce a variety of pharmacological or physiological responses with effects on the central and peripheral nervous systems. AIM OF THE STUDY: In this report, we investigated the effects of ginsenoside Rg2 on cerebral ischemia-reperfusion induced impairment of neurological responses, memory and caudate-putamen neuronal apoptosis in a vascular dementia (VD) rat model. MATERIALS AND METHODS: Neurological evaluation was performed 24h after reperfusion and Y-maze memory performance was assessed at 48 h after reperfusion. Immunocytochemical techniques were employed to check the protein expression of BCL-2, BAX, heat shock protein 70 and P53, which are related with cell apoptosis. RESULTS: Neurological responses and memory ability of the ginsenoside Rg2 or nimodipine groups improved significantly compared with the VD group. The expression of BCL-2 and HSP70 were decreased, while BAX and P53 were increased in the VD model. The expression of BCL-2 and HSP70 proteins were increased, while BAX and P53 decreased after ginsenoside Rg2 (2.5, 5 and 10mg/kg) and nimodipine (50 microg/kg) treatment compared with the VD group. The study suggests that ginsenoside Rg2 improved neurological performance and memory ability of VD rats through mechanisms related to anti-apoptosis. CONCLUSIONS: The capacity for ginsenoside Rg2 to modulate the expression of apoptotic related proteins suggests that ginsenoside Rg2 may represent a potential treatment strategy for vascular dementia or other ischemic insults.     

异常黑胆质成熟剂醇提物诱导HepG2细胞凋亡机制的研究

目的:探讨异常黑胆质成熟剂醇提物的抗癌作用机理。方法:采用四氮甲基唑蓝法(MTT)观察样品对人肝癌细胞株(HepG2)体外生长的抑制作用;采用琼脂糖凝胶电泳技术、流式细胞术等观察样品对HepG2细胞凋亡的影响;采用逆转录-多聚酶链式反应技术(RT-PCR)观察样品对HepG2细胞凋亡相关基因mRNA表达的影响;观察样品对HepG2细胞Caspase-3活性的影响。结果:异常黑胆质成熟剂醇提物可明显抑制癌细胞体外生长(P<0.05);明显阻滞癌细胞周期、诱导癌细胞凋亡(P<0.05);明显提高抑癌基因p53、p21基因mRNA的表达,抑制抗凋亡基因Bc l-2 mRNA的表达,对Bax基因mRNA表达不产生明显的影响;明显提高Caspase-3活性。结论:异常黑胆质成熟剂醇提物抗癌作用可能与其抑制癌细胞生长、阻滞癌细胞周期、诱导癌细胞凋亡、调节凋亡相关基因表达、激活Caspase-3活性等功能有密切联系。     

扶正抑瘤颗粒对小鼠H22肿瘤细胞凋亡及p53和Caspase-3基因表达的影响

目的 研究扶正抑瘤颗粒(FYK)对小鼠H22肿瘤细胞生长的抑制作用,及其对细胞凋亡和p53、Caspase-3基因表达的影响。方法 用体内实验观察FYK对H22瘤株的抑瘤率,流式细胞术测定细胞凋亡率和细胞周期,反转录-聚合酶链式反应(RT-PCR)法测定野生型p53(Wtp53)和Caspase-3的mRNA表达情况。结果 12g／kg、24g／kg FYK均能显著抑制小鼠H22肿瘤细胞的生长,最高抑瘤率为51．24％(P<0．01)。流式细胞术检测表明,FYK显著提高H22肿瘤细胞的凋亡率,最高为15．84％(P<0．01);肿瘤细胞阻滞在G0／G1期,S期细胞比率降低;RT-PCR实验表明,FYK可显著上调p53和Caspase-3 mRNA的表达水平。结论 FYK能显著抑制小鼠H22肿瘤细胞生长,其抗肿瘤机制与诱导细胞凋亡,调控细胞周期,促进Wt p53与Caspase-3基因的表达有关。     

纳米雄黄对肺癌A549细胞的凋亡诱导作用

目的:研究纳米雄黄对肺癌A549细胞的凋亡诱导作用。方法:采用机械研磨法制备纳米雄黄。以肺癌A549细胞株为靶细胞,采用MTT法检测细胞的增殖活性,AnnexinV/PI双染色法检测A549细胞的凋亡,流式细胞术检测BAX蛋白和Bcl-2蛋白表达、Caspase-3活性、P53蛋白的表达。结果:纳米雄黄可显著抑制A549细胞的增殖,50μg/mL和100μg/mL的纳米雄黄处理48h后,A549细胞凋亡率显著增高为12.53%和69.19%;20μg/mL和50μg/mL的纳米雄黄作用24h,A549细胞中活性caspase-3由对照的(2.25±0.17)%增高到(3.84±0.63)%和(7.35±0.33)%;P53蛋白表达总体增高但加药48h高剂量组也有所降低;Bax蛋白表达由对照的(79.50±0.50)%增高到(92.45±0.35)%和(96.9±0.00)%;Bcl-2蛋白表达由对照的(77.85±2.15)%增高到(87.10±10.5)%和(83.1±4.6)%。结论:纳米雄黄可有效诱导肺癌A549细胞发生凋亡。     

In vitro anti-inflammatory and anti-cancer activities of Cuscuta reflexa Roxb

Aim of the study

To determine anti-inflammatory and anti-cancer activities of Cuscuta reflexa in cell lines (in vitro).

Materials and methods

Anti-inflammatory activity of the water extract was analysed in vitro using lipopolysaccharide (LPS) induced inflammatory reactions in murine macrophage cell line RAW264.7. The expression of COX-2 and TNF-α genes involved in inflammation was analysed by SQ RT-PCR. EMSA was conducted to analyse the influence of the extract on NF-κB signalling. Anti-cancer activity was analysed on Hep3B cells by MTT assay, DAPI staining, annexin V staining and SQ-RT PCR analysis of BAX, Bcl-2, p53 and survivin.

Results

The extract down regulated LPS induced over expression of TNF-α and COX-2 in RAW264.7 cells; blocked NF-κB binding to its motifs and induced apoptosis in Hep3B cells as evidenced from MTT, DAPI staining and annexin V staining assays. The extract up regulated pro-apoptotic factors BAX and p53, and down regulated anti-apoptotic factors Bcl-2 and survivin.

Conclusions

The study showed that Cuscuta reflexa inhibits LPS induced inflammatory responses in RAW264.7 cells through interplay of TNF-α, COX-2 and NF-κB signalling. It induced apoptosis in Hep3B cells through the up regulation of p53, BAX and down regulation of Bcl-2 and survivin.     

半边旗提取物5F诱导HepG2细胞凋亡与p53活化及血管内皮生长因子抑制有关

目的观察半边旗提取物Ent-11α-hydroxy-15-oxo-kaur-16-en-19-oic-acid(5F)对人肝癌细胞HepG2增殖的影响,并探讨p53、血管内皮生长因子(VEGF)及Caspase-3在5F诱导的HepG2细胞凋亡中的作用。方法采用MTT分析检测5F对HepG2细胞增殖的影响,并通过细胞凋亡检测ELISA试剂盒分析经5F处理的HepG2细胞胞浆核小体片段,以确定5F能否诱导细胞凋亡,采用Hoechst/PI分析鉴定凋亡细胞核形态。通过免疫印迹(Western blotting)分析测定p53及VEGF蛋白表达水平,并通过Caspases-3分光光度法检测试剂盒检测Caspase-3活性。结果通过细胞活性分析证实,5F对HepG2的细胞毒作用随着5F质量浓度的升高而增强。5F诱导HepG2产生胞浆核小体片段,并且该诱导作用具有剂量依赖性。5F处理后,凋亡变化,如染色质浓缩,被Hoechst/PI染色所确定。5F处理后HepG2细胞核内p53表达水平显著提高,而胞浆VEGF表达水平却下降,同时,Caspase-3活性通过浓度依赖方式增强。结论5F所诱导的HepG2细胞凋亡与p53及Caspase-3活化、VEGF负调控有关。5F可能具有抗癌尤其是抗肝细胞癌价值。     

金雀异黄酮对体外培养成骨细胞抗缺氧的机制研究

目的:观察金雀异黄酮对缺氧成骨细胞的抗缺氧作用。方法:以大鼠成骨细胞为材料,用三气培养箱建立缺氧模型。设常氧对照组、缺氧对照组和含不同浓度金雀异黄酮的缺氧加药组。比较各组缺氧36 h后细胞活力、ROS含量、细胞凋亡、细胞周期、PCNA表达i、NOS活性和钙化结节面积等,荧光定量PCR检测HIF-1α、BCL-2及Caspase-3 mRNA的表达。结果:金雀异黄酮显著提高缺氧成骨细胞存活率、G1期细胞百分比、钙化结节面积、HIF-1α和BCL-2 mRNA的表达水平,降低凋亡、ROS含量、PCNA表达量i、NOS酶活性和Caspase-3 mRNA表达。结论:金雀异黄酮能保护缺氧成骨细胞并促进其分化。     

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??OBJECTIVE To investigate the mechanism of human liver cancer HepG-2 cells apoptosis induced by Undaria pinnatifida sulfated polysaccharides S-UPPS??B. METHODS The anti-proliferation effects of S-UPPS??B on HepG-2 cells was by MTT assay. [Ca²⁺]i in HepG-2 cells was detected by laser cofocal scaning microscopy (LCSM). The apoptosis rate and protein expression level of Bcl-2, Bax, Cyt-C and p53 were detected by flow cytometry (FCM). Caspase Assay Kit was used to detected the activities of Caspase-3 and -9. RESULTS S-UPPS??B could inhibit the proliferation of HepG-2 cells and the IC₅₀ was 50.09 ??gmL^-1. With the increase of drug delivery dosage, apoptosis rate also increased, and the significant regulating effects of S-UPPS??B on Ca²⁺ and its associated channel proteins were observed. The [Ca²⁺]i level, the protein expression level of Cyt-c, p53 and the activities of Caspase-3 and -9 were all increased remarkably (P<0.05). The ratio of Bcl-2 to Bax was reduced. CONCLUSION Undaria pinnatifida sulfated polysaccharides S-UPPS??B can effectively inhibit the proliferation of human liver cancer HepG-2 cells by inducing apoptosis of HepG-2 cells through mitochondrial pathway.