B型链球菌数量感应通路测定及LuxS缺失突变株的构建

目的对GBS中可能存在的AI-2数量感应通路进行测定，构建数量感应相关分子LuxS缺失突变株并对其基因型进行确认。方法培养GBS至不同D（λ）值．利用V．harveyi BB170作为报告菌株，对GBS诱导生物发光的能力进行测定，然后寻找GBS中LuxS同源基岗，通过同源重组法在GBS中构建LuxS缺失突变株，Southern杂交分析确证。结果GBS中的某种分泌成份可在报告菌株中诱导生物发光活性，提示GBS中存在AI-2数量感应通路，在GBS中发现了LuxS同源基因并成功地构建了LuxS缺失突变株。结论本研究为探索LuxS在GBS中AI-2数量感应通路中的重要性及GBS毒力研究建立了细菌模型     

B型链球菌数量感应通路测定及LuxS缺失突变株的构建

目的 对GBS中可能存在的AI-2数量感应通路进行测定,构建数量感应相关分子LuxS缺失突变株并对其基因型进行确认。方法 培养GBS至不同D(λ)值,利用V.harveyi BB170作为报告菌株,对GBS诱导生物发光的能力进行测定,然后寻找GBS中LuxS同源基因,通过同源重组法在GBS中构建LuxS缺失突变株,Southern杂交分析确证。结果 GBS中的某种分泌成份可在报告菌株中诱导生物发光活性,提示GBS中存在AI-2数量感应通路,在GBS中发现了LuxS同源基因并成功地构建了LuxS缺失突变株。结论 本研究为探索LuxS在GBS中AI-2数量感应通路中的重要性及GBS毒力研究建立了细菌模型。     

LuxS/AI-2密度感应信号及其在口腔致病菌感染中的作用

密度感应是细菌之间通过分泌和感应胞外信号分子而进行的交流活动,密度感应使细菌同时激活相关基因的表达,协调菌群生物学行为。目前认为AI-2在细菌种间交流中起通用信号分子的作用。LuxS/AI-2参与口腔细菌间的交流,并参与调控毒力因子表达和牙菌斑生物膜的稳定。     

细胞衰老相关分泌表型因子及其分子调控机制研究进展

细胞衰老是增殖细胞脱离细胞周期呈永久性生长停滞的状态,其显著特点之一是分泌大量生物活性物质,即细胞衰老相关分泌表型（SASP）因子。SASP因子的分泌大致可分为DNA损伤快速旁分泌期、SASP早期、SASP成熟期3个阶段。SASP因子的分子调控机制复杂,涉及DNA损伤反应、p38丝裂原活化蛋白激酶（MAPK）信号通路、核因子κB（NF-κB）及CCAAT/增强子结合蛋白β（C/EBPβ）激活、SASP基因表观遗传学改变、基因转录后调控和自噬等。SASP因子能改变细胞微环境导致的多种病理状态的发生,已成为调节衰老效应的药物靶标,为肿瘤和年龄相关性疾病提供了新的治疗方向。基于此,本文对SASP因子进行了分类,总结了其在生物过程中的作用,并深入探讨其调控机制。     

circRNAs调控NF-κB信号通路在脊髓型颈椎病中的作用及机制研究

目的基于miR-146a、miR-155调控核因子κB(NF-κB)信号通路探讨脊髓型颈椎病损伤的作用机制。方法选取20只3个月月龄,体重(490±30)g的SD大鼠作为研究对象,将其随机分为对照组和试验组,对照组为空白组不进行处理,试验组参照脊髓型颈椎病动物模型的建模方法进行造模,8周后检测造模动物血清炎性因子水平,同时对造模成功后3周、6周和12周大鼠的髓核细胞进行体外培养及转染miRNA模拟物/抑制物,Western blot检测转染后3周、6周和12周的大鼠标本中信号通路关键蛋白MyD88、NF-κB的P65蛋白表达量,定量RT-PCR检测标本中大鼠Toll样受体4(TLR4)、TRAF-6、miR-146a和miR-155的表达水平。结果造模后试验组的血清炎性因子肿瘤坏死因子(TNF)-α、白细胞介素(IL)-1β及IL-6水平均高于对照组(P<0.05);随着转染时间的延长,试验组的髓核细胞表达的MyD88蛋白及NF-κB信号蛋白P65的水平均明显下降(P<0.05),髓核细胞的TLR4、TRAF-6、miR-146a和miR-155基因的表达受抑制且表达水平均明显下降(P<0.05)。结论环状RNA(circRNA)对脊髓型颈椎病的NF-κB信号通路调控效果显著,抑制circRNA的特定基因表达对脊髓型疾病的防控具有重要意义。     

山奈素对小鼠乙醇型胃溃疡的影响及其机制

目的： 探究山奈素对小鼠乙醇型胃溃疡的影响及其潜在机制。方法： 将60只SPF级昆明小鼠随机均分为6组,每组10只,分别为正常对照组,模型组,阳性对照组,山奈素低、中、高剂量组。正常对照组和模型组给予0.5% 羧甲基纤维素钠,其他4组分别给予雷尼替丁(100 mg/kg)、低剂量山奈素(31.7 mg/kg)、中剂量山奈素(63.4 mg/kg)、高剂量山奈素(126.8 mg/kg);所有小鼠灌胃容积均为20 mL/kg,连续给药7 d;然后用无水乙醇10 mL/kg灌胃建立急性胃溃疡模型;采用溃疡指数评估胃黏膜损伤情况,ELISA法检测血清中环氧合酶-2(cyclooxygenase-2,COX-2)、前列腺素E2(prostaglandin E2,PGE2)、TNF-α、IL-1β、IL-6、NO含量,免疫印迹法检测胃组织COX-2、诱导型一氧化氮合酶(inducible nitric oxide synthase,iNOS)、NF-κB p65蛋白表达。结果： 与正常对照组比较,模型组小鼠胃黏膜出现明显的血斑和上皮细胞脱落;与模型组相比,山奈素组可显著降低胃溃疡指数且高剂量组优于中、低剂量组(P均<0.05)。与正常对照组相比,模型组炎症介质COX-2、PGE2、TNF-α、IL-1β、IL-6、NO血清含量明显升高,胃组织COX-2、iNOS、NF-κB p65蛋白表达明显增加(P均<0.05);与模型组相比,山奈素组胃组织COX-2、iNOS、NF-κB p65蛋白表达及血清中炎症介质含量均明显降低(P<0.05或P<0.01)。结论： 山奈素对乙醇型胃溃疡具有保护作用,可能通过抑制NF-κB/COX-2通路,减少下游炎症因子TNF-α、IL-6、IL-1β含量,降低iNOS活性,进而抑制NO产生。     

高脂饮食下核因子κB调控自噬在小鼠溃疡性结肠炎中的作用及其机制

目的 观察核因子κB (NF-κB)调控自噬在高脂饮食下葡聚糖硫酸钠（DSS）诱导的小鼠溃疡性结肠炎中的作用及其机制。方法 将小鼠分为正常对照组（Control组）、高脂饮食组（HFD组）、DSS组、DSS+高脂饮食组（DSS+HFD组）,每组12只。采用体质量差值、疾病活动指数（DAI）和结肠组织病理学结果评估小鼠一般情况和结肠组织炎症程度,采用ELISA检测小鼠血清炎性细胞因子水平,采用实时PCR检测小鼠结肠组织中NF-κB和LC3 mRNA的表达情况。结果 DSS+HFD组体质量差值小于Control组和DSS组（均P <0.05）。DSS+HFD组DAI、结肠组织病理学评分大于Control组和DSS组（均P <0.05）。DSS+HFD组血清白细胞介素（IL）-6、肿瘤坏死因子-α (TNF-α)以及结肠组织NF-κB mRNA水平高于Control组和DSS组（均P <0.05）。DSS+HFD组结肠组织LC3 mRNA水平低于Control组和DSS组（均P <0.05）。DSS+HFD组血清IL-10水平低于Control组（P <0.05...     

低氧诱导因子1在骨肉瘤组织细胞中的表达及其调控机制

实体瘤中低氧普遍存在,而骨肉瘤作为骨骼组织中实体瘤的一种具体表现形式,其肿瘤组织内亦应存在低氧状态。低氧诱导因子1是组织细胞在低氧条件下一系列基因转录和级联反应的重要调控因子。在实体瘤中,低氧诱导因子1可通过调控肿瘤细胞血管生成、凋亡、能量代谢、pH值、反转录端粒酶活性及侵袭和转移,从而抑制肿瘤细胞生长和调控肿瘤细胞适应性反应。     

SH2B1调控JAK2/IRS2在肥胖症发病中的分子机制

目的：研究JAK2接头蛋白SH2B1调控JAK2/IRS2在肥胖症发病中的作用及其分子机制。方法：采用高效稳定表达瘦素受体的细胞株HEK239LRb和SH2B1基因缺失小鼠,Western 印迹、［γ-32P］-ATP体外激活分析法分析瘦素信号通路关键分子JAK2和IRS2的酪氨酸磷酸化水平;ELISA法测定小鼠血清瘦素水平;检测出生后至27周小鼠体质量。结果：在高效稳定表达瘦素受体细胞株HEK239LRb中,SH2B13显著增强瘦素刺激的JAK2激酶活性和IRS2磷酸化;在SH2B1基因缺失小鼠中,瘦素刺激JAK2激酶活性和IRS2酪氨酸磷酸化水平均显著降低;无论空腹还是随机给食,SH2B1基因缺失小鼠血清瘦素水平均升高并发展为高瘦素血症,其血清瘦素水平与同窝野生型小鼠相比分别增加3.2倍和5.1倍。5 周后,SH2B1基因缺失小鼠体质量逐渐增加,21周龄时,大约为同窝野生型小鼠2倍。结论：JAK2接头蛋白SH2B1是内源性瘦素敏感性增强子,通过瘦素JAK2/IRS2信号通路参与瘦素对体质量的调节,SH2B1基因缺失小鼠易发展为高瘦素血症及肥胖。     

EphA2在结直肠癌细胞中的生物学功能及其信号调控机制

[目的]探讨EphA2在结直肠癌细胞中的生物学功能及其信号调控机制。[方法]qRT-PCR法检测EphA2在结直肠癌细胞系中的表达情况,筛选得到表达量较高细胞株系,利用si RNA沉默该细胞系中EphA2的表达,利用MTT、Transwell、Western blot、qRT-PCR法检测细胞生物学功能变化及Wnt/β-catenin信号通路相关基因及蛋白的表达变化。[结果]在人结肠癌细胞HCT116、HT29和SW480中筛选得到EphA2高表达细胞HCT116,构建载体EphA2-si RNA并成功转染细胞HCT116。MTT、Transwell法检测结果显示,与对照组相比,EphA2-si RNA组中细胞的增殖、侵袭和迁移能力明显受到抑制,差异具有统计学意义(P<0.05)。qRT-PCR和western blot分析表明,与对照组相比,EphA2-si RNA组中Wnt/β-catenin信号通路相关蛋白E-cadherin、TCF-4、β-catenin和p-GSK-3βSer9的表达量均呈现下降趋势,差异具有统计学意义(P<0.05)。[结论]结直肠癌细胞中EphA2的表达与结直肠癌的进展和侵袭转移密切相关,EphA2可能通过调控Wnt/β-catenin信号通路影响结直肠癌的进展。     

深圳孕妇携带B族链球菌的血清型和毒素基因分析

目的 调查深圳市孕妇B族链球菌(group B Streptococcus,GBS)携带情况,并分析其血清分型和毒素基因.方法 对1277名研究对象进行问卷调查和阴道拭子采样,采用PCR检测菌株的血清分型和毒素基因,采用确切概率法分析血清分型和毒素基因间关联性.结果 孕妇阴道GBS携带率为4.5%.GBS菌株的主要血清型是Ⅲ型(56.1%)、Ⅰa型(21.0%)和Ⅴ型(12.3%),主要携带毒素基因是Rib(49.1%)、Epsilon(28.1%)和AlphaC(21.1%).菌株的血清型与毒素基因存在关联性,Ⅲ型菌株主要携带Rib,Ⅰa型菌株主要携带Epsilon,Ⅴ型菌株主要携带AlphaC.结论 GBS菌株血清分型与毒素基因存在关联性,提示不同特征菌株的潜在致病能力可能不同.     

新生儿B族链球菌侵袭性感染54例临床分析

目的：探讨新生儿B族链球菌（GBS）侵袭性感染的临床特征、围产期危险因素、耐药性、治疗及归转。方法：收集2014年1月至2020年6月温州医科大学附属第二医院育英儿童医院新生儿科收治的54例经血液、脑脊液等无菌腔隙培养确诊为GBS侵袭性感染的新生儿的临床资料,回顾性分析其围产期危险因素、临床表现、体外药物敏感试验结果、治疗与归转。结果：54例新生儿GBS侵袭性感染患儿中早发型感染28例,晚发型感染26例。13例在血液和脑脊液样本中同时检出GBS,36例仅在血液中检出GBS,4例仅在脑脊液中检出GBS。早发型感染以发绀、呻吟、气促及发热为主要症状,易合并肺炎,少数合并化脓性脑膜炎;晚发型感染以发热、喂养差为首发症状,易合并化脓性脑膜炎。早发型宫内感染比例高于晚发型,差异有统计学意义（P＜0.05）;死亡的3例新生儿均有一项或多项围产期危险因素。GBS药敏结果显示对青霉素、氨苄青霉素、万古霉素、利奈唑胺均100%敏感。经治疗后,47例治愈出院,4例未愈出院（家属放弃治疗）,3例死亡（均为早发型,病死率5.5%）。平均住院时间（25.5±15.6）d。结论：对GBS侵袭性感染的新生儿,根据临床特征应尽早行实验室病原学检查以明确诊断,将青霉素作为首选用药,后根据病情联合其他抗生素抗感染。围产期危险因素可能为新生儿GBS感染的重要危险因素,对孕妇开展GBS筛查和产时抗生素预防措施可有效降低新生儿GBS感染的发生。     

孕妇产道B群链球菌带菌状态及其母婴传播

采用选择性增菌培养法,对孕妇产道 B 群链球菌带菌状态及其母婴传播进行调查研究。孕妇产道和新生儿 B 群链球菌的检出率分别为2.8%(10/364)和1.5%(5/333)。母婴传播率为20%(2/10)。     

围产期孕妇生殖道B群链球菌感染临床特征

目的：探讨B群链球菌（GBS）在围产期孕妇生殖道的定植情况,及其对围产期孕妇妊娠结局的影响。方法：纳入2018年5月至2019年3月在温州医科大学附属第二医院建卡定期产检的3 619例孕妇,检查GBS感染情况,分为GBS阳性组和GBS阴性组。分析围产期孕妇高危因素,根据临床诊断判断妊娠结局,根据白带常规检查判断阴道微环境情况。结果：与GBS阴性组比,GBS阳性组阴道pH值升高,清洁度更差,且真菌和线索细胞检出率更高（均P＜0.05）。GBS阳性组霉菌感染史或细菌性阴道炎史显著高于GBS阴性组（均P＜0.05）;霉菌感染史、细菌性阴道炎史为GBS感染的危险因素（均P＜0.05）。GBS阳性组中胎膜早破、宫内感染、新生儿感染的发生率,显著高于GBS阴性孕妇（P＜0.05）。结论：霉菌感染史或细菌性阴道炎史是GBS感染的高危因素,而GBS感染对围产期孕妇阴道微环境有负面影响,而且对产妇以及新生儿的结局产生不良影响。     

B群链球菌显色培养基在孕产妇B群链球菌筛查中的性能评价

目的 评价B群链球菌（group B streptococcus,GBS）显色培养基在孕产妇中筛查GBS的敏感性、特异性和选择性能。方法 收集孕产妇肛门/阴道拭子标本共312例,已知菌株标本9例,分别直接接种或增菌后接种于血平皿和GBS显色培养基,记录鉴定结果。以筛查出的GBS总阳性数为参考,分别比较直接接种和增菌接种时,显色培养基筛查GBS的敏感性和特异性。结果 显色培养基对GBS的检出率、敏感性和特异性优于常规血平皿。标本增菌后接种法孵育24 h得到的阳性率为7.05%（22/312）高于直接接种法（6.41%,20/312）,对GBS筛查的敏感性高于直接接种法（95.65%vs 86.96%）,特异性一致（99.65%）。结论 显色培养基对GBS有良好的检出率,判断方法直观简便,对非目标菌群有良好的抑制作用。     

B族链球菌基因cpsG抑制人类宫颈癌细胞增殖的研究

目的探讨B族链球菌基因cpsG影响人类宫颈癌细胞增殖的作用及其机制。方法通过人工合成方法将cpsG的读码框序列（ORF）融合HA标签连接到质粒pLVX-mCMV-ZsGreen的限制性内切酶EcoRⅠ和BamHⅠ之间构建稳定表达cpsG人类宫颈癌细胞系。通过CCK8和集落形成实验进行生长曲线和集落形成能力分析,检测cpsG对人类宫颈癌细胞体外生长能力的影响。通过高通量RNA测序进行基因表达水平的定量分析,分析cpsG对人类宫颈癌细胞转录组学的影响,包括基因本体论（GO）分析、京都基因与基因组百科全书（KEGG）分析和融合基因分析。结果成功构建稳定表达cpsG人类宫颈癌细胞系之后,CCK8和集落形成实验显示cpsG基因抑制人类宫颈癌细胞体外生长。高通量RNA测序技术发现cpsG能够显著调控人类宫颈癌细胞部分基因的转录能力;GO分析和KEGG分析发现cpsG调节了人类宫颈癌细胞中部分基因的功能和信号通路。主要通过上调DSC3、IGFBP4、PLCL1和下调KRT6A、COL8A1、KRT17等基因的转录,从而抑制G蛋白偶联受体活性、PI3K-Akt信号通路、TNF信号通路、NF-κB信号通路和激活脂肪酸降解、p53信号通路。结论cpsG可能影响了人类宫颈癌细胞中部分基因的融合,主要影响了B3GAT3-ATP8、LEPROT-LEPR、MRPS6-SON融合基因的形成     

细胞因子与孕期B族链球菌亚临床感染

目的探讨以白细胞介素-6(interleukin,IL-6)I、L-8及其受体水平,作为早期诊断B族链球菌(GBS)亚临床感染指标的可行性。方法对208例孕妇进行GBS培养及其他病原体检测,对其中无其他病原体感染的80例(GBS阳性20例,阴性60例)孕妇留取母血、羊水、脐血,用酶联免疫吸附法和免疫组化法行细胞因子及其受体检测。结果208例孕妇中GBS阳性20例,占9.62%。GBS带菌孕妇母血、羊水中的IL-6I、L-8明显高于正常孕妇(P<0.05,P<0.01);绒毛膜羊膜炎时母血、羊水IL-6I、L-8质量浓度明显增加(P<0.05,P<0.01),GBS亚临床感染时母血、羊水中IL-6I、L-8质量浓度也较对照组明显增加(P<0.05,P<0.01)。结论将母血IL-6作为预测GBS亚临床感染的有效指标有很大的临床价值。     

妊娠晚期B族链球菌带菌状态的检测及带菌对妊娠结局的影响

目的 探讨妊娠晚期B族链球菌带菌状态的检测及带菌对妊娠结局的影响.方法 选择江西省萍乡市妇幼保健院2020年3—8月进行妊娠期检查并分娩的孕妇500名作为研究对象.经检测后,共有70例为妊娠晚期B族链球菌带菌状态孕妇.按照抽签法进行随机分组,每组各35例.观察组孕妇破膜后或临产后,为患者预防性使用抗生素.对照组未采取措...