获得性他莫昔芬耐受MCF-7细胞膜受体的变化及格列卫的逆转作用

目的 :探讨耐受他莫昔芬 (TAM)的MCF 7细胞膜受体等的变化及格列卫对耐药的逆转作用。方法 :MTT法检测TAM对E2 、EGF、Insulin刺激的MCF 7增殖的抑制作用 ;流式细胞术检测与10 - 7mol/LTAM孵育 8周、16周后的MCF 7细胞ER、PR、EGFR及VEGF的变化 ,MTT法检测格列卫对耐药的逆转作用。结果 :TAM抑制E2 、EGF、Insulin刺激的MCF 7增殖 ;耐受TAM的MCF 7ER、PR表达率由父代的 93%、91%下降为 4 1%、36 % ,EGFR由 10 %上升为 39% ,VEGF由 36 %下降至 30 % ,对EGF刺激的增殖更敏感 ,格列卫可增强TAM的生长抑制作用。结论 :耐受TAM的MCF 7细胞ER、PR表达下降 ,EGFR表达升高 ,EGF/EGFR刺激的细胞增殖作用增强 ,格列卫可能作为对TAM获得性耐药后逆转用药方案或贯序用药方案。     

维甲酸联合他莫昔芬对人乳腺癌细胞株作用的研究

目的:探讨他莫昔芬(TAM)与维甲酸(ATRA)联合对人乳腺癌他莫昔芬耐药株的作用.方法:在体外培养条件下,分别或联合应用ATRA和TAM作用于MCF-7人乳腺癌他莫昔芬耐药株(MCF-7/T)及敏感组(MCF-7/S).MTT比色法分析细胞生长抑制作用;用流式细胞仪(FCM)检测细胞周期分布、凋亡率及用药前后Bcl-2、Bax、Fas和FasL蛋白的变化.结果:TAM能抑制ER阳性MCF-7/S的生长,阻滞细胞周期于G0/G1期,并可诱导细胞凋亡,TAM不能抑制MCF-7/T的生长; ATRA预处理细胞24 h后,TAM抗乳腺癌细胞MCF-7/S的作用增强,且恢复了MCF-7/T对TAM的敏感性.ATRA与TAM联用后,MCF-7/T细胞Bcl-2蛋白表达下调,细胞Bax、Fas和FasL蛋白表达水平未见明显变化.结论:体外条件下,TAM通过影响细胞周期、诱导细胞凋亡而发挥抗ER阳性MCF-7/S作用;视黄酸能加强TAM对激素敏感细胞MCF-7/S的抗乳腺癌作用,恢复耐受细胞MCF-7/T对TAM的敏感性.同时恢复TAM对MCF-7/T的促凋亡作用.     

雌激素受体β及其剪切变异体与乳腺癌他莫昔芬耐药的关系

目的探讨雌激素受体（ER）亚型（ERβ）及其剪切变异体（ERβcx）的表达与乳腺癌他莫昔芬耐药的关系。方法 （1）对乳腺癌他莫西芬敏感MCF-7细胞和他莫西芬耐药MCF-7细胞进行培养,利用去甲基化物5-氮杂胞苷（5-Aza-2-deoxycytidine,5-AZA-CdR）去甲基化的作用,对MCF-7细胞进行药物处理获得MCF-75-AZA-CdR细胞,采用Western blot方法检测3组细胞中ERβ和ERβcx蛋白的表达。（2）取对数生长期生长良好的乳腺癌MCF-7细胞株,按2.5×103细胞/孔接种于96孔细胞培养板板中,实验组分为他莫细芬处理的MCF-7细胞（MCF-7＋TAM组）和MCF-75-AZA-CdR细胞（MCF-75-AZA-CdR细胞＋TAM组）,对照组为MCF-7细胞,采用MTT比色法,观察3组细胞的增殖情况。统计学分析采用单因素方差分析和重复测量方差分析。结果 （1）ERβ蛋白在他莫西芬敏感MCF-7细胞中的表达高于他莫西芬耐药的MCF-7细胞,两组细胞间差异有显著的统计学意义（P=0.000）;ERβcx蛋白表达在两组之间差异无统计学意义（P=0.366）。MCF-75-AZA-CdR细胞ERβ和ERβcx蛋白表达均高于他莫西芬敏感MCF-7细胞和他莫西芬敏耐药MCF-7细胞（P均=0.000）。（2）与对照组MCF-7细胞相比,他莫西芬明显降低了MCF-7＋TAM组和MCF-75-AZA-CdR细胞＋TAM组的细胞增值速度并抑制细胞生长;且他莫西芬抑制细胞增殖作用MCF-75-AZA-CdR细胞＋TAM组强于MCF-7＋TAM组（P=0.000）。结论 ERβ蛋白在他莫西芬敏感MCF-7细胞中的表达高。MCF-75-AZA-CdR细胞中ERβ和ERβcx蛋白的表达均高。他莫西芬抑制细胞增殖作用在他莫西芬处理的MCF-75-AZA-CdR细胞中强     

雌激素受体β在乳腺癌他莫昔芬内分泌治疗耐药中的作用

目的：探讨雌激素受体β（estrogen receptor β,ERβ）的表达与乳腺癌他莫昔芬（tamoxifen,TAM）内分泌治疗耐药的相关性及其机制。方法：以前期构建的ERα/ERβ不同表达的人乳腺癌MCF-7细胞株\[M/HK（阴性对照）、M/siα（ERαlow/ERβhigh）、M/siβ（ERαhigh/ERβlow）细胞\]为研究对象,MTT法评估乳腺癌细胞对TAM的耐药性;用半定量RT-PCR法检测细胞中耐药相关基因MDR1、TOPOⅡ、LRP和GST-π的mRNA表达水平,用Western blotting法检测细胞中耐药相关信号通路MAPK、PI3K/Akt的p-ERK、p-Akt蛋白表达水平。结果：与对照组MCF-7细胞相比,MCF-7细胞中的ERβ高表达可促进高浓度TAM（1、5、10 μmol/L）对MCF-7细胞增殖的抑制作用\[（45.788 ± 1.641）% vs （24.288±1.170）%,（57.899±1.583）% vs（31.499±1.978）%,（59.853 ±1.648）% vs（38.039±1.482）%;均P<0.05 ）\],该抑制作用与TAM浓度呈剂量依赖性。ERβ高表达可显著抑制MCF-7细胞耐药基因MDR1、TOPOⅡ、LRP的 mRNA表达水平（0.431±0.032 vs 0.932±0.083,0.234±0.008 vs 0.391±0.002,0.47±0.028 vs 0.586±0.036;均P<0.05);可显著下调Akt和ERK蛋白的磷酸化水平（0224±0.006 vs 0.437±0.007,0.367±0.015 vs 0.756±0.039;均P<0.05)。结论： ERβ表达水平可影响乳腺癌细胞MCF-7对TAM的耐药性,该作用机制可能与耐药基因的表达及PI3K/ AKT、MAPK信号通路激活有关。     

卡马西平对雌激素依赖性乳腺癌细胞增殖的抑制作用及其机制的研究

背景与目的：卡马西平是一种应用多年的抗癫痫药,最近研究证明其具有组蛋白脱乙酰化酶抑制剂（histone deacetylase inhibitor,HDI）的性质。而已知的HDI多具有抗肿瘤作用。本实验旨在探讨卡马西平对雌激素受体α（estrogenreceptorα,ERα）阳性乳腺癌细胞增殖的抑制作用及其机制。方法：利用磺酰罗丹明B色度法（sulforhodamine B,SRB）分析不同情况下卡马西平对细胞增殖的影响。Western blot法检测ERa、Cyclin D1等相关蛋白的表达水平：RT—PCR法检测相应mRNA水平的变化：免疫荧光法测定他莫昔芬耐药细胞MCF-7RT中HER-2的表达;免疫沉淀技术检测Hsp90的分子伴侣功能及乙酰化水平。结果：卡马西平处理ERα阳性细胞MCF-7及T47D时,显著抑制雌二醇刺激的细胞增殖效应（P〈0．01）;卡马西平与4羟基他莫昔芬（4-OHT）联合处理MCF-7细胞,对雌二醇引起的细胞增殖抑制呈相加作用（q=1．00）;在MCF-7RT细胞中,卡马西平逆转了4-OHT的刺激增殖作用（P〈0．01）;卡马西平处理可以降低ERα阳性细胞中ERα、Cyclin D1在蛋白及mRNA水平的表达,并降低MCF-7RT细胞中HER-2表达;ERα、Cyclin D1的表达降低可以被26s蛋白酶体抑制剂MG132抑制;卡马西平可以促进Hsp90乙酰化并破坏其分子伴侣功能。结论：卡马西平明显抑制ER阳性乳腺癌细胞增殖,该作用可能部分通过促进ERα、Cyclin D1的蛋白酶体降解途径实现。卡马西平可以通过降低HER-2表达逆转与HER-2相关的4-OHT耐药。     

乳腺癌中c-erbB-2、EGFR的表达及其临床意义

目的 检测c—erbB-2、EGFR在乳腺癌中的表达及其预后的关系。方法 应用免疫组化Envision法对110例乳腺癌进行标记，分析c—erbB-2、EGFR、ER、PR的阳性表达情况。结果c—erbB-2、EGFR、ER、PR的阳性率分别为36．4％、45．5％、52．7％和47．3％，c—erbB-2、EGFR与ER、PR呈负相关；c—erbB-2、EGFR、ER、PR的表达与乳腺癌的组织类型、分化程度具有相关性。结论 乳腺癌中c—erbB-2、EGFR的表达提示乳腺癌患者预后不良，可作为临床判断预后的指标。     

γ-干扰素增强他莫昔芬抗乳腺癌作用的体外研究

研究γ-干扰素（γ-IFN）对他莫昔芬（TAM）抗乳腺癌细胞的增强作用。方法：在体外培养条件下，分别或联合应用γ-干扰素、TAM或雌二醇（E2）作用于雌激素受体（estrogen receptor，ER）阳性的MCF-7和ER阴性的MDA-MB-231人乳腺癌细胞株，用MTT比色法分析细胞生长抑制作用，流式细胞仪检测细胞周期分布，DNA凝胶电泳和流式细胞仪检测细胞凋亡。结果：TAM能抑制ER阳性和阴性的乳腺癌细胞的生长，阻滞细胞周期于GO／G1期，并可诱导细胞凋亡；相同浓度条件下，TAM对ER阳性乳腺癌细胞的抑制作用强于对ER阴性的乳腺癌细胞。同时，TAM能拈抗外源性雌激素对MCF-7细胞的促生长作用，而对MDA-MB-231细胞的生长抑制作用与雌激素的存在与否无关。γ-干扰素预处理细胞24h后，TAM抗乳腺癌细胞的作用增强。结论：体外条件下，TAM有抗ER阳性和阴性乳腺癌细胞作用，作用机制是通过影响细胞周期，诱导细胞凋亡，γ-干扰素能加强TAM的抗乳腺癌作用。     

脉冲磁场逆转乳腺癌细胞多药耐药性的作用研究

目的：研究脉冲磁场（Pulsed Magnetic Fields，PMF）对乳腺癌耐药细胞株MCF-7／ADR的逆转作用。方法：采用MTT实验方法，分别检测不同频率及不同磁场强度条件照射下的MCF-7／ADR细胞的耐药倍数和逆转倍数。用流式细胞术检测经脉冲磁场照射后MCF-7／ADR细胞中Rh123药物蓄积量变化。用流式免疫荧光技术检测膜经脉冲磁场照射后MCF-7／ADR细胞膜表面P-糖蛋白（P-gP）和多药耐药相关蛋白（MRP1）表达情况。采用半定量RT—PCR（逆转录-聚合酶链反应）检测经脉冲磁场照射后MCF-7／ADR细胞中MDR1和MRP1基因表达情况。建立人乳腺癌耐药细胞株MCF-7／ADR裸鼠移植瘤模型，通过测量肿瘤体积及重量观察PMF对肿瘤细胞的体内逆转作用。结果：脉冲磁场能有效逆转乳腺癌耐药细胞株MCF-7／ADR对阿霉素产生的耐药性（P〈0．01），其中110Hz，40mT照射条件逆转效果最好，可达5倍左右；脉冲磁场能提高罗丹明123在细胞内的蓄积量，其中110Hz，40mT照射奈件下可有效提升20％左右药物蓄积量；细胞经脉冲磁场照射后，膜表面耐药蛋白P糖蛋白表达量明显下降，MRP1蛋白表达量变化不明显；编码上述两种耐药蛋白的耐药基因表达量均明显下降；此外，脉冲磁场联合阿霉素可有效逆转裸鼠移植瘤的生长增值（P〈0．01）。结论：PMF具有逆转体外和体内乳腺癌细胞多药耐药性的作用。     

大黄素对乳腺癌多药耐药细胞株MCF-7/Adr的耐药逆转作用

目的：探讨中药成分大黄素(Emodin，EMD)对乳腺癌多药耐药细胞株MCF-7／Adr的耐药逆转作用。方法：药物敏感试验采用四唑氮盐(MTT)比色法，P糖蛋白以Western-blot法检测。结果：EMD在0～20μmol／L浓度时作用14天后对MCF-7／Adr未见明显毒性作用；EMD在10μmol／L浓度时，其耐药逆转倍数为1．7倍。EMD在20μmol／L浓度时，处理MCF-7／Adr2、4、6和11天后，检测P糖蛋白发现自第4天起P糖蛋白表达下降，至第11天无法检测到P糖蛋白的表达。结论：EMD具有逆转MCF-7／Adr多药耐药性的作用，可明显下调P糖蛋白的表达，且逆转作用持久。     

EGF对ER阴性乳腺癌细胞株MAPK通路及c-fos的活化作用

目的比较表皮生长因子（EGF）对ER（＋）和ER（-）乳腺癌细胞MAPK信号转导通路及原癌基因c-fos表达的活化作用,探讨ER（-）的乳腺癌细胞激素非依赖性生长的可能机制.方法 EGF和MAPK抑制剂（PD98059）分别和（或）联合作用于ER（＋）乳腺癌细胞株MCF-7和ER（-）乳腺癌细胞株MDA-MB-435s,Western blot技术检测两种细胞中磷酸化MAPK蛋白（p-MAPK）及c-fos蛋白的表达.结果 EGF对ER阳性和阴性的两种细胞株p-MAPK和c-fos蛋白的表达均有上调作用,但MDA-MB-435s细胞中两种蛋白的激活明显高于MCF-7细胞,且c-fos蛋白表达与p-MAPK蛋白表达一致.结论 EGF通过激活MAPK信号转导通路,活化原癌基因c-fos来刺激细胞恶性增殖可能是引起ER（-）乳腺癌细胞的激素非依赖性生长的重要机制之一.     

整合NGR肽抗EGFR单链抗体制备及其抗肿瘤活性研究

目的：利用大肠埃希菌表达基于抗表皮生长因子受体（epidermalgrowthfactorreceptor,EGFR）单链抗体和靶向CD13环状NGR肽的双靶点重组融合蛋白ER（Fv）-NGR,研究其对肿瘤细胞的亲和能力和体内外抑制作用。方法：用基因工程的方法构建重组质粒pET-scfv-ngr,转入大肠埃希菌BL21,IPTG诱导表达带有His-tag标签肽的重组蛋白ER（Fv）-NGR,用Ni离子亲和柱进行纯化。运用细胞免疫荧光检测ER（Fv）-NGR与肿瘤细胞的结合;流式细胞术分析重组蛋白与肿瘤细胞的亲和力;克隆形成实验测定重组蛋白对肿瘤细胞体外增殖的抑制作用;利用人乳腺癌MCF-7裸鼠移植瘤模型对ER（Fv）-NGR的体内抗肿瘤活性进行研究。结果：重组蛋白ER（Fv）-NGR由抗EGFR单链抗体和3个连续的环状NGR肽构成,相对分子质量约为27×10^4,以包涵体形式在大肠埃希菌内表达,表达量约为5mg／L。细胞免疫荧光结果表明,重组蛋白与EGFR和CD13皆高表达MCF-7细胞有较强的结合能力,而与正常HEK293细胞结合较弱。ER（Fv）-NGR与MCF-7细胞结合的解离常数为8．4×10-7nmol／L。ER（Fv）-NGR在体外对肿瘤细胞的增殖有抑制作用,作用于MCF-7和A549细胞的Ic50值分别为1．2×10^-6和4．7×10-mol／L。在体内对人乳腺癌MCF-7裸鼠移植瘤有生长抑制作用,在10mg／kg药物剂量下28d对照组与实验组瘤体积分别为（1．06±0．17）和（0．63±0．11）cm2,F-18．7,P=0．003;瘤质量分别为（0．95±0．12）和（0．52±0．07）g,F=42．7,P〈0．001;抑瘤率为45．4％。结论：成功制备了基于单链抗体和靶向肽的双靶点融合蛋白ER（Fv）-NGR,其对肿瘤细胞具有良好的亲和力和体外增殖抑制作用,能够有效抑制裸鼠移植瘤的生长,为研制新型双靶点抗肿瘤药物提供依据。     

VEGF-C短发夹RNA抑制乳腺癌细胞增殖及侵袭能力的实验研究

目的探讨应用靶向VEGF—C的短发夹RNA（shRNA）质粒载体在体外抑制乳腺癌细胞株MCF-7生物学活性的影响。方法制备携带有绿色荧光蛋白（GFP）报告基因的VEGF—C—shRNA质粒载体，脂质体转染方法转入乳腺癌细胞株MCF-7，通过倒置荧光显微镜及流式细胞术检测细胞的转染效率，RT—PCR及Western blot检测转染细胞内VEGF—CmRNA及蛋白的表达变化，MTT法检测细胞增殖抑制率，重组基底膜侵袭实验检测细胞侵袭能力。结果高效转染入VEGF—C—shRNA的MCF-7细胞VEGF—C mRNA及蛋白表达水平显著下降；VEGF—C ShRNA对MCF-7细胞具有明显的增殖抑制作用，其抑增殖效应呈时间依赖性；VEGF—C—shRNA可抑制乳腺癌细胞MCF-7体外侵袭重组基底膜的能力，与阴性shRNA转染组、空载体组及空白组比较，差异有统计学意义（P〈0．05）；结论VEGF-C在乳腺癌增殖、侵袭转移中发挥重要作用，通过RNA干扰技术实现VEGF—C沉默在乳腺癌的基因治疗中具有可行性。     

维生素E琥珀酸酯对MCF-7乳腺癌细胞三苯氧胺敏感性的影响

目的检测维生素E琥珀酸酯(VES)对MCF-7乳腺癌细胞三苯氧胺敏感性的影响。方法人乳腺癌细胞MCF-7以VES刺激24h,VES浓度为5μg/ml和10μg/ml。随后以1μM,2.5μM,5μM和10μM的三苯氧胺作用24h,以MTT法测定对细胞增殖的抑制作用,RT-PCR法检测VES对HER-2mRNA表达的影响,以免疫组化法检测VES作用前后HER-2产物c-erbB-2表达的变化。结果TAM对MCF-7乳腺癌细胞具有增殖抑制作用,VES处理后,乳腺癌细胞对TAM的敏感性升高。RT-PCR显示VES作用后乳腺癌细胞HER-2mRNA转录水平有一定程度的下降,乳腺癌细胞c-erbB-2的表达降低。结论VES对MCF-7乳腺癌细胞三苯氧胺的敏感性具有增强作用,可能与降低HER-2基因表达产物有关。     

雌激素受体阳性乳腺癌组织中Efp和Plk3的表达及其临床意义

目的:探讨雌激素受体(estrogen receptor,ER)阳性的乳腺癌患者癌组织中Efp和Plk3的表达及其临床意义和可能的作用机制.方法:采用免疫组织化学法检测于2010年1月至6月在河北医科大学第四医院乳腺科住院的86例ER阳性患者乳腺癌组织中Efp和Hk3的蛋白表达,并分析两者表达的相关性及与临床病理指标的关系.采用qRT-PCR法检测乳腺癌细胞MCF-7和MDA-MB-231中ER、Efp mRNA的表达情况,采用RT-PCR及Western blotting法检测雌激素刺激后ER阳性乳腺癌细胞MCF-7中Efp、Pkk3基因的表达变化,采用Western blotting法检测雌激素及蛋白酶抑制剂MG132处理后MCF-7细胞中Efp、Plk3的表达变化.结果:86例ER阳性的乳腺癌组织中,55例Efp表达阳性(64.0％),28例Plk3表达阳性(32.6％).Efp表达阳性组织中Plk3表达阳性为23.6％,Efp表达阴性组织中Plk3表达阳性为48.4％,Efp和Plk3蛋白表达存在明显的负相关(P＜0.05),Efp蛋白表达与乳腺患者的淋巴结转移状况呈明显正相关(P＜0.05),Plk3蛋白表达与乳腺癌患者的淋巴结转移状况呈明显负相关(P＜0.05).MCF-7细胞ER mRNA高表达,而MDA-MB-231细胞的ER mRNA低表达.MDA-MB-231细胞经雌激素刺激后,Efp mRNA的表达未见明显改变.MCF-7经雌激素刺激后Efp mRNA及蛋白的表达显著增加(P＜0.05),而Hk3 mRNA的表达未见明显改变,未检测到Plk3蛋白的表达.MG132处理后MCF-7细胞中Plk3的蛋白表达明显上调,MCF-7经雌激素刺激后,再用MG132处理,Efp的蛋白表达显著增加(P＜0.05),而Plk3蛋白表达明显下降(P＜0.05).结论:ER阳性乳腺癌中Efp和Plk3蛋白表达存在明显的负相关,Efp可促进Plk3的蛋白降解,并可能参与了ER阳性乳腺癌患者内分泌治疗的耐药过程.     

他莫昔芬对乳腺癌MCF-7细胞侵袭能力的影响及其作用机制

目的 探讨他莫昔芬(TAM)对乳腺癌MCF-7细胞侵袭能力的影响及其作用机制.方法 采用对数生长期的乳腺癌MCF-7细胞,以无血清无酚红高糖DMEM培养基对其进行24 h的培养,然后将其分别接种并分为对照组(无血清无酚红高糖DMEM培养基)、TAM组(含有1μmol/L TAM的无血清无酚红高糖DMEM培养基),采用Western blot法、RT-PCR法检测两组MCF-7细胞基质金属蛋白酶-9(MMP-9)、MMP-2、血管内皮细胞生长因子(VEGF)蛋白及mRNA表达水平,采用Transwell法检测MCF-7细胞的侵袭能力.结果 TAM组MCF-7细胞中VEGF、MMP-9、MMP-2蛋白表达水平均明显高于对照组,VEGF、MMP-9、MMP-2 mRNA相对表达水平均明显高于对照组,差异均有统计学意义(P﹤0.01);TAM组MCF-7细胞的侵袭能力相对数明显高于对照组,差异有统计学意义(P﹤0.01).结论 TAM可能发挥类雌激素功能,促进乳腺癌MCF-7细胞侵袭能力,这与其提高MCF-7细胞中VEGF、MMP-9、MMP-2表达水平有关.     

三苯氧胺联合人参皂苷Rg3抑制乳腺癌血管生成的研究

目的：研究三苯氧胺（tamoxifen，TAM）联合人参皂苷R0对乳腺癌肿瘤血管生成的影响，并观察其抑瘤效果。方法：以荷MCF-7乳腺癌裸鼠为模型，分别给予TAM、雌二醇（estradiol，E2）、人参皂苷Rg3、TAM联合人参皂苷Rg3及9％氯化钠溶液灌胃，观察肿瘤生长情况，免疫组织化学染色计数肿瘤微血管密度（microvascular density，MVD），PT-PCR法检测血管内皮生长因子（vascular endothelial growth factor，VEGF）表达。结果：E2处理组的肿瘤生长迅速，而TAM治疗组肿瘤生长受到抑制，合用人参组皂苷Rg3时抑瘤效果更显著（P〈0．05）。与9％氯化钠溶液对照组相比，E2组MVD升高，而TAM组和人参皂苷Rg3组的MVD及VEGF mRNA表达均下降，二者合用时MVD和VEGF mRNA表达下降更明显（P〈0．05）。结论：TAM可抑制乳腺癌肿瘤血管生成，与人参皂苷Rg3联合应用显示出抗血管生成协同作用，可有效抑制乳腺癌肿瘤生长。     

透明质酸寡糖逆转MCF-7/ADM耐药及促凋亡作用研究

[目的]研究透明质酸寡糖逆转MCF-7／ADM细胞耐药的作用。[方法]MTT法研究透明质酸寡糖对MCF-7／ADM耐药逆转作用，流式细胞术测定细胞表面耐药相关蛋白P-gp、MRP的表达及凋亡调控蛋白p53、bcl-2的表达。[结果]透明质酸寡糖可提高MCF-7／ADM对化疗药的敏感性，使P—gp、MRP表达下降，p53表达增高，[结论]透明质酸寡糖可部分逆转MCF-7／ADM耐药及促进凋亡的作用．     

托瑞米芬和他莫昔芬对MCF7/ADR多药耐药的逆转作用

目的：研究托瑞米芬（toremifene,TOR）和他莫昔芬（tamoxifen,TAM）对乳腺癌耐阿霉素细胞株MCF7/ADR多药耐药的逆转作用及其可能作用机制。方法：采用SRB法测量TOR、TAM对MCF7/ADR细胞的耐药逆转倍数;荧光显微镜、流式细胞仪测定加入TOR、TAM前后耐药细胞内荧光含量表达变化;Westernblotting检测TOR、TAM对P-gp表达的影响。结果：（5、10、20）μmol/L的TOR和TAM对MCF7/ADR耐药的逆转倍数分别为（1.5、7.0、35.4）倍和（2.0、5.4、30.7）倍,而对MCF7/S细胞没有显著性作用。加入TOR、TAM后,MCF7/ADR细胞内ADR荧光的呈现由核外进入核内,荧光含量亦具浓度依赖性提高。MCF7/S细胞P-gp表达阴性,而MCF/ADR细胞P-gp表达阳性。TOR[（5、10、20）μmol/L]与TAM[（5、10）μmol/L]对MCF7/ADR细胞株中的P-gp表达未产生显著性抑制作用。结论：TOR可明显逆转MCF7/ADR细胞株对ADR的耐药性,增强其细胞毒作用,逆转强度与TAM相当。其机制可能是通过对P-gp结构功能的调控来逆转耐药性,而不是通过下调MDR1基因的蛋白水平表达。     

miR-342与乳腺癌ERα表达及他莫昔芬敏感性关系探讨

目的:探讨miR-342与乳腺癌临床病理的关系及是否参与调节ERα并影响他莫昔芬(TAM)的敏感性。方法:RT-PCR检测48例癌组织miR-342和ERαmRNA水平及其中24例癌旁组织miR-342的表达;免疫组化评价癌组织ER、PR、HER-2和VEGF的状态;RT-PCR检测乳腺癌细胞株MCF-7、SKBR-3及MB-231的miR-342、ERαmRNA水平;检测MCF-7细胞瞬时转染hsa-miR342(分mimic、inhibitor及各自阴性对照共4组)48h后miR-342和ERαmRNA的变化;1×10-8 mol/L 17-β雌二醇(E2)单独或联合2×10-5 mol/L TAM处理MCF-7细胞72h,CCK-8法测不同转染组细胞增殖;各转染组细胞1.5×10-5 mol/L TAM处理48h,流式细胞术分析细胞凋亡率。结果:miR-342及ERαmR-NA在ERα阳性乳腺癌组织及细胞中均明显升高,P<0.01;miR-342和ERαmRNA之间存在正相关,P=0.003。miR-342在HER-2阴性(P=0.001)及VEGF阴性(P=0.031)乳腺癌组织中上调;miR-342与PR、淋巴转移、病理分级等因素无明显关系,P>0.05;癌与癌旁miR-342表达差异无统计学意义,P=0.065。MCF-7细胞mimic组ERαmRNA表达为1.80±0.14,高于对照组的1.0±0.0,P=0.001;inhibitor组为0.747±0.087,较对照组低,P=0.037。TAM作用72h,mimic组细胞增殖率为(45.9±1.3)%,与对照组的(55.0±1.5)%相比明显抑制,P=0.001;inhibitor组增殖率为(72.9±1.9)%,较对照组升高,P=0.000。流式细胞术分析TAM处理后的细胞凋亡率,结果显示,mimic组凋亡率为(9.54±1.14)%,较对照组的(4.50±0.46)%增加,P=0.002;inhibitor组凋亡率为(3.06±0.42)%,较对照组的(4.95±0.59)%降低,P=0.011。结论:miR-342的表达可以一定程度预测ERα的表达水平,并作为分子标志预测乳腺癌细胞对TAM的敏感性;miR-342有望成为潜在靶点来参与乳腺癌内分泌治疗。