bFGF对人晶状体上皮细胞增殖的影响

目的 研究碱性成纤维细胞生长因子（ｂａｓｉｃ ｆｉｂｒｏｂｌａｓｔ ｇｒｏｗｔｈ ｆａｃｔｏｒ,ｂＦＧＦＧ）在体系对人晶状体上皮细胞增殖的影响及机制探讨。方法 取人晶状前囊膜培养。加入不同浓度ｂＦＧＦ（１μｇ．Ｌ＾－１１０μｇＬ＾－１、１００μｇ．Ｌ＾－１）,４８ｈ后免疫组化测增殖核细胞抗原阳性面积率,取人晶状体前囊膜免疫组化测ｂＦＧＦ受体。结果 一定浓度（１～１００ｕｇ．Ｌ＾－１）的ｂＦＧＦ在体     

环氧合酶-2在bFGF诱导的人晶状体上皮细胞增殖中的表达

目的检测环氧合酶-2(cyclooxygenase，COX-2)在人晶状体上皮细胞(human lens epithelium cell，HLEC)中的表达，探讨COX-2在后发性白内障(PCO)形成中的意义。方法细胞传代培养，取第三代细胞用于实验。用SP免疫组化法检测bFGF刺激6小时后COX-2蛋白的表达，并与对照组相比较，以胞浆内出现棕黄色颗粒为阳性表达；采用RT—PCR和Western—blot方法检测bFGF刺激下，不同时间点(1h、3h、6h、12h、24h)COX-2的mRNA和蛋白的表达。结果检测的人晶状体上皮细胞中，实验组的细胞COX-2mRNA和蛋白表达均为阳性。且表达呈时间依赖性，随着时间的延长COX-2表达逐渐增加，6h达最高峰；正常对照组表达弱或无表达。结论bFGF可以刺激晶状体上皮细胞增殖，并诱导环氧合酶-2的表达，提示COX-2与人晶状体上皮细胞的增殖密切相关。COX-2可能参与PCO的形成。     

细胞因子与晶状体上皮细胞增殖

后发性白内障是白内障手术后较严重的并发症。人们通过对其发生机制的研究发现,生长因子类物质与晶状体上皮细胞的增殖、胶原的产生有密切的关系,对这些因子进行适当的调控可能对于防治后发性白内障有重要意义。     

奥曲肽对bFGF诱导的兔晶状体上皮细胞增殖的影响

目的 研究奥曲肽对bFGF诱导的兔晶状体上皮细胞增殖的影响.方法 体外培养的兔晶状体上皮细胞分为对照组和实验组,其中对照组包括空白对照和bFGF对照组,实验组包括单独用奥曲肽和联合10 mg·L-1碱性成纤维细胞生长因子(basic fibroblast growth factor,bFGF)组,奥曲肽浓度分别为10-11mol·L-1、10-10 mol·L-1、10-9 mol·L-1、10-8 mol·L-1.加药后48 h用MTT比色法测定奥曲肽对细胞增殖的抑制作用;用流式细胞仪分析细胞周期.结果 bFGF组与空白对照组相比,吸光度A值升高,加入奥曲肽作用48 h后,随着药物浓度增加,A值明显降低(P<0.05),抑制率增加,10-9 mol·L-1、10-8 mol·L-1奥曲肽组的抑制率分别为(24.7±3.6)%、(22.8 ±6.6)%.联合应用bFGF+奥曲肽组与仅用bFGF组相比,吸光度下降更明显(P<0.05),即抑制率增加更明显,10-9 mol·L-1、10-8 mol·L-1奥曲肽联合bFGF组的抑制率分别为(32.1±2.9)%、(33.6±3.3)%.流式细胞仪分析奥曲肽对兔晶状体上皮细胞的周期的影响与MTT法栓测结果呈现大致相同趋势,随着药物浓度的增加,处于静止期的细胞逐渐增加而增殖期细胞逐渐减少.结论 奥曲肽可明显抑制bFGF诱导的兔晶状体上皮细胞的增殖,并呈剂量依赖性关系,为临床筛选防治后发性白内障的药物提供一定的依据.     

C-Met抑制剂对人晶状体上皮细胞增殖的抑制作用

目的:探讨 c-M et抑制剂 K252a 对人晶状体上皮细胞增殖的抑制作用。方法 : 取原代培养人晶状体上皮细胞加入 H G F、H G F K252a,以 D M EM 为对照,应用四唑盐法(M TT法)观察 K252a 对晶状体上皮细胞生长的抑制作用,蛋白质免疫印迹(W estern blot)方法检测 K252a 对 Bcl-2,C aspase-3 蛋白表达的影响。结果:H G F (50nm ol/L) K252a(30nm ol/L)组与对照组光密度值无显著差异 (P>0.05),Bcl-2 和 C aspase-3 的表达水平变化都不明显。结论:c-M et抑制剂 K252a 对人晶状体上皮细胞增殖有抑制作用。     

环孢素A对兔晶状体上皮细胞增殖过程中磷酸肌醇-3激酶途径的影响

目的:研究环孢素A对白内障术后晶状体上皮细胞增殖过程中磷酸肌醇-3激酶(phosphatidylinositol-3 kinase,PI-3 k)途径的影响,为后发性白内障的治疗提供实验依据。方法:将健康白色家兔30只60眼,行双眼透明晶状体皮质吸除术,右眼为治疗组,左眼为对照组。术后第1d起,对照组眼用生理盐水点眼6次,而治疗组眼应用1%环孢素A(cyclosporine A,Cs A)眼药水点眼6次。分别在术后第1d未点药前、术后1wk,2wk,1mo和2mo各处死随机选择的6只兔,摘取双眼球。应用免疫组织化学、原位杂交方法检测赤道部晶状体上皮细胞中增殖细胞核抗原(proliferating cell nuclear antigen,PCNA)及张力蛋白同源的28号染色体缺失磷酸酯酶mRNA(PTEN mRNA)和Ser473-R的表达。结果:术后两组PCNA和Ser473-R的表达均逐渐降低,其中1wk(0.690±0.035 vs 0.785±0.015,t=6.099,P<0.01)和2wk(0.571±0.038 vs 0.670±0.037,t=4.585,P<0.01)时治疗组PCNA表达均显著低于对照组。另外,1wk(0.374±0.031 vs 0.435±0.030,t=3.486,P=0.006)和2wk(0.220±0.022 vs 0.251±0.020,t=2.516,P=0.031)时治疗组Ser473-R的表达均显著低于对照组。术后1wk~1mo时,两组PTEN mRNA均逐渐回升。术后1wk,治疗组A值显著高于对照组(0.302±0.027 vs 0.255±0.038,t=2.474,P=0.033)。结论:环孢素A对兔眼白内障术后晶状体上皮细胞增殖过程中PI-3k途径有显著抑制作用,为研究CsA抑制后发性白内障提供实验依据。     

白藜芦醇对紫外线诱导人晶状体上皮细胞氧化损伤的保护作用

目的:探讨白藜芦醇对紫外线诱导人晶状体上皮细胞氧化损伤的保护作用。方法:人晶状体上皮细胞系传代培养,紫外线诱导细胞发生凋亡,20μmol/L白藜芦醇预处理细胞后,观察各项指标改变:流式细胞仪检测细胞凋亡率,比色法检测凋亡相关因子caspase-3及caspase-9的表达,透射电镜观察超微结构变化。结果:流式细胞仪检测发现,白藜芦醇可以抑制紫外线照射诱导的细胞凋亡,阳性对照组中caspase-3及caspase-9含量显著高于同时段阴性对照组,差异有统计学意义(P<0.05);实验组中caspase-3及caspase-9含量均低于同时段阳性对照组,差异有统计学意义(P<0.05)。此外,伴随白藜芦醇作用时间的延长,透射电镜下人晶状体上皮细胞损伤的程度减轻。结论:白藜芦醇可以抑制紫外线诱导的晶状体上皮细胞的凋亡,对辐射性白内障具有预防作用,从而为寻求有效的防治白内障药物提供可靠的实验依据。     

去整合素抑制体外培养人晶状体上皮细胞增殖的研究

目的探讨去整合素Kistrin(disintegrin kistrin)对体外培养的人眼晶状体上皮细胞(human lensepithelial cells,HLECs)增殖的抑制作用.方法对先天性白内障患者术中环行撕前囊膜,进行原代培养并传代,取第二代细胞用于实验.增殖抑制实验将悬浮的活细胞接种于涂有鼠尾胶原的96孔培养板,16 h后,去掉旧培养液,换用不同浓度的去整合素(5 ng/ml、10 ng/ml、20ng/ml、40 ng/ml、80 ng/ml)37℃、5%CO2条件下共同孵育,7 d后,MTT法测定晶状体上皮细胞的数目.结果20ng/ml、40 ng/ml、80 ng/ml的去整合素对体外培养的晶状体上皮细胞的增殖进行干预后,OD值分别为0.254±0.008、0.224±0.009,0.202±0.010,与空白对照组相比,差异有统计学意义(P＜0.05).结论去整合素可抑制体外培养的人眼晶状体上皮细胞的增殖.     

番茄红素对紫外线诱导人晶状体上皮细胞氧化损伤的保护作用

目的：探讨番茄红素对紫外线诱导的人晶状体上皮细胞(hulan lens epithelial cells,HLEC)氧化损伤的保护作用及可能机制。
　　方法：HLEC传代培养,分为阴性对照组、氧化损伤组、番茄红素低剂量组和番茄红素高剂量组, MTT比色法检测细胞存活率,电子显微镜观察细胞形态学改变,DCFH-DA荧光探针检测胞内ROS变化,分光光度计检测上清液中超氧化物歧化酶( superoxide dislutase,SOD)、谷胱甘肽过氧化物酶( glutathione peroxidase, GSH )活性及丙二醛( lalondialdehyde,MDA)的含量。
　　结果：番茄红素能明显抑制紫外线诱导的细胞活性的下降,减少紫外线所致HLEC内ROS的生成,引起HLEC内SOD和GSH-Px水平的升高及MDA水平的下降。
　　结论：番茄红素通过提高细胞内SOD和GSH-Px含量,降低细胞内MDA含量,发挥其较强的抗氧化作用,从而为其用于白内障防治提供可靠的实验依据。     

EGCG抗兔晶状体上皮细胞增殖机制中p38激酶作用的研究

目的:研究p38激酶在绿茶提取物中的表没食子儿茶素没食子酸酯[(-)-Epigallocatechin-3-gallate,EGCG]抗晶状体上皮细胞增殖机制中的作用。 方法:用噻唑蓝比色法(MTT比色法)研究p38的特异性抑制剂SB203580对EGCG抑制晶状体上皮细胞增殖作用的影响;用Western Blot法研究EGCG对p38激酶的磷酸化和非磷酸化水平的影响。 结果:(1)预先加入25μmol/L,50μmol/L的SB203580孵育1h后,100μmol/L EGCG对晶状体上皮细胞增殖的抑制率低于对照组,但这种差别没有统计学上的意义(P>0.05);200μmol/L EGCG组对晶状体上皮细胞的抑制率低于对照组,有统计学的意义(P<0.05);(2)在晶状体上皮细胞,磷酸化的p38基础水平很低。p38的磷酸化水平随EGCG浓度的增加逐渐增加,而非磷酸化的p38的水平与基础水平一样保持不变。以200μmol/L EGCG作用15min来研究其对p38的磷酸化和非磷酸化影响的时-效规律发现,加药后初期,p38的磷酸化水平很高,随后逐渐下降。同时,非磷酸化p38的水平保持不变。 结论:(1)EGCG对晶状体上皮细胞的增殖抑制作用可能通过p38通路;(2)EGCG对p38影响主要在于调节蛋白激酶的磷酸化与去磷酸化水平,不影响总蛋白含量。眼科学报 2003;19:236-238。     

阿司匹林对体外培养的人晶状体上皮细胞凋亡调节基因表达的影响

目的:研究阿司匹林(Asp)对培养的人晶状体上皮细胞(humanlens epithelial cells,hLEC)Bax,Bcl-2,caspase-3表达的影响。方法:人晶状体上皮细胞系SRA01/04传代培养,MTT比色法检测Asp对bFGF诱导的hLEC增殖的影响;Western-blot方法检测Asp作用1,3,6,12,24h后凋亡相关因子Bcl-2,Bax,caspses-3蛋白的表达。结果:Asp5mmol/L可明显抑制bFGF诱导的hLEC增殖(P<0.01),且抑制作用呈浓度依赖性。Western-blot结果显示,10mmol/LAsp作用1h后Bax蛋白表达增强,随着时间的延长,表达逐渐增加,6h达到高峰,24h后恢复至基础水平;而Bcl-2的表达与其相反,Asp作用1h后Bcl-2蛋白表达明显下降,6h降到最低点,然后有上升趋势。caspase-3的表达与Bax相似,Asp作用1h后caspase-3表达增加,6h达到高峰,持续24h仍有较高的表达。结论:凋亡因子Bcl-2,Bax,caspase-3参与了Asp诱导的人晶状体上皮细胞凋亡途径。Asp通过调节凋亡基因蛋白产物的表达,诱导hLEC的凋亡。     

bFGF对人晶状体上皮细胞中FAK表达的影响

目的:观察不同浓度碱性成纤维细胞生长因子(basic fibroblast growth factor,bFGF)引起体外培养的人晶状体上皮细胞迁移和黏着斑激酶(focal adhesion kinase,FAK)mRNA水平的动态变化.方法:体外培养的第3代人晶状体上皮细胞,建立细胞划痕损伤模型,经0,5,10,15μg/L bFGF作用8～16h后,电脑图像法测定细胞迁移距离,RT-PCR法检测0,1,4,8,16h FAK mRNA水平,免疫荧光法检测整合素β1和增殖细胞核抗原表达阳性率的变化.结果:与对照组比,5μg/L 组细胞迁移距离和FAK mRNA表达显著增加(P＜0.05):10μg/L 组细胞整合素β1表达阳性率显著增加(P＜0.05);15μg/L 细胞迁移距离和FAKmRNA显著降低(P＜0.05).结论:bFGF引起人晶状体上皮细胞迁移距离和FAK mRNA表达的变化.     

P38有丝分裂素激活蛋白激酶信号转导通路介导过氧化氢诱导的人晶状体上皮细胞中热休克蛋白27表达的研究

目的研究P38有丝分裂素激活蛋白激酶(MAPK)在H2O2诱导的人晶状体上皮细胞热休克蛋白质27(HSP27)表达中的作用。方法使用100和200μmol/LH2O2分别以不同时间刺激培养的人晶状体上皮细胞系B3,在阻断实验中加入特异性P38MAPK阻断剂SB203580阻断P38MAPK信号转导通路。采用逆转录聚合酶链反应检测刺激不同时间的人晶状体上皮细胞HSP27mRNA的表达情况,采用免疫印迹法(Westernblotting)检测细胞中HSP27和磷酸化P38MAPK的表达情况。结果(1)H2O2刺激后的人晶状体上皮细胞中HSP27mRNA及其蛋白的表达显著增加;(2)100和200μmol/LH2O2刺激30min,人晶状体上皮细胞应激活化蛋白激酶的活性(平均灰度值)分别增强至800±081和825±050,6h后恢复至基线水平(P<001);磷酸化P38MAPK的表达随H2O2浓度的增高而增加,且在H2O2刺激后15min达到峰值,随后逐渐下降;(3)加用特异性P38MAPK阻断剂SB203580预处理后,200μmol/LH2O2刺激6h的人晶状体上皮细胞HSP27表达(平均灰度值)从3600±082降至875±126,受到显著抑制(P<001)。结论P38MAPK信号转导途径参与H2O2诱导的人晶状体上皮细胞HSP27的表达。(中华眼科杂志,2005,414751)     

X射线对人晶状体上皮细胞增生的影响

目的研究X射线照射对人晶状体上皮细胞增生的影响.方法取对数增生状态的人晶状体上皮细胞,分别以50 cGy、100 cGy、200 cGy、300 cGy、400 cGy、500 cGy X射线照射,观察照射前后细胞形态学改变;MTT法测定X射线对细胞增生的影响;采用荧光标记、流式细胞仪测定增生相关基因PCNA的表达。结果200 cGy及以上剂量X线辐射可降低晶状体上皮细胞的增生活性,使细胞排列紊乱、固缩或脱壁;随着X线剂量的增加,各剂量组增生相关基因PCNA表达明显下降。结论200 cGy及以上剂量X射线可明显抑制晶状体上皮细胞的增生,抑制存在明显的剂量依赖关系,其作用机制可能与抑制PCNA表达有关。     

碱性成纤维细胞生长因子反义寡核苷酸及其脂质体对体外培养的大鼠晶状体上皮细胞增殖的抑制作用

目的 探讨碱性成纤维细胞生长因子(bFGF)反义寡核苷酸及其脂质体对大鼠晶状体上皮细胞(LEC)增殖的抑制作用。方法 体外培养大鼠LEC,细胞传代后分别加入bFGF反义和正义寡核苷酸及其脂质体,以营养液和无药脂质体为对照培养24 h后,用噻唑蓝(MTT)法测定细胞的增殖情况,用逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)法测定细胞bFGF mRNA的表达情况。结果 大鼠LEC原代培养24 h可见细胞生长,形态为多边形,培养2-3周细胞汇合成片;传代培养细胞可在1～2周汇合成片。MTT法测定显示,bFGF反义寡核苷酸组(Ⅰ组)、正义寡核苷酸组(Ⅱ组)及营养液组(Ⅴ组)的吸光度(A值)分别为0.138±0.074、0.325±0.097及0.370±0.079,Ⅰ组A值显著小于Ⅱ和Ⅴ组(P=0.024,0.005);bFGF反义寡核苷酸脂质体组(Ⅲ组)、正义寡核苷酸脂质体组(Ⅳ组)及无药脂质体组(Ⅵ组)的A值分别为0.128±0.032、0.258±0.120及0.348±0.017,Ⅲ组A值显著小于Ⅵ组(P=0.000)。RT-PCR法检测结果显示,以2μg总RNA为模板,循环30次,bFGF反义寡核苷酸、bFGF正义寡核苷酸及营养液的扩增产物的量分别为0.33、0.99及0.85μg;:bFGF反义寡核苷酸脂质体、bFGF正义寡核苷酸脂质体及无药脂质体的扩增产物的量分别为0.23、0.48及0.56μg。结论大鼠LEC可在体外培养;bFGF反义寡核苷酸及其脂质体可     

人原代晶体上皮细胞bFGF多肽和mRNA的表达

目的 为研究后发性白内障的发生机理,检测生长中人晶体上皮细胞（ＨＬＥＣｓ）自身是否表达碱性成纤维细胞生长因子（ｂＦＧＦ）。方法 体外培养人晶体上皮细胞,用免疫细胞化学和原位核酸分子杂交的方法,检测ＨＬＥＣｓ中ｂＦＧＦ多肽和其ｍＲＮＡ的表达。结果 用免疫细胞化学和原位核酸分子杂交方法,可检测到生长中的人晶体上皮细胞自身表达碱性成纤维细胞生长因子。结论 结合碱性成纤维细胞生长因子促进人晶体上皮细胞生长     

酪氨酸蛋白激酶在紫外线引起的人晶状体上皮细胞PGE2合成增加中的作用

目的:探讨酪氨酸蛋白激酶途径在紫外线引起的晶状体上皮细胞前列腺素E(2PGE2)合成增加过程中的作用。方法:体外培养人晶状体上皮细胞,分别用紫外线照射、吲哚美辛(indomethacin)、酪氨酸蛋白激酶抑制剂genistein处理,用酶联免疫法检测培养液中PGE2浓度的变化,用Westernblot和免疫组织化学染色法检测培养细胞酪氨酸蛋白激酶磷酸化水平的变化。结果:紫外线照射可以引起培养的人晶状体上皮细胞PGE2的合成明显增加(对照组1h200.0±24.8ng/g,2h253.7±45.7ng/g,4h279.1±21.6ng/g,6h255.6±43.8ng/g,UV组1h613.4±43.5ng/g,2h452.9±87.4ng/g,4h538.2±33.5ng/g,6h776.8±42.0ng/g,P<0.05);照射前给予吲哚美辛可以明显抑制由紫外线引起的PGE2升高(UV Indo组1h93.2±10.8ng/g,2h64.7±12.1ng/g,4h117.2±17.5ng/g,6h132.2±34.3ng/g,P<0.05);事先给予genistein处理也可以明显抑制由紫外线引起的PGE2升高(Gen UV组1h161.2±18.5ng/g,2h240.3±25.0ng/g,4h357.7±28.1ng/g,6h478.6±62.4ng/g,P<0.05)。紫外线照射可以使酪氨酸蛋白激酶磷酸化增强,并可以被genistein抑制。结论:紫外线引起的人晶状体上皮细胞PGE2合成增加可能由酪氨酸蛋白激酶途径诱导。     

碱性成纤维细胞生长因子作用于人晶状体上皮细胞系内Ca2+转导通路的初步研究

目的 初步探讨碱性成纤维细胞生长因子(bFGF)作用于人晶状体上皮细胞(LEC)系-B3(LEC-B3)内Ca^2 转导的途径。方法 人LEC-B3传代培养,在激光扫描共焦显微镜下于解冻后的第三代细胞中分别加入10μg／L bFGF、10mmol／L咖啡因、10mmol／L兰尼碱、50mmol／L普鲁卡因及0．5mmol／L金雀异黄素,通过观测细胞内相对荧光强度实时观察细胞内Ca^2 浓度的变化。结果 10μg/L bFGF在细胞外液含或无Ca^2 、Mg^2 的情况下,均可迅速引起人LEC-B3内Ca^2 浓度升高,且持续时间基本相同;而在细胞外液无Ca^2 和Mg^2 、含1mmol／L乙二醇双乙醚四乙酸时,人LEC-B3内Ca2^ 浓度更高。50mmol／L普鲁卡因和10mmol／L兰尼碱与10μg/L bFGF共同作用,人LEC-B3内Ca^2 浓度虽升高,但低于10μg/L bFGF单独作用的效果;10mmol／L咖啡因和0．5mmol／L金雀异黄素可明显降低追加的10μg/L bFGF升高人LEC-B3内Ca^2 浓度的作用,后者尤为明显。结论 bFGF主要通过激活络氨酸蛋白激酶信号转导途径引起人LEC-B3内Ca^2 浓度升高;肌醇1,4,5-三磷酸受体和兰尼碱受体通道发挥一定作用;Ca^2 主要来源于细胞内Ca^2 库释放。（中华眼科杂志,2004,40：832-835)