皮肤科学基础

991239 人类免疫缺陷病毒gag基因的单链构象多态性分析/范雪莉（四军大西京医院皮肤科）…//临床皮肤科杂志.-1998,27（6）.-349～351 艾滋病病例和人类免疫缺陷病毒感染者正在全球范围包括我国在内逐年上升,当进行基因疫苗研制时,首先应搞清当地的流行毒株是什么。采用PCR-单链构象多态性分析技术,对主要来自云南地区的26份经确证的阳性血清标本进行了结构分析,发现其中15份的gag基因片段呈现一致的单链构象,与异源双链分析的结果基本一致,从而初步确定这类毒株为当地流行的主要毒株,为以后的序列测定及基因型确定奠定基础。图1参9 （原文摘要）     

CRF01-AE基因亚型毒株在HIV传播及流行中的作用

目的研究HIV-1CRF01-AE亚型毒株与HIV传播及流行的关系,为预防控制艾滋病提供科学依据。方法分三个时段检测贵州省多地区190份HIV-1毒株样本,用套式PCR扩增其Env基因和测序分析,将实验结果与贵州省艾滋病流行现状进行相关分析。结果检出B,B',E,C亚型及CRF07-BC,CRF08-BC和CRF01-AE三种新的流行性重组亚型毒株,流行性重组亚型毒株是造成贵州省艾滋病流行的因素之一,其中CRF01-AE毒株与性传播、16～50岁年龄段高度相关。结论 CRF01-AE亚型毒株是贵州省艾滋病传播与流行的主要亚型毒株;16～50岁年龄段是CRF01-AE亚型毒株通过性传播艾滋病的主体人群;CRF01-AE亚型毒株引起的艾滋病流行,具有传播范围广、流行时间长、控制难度大等特点。     

贵州省HIV－1感染毒株膜蛋白基因序列测定及流行病学分析

目的 揭示贵州省 HIV－ 1感染毒株的亚型分布及其流行态势。方法 用巢式 PCR法扩增 HIV－ 1膜蛋白基因 (env)，并经序列分析。结果 核酸分离成功的 11份全血标本中， B亚型 7例， C、 E亚型各 2例； B亚型基因离散率为 3.21％± 1.4％，流行时间约 3年， E和 C亚型基因离散率为 1.65％和 0.98％，流行时间约 1年。结论 贵州省 HIV－ 1感染毒株亚型分布广泛，来源复杂，预示今后将以性传播途径为主，防治难度较大。     

陕西省HIV-1分子流行病学研究

目的研究陕西HIV-1流行亚型及相互关系,分析流行时间及传播途径,为陕西省HIV的预防、控制及感染者治疗提供有力的依据。方法用PCR对15份陕西HIV-1感染者外周血单核细胞(PBMCs)样本进行扩增,获得HIV-1 env基因的核酸片段,对其C2-V3及邻区350-450个核苷酸序列进行分析,所得结果与HIV国际标准株及周边省份流行株进行比较,分析共享序列及突变序列,制作系统树,计算离散率。结果 陕西流行的B、E、C亚型内基因离散率分别为3.0％,1.7％和2.3％。10个B亚型毒株与泰国、我国云南、新疆、河南和四川流行的B亚型代表株基因序列接近;2个C亚型毒株我国新疆流行的C亚型代表株接近;3个E亚型毒株与河南流行的E亚型代表株接近。结论 陕西HIV-1流行株主要为B、E、C亚型,三亚型毒株在陕西的流行时间分别在2.5～3年、2～2.5和1.5～2年之间,传播来源可能为国外或周边省份传入。     

青海省首次发现的2例HIV感染者HIV—1毒株的基因特征和亚型分析

目的：分析青海省首次发现的HIV感染者HIV－1毒株的基因特征及亚型。方法：从2例感染者外周静脉血淋巴细胞中提取前病毒DNA，使用套式PCR方法，扩增HIV的Env基因，对其Env C2-V3及邻近序列进行分析。结果：两个毒株与国际参考序列的Coon间的基因离散率最小为4．93％，而远离其它亚型，2个毒株间的基因离散率为1．35％，进一步的系统树分析显示，2个毒株与Ccon聚集在一起。结论：2个毒株均为C亚型，而且HIV－1毒株刚进入青海省且流行的时间不长。     

免疫缺陷性皮肤病

20 0 10 14 0　贵州省 HIV- 1感染毒株膜蛋白基因序列测定及流行病学分析 /雷世光 (贵州省皮研所 )…∥中华皮肤科杂志 .- 2 0 0 0 ,33( 3) .- 14 9～ 151为探索贵州省 H IV - 1感染毒株亚型分布及变异情况 ,分析其流行态势。对 2 0份确诊的 HIV - 1感染者血样 ,用巢式 PCR法扩增膜蛋白基因并作测序分析。核酸分离成功有排列结果仅有 11份 ,其中云南 B亚型4份 ,欧美 B亚型 3份 ,国际 E亚型 2份 ,国际 C亚型2份。结果显示贵州 H IV毒株来源广泛 ,分布复杂 ,主要通过性接触传播。输血和静脉吸毒方式传播的 B亚型可通过政策因素在短期…     

遗传性皮肤病

２００１０８６９一毛囊角化病家系中ＡＴＰ２Ａ２ 基因的突变／杨勇（北京大学一院皮肤科）…／／北京医科大学学报．－２０００，３２（５）．－４４７～４４９ 通过电镜、ＰＣＲ－单链构象多态性分析及ＤＮＡ测序对一毛囊角化病家系进行了检测，发现了其基因突变位点，并探讨该病的发病机制。结果：电镜检查示表皮基底细胞桥粒减少，张力微丝在核周凝聚。ＰＣＲ－单链构象多态性分析提示ＡＴＰＺＡＺ基因（编码肌浆网／内质网钙离子－ＡＴＰ酶２）第５外显子可能存在异常，ＤＮＡ测序证实了一种未见报道的新突变位点：第４４５位碱基由鸟…     

念珠菌对唑类药物耐药机理的探讨

文献报道念珠菌对唑类药物耐药机制有三，即膜通透性降低、靶酶改变及靶酶产生过多。本文对２６株分离自艾滋病患者的耐氟康唑白念珠菌及通过诱变获得的白念珠菌ＡＴＣＣ１４０５３五个氟康唑耐药突变菌落的耐药机制进行了初步探讨。根据唑类药物靶酶编码序列设计六对上下之间交叉重叠的引物，分六段（包括相当于调控序列所在部位）将目的基因扩增出来，采用Ｓｏｕｔｈｅｒｎ杂交、限制性片段多态性分析及聚合酶链反应－单链构象多态性分析等方法对所获目的片段进行了分析。结果排除了所有受试菌株因靶酶编码基因缺失而耐药的可能，单链构象多态性分析结果呈阳性，且耐药株之间也存在差异。故此，推测耐药性系因为靶酶编码序列多位点突变造成，这一点尚有待进一步证实。另外，本实验结果不能排除另两条耐药机理的存在     

肿瘤生长抑制基因ING1在基底细胞上皮瘤中的表达及突变分析

目的 研究肿瘤生长抑制基因ING1在基底细胞上皮瘤中是否存在过度表达及基因突变。方法 搜集了54份基底细胞上皮瘤标本，运用免疫组织化学染色，DNA单链构象多态性分析(SSCP)及DNA序列测定的方法研究ING1基因在基底细胞上皮瘤中的表达及突变情况。结果 免疫组化显示ING1基因在25％(6／24)基底细胞上皮瘤标本中过度表达。SSCP及DNA序列测定结果显示54例基底细胞上皮瘤标本中仅1例标本(1．8％)发生实质突变。突变发生在ING1基因编码区exon2，因而可能影响所有ING1异构体结构，并影响PHD锌指基序的功能。结论 ING1基因在基底细胞上皮瘤中无明显过度表达及突变。     

基底细胞癌p53基因缺失和突变检测

我们应用新近建立的基因突变检测技术聚合酶链反应－单链构象多态性，检测了１２例基底细胞癌（ＢＣＣ）和５例正常对照的石蜡包埋标本。发现ＢＣＣ ｐ５３基因丢失和突变率为４２％（５／１２），正常对照未见异常。其结果提示ｐ５３基因的异常改变可能是ＢＣＣ发生、发展的重要环节。     

2011-2012年海南地区淋球菌耐药性监测及基因分型研究

【摘要】 目的 探讨海南淋球菌耐药状态及耐药基因分型情况。 方法 用琼脂稀释法测定4种抗生素的最低抑菌浓度（MIC）,PCR方法鉴定四环素高度耐药菌株（TRNG）并进行TetM基因分型;用纸片酸度法测定β内酰胺酶（PPNG）,PCR方法鉴定β内酰胺酶质粒并进行TEM-1基因分型。 结果 2011—2012年共检测214株淋球菌,环丙沙星中度敏感率7.94 %（17/214）,耐药率为92.06%（197/214）;头孢曲松敏感率24.30%（52/214）,中度敏感率为75.70%（162/214）;未发现耐大观霉素的菌株。多重耐药情况：对四环素和青霉素耐药的菌株39株（18.22%）,对青霉素和环丙沙星耐药菌株66株（30.84%）,对四环素和环丙沙星耐药的菌株 91株（42.52%）,对四环素、青霉素和环丙沙星耐药的菌株 37株（17.29%）。检出TRNG 101株（47.20%）,TetM基因分型结果99株（98.02%）荷兰型, 2 株（1.98%）美国型。检出PPNG 65株（30.37%）,TEM-1基因分型结果55株（84.62%）亚州型,10株（15.38%）非州型,未见多伦多型、里约型。 结论 海南省淋球菌对大观霉素敏感率高,应作为治疗淋病的首选药物;多重耐药菌株应引起重视。PPNG以亚州型为主,非州型次之;TRNG以荷兰型为主,偶见美国型。     

Isolation of human immunodeficiency virus type 1 from human epidermis: virus replication and transmission studies.

For a better understanding of the pathogenetic events operative in the cutaneous manifestations of human immunodeficiency virus type 1 (HIV-1) disease, we investigated whether epidermal cells (EC) from HIV-1-seronegative persons can be infected with HIV-1 and, vice versa, whether HIV-1 can be rescued from the epidermis of HIV-1-infected individuals. In a series of three experiments, we consistently found that exposure of EC from HIV-1-seronegative donors to HIV-1 led to viral replication in these cells as evidenced by the detection of HIV-1 p24 in culture fluids. Because EC had been substantially enriched for Langerhans cells (LC) before being exposed to HIV-1, it is reasonable to assume that these CD1a+/CD4+/MHC class II+ antigen-presenting cells of the epidermis represented the actual targets of infection. This assumption is further strengthened by the observation that T cell-depleted cell suspensions from Langerhans cell histiocytosis (LCH) lesions could be productively infected with HIV-1. Conversely, co-culture of epidermal sheets from HIV-1-seropositive individuals with mononuclear phagocytes (MNP) from HIV-1-seronegative donors resulted, after 3 to 5 weeks, in the detection of HIV-1 p24 in 12 of 23 cases. Immunocytochemical analysis, using a monoclonal antibody specific for p24, revealed the presence of HIV-1 in adherent MNP in three cocultures tested. In addition, cellular DNA from these cultures showed strong signals when hybridized to a HIV-1-specific DNA probe. The further finding that two isolates examined exhibited different restriction enzyme patterns indicates that they are separate entities rather than contaminants. Transmission of these isolates to MNP, B- or T-cell lines resulted in cultures strongly positive for p24 and, in the case of H9 cells, for viral particles as detected by electron microscopy. Our results therefore strongly suggest that EC not only can serve as targets for HIV-1, but also can allow efficient virus replication and transmit HIV-1 to various cell types of the hematopoietic lineage.     

The novel tumour suppressor gene ING1 is overexpressed in human melanoma cell lines

BACKGROUND: Epidemiological evidence indicates that exposure to ultraviolet (UV) radiation is directly linked to the increase of both incidence and mortality of melanoma. However, the genetic changes caused by UV radiation that lead to melanoma formation remain poorly understood. Recently, a potential tumour suppressor gene ING1 (inhibitor of growth 1) was shown to inhibit cell growth and induce apoptosis in the presence of p53. We have demonstrated that the expression of ING1 is induced after UV irradiation and that ING1 enhances the repair of UV-damaged DNA. OBJECTIVES: To investigate if ING1 plays a role in melanoma formation. METHODS: We examined p33ING1 expression levels in 14 melanoma cell lines. RESULTS: We found that p33ING1 is overexpressed at both mRNA and protein levels in melanoma cell lines compared with normal melanocytes. Single-strand conformation polymorphism (SSCP) analysis showed band shifting in two melanoma cell lines. DNA sequencing confirmed that there were nucleotide alterations in the ING1 gene in Sk-mel-24 and Sk-mel-110 cell lines. Two silent nucleotide alterations in exon 1a were detected in Sk-mel-110. In Sk-mel-24, the A-->G nucleotide alteration at codon 260 resulted in an amino acid change from Asn to Ser, while seven other nucleotide alterations were silent. To determine if the silent nucleotide alterations in these two melanoma cell lines were due to polymorphism, SSCP analysis of ING1 gene was performed in 25 healthy volunteers. No band shift was observed in the SSCP analysis, suggesting that the nucleotide alterations in the melanoma cell lines are unlikely to be due to polymorphism. CONCLUSIONS: Taken together, our data demonstrate that ING1 is overexpressed, but infrequently mutated, in melanoma cell lines.     

白念珠菌菌丝相和酵母相ERG11基因部分序列差异性的探讨

目的 研究白念珠菌菌丝相和酵母相细胞ERG11基因碱基序列上的差异，探讨两相细胞之间的差异性。方法 分别抽提从同—HIV阳性患者体内分离到的7株对氟康唑敏感程度不同的白念珠菌菌丝相和酵母相的DNA，此系白念珠菌经染色体水平及DNA水平证实来源于同一亲本。根据ERG11编码序列设计一对引物，对ERG11的近3’端的310bp的碱基序列进行PCR扩增，引物序列为：上游引物5’-GGGAAAGTTTCTAAAGGGG-3’：下游引物5’-TATGrITAATCCAACTAAGTAA-3’。经PCR产物直接测序比较两相细胞ERG11基因碱基序列上的差异。结果 1株氟康唑剂量依赖性敏感和2株氟康唑耐药白念珠菌的菌丝相与酵母相细胞间均出现ERG11基因1547位点、1587位点和1617位点的不一致。结论 白念珠菌的菌丝相和酵母相ERG11基因的部分序列存在差异。     

人恶性黑素瘤细胞株A375中色素上皮衍生因子基因的突变

目的 探讨色素上皮衍生因子（PEDF）基因在恶性黑素瘤细胞系中的突变情况。方法 采用聚合酶链反应--单链构象多态性分析（PCR-SSCP）对人恶性黑素瘤细胞株A375和正常人黑素细胞中PEDF基因的所有8个外显子进行突变检测。对SSCP分析有异常泳动条带样本的PCR产物进行DNA 测序。结果 人恶性黑素瘤细胞株A375的第3到第7外显子都出现DNA泳动变位,其中以外显子5,6最为明显。PEDF基因第5,6外显子均存在突变。第5外显子的突变类型以单个碱基的缺失为主,第6外显子的突变类型则以单个碱基的置换为主。结论 PEDF基因的突变可能在恶性黑素瘤的发病中起一定作用。     

艾滋病患者白念珠菌ERG11基因突变的研究

目的 探讨艾滋病患者的白念珠菌唑类耐药株中唑类抗真菌药物(氟康唑、伊曲康唑、伏立康唑)的作用靶位基因ERG 11基因突变与耐药的关系.方法 用PCR对临床分离的93株白念珠菌的Erg11基因进行扩增、测序,DNAman软件将测序结果与基因库中的X13296进行比对,将突变碱基翻译为氨基酸,确定是否发生错义突变.结果 共检出40个碱基突变位点,包括27个同义突变位点和13个错义突变位点.耐一种药物的突变菌株中每株菌只发生一处错义突变或无错义突变,而耐二种或三种药物的菌株中每株菌还可以同时出现两处或三处错义突变.结论 ERG 11基因错义突变与白念珠菌耐药有关.     

Detection of a peripheral blood T cell clone is an independent prognostic marker in mycosis fungoides

T cell receptor gene analysis is a sensitive method for assessment of peripheral blood involvement in mycosis fungoides. This study uses polymerase chain reaction/single-strand conformational polymorphism (PCR/SSCP) analysis of the T cell receptor gamma gene and relates the results to skin stage and outcome in mycosis fungoides. Seventy-five peripheral blood samples from 66 patients were obtained from 1990 onwards and subjected to PCR/SSCP. Both Southern blot analysis and PCR/SSCP analysis were performed on 63 samples from 56 patients. Fourteen patients had T1 disease (12 IA, two IIA), 20 T2 (14 IB, five IIA, one IVA), 29 T3 (24 IIB, two IVA, three IVB, two patients tested at both T2 and T3), and five T4 (all III). The percentage of positive samples was higher with PCR/SSCP than with Southern blot analysis (29 of 63 vs eight of 63 samples, p < 0.001), and the percentage of positive samples increased with each stage (21% at T1, 35% at T2, 58% at T3, and 71% at T4). Proportional hazards analysis corrected for age, skin, and lymph node stage showed that the presence of a peripheral blood clone is associated with a worse outcome (p = 0.03, CI 1.1-6.03). These results indicate that the presence of a peripheral blood clone is an independent prognostic variable in patients with mycosis fungoides after correcting for age, skin, and lymph node stage, and that peripheral blood involvement is present in a large proportion of patients with early stage mycosis fungoides. Keywords: polymerase chain reaction/single-strand conformational polymorphism/T cell receptor gene rearrangement. J Invest Dermatol 114:117-121, 2000     

HIV-1与HIV-2交叉反应毒株的基因亚型分析

目的分析HIV-1+2蛋白印迹试验中HIV-1确证阳性同时出现HIV-2带型样本的基因亚型。方法将HIV-1+2确证试验中同时出现HIV-2带型的样本,通过基因诊断确认是否为HIV-2共感染;同时扩增HIV-1 gag,env基因段,通过测序和系统进化树的构建,分析具有HIV-2带型的HIV-1毒株的基因亚型。结果在34份出现HIV-2带型的标本中,基因诊断发现均为交叉反应,并非HIV-1和HIV-2共感染。出现交叉反应的毒株中以AE亚型为主,占73.5%(25/34),BC重组和B亚型分别占17.7%(6/34)和8.8%(3/34)。结论HIV-1+2蛋白确证试验中HIV-1确证阳性,同时出现HIV-2带型的阳性样本,并非HIV-1和HIV-2共感染,而是交叉反应。出现交叉反应的HIV-1毒株以AE亚型为主。     

HIV亚型分析基因芯片的制备及应用

目的　建立新的HIV亚型分析方法 ,并检测其特异性及敏感性。方法　HIV 111个亚型及HIV 2的env基因C2 V3区一段核苷酸序列 ,用芯片点样机点样于经预处理的玻片 ,制备成HIV亚型分析基因芯片 ,并用其对 15份HIV阳性样本进行亚型分析 ,所得结果与目前常用HIV亚型分析方法 基因序列分析法所得结果进行比较。结果　制备的基因芯片对 15份HIV阳性样本检测结果为 :样本 0 1、0 2、0 3、0 5、0 8、0 9、11、12、13、15为HIV 1B亚型 ;0 6、0 7为HIV 1C亚型 ;0 4、10、14为HIV 1E亚型。结论　制备的基因芯片亚型分析结果与基因序列分析法所得结果完全符合 ,敏感性高、特异性好 ,并且具有操作简单、省时、价廉等特点 ,有望推广应用。