高磷对大鼠血管平滑肌细胞钙化及核心结合因子α1表达的影响

[目的]研究高磷对体外培养大鼠血管平滑肌细胞(VSMC)钙沉积以及核心结合因子α1 (Cbfα1)的影响.[方法] 体外培养大鼠主动脉平滑肌细胞,根据培养基中磷浓度分为:正常磷浓度(磷浓度1.4 mmol/L)和高磷浓度(磷浓度2.4 mmol/L)组,培养第3 d、6 d、9 d后,BCA法检测细胞内钙含量,放射免疫方法检测培养液骨钙素含量,ELISA检测细胞Cbfα1与DNA结合活性.[结果] 正常磷浓度组VSMCs钙含量在9 d内无明显变化.高磷浓度组第3、6、9天细胞钙含量比第0天明显增高(P<0.01).高磷浓度组细胞钙含量在第3、6、9天均明显高于相同时间点正常磷浓度组(P<0.05).培养3 d后,高磷浓度组培养上清液骨钙素水平明显高于正常磷浓度组,(14.62±2.93)pg/μg蛋白vs (2.83±0.64)pg/μg蛋白,P<0.01.Cbfα1活性在正常磷浓度组细胞9 d内无明显变化;但在高磷浓度组6、9天与第0天比明显增强(P<0.05).高磷浓度组在第6、9天细胞Cbfα1活性与相同时间点正常磷浓度组比明显增强(P<0.05).[结论] 高磷可直接刺激大鼠VSMC的钙沉积和骨钙素产生,其作用可能与高磷上调VSMC的Cbfα1表达有关.     

脂质体携载精氨酸对大鼠钙化血管精氨酸/NO途径的影响

目的:观察钙化血管精氨酸/NO途径的改变和脂质体携载精氨酸对血管钙化及精氨酸/NO途径的影响。方法:维生素D3注射制备大鼠血管钙化模型,检测血管钙含量、血浆精氨酸和亚硝酸盐含量、血管环磷酸鸟苷(cGMP)含量、血管一氧化氮合酶(NOS)活性及血管精氨酸水平。结果:钙化组大鼠血管钙含量较对照组升高7.5倍(P<0.01),血浆NO生成减少,血管cGMP水平降低,血管NOS活性增高(P<0.01),但精氨酸含量明显减少(-19.1%,P<0.01)。脂质体携载精氨酸治疗后血管钙含量较钙化组降低51.2%(P<0.01),血浆NO生成增加,血管cGMP含量增加5.1%(P均<0.05),血管精氨酸含量增加15.7%(P<0.05)。结论:给予脂质体携载精氨酸治疗可以减轻大鼠的血管钙化程度,改善钙化血管L-Arg/NOS/NO/cGMP途径紊乱,提示脂质体携载精氨酸对防治动脉粥样硬化等疾病的血管钙化可能具有潜在临床意义。     

左旋精氨酸对大鼠心脏移植模型移植物血管病变的抑制作用

目的研究左旋精氨酸对心脏移植物血管病变的抑制作用及其机制.方法采用大鼠异位心脏移植模型.对照组26只,移植后不用左旋精氨酸;实验组21只,移植后按每天800mg/kg将左旋精氨酸加入饮水中.于移植后2个月和3个月检测各组的心脏移植物血管病变评分和血浆一氧化氮含量.结果移植后2个月,实验组的移植物存活率为90.5%,显著高于对照组的61.5%(P<0.05).移植后2个月和3个月,实验组血浆一氧化氮均显著高于对照组,分别为(105.37±10.66)μmol/L vs (68.54±6.83)μmol/L(P<0.05),和(104.53±12.31)μmol/L vs (66.32±10.54)μmol/L(P<0.05);而对照组心脏移植物血管病变评分显著高于实验组,分别为2.4±0.7 vs 1.1±0.6(P<0.05),和3.0±0.8 vs 1.6±0.9(P<0.05).实验组心脏移植物的冠状动脉内膜病变轻微,内皮和内弹力层基本保持完整,平滑肌细胞增殖不明显.结论补充左旋精氨酸可改善心脏移植物血管病变,其机制与一氧化氮合成增加有关.一氧化氮具有保护内皮功能,抑制平滑肌细胞增殖的作用.     

L-精氨酸对肾性高血压大鼠主动脉肥厚的影响

目的 探讨一氧化氮前体L-精氨酸对肾血管性高血压大鼠主动脉肥厚的影响。方法 采用两肾一夹Glodblatt肾血管性高血压大鼠模型。所有大鼠被随机分为4组（每组10只）：假手术对照组，高血压对照组，L-精氨酸治疗组（于术后第5周开始每天给予L-精氨酸200mg／kg），L-NAME处理组（于术后第5周开始每天同时给予L-NAME10mg／kg及L-精氨酸200mg／kg）。采用标准尾套法间接检测清醒大鼠血压。给药8周后，处死大鼠，分离胸主动脉用于检测主动脉重／体重比、胸主动脉中膜厚度及中膜截面积（应用石蜡切片的彩色图像分析技术）。结果 L-精氨酸治疗明显抑制了肾动脉狭窄术后的血压升高，减小了主动脉重／体重比、主动脉中膜厚度及中膜截面积。L-NAME明显抑制了L-精氨酸的上述作用。结论 长疗程L-精氨酸治疗在抗高血压的同时也具有抑制主动脉肥厚的作用。     

左旋精氨酸对大鼠自体移植静脉内膜增生的影响

目的　观察左旋精氨酸 (L Arg)对大鼠自体移植静脉内膜增生的影响 ,探讨其作用机制。方法　建立大鼠自体静脉移植模型。分L Arg组和对照组。L Arg组于术前 7天开始用L Arg灌胃 (每天 1.0g kg)直至取材 ;对照组用等量生理盐水灌胃 ,于术后 1、2、4、6周及 8周取材。观测新生内膜与中膜面积比 (I M)、细胞间黏附分子 (ICAM 1)及细胞周期素A(CyclinA)的表达。结果　术后 2、4、6周及 8周I ML Arg组均显著低于对照组 (P <0 .0 1) ,术后不同时相ICAM 1及CyclinA表达水平较术前正常静脉均有明显增加 ,L Arg组ICAM 1及CyclinA蛋白阳性细胞百分比显著低于对照组 (P <0 .0 1)。结论　L Arg可以抑制移植静脉内膜增生病变 ,其机制与增加一氧化氮释放 ,减少单核细胞与内皮细胞的黏附 ,抑制血管平滑肌细胞增殖有关。     

血管紧张素-(1-7)对人脐静脉平滑肌细胞钙化的影响及其机制研究

目的复制人脐静脉平滑肌细胞(HUSMCs)钙化模型,观察血管紧张素-(1-7)[Ang-(1-7)]对HUSMCs钙沉积的影响,探索Ang-(1-7)延缓或抑制HUSMCs钙化的机制。方法采用β-甘油磷酸盐(β-GP)复制HUSMCs钙沉积模型,Ang-(1-7)干预后,对细胞进行Von Kossa染色及图像分析、检测碱性磷酸酶(ALP)活性和细胞钙含量;检测细胞培养液中转化生长因子β1(TGFβ1)活性、骨钙素(OC)含量及细胞中核心结合因子1(Cbfα1)蛋白表达。结果 Ang-(1-7)可明显减轻钙化HUSMCs聚集生长,Von Kossa染色显示细胞聚集处棕褐色钙结节较钙化组明显减轻(P<0.01),且10-5、10-7、10-9mol.L-1Ang-(1-7)与钙化组相比钙化细胞百分比、细胞钙含量和ALP活性均明显降低(P均<0.01),细胞TGFβ1分泌水平、Cbfα1表达、骨钙素含量均较钙化组降低(P均<0.01)。结论 Ang-(1-7)可减轻HUSMCs钙化程度,其作用机制与减弱TGFβ1-Smads-Cbfα1信号通路中关键信号分子TGFβ1、Cbfα1的表达有关。     

左旋精氨酸对急性心肌缺血大鼠L-及P-选择素表达的影响

目的：探讨NO的前体左旋精氨酸（L-arg)对急性心肌缺血（AMI）大鼠心血肌有无保护作用及其作用机制,方法：采用垂体后叶素（Pit)性急性心肌缺血模型,建立正常对照组,阳性对照组,及L－arg治疗组,观察中性粒细胞（PMN）表面L－选择素及心肌微血管内皮细胞表面P－选择素的表达,并测定心肌梗死面积,PMN浸润数及血浆NO,MDA的浓度,结果：阳性对照组与正常对照组相比,其L－选择素及P－选择素表达上调,心肌PMN浸润数,血浆MDA的浓度明显升高,血浆NO的浓度降低,L－arg治疗组上述指标改变的程度明显轻于阳性对照组（P＜0．01）,心肌梗死范围小于阳性对照组,结论：外源性L－arg对急性心肌缺血有防治意义,其作用的机制与NO抑制选择素的表达有关。     

左旋-精氨酸对糖尿病肾病鼠的影响

目的 :了解左旋 精氨酸 (L arginine)对糖尿病 (DM )鼠肾脏的影响并初步探讨其机制。方法 :将实验大鼠分 3组 ,正常对照组 (A组 ) 8只 ;DM组 (B组 ) 8只 ;DM 4周后 +0 .5 %L arginine组 (C组 ) 8只。观察 8周。结果 :第 1周末开始 ,B、C组Ccr和UAE较A组明显升高 ,B、C组之间无显著差异 ;尿NO-2 /NO-3 第 1,2周B、C较A组明显升高 ,B、C组之间无显著差异 ,第 8周B、C组较A组降低 ,但C组较B组升高。第 8周末肾脏病理变化为 ,B组肾小球系膜区增宽 ,肾小球毛细血管基底膜弥漫性增厚 ,系膜及基质PAS阳性物增多 ,但C组上述变化明显较B组轻。ABC染色Laminin阳性物可见B组肾小球系膜区弥漫性增宽 ,肾小管基底膜阳性物呈宽带状沉积 ,而C组肾小球系膜区稍宽 ,肾小管基底膜阳性物呈线状沉积 ,χ2 检验P <0 .0 5。B、C组肾皮质NO-2 /NO-3 与PAS阳性物灰度值呈直线正相关。结论 :糖尿病肾病进程中内源性NO表现为初期的升高到发展中的下降趋势。内源性NO生成增多是导致糖尿病肾病早期肾小球高灌注、高滤过的重要原因之一 ,在糖尿病肾病发展中补充小剂量L arginine能减轻肾小球基底膜的增厚和基质的增生 ,延缓肾小球硬化 ,对肾脏起保护作用。     

侧脑室微量注射左旋精氨酸对大鼠痛阈的影响

实验采用辐射热作为伤害性刺激，以浅麻状态大鼠甩尾潜伏期为痛阈指标，观察了侧脑室微量注入不同浓度的左旋精氨酸对大鼠痛阈的影响。结果表明，在旋精氨酸从１．２５ｍｍｏｌ／Ｌ（８μｌ）至１００ｍｍｏｌ／Ｌ均使大鼠甩尾潜伏期有显意义的降低；在２０ｍｍｏｌ／Ｌ时７分钟降低达到高峰（２６．８４％）；１００ｍｍｏｌ／Ｌ时提前至２分钟（２３．０９％）。以上结果提示，左旋精氨酸在高位中枢对伤害性刺激有易化作用，这种     

L-精氨酸对哮喘大鼠一氧化氮水平的影响

目的：观察实验性哮喘大鼠一氧化氮合酗一氧化氮系统的改变，以探讨NO的生成机制。方法：用卵蛋白致敏并激发建立了SD大鼠哮喘模型，32只大鼠随机分为4组，每组8只，为正常对照A组、卵蛋白激发哮喘发作B组、L-精氨酸对照C组、L-精氨酸＋卵蛋白刺激D组，用铬粒还原法测定血浆中硝酸盐水平，免疫组化观察iNOS的表达情况。结果：正常大鼠各级支气管、肺泡管、肺泡囊上皮细胞均呈iNOS阳性反应，气道上皮下平滑肌呈iNOS阴性反应；哮喘大鼠各级支气管、肺泡管及肺泡囊上皮细胞呈iNOS强阳性反应，气道上皮下平滑肌呈iNOS阳性反应，且浸润的炎细胞也呈强阳性表达；L-精氨酸对照组大鼠各级支气管、肺泡管、肺泡囊上皮细胞均呈iNOS阳性反应，气道上皮下平滑肌呈iNOS弱阳性反应；L-精氨酸＋卵蛋白激发组大鼠各级支气管、肺泡管、肺泡囊上皮细胞均呈iNOS阳性反应，气道上皮下平滑肌呈iNOS阳性反应。与A组相比，B组大鼠SOD活性明显下降（P〈0．01），MDA水平明显增高（P〈0．01），B、D组大鼠N03．水平明显增高（P〈0．05），C组与A组比较没有明显变化。结论：L-精氨酸对哮喘大鼠NOS／NO的产生具有调节作用。     

复方丹参滴丸对动脉钙化组织中骨保护蛋白表达的影响

目的研究复方丹参滴丸(DSP)对钙化血管骨保护蛋白(OPG)表达的干预作用。方法28只SD大鼠随机分为对照组、维生素D3(V itD3)组和V itD3+DSP组(15粒.kg-1.d-1)。病理学检查V itD3诱导的血管钙化情况,电极法和自动生化仪酶法分别测定血管壁和骨组织钙含量,免疫组化检测钙化组织中OPG表达。结果病理学观察显示,成功建立V it D3诱发的血管钙化模型。与对照组比较,V it D3组血管壁钙含量和OPG表达明显增加,而骨组织钙含量明显减少;与V it D3组比较,V it D3+DSP组血管壁钙含量和OPG表达明显减少,而骨组织钙含量明显增加。结论提示DSP通过减少大鼠动脉钙化组织中OPG的表达,有效抑制血管钙化。     

体外培养中川芎嗪对大鼠血管平滑肌细胞血管细胞粘附分子-1表达的影响

目的　观察川芎嗪对血管平滑肌细胞 (VSMC)表达血管细胞粘附分子 1(VCAM 1)的影响。方法　在建立血管紧张素Ⅱ (AngⅡ )诱导的VSMC表达粘附分子模型的基础上 ,将培养的细胞分为 3组 :正常对照组、AngⅡ刺激组、川芎嗪治疗组。分别在 6、 12、 2 4h 3个时段 ,利用免疫细胞化学技术和原位杂交技术检测各组细胞中VCAM 1的蛋白表达及mRNA转录水平。结果　①各时段正常对照组即有VCAM 1的基础表达 ;②与正常对照组比较 ,AngⅡ能够明显诱导VCAM 1的表达 ,而且其诱导作用在 6h即已出现 (P <0 0 5 ) ,12h表达增强 (P <0 0 1) ,2 4h有所回降 (P <0 0 5 ) ;③川芎嗪在各个时段均能抑制VCAM 1蛋白和mRNA的转录水平 (P <0 0 5 )。结论　AngⅡ能够明显诱导VSMC中VCAM 1的表达 ,而川芎嗪能够通过抑制VSMC中VCAM 1的表达从而延缓早期动脉粥样硬化的病变进展     

双特异性磷酸酶1通过视神经萎缩蛋白1抑制血管平滑肌细胞钙化

目的 研究双特异性磷酸酶1(DUSP1)/视神经萎缩蛋白1(OPA1)信号通路对血管平滑肌细胞钙化的作用。方法 采用体外血管钙化模型,β磷酸甘油和氯化钙诱导大鼠主动脉血管平滑肌细胞钙化,茜素红S染色检测细胞钙化,ELISA测定钙含量,TUNEL检测细胞凋亡,Western blot测定DUSP1、OPA1、Runt相关转录因子2(Runx-2)、骨形态发生蛋白2(BMP-2)和半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶3(Caspase-3)蛋白表达水平。采用细胞转染的方法过表达DUSP1和敲减OPA1表达,观察细胞钙化、钙含量、细胞凋亡率和Runx-2、BMP-2、Caspase-3表达水平。结果 β磷酸甘油和氯化钙诱导血管平滑肌细胞钙化模型中,DUSP1(t=11.951,P<0.001)、OPA1(t=8.487,P<0.001)蛋白表达水平均显著下降。过表达DUSP1能促进OPA1蛋白表达(t=-8.921,P<0.001),减轻血管平滑肌细胞钙化,降低细胞钙含量、细胞凋亡率以及Runx-2、BMP-2、活化的Caspase-3的表达(P均<0.001);而敲减OPA1表达能促进血管平滑肌细胞钙化,增加细胞钙含量、细胞凋亡率以及Runx-2、BMP-2、活化的Caspase-3的表达(P均<0.001)。结论 DUSP1可能通过促进OPA1蛋白表达起到抑制血管平滑肌细胞钙化的作用。     

氧化苦参碱对大鼠血管平滑肌细胞钙化抑制作用的研究

目的 观察氧化苦参碱(Oxymatrine, OMT)对血管钙化的影响,探讨血管钙化的发生机制.方法 以a-甘油磷酸盐诱导大鼠主动脉平滑肌细胞(VSMCs)钙化,OMT干预.采用磷酸苯二钠法测定碱性磷酸酶(ALP)活性,Von Kossa染色鉴定细胞钙化,比色法测定细胞钙含量,硫代巴比妥酸法测定细胞丙二醛(MDA)含量.结果 a-甘油磷酸盐可诱导VSMCs发生钙化,钙化组细胞总钙含量、ALP活性和丙二醛含量明显增高,OMT呈浓度依赖性地降低细胞总钙含量、ALP活性和丙二醛含量,VSMCs的钙化程度亦明显减轻.结论 OMT能有效抑制a-甘油磷酸盐诱导的大鼠主动脉VSMCs钙化,其机制可能与减轻细胞的氧化损伤有关.     

血管内皮细胞生长因子及其受体在大鼠肺气肿模型中的表达

目的　探讨血管内皮细胞生长因子 (VEGF)及其受体 2 (VEGFR 2 )在大鼠肺气肿模型中的表达及意义。方法　经气管内注入脂多糖及熏香烟法建立大鼠肺气肿模型。免疫组化法检测VEGF在肺组织的表达部位 ,ELISA法检测支气管肺泡灌洗液 (BALF)中VEGF的含量 ,Westernblot检测VEGFR 2蛋白的表达。结果　VEGF在肺泡上皮细胞、支气管粘膜上皮细胞及血管内皮细胞表达 ,模型组BALF的VEGF含量 (110 2± 4 6 0 .1)pg/mL较对照组 (2 0 17± 84 0 .6 ) pg/mL明显降低 (P <0 .0 5 ) ;模型组VEGFR 2蛋白的表达低于对照组 (P <0 .0 5 )。结论　VEGF及VEGFR 2的减少可能参与了肺气肿的发生     

绿茶对实验大鼠血管钙化的影响

目的观察饮用绿茶对大鼠血管钙化的影响及其可能机制。方法用肌注维生素D3和灌胃尼古丁诱导大鼠血管钙化模型。实验分为对照组、钙化组、低剂量和高剂量绿茶干预组。Von Kossa染色,原子吸收分光光度法测定钙含量,放射免疫分析法测定血浆、血管骨钙素(osteocalcin,OC)、血管紧张素Ⅱ(angiotensin II,AngⅡ)及碱性磷酸酶(alkaline phosphatase,ALP)活性。结果钙化组大鼠血管染色见平滑肌细胞内和细胞间基质有大量黑色颗粒聚集;与对照组相比,主动脉钙含量、ALP活性、OC和AngⅡ含量均有明显增加;采用50g/L和100 g/L绿茶防治大鼠均可抑制血管钙化,且高剂量时效应强于低剂量;与钙化组相比较,血管组织钙化指标均下降,而主动脉AngⅡ含量亦有减少。结论饮用绿茶可能部分通过拮抗血浆和血管组织局部的AngⅡ系统效应而产生抑制大鼠血管组织钙化的作用。     

血管钙化大鼠肾动脉BMP2/Smad1/Runx2信号通路的表达

目的 观察血管钙化大鼠模型肾动脉上骨形态蛋白2（BMP2）/Smad1/Runt相关转录因子2（Runx2）信号通路的表达及其变化规律,探讨BMP2/Smad1/Runx2信号通路激活在肾动脉钙化中的作用。方法 将24只雄性SD大鼠随机分为对照组和钙化组,钙化组建立维生素D3和尼古丁诱导的大鼠血管钙化模型,对照组给予生理盐水和花生油。6周后采用Von Kossa染色检测肾动脉钙化程度,钙离子试剂盒测定大鼠肾动脉钙含量,实时荧光定量PCR检测肾动脉组织中BMP2、Smad1、Runx2 mRNA水平,免疫组化法观察BMP2、Smad1、Runx2及α-平滑肌肌动蛋白（α-SMA）的表达。结果 Von Kossa染色见钙化组大鼠肾动脉有大量黑色颗粒沉淀。钙化组血管钙含量高于对照组（ P<0.05)。与对照组相比,钙化组大鼠肾动脉组织BMP2、Smad1、Runx2 mRNA的水平升高（P<0.05),BMP2/Smad1/Runx2信号通路蛋白在肾动脉的表达亦同步上调,而α-SMA的表达较对照组下降（P<0.05)。相关分析表明,大鼠肾血管钙含量与肾动脉组织BMP2 mRNA（r =0.655, P<0.05)、Smad1 mRNA (r =0.735, P<0.05)、Runx2 mRNA ( r=0.734, P<0.05)均呈正相关。结论 BMP2/Smad1/Runx2通路的表达变化与肾动脉钙化的严重程度相关,提示BMP2/Smad1/Runx2信号通路参与了肾动脉钙化的发生发展。     

高糖刺激血管平滑肌细胞表达cbfα-1和OC的实验研究

目的 研究高糖在刺激大鼠胸主动脉血管平滑肌细胞(VSMC)转分化过程中对相关骨基质蛋白如核心结合因子α-1(cbfα-1)和骨钙索(OC)表达的影响,并探讨高糖在诱导血管钙化发生过程中可能的作用机制.方法 原代培养VSMC,分为正常糖浓度组(5 mmol/L D-葡萄塘)、高糖组(25 mmol/L D-葡萄糖)和甘露醇组(5mmol/L D-葡萄糖+25 mmol/L甘露醇),在不同时间点检测各组VSMC的钙沉积指标;茜素红染色了解各组VSMC钙化程度;实时荧光定量PCR法和免疫印迹法检测各组cbfα-1和OC的mRMA水平和蛋白表达变化;碱性磷酸酶活性检测试剂盒检测碱性磷酸酶(ALP)的活性.免疫组化检测α-平滑肌肌动蛋白(α-SMA)水平.结果 与正常糖浓度和甘露醇对照组相比较,高糖组VSMC钙沉积和钙化染色均明显增强,cbfα-1和OC的mRNA和蛋白表达均升高(P<0.05),α-SMA蛋白表达下降(P<0.05),均呈时间依赖性.高糖刺激后VSMC的ALP的活性比对照组增加了近2倍.结论 高糖介导的平滑肌细胞钙化可能与高糖促进VSMC分泌骨基质蛋白cbfα-1和OC水平增加有关;高糖在促进VSMC钙化同时,使VSMC的α-SMA表达水平降低,促进其向成骨样细胞转分化.     

终末期肾病患者炎性因子与血管钙化研究进展

血管钙化是终末期肾病患者死于心血管疾病的主要病理学变化,是预测患者死亡的独立危险因素。终末期肾病患者由于机体免疫功能异常,以及高容量负荷、代谢性酸中毒、贫血、氧自由基损伤、新近认识的尿毒症毒素（如：高同型半胱氨酸血症、氧化低密度脂蛋白、晚期糖基化终末产物及其修饰的蛋白质、晚期氧化蛋白产物）等促进炎症发展的危险因素存在,造成终末期肾病患者体内存在微炎症状态。这种异常的免疫性炎症可以造成体内营养不良-炎症-动脉粥样硬化。同时,血管壁的炎性因子作为炎症和氧化应激的始动因子或产物,也可加速和参与血管钙化过程。本文对肿瘤坏死因子-a（tumor-necrosis factor-a,TNF-a）、胰岛素样生长因子-1（insulin like growth factor1,IGF-1）、转化生长因子-β（transforming growth factor-β,TGF-β）以及C-反应蛋白（C-reactive protein,CRP）对血管钙化的作用作一综述,旨在阐述炎症和炎性细胞因子在血管钙化形成过程中的作用。