逍遥散对肝郁气滞证视神经炎大鼠视网膜神经节细胞凋亡的影响

目的:观察逍遥散对肝郁气滞证视神经炎大鼠视网膜神经节细胞(RGCs)凋亡的影响,为临床应用逍遥散治疗视神经炎提供实验室依据。方法:将60只大鼠按RAND函数随机分为正常组、肝郁气滞证视神经炎组(病证结合组)、逍遥散加肝郁气滞证视神经炎组(给药组),应用慢性应激方法建立肝郁气滞证动物模型,并采用EAE动物模型方法建立视神经炎动物模型,记录大鼠神经功能评分,光镜下观察视网膜形态学变化,利用上述指标评价造模成功。第14天、第28天时采用原位末端转移酶标记技术(TUNEL法)光镜下观察并记录3组大鼠视网膜神经节细胞(RCGs)凋亡数量,计算各组凋亡指数并比较。结果:在免疫后第14天,除正常组外其余两组视网膜均出现不同程度的病理改变,在免疫后28 d,病证结合组视网膜的病变的程度和范围较治疗后14 d时重;TUNEL法检测,14 d时,正常组大鼠视网膜未见凋亡,病症结合组及给药组可见一定数量的凋亡,两组与正常组比较均有统计学意义(P0.05),28 d时,病证结合组及给药组大鼠仍可见一定数量的凋亡,但病证结合组大鼠RCGs较14 d增多,给药组大鼠较病证结合组大鼠凋亡数量减少,差异均有统计学意义(P0.05)。结论:逍遥散对肝郁气滞证视神经炎有干预作用,一定程度上可以降低视网膜病变程度和降低视网膜神经节细胞的凋亡,其作用机制有待进一步探讨。     

肝郁气滞证视神经炎大鼠模型的建立

目的:建立肝郁气滞证视神经炎大鼠模型。方法:利用EAE动物模型和肝郁证大鼠模型的组合方法,对40只Wistar大鼠进行造模,观察大鼠的行为学变化、糖水偏好值、血浆促肾上腺皮质激素(ACTH)水平、肝脏及视网膜的病理改变。结果:与正常组比较,模型组的EAE神经功能评分、ACTH水平增加,1%蔗糖水摄入量降低(P0.05,P0.01)。结论:利用EAE动物模型结合肝郁证大鼠模型的方法,通过各指标显示,肝郁气滞证视神经炎组动物模型具备了视神经炎病肝郁气滞证的特点,与正常组相比模型制备成功。     

补肾活血中药对糖尿病大鼠视路Nissl小体和Bcl-2的影响

目的:观察实验性糖尿病大鼠视路神经元组织形态学的病理改变,并探讨补肾活血中药复方防治实验性糖尿病大鼠视路损害的作用机理。方法:用免疫组化及Nissl染色结合图像分析半定量测定测定视网膜、外侧膝状体及视皮质的B淋巴细胞瘤/白血病-2基因(B cell lymphoma/leukemia-2,Bcl-2)的表达强度和Nissl小体的含量。结果:与正常对照组相比,阴性对照组大鼠视路三级神经元的Bcl-2的表达强度和Nissl小体的含量均明显降低(P<0.05或0.01);与阴性对照组相比,中药治疗组大鼠视网膜、外侧膝状体及是皮质的Bcl-2表达强度和Nissl小体的含量均明显增高,其中中药高剂量组最为明显(P<0.05或0.01)。结论:实验性糖尿病大鼠在高血糖状态持续6个月后,其视路神经元发生不同程度的退行性改变;补肾活血中药可一定程度抑制神经细胞凋亡,促进其存活,从而保护糖尿病大鼠视路神经元,减轻糖尿病性视路损害。     

剥夺性弱视大鼠视中枢一氧化氮合酶阳性神经元分布与数量的变化

研究单眼剥夺下大鼠视中枢呈氧化氮合酶阳性神经元的变化。方法：用２周龄大鼠缝合其单侧眼睑一月后，造成剥夺弱视动物模型。冠状切取外侧膝状体及这高皮质１７区，工片行尼克酰胺腺嘌呤二核苷酸脱氢酶组织化学染色，以间接研究ＮＯＳ阳性神经元的变化。结论：生后早期单剥夺可造成大鼠外侧膝状体和视皮质１７区相应层的ＮＯＳ阳性神经元数量下降，活性降低。     

斜视性弱视猫视中枢神经元细胞色素氧化酶活性变化

观察斜视对猫外侧膝状体神经元和视歧层神经元发育的影响。方法采用细胞色素氧化酶技术,测定斜视猫外侧膝状体各投射层细胞及视皮层第Ⅳ细胞层细胞的细胞色素氧化酶活性,了解其功能与形态学的关系。结果３只斜视猫斜视眼投射到同侧外侧膝状体Ａ１层细胞的细胞色素氧化酶活性降低,而投射到对侧外侧膝状体Ａ层细胞的酶活性未见降低;斜视猫双侧视皮层了１７区第Ⅳ层发生交替柱状酶活性未见降低。结论在视觉发育可塑性敏感性内产生的     

高眼压缺血-再灌注中脑组织NOS的表达及神经营养因子对其表达的影响

目的 :观察视网膜缺血再灌注损伤过程中脑组织一氧化氮合酶 ( NOS)的变化及神经营养因子对 NOS表达的影响 ,探讨 NOS在脑组织不同部位的改变及可能作用机制 ,进而为临床实践提供依据。方法 :建立眼缺血再灌注损伤动物模型 ,分为对照组、实验组。实验 组为缺血组 ( I组 ) ,实验 组为缺血 2 h+再灌注组 ( I/R组 ) ,实验 组在缺血再灌注前于右侧侧脑室注射神经营养因子 (神经营养因子 + I/R组 )。采用 HE常规染色切片光镜下观察大鼠高眼压脑外侧膝状体、嘴侧丘、视皮质结构神经细胞变化 ,采用免疫组织化学染色分别测定各组大鼠中脑组织以上三个部位 NOS的变化。结果 :1脑组织不同部位中 NOS在对照组、缺血组、缺血再灌注组间无统计学差异。 2在再灌注 1 d组脑组织不同部位的NOS与缺血再灌注组有显著性统计学差异 ,其中在外侧膝状体中有明显改变。 3在再灌注1 d组与再灌注 2 d组间两者存在统计学差异。 4在再灌注后 5 d组与 2 d组间 NOS无统计学差异。 5在注射神经营养因子的实验 组 ,脑组织中不同部位的 NOS与对照组无统计学差异。结论 :NOS在脑外侧膝状体、嘴侧丘、视皮质参与损伤的作用。在外侧膝状体中 NOS的变化在中枢调节作用中起着中介作用 ,NOS可能参与引起脑组织改变。神经营养因子能明显减轻?     

血府逐瘀汤干预外伤性视神经损伤大鼠模型脑HSP-70表达机制研究

予中医活血化瘀经典方剂血府逐瘀汤干预外伤性视神经损伤(Traumatic optic neuropathy,TON)大鼠模型,观测不同时间节点脑外侧膝状体HSP-70(Heat shock protein)的表达变化,探讨该方治疗TON的作用机制,并结合中西医理论阐释血府逐瘀汤对视神经损伤的保护和治疗作用。     

逍遥散对肝郁脾虚证模型大鼠行为学变化的调节作用

目的 探讨逍遥散治疗慢性应激致肝郁脾虚证的作用机制.方法 将100只雄性SD大鼠随机分为正常组、假手术组、模型组、逍遥散组、6-氰基-7-硝喹啉-2,3-双酮(CNQX)组和联合用药组.造模大鼠通过连续21 d慢性束缚应激建立肝郁脾虚证候模型,逍遥散组、联合用药组大鼠每天束缚前灌服逍遥散5.32 g/kg,CNQX组、联合用药组大鼠在第1、4、7、10、13、16、19、21天右侧杏仁核区微量注射α-氨基羟甲基恶唑丙酸(AMPA)受体拮抗剂CNQX 0.5 μg.各组大鼠第22天进行旷场实验和高架十字迷宫实验.结果 在旷场实验中,模型组大鼠的中央区停留时间明显增多,5 min运动总长度明显减少.在高架十字迷宫实验中,模型组大鼠进入中央区的次数和停留时间、进入开放臂的次数和停留时间均明显减少;封闭臂停留时间明显增加.CNQX和逍遥散对旷场和高架十字迷宫各项指标的改善作用明显,二者联合作用效果较好.结论 逍遥散可改善肝郁脾虚模型大鼠的行为学变化,其作用机制可能与CNQX一致.     

对Ghrelin/GHSR-1a/GABA通路关键因子在胃食管反流病肝郁证模型中表达水平的研究

目的 研究胃饥饿素/生长激素促分泌性受体/γ-氨基丁酸(Ghrelin/GHSR-1a/GABA)通路的关键因子在胃食管反流病肝郁证大鼠模型中的表达情况,建立相关病证结合动物模型.方法 将55只雄性SD大鼠随机分为正常组、假手术组、胃食管反流病组、肝郁证组、胃食管反流病肝郁证组,每组11只.以食管十二指肠侧吻合术制备胃食管反流病模型,以慢性不可预见性刺激制备中医肝郁证模型,以食管十二指肠侧吻合术联合慢性不可预见性刺激制备胃食管反流病肝郁证模型.进行糖水偏爱实验、旷场实验、食管上皮HE病理观察,检测血清及胃组织Ghrelin、下丘脑GABA和GHSR-1a表达.结果 分别与正常组、胃食管反流病组比较,胃食管反流病肝郁证组大鼠糖水偏好比和旷场实验总穿格数降低(P<0.01)、中央区持续停留时间缩短(P<0.01),血清中Ghrelin含量增高(P<0.01),胃组织中Ghrelin阳性细胞表达数及下丘脑GHSR-1 a蛋白表达增加(P<0.01).与假手术组比较,胃食管反流病肝郁证组大鼠下丘脑中GABA含量降低(P<0.05).结论 食管十二指肠侧吻合术联合慢性不可预见性刺激可以制备胃食管反流病肝郁证模型,该病证结合大鼠模型血清及胃Ghrelin表达增高,下丘脑GHSR-1 a蛋白表达增高、GABA含量降低.     

幼儿外侧膝状体微血管的形态学分析

目的分析幼儿外侧膝状体微血管的形态结构。方法采用8例死亡24 h内的幼儿外侧膝状体,经碱性磷酸酶染色、光镜观察及体视学处理,对幼儿外侧膝状体微血管密度进行分析。结果幼儿外侧膝状体后2/3部微血管密度高于前1/3部的微血管密度,经t检验,P<0.01。结论①幼儿阶段外侧膝状体与其相对应的视皮质各区微血管密度的大小相一致。②按照功能与结构相一致的原则,本课题研究结果支持“直接兴奋性输入会聚学说”。     

异丙酚诱导大鼠中枢JUN核蛋白表达的研究

目的通过检测异丙酚静脉全麻诱导大鼠中枢c-jun基因的表达,了解异丙酚在大鼠中枢的可能作用位点.方法 42只Wistar大鼠随机分成6组:空白对照组(C组)、小剂量异丙酚组(50mg/kg,P1组)、中等剂量异丙酚组(100mg/kg,P3组)、大剂量异丙酚组(150mg/kg,P3组)、断尾刺激组(S1组)、异丙酚作用后断尾刺激组(S2组).免疫组织化学法(ABC法)检测JUN核蛋白,统计各组大鼠脑片的JUN免疫反应阳性神经元的分布.结果 C组:JUN免疫反应阳性神经元散在分布在视上核、外侧隔核及外侧缰核等神经核团.P1、P2、P3组:JUN免疫反应阳性神经元表达较对照组明显增多,主要分布在伏核、外侧隔核、下丘脑室旁核、膝状体腹下核、背外侧膝状核、视上核、视交叉上核、视前腹侧核、弧束核、杏仁基底外侧核、丘脑室旁核、外侧缰核、海马回嗅觉小岛及乳头状核等核团,表达的阳性神经元数量与异丙酚剂量正相关.结论异丙酚在大鼠中枢神经系统有与其静脉麻醉作用相关的神经核团.     

异丙酚麻醉对大鼠中枢神经核团c-jun基因表达的影响

目的通过检测异丙酚静脉全麻诱导大鼠中枢c-jun基因的表达,了解异丙酚在大鼠中枢的可能作用位点.方法 42只Wistar大鼠随机分成6组:空白对照组(C组)、小剂量异丙酚组(50mg/kg,P1组)、中等剂量异丙酚组(100mg/kg,P2组)、大剂量异丙酚组(150mg/kg,P3组)、断尾刺激组(S1组)、异丙酚作用后断尾刺激组(S2组).免疫组织化学法(ABC法)检测JUN核蛋白,统计各组大鼠脑片的JUN免疫反应阳性神经元的分布.结果 C组:JUN免疫反应阳性神经元散在分布在视上核、外侧隔核及外侧缰核等神经核团.P1、P2、P3组.JUN免疫反应阳性神经元表达较对照组明显增多,主要分布在伏核、外侧隔核、下丘脑室旁核、膝状体腹下核、背外侧膝状核、视上核、视交叉上核、视前腹侧核、弧束核、杏仁基底外侧核、丘脑室旁核、外侧缰核、海马回嗅觉小岛及乳头状核等核团,表达的阳性神经元数量与异丙酚剂量正相关.结论异丙酚在大鼠中枢神经系统有与其静脉麻醉作用相关的神经核团.     

视辐射白质纤维解剖学研究

目的 研究视辐射、侧脑室、视束和外侧膝状体等结构的三维关系,确定经侧裂入路的解剖学标志.方法 应用Klingler技术对10例成人尸头标本行纤维解剖研究,分离视辐射,并观察和测量其与周围重要结构的关系.结果 视辐射由外侧膝状体发出分三束覆盖于颞角前极外侧半、全部颞角上壁及外侧壁,Meyer袢走行于颞角顶壁,并超过颞角尖部前方1～3mm(平均2mm),在颞极后方22-30 mm(平均25mm).经侧裂入路的颞叶手术中,在外侧裂底部存在着一个可以避免损伤视辐射进入颞角的安全三角区域,而在其后10、15、20mm水平处切口,向内下与矢状面成一定的角度可避免损伤视辐射.结论 Meyer袢走行于颞角顶壁,并超过颞角尖,到达颞角与颞极之间.经侧裂进入颞角的手术,切口靠近岛阈或下环岛沟周围5mm范围对视辐射的损伤机会小.     

丁苯酞对癫痫大鼠认知功能的影响

目的:观察丁苯酞对癫痫持续状态模型大鼠学习记忆功能,及皮质、海马NR1和NR2B表达的影响,探讨丁苯酞影响癫痫大鼠认知功能的可能机制。方法:40只雄性Wistar大鼠随机分为假手术组、致痫组、丁苯酞低剂量组、丁苯酞高剂量组,每组各10只;造模后第12天起,用药组大鼠腹腔注射丁苯酞,假手术组注射等量的生理盐水,采用Morris水迷宫对大鼠进行行为学检测;采用免疫组织化学染色法测定皮质NR2B,海马NR1和NR2B蛋白的表达。结果:水迷宫实验显示,致痫组找到平台的时间明显长于对照组(P<0.01);而与致痫组大鼠相比,丁苯酞低剂量组和高剂量组找到平台的时间明显减少(P<0.05;P<0.01);与致痫组相比,丁苯酞低剂量组和高剂量干预组大鼠皮质NR2B,海马NR1和NR2B的积分光密度值均明显升高(P<0.05,P<0.01)。结论:1丁苯酞可以改善癫痫模型大鼠学习和空间记忆能力。2丁苯酞可以促进癫痫大鼠皮质NR2B,海马NR1和NR2B蛋白的表达,从而改善癫痫大鼠认知功能障碍。     

基于海马CA1区微量注射AMPA对肝郁脾虚证模型大鼠杏仁核BLA区阳性细胞的影响探讨逍遥散的调节机制

目的运用免疫组化方法,对比海马CA1区微量注射α-氨基羟甲基恶唑丙酸(AMPA)对肝郁脾虚证模型大鼠杏仁核BLA区AMPA受体亚基阳性细胞的影响,探讨逍遥散调节肝郁脾虚证的机制。方法 25只SD雄性大鼠随机等分为5组,正常组、模型组、假手术组、AMPA组和逍遥散组。以21 d慢性束缚应激方法造肝郁脾虚证模型,于模型大鼠双侧海马CA1区,埋管微量注射AMPA受体的激动剂AMPA,逍遥散组造模方法和AMPA组尽可能相似,突出逍遥散和AMPA干预的可比性。运用免疫组化方法检测杏仁核基底外侧区(BLA区)AMPA受体的2个重要亚基谷氨酸受体1(GluR1)和谷氨酸受体2(GluR2)的阳性细胞数变化情况,比较逍遥散组和AMPA组上述指标的变化趋势是否一致。结果造模21 d后,在杏仁核BLA区,与正常组比较,AMPA组和逍遥散组GluR1和GluR2阳性细胞数表达差异均无统计学意义(均P>0.05);与模型组比较,AMPA组和逍遥散组GluR1和GluR2阳性细胞数表达差异均有统计学意义(均P<0.01),且2组GluR1阳性细胞数表达均较模型组增高,GluR2阳性细胞数表达均较模型组降低,2组阳性细胞数表达升降趋势一致。各组阳性细胞积分光密度结果与阳性细胞数结果一致。结论结合前期实验,从免疫组化角度进一步推断逍遥散通过纠正杏仁核和海马AMPA受体的"兴奋-抑制"失衡,重建稳态,从而治疗肝郁脾虚证。     

四逆散对抑郁症大鼠的治疗效果及机制探究

[目的]探究四逆散对抑郁大鼠行为、中枢神经递质及ERK1/2-CREB-BDNF信号通路的影响。[方法]实验大鼠随机分为正常组、模型组、阳性对照组、四逆散低剂量组、四逆散中剂量组、四逆散高剂量组,每组20只。给药结束后,进行糖水消耗实验、旷场实验;Elisa试剂盒检测大鼠海马组织中多巴胺（DA）、去甲肾上腺素（NE）、5-羟色胺（5-HT）;放免试剂盒检测血清中神经肽Y(NPY)、P物质（SP）、生长抑素（SS）含量;Western blot检测皮质中ERK1/2-CREB-BDNF信号通路关键蛋白表达情况。[结果]与正常组相比,模型组大鼠糖水偏爱度和旷场运动评分显著降低（P均<0.001）,海马组织中DA、NE、5-HT含量显著下调（P<0.001）,血清中NPY、SS显著下调（P<0.001）,SP显著上调（P<0.001）,皮质中ERK1/2、CREB蛋白磷酸化水平及BDNF蛋白表达显著下调（P<0.001）;与模型组相比,四逆散给药组大鼠糖水偏爱度和旷场运动评分显著上调（P<0.001）,海马组织中DA、NE、5-HT含量显著上调（P<...     

大鼠肝郁气滞型乳腺增生病模型的建立

目的建立大鼠乳腺增生病证结合模型。方法采用激素结合束缚方法,大鼠隔2日肌肉注射苯甲酸雌二醇注射液1．0mg／kg,连续10次,后每日肌肉注射黄体酮5．0mg／kg连续5日,隔日束缚过夜共15次。末次给药次日测量大鼠乳头直径,进行旷场实验。取血液、乳腺组织备检。结果模型组大鼠乳头肿胀,垂直运动和直线运动均减少,血清PRL、E2升高,P降低,乳腺腺泡数量增多,体积增大,3周内未恢复至正常水平。结论激素结合束缚方法成功建立大鼠肝郁气滞型乳腺增生病模型,符合乳腺增生病临床发病病因,模型稳定,方法简单。     

甲状腺功能低下对胚胎时期大鼠皮质下视、听中枢细胞增殖迁移的影响

报告采用放射自显影术用~3H-TdR为示踪剂,以标记率为指标,对胎龄13、15、17、19及21天的正常与甲状腺功能低下大鼠皮质下视、听中枢细胞的增殖和迁移进行了观察结果,表明,甲状腺功能低下胎鼠的耳蜗背核、耳蜗腹核、内侧膝状体、下丘的细胞增殖和迁移速度在胎龄19及21天时低于正常对照组;甲状腺功能低下胎鼠外侧膝状体和上丘细胞增殖和迁移速度在胎龄17、19及21天均慢于正常对照组。     

还原型谷胱甘肽对实验性视神经炎视神经和视网膜的影响

目的 观察还原型谷胱甘肽(GSH)对实验性视神经炎视神经和视网膜的影响,并探讨其作用机制.方法 以48只雌性SD大鼠建立实验性变态反应性脑脊髓炎(EAE)动物模型,完全随机分为EAE组18只和GSH组30只,另6只雌性SD大鼠为正常组.免疫后当天开始,GSH组给予注射用GSH 100 mg·kg-1·d-1腹腔注射14 d,EAE组给予等量生理盐水替代.分别于发病初发期、高峰期、恢复期观察视神经病理学改变、视网膜神经节细胞(RGCs)凋亡,并检测视网膜丙二醛(MDA)、谷胱甘肽过氧化物酶(GSH-PX)、一氧化氮(NO)的含量.结果 GSH组18只大鼠发病,发病率为60%,症状评分为1～3分;视神经HE染色见神经纤维排列较规则,胶质细胞较EAE组有所增加,脱髓鞘相对轻;RGCs凋亡数初发期和高峰期比EAE组减少,差异有统计学意义(P<0.01);视网膜MDA、NO含量下降,GSH-PX活力升高,与EAE组比较差异有统计学意义(P<0.05).结论 还原型谷胱什肽可降低EAE大鼠发病率和症状评分,抑制大鼠RGCs的凋亡,降低视网膜MDA、NO含量,提高GSH-PX活力,对实验性视神经炎的视神经和视网膜具有保护作用.     

乌龙丹改善慢性脑缺血大鼠学习记忆功能的分子机制探讨

目的 通过建立大鼠慢性脑缺血模型,观察NR1、NR2B在海马和皮层的表达水平,探讨乌龙丹改善慢性脑缺血大鼠学习记忆功能的部分作用机制.方法 采用双侧颈总动脉永久性结扎制作大鼠慢性脑缺血模型,造模3周后存活大鼠随机分为假手术组、模型组、银杏叶组、乌龙丹高剂量组、乌龙丹低剂量组(n=12),Morris水迷宫检测大鼠学习记忆能力,Western blot法检测大鼠海马和皮层NR1、NR2B的表达水平.结果 模型组大鼠学习记忆能力较假手术组和乌龙丹给药组明显降低(P＜0.05,或P＜0.01);模型组皮层及海马区NR1、NR2B表达水平与假手术组比较,比值显著降低(P＜0.01).乌龙丹高剂量组和银杏叶组皮层及海马与模型组比较NR1、NR2B表达均增高(P＜0.01);但与假手术组比较,NR1、NR2B表达水平比值降低,差异也具有统计学意义(P＜0.01).结论 乌龙丹改善大鼠慢性脑缺血学习记忆功能可能途径之一:一定程度上提高海马和皮层区NR1、NR2B的表达水平.