INTERLEUKIN 10 INHIBITS THE RAT VSMC PROLIFERATION AND COLLAGEN SECRETION STIMULATED BY ANGIOTENSIN Ⅱ

Objective. To study the effect of interleukin 10 (IL-10) on the angiotensin II (AagII) stimulated rat VSMC proliferation and collagen secretion, and furthermore, explore its mechanism.Methods. On cultured VSMC of rat, 3H-thymine (3H-TdR) and 3H-proline incorporations were used to evaluate the DNA and collagen synthesis, respectively. Western blot and immunoprecipitation were applied to assay the expression and activity of focal adhesion kinase (FAK), respectively.Results. IL-10 (10-8 ～ 10-10g/ml) inhibited the increase of 3H-TdR and 3H-proline incorporation as well as FAK activity, which was induced by 10-7mol/L AngI ( P ＜ 0. 05 or P ＜ 0. 01 ). IL-10 also obviously downregulated the synthesis and secretion of collagen by AngII stimulated VSMC. But there was no difference in the protein expression of FAK among all the groups ( P ＞ 0. 05).Conclusion. IL-10 antagonizes the VSMC proliferation and collagen synthesis by regulating FAK activity stimulated by AngII.     

IL-10对AngⅡ诱导的A7r5细胞增殖的抑制作用

目的探讨IL-10对A7r5大鼠胸大动脉平滑肌细胞增殖的抑制作用及其与p53、bcl-2的变化关系。方法用MTT法测定细胞抑制率;倒置显微镜观察细胞形态;细胞免疫组化法和Western bolt观察细胞内p53、bcl-2基因的表达。结果 IL-10对AngⅡ诱导的A7r5平滑肌细胞增殖有明显抑制作用,但不呈剂量依赖关系;可逆转p53、bcl-2的表达。结论 IL-10对AngⅡ诱导的A7r5平滑肌细胞增殖有明显防治作用,与细胞凋亡基因p53、bcl-2相关。     

血管紧张素Ⅱ对血管平滑肌细胞增殖及人Ⅰ型胶原α2（Ⅰ）基因启动子活性的影响

目的：通过研究血管紧张素Ⅱ(AngⅡ)对血管平滑肌细胞(VSMC)增殖的影响及对人Ⅰ型胶原α2(Ⅰ)链启动子活性的调控，了解AngⅡ在动脉粥样硬化形成和发展过程中的作用。方法：①SD大鼠胸主动脉VSMC体外培养，分别在24、48和72h采用MTF法检测不同浓度的AngⅡ(10^-8mol／L、10^-7mol／L、10^-6mol／L)对VSMCs增殖的影响。②构建含人α2(Ⅰ)前胶原基因5侧翼序列-2．4kb和-1．6kb与报告基因氯霉素乙酰基转移酶(CAT)的重组体，用FuGENE转染试剂瞬时转染平滑肌细胞，CAT—ELISA测定AngⅡ10^-7mol／L对重组体的作用。结果：①AngⅡ剂量依赖性促进VSMC增殖。②AngⅡ组的相对CAT表达量明显增高，有统计学意义。结论：AngⅡ可促进VSMC增殖，并可以在转录水平上调人α2(Ⅰ)前胶原基因表达，从而促进动脉粥样硬化的形成和发展。     

血管紧张素Ⅱ诱导大鼠胰星状细胞增殖和胶原合成

目的:研究血管紧张素Ⅱ(angiotensin Ⅱ,Ang Ⅱ)对大鼠胰星状细胞(pancreatic stellate cells,PSCs)增殖和活化的影响.方法:取第4～7代培养的大鼠PSCs,采用无血清DMEM培养液培养48 h使细胞同步静止化后,换含1、10和100 nmol/L Ang Ⅱ的无血清培养液继续培养24 h或48 h;另外,在加入100 nmol/L Ang Ⅱ无血清培养液前加入100 nmol/L AT1受体拮抗剂ZD7155或AT2受体拮抗剂PD123319.分别采用[3H]-胸嘧啶核苷掺入、[3H]-脯氨酸掺入、Western印迹和Northern印迹法动态检测细胞DNA合成速率、胶原合成速率、α-平滑肌动蛋白和Ⅰ型前胶原mRNA表达.结果:与正常对照组比较,1 nmol/L Ang Ⅱ刺激24 h后细胞DNA合成率无显著增加(P>0.05),而10和100 nmol/L处理组细胞DNA合成率显著增加(P值均<0.05);刺激48 h后,1、10和100 nmol/L Ang Ⅱ处理组细胞胶原合成率和Ⅰ型前胶原mRNA表达水平均明显增加(P值均<0.05),但α-平滑肌动蛋白表达无明显变化(P值均>0.05).与Ang Ⅱ(100 nmol/L)处理组比较,Ang Ⅱ(100 nmol/L) ZD7155(100 nmol/L)处理组细胞DNA合成率、胶原合成率和Ⅰ型前胶原mRNA表达水平均显著下降(P值均<0.01),而Ang Ⅱ(100 nmol/L) PD123319(100 nmol/L)处理组均无明显变化(P值均>0.05).结论:Ang Ⅱ通过AT1受体介导,可剂量依赖性诱导大鼠PSCs增殖和胶原合成,从而参与胰腺纤维化的发生.     

反义EGFR寡核苷酸对血管紧张素Ⅱ促VSMC增殖的影响

目的探讨脂质体介导的反义表皮生长因子受体寡核苷酸基因转染对血管紧张素Ⅱ促大鼠血管平滑肌细胞增殖的影响．方法用反义表皮生长因子受体寡核苷酸脂质体复合物转染Sprague—Dawley大鼠血管平滑肌细胞，通过RT—PCR、Western—Bloting分别检测转染后EGFRmRNA及蛋白的表达情况，用^3H—Tdr掺入率实验检测经反义表皮生长因子受体寡核苷酸转染再用血管紧张素Ⅱ刺激的血管平滑肌细胞的增殖情况，结果反义表皮生长因子受体寡核苷酸转染大鼠血管平滑肌细胞后，EGFRmRNA及蛋白的表达较正义组及对照组明显减少（P〈0．05）；用血管紧张素Ⅱ刺激后，反义组细胞的^3H—Tdr掺入较正义组及对照组明显降低，经方差分析两者有显著差异（P〈0．05），结论脂质体介导的反义表皮生长因子受体寡核苷酸转染减弱了血管紧张素Ⅱ的促血管平滑肌细胞增殖效应，证明了表皮生长因子受体在血管紧张素Ⅱ促血管平滑肌细胞增殖中起重要作用．     

缬沙坦对血紧张素Ⅱ诱导的牛主动脉血管平滑肌增殖及迁移的影响

目的：观察血紧张素Ⅱ（AngⅡ）及缬沙坦对培养的牛主动脉血管平滑肌细胞（VSMC）增殖，迁移的作用。方法：取新生小牛胸主动脉采用贴块法培养平滑肌细胞，分成对照组、AngⅡ组、缬沙坦组、缬沙坦加AngⅡ组，干预，分别测定^3H－胸腺嘧啶（^3H-TdR)掺入量和计数迁移的细胞，结果：AngⅡ（1μmol/L）作用24h能使VSMC的^3H-TdR的掺入量，细胞迁移数较对照组增多；与AngⅡ组相比，AngⅡ加用缬沙坦（100μmol/L）使^3H-TdR的掺入量与细胞迁移数明显减少；与对照组相比，单用缬沙坦使^3H-TdR的掺入量亦明显减少，结论：AngⅡ对VSMC有促增殖，迁移作用，能被缬沙坦拮抗，而且缬沙坦在没有AngⅡ作用时亦能单独发挥抗增殖作用。     

老年慢性心力衰竭患者血清TNF-α、AⅡ、Hb、IL-10、IL-4的水平变化及临床意义

目的探讨老年慢性心力衰竭患者血清肿瘤坏死因子仪（TNF-α）、血管紧张素U（AⅡ）、血红蛋白（Hb）、白细胞介素（IL）-10及IL-4的水平变化及临床意义。方法选择30例慢性心力衰竭患者为观察组,30例健康人为对照组。分别检测其血清TNF-α、AⅡ、Hb、IL-10、IL-4的水平,两组进行对照比较。结果观察组患者Hb水平逐渐降低,IL-10水平随心功能分级程度加重高而降低,血清TNF-αA11水平呈进行性升高（P〈0．05）。血清IL-4水平在各心功能分级组间比较差异无统计学意义（P〉0．05）。对照组患者Hb水平、血清IL-10浓度与血清TNF-α、AⅡ的水平呈负相关（P〈0．05）。结论老年慢性心力衰竭患者上述指标变化与心功能分级及炎症因子密切相关。积极纠正贫血,规范治疗可显著降低上述指标变化,改善其心脏功能和预后。     

环孢素A对血管紧张素Ⅱ诱导的血管平滑肌细胞增殖的影响

目的：观察环孢素A（CsA)对血管紧张素Ⅱ（AngⅡ）诱导的大鼠血管平滑肌细胞增殖的影响，以探讨钙调神经磷酸酶（CaN)依赖的信号通路在血管平滑肌细胞增殖中的作用。方法；以体外培养的大鼠主动脉平滑肌细胞为模型，实验分为三组：（1）AngⅡ组，（2）CsA AngⅡ组，（3）对照组。检测细胞增殖活度（MTT法），增殖细胞核抗原（PCNA）表达（免疫组化定量技术），细胞数目（直接计数法）的变化。结果：AngⅡ组血管平滑肌细胞增殖活度（吸光度表示），PCNA表达水平（光密度值表示）和细胞数目明显高于对照组（P＜0．01或P＜0．05），CsA＋AngⅡ组血管平滑肌细胞增殖活度，PCNA表达水平和细胞数目较AngⅡ组明显降低，差异显著（P＜0．01或P＜0．05）。结论：环孢素A可显著阻滞血管紧张素Ⅱ刺激的血管平滑肌细胞增殖，这种作用可能通过抑制CaN活性，阻断CaN介导的信号传导通路所致。     

血管紧张素Ⅱ对肾成纤维细胞增殖及分泌白细胞介素—6的影响

目的 研究血管紧张素（Ang)Ⅱ对人肾成纤维细胞（KFB）增殖及分泌白细胞介素（IL－6）的影响，为完善Ang Ⅱ致肾纤维化机理提供新实验依据。方法 分离培养人胎肾成纤维细胞，经鉴定后分别采用MTT法和放射免疫分析法（RIA）检测AngⅡ对KFB增殖及分泌IL－6的影响。结果 10^-6mol/L Ang Ⅱ作用于KFB后48及72小时，可明显促进细胞增殖；无AngⅡ刺激时，体外培养的正常人KFB可分泌微量的IL－6，且呈时间依赖性，10^-7-10^-6mol/L Ang Ⅱ作用于细胞6小时，即可迅速而显著地刺激细胞分泌IL－6，10^-6mol/L AngⅡ作用24－48小时，均可显著增加细胞IL－6的分泌。结论 不同浓度的Ang Ⅱ（10^-7-10^-6mol/L)作用于人KFB后，可促进细胞增殖，提高细胞对IL－6的分泌量。推测这可能是在各种肾脏疾病进展时，AngⅡ 参与肾小管间质病变、促进肾纤维化的机制之一。     

大黄素对血管紧张素Ⅱ刺激人肾成纤维细胞增殖、胶原表达的抑制效应研究

目的：研究大黄素对血管紧张素Ⅱ（AngⅡ）刺激人肾成纤维细胞（KFB）增殖、胶原表达等的抑制效应。方法：用^H-TdR掺入法，流式细胞仪及免疫组化化学技术观察了AngⅡ1对KFB增殖，细胞周期及I型胶原表达的影响以及大黄素对AngⅡ作用于KFB的保护效应。结果：①AngⅡ10^-10mol/L至10^-6mol/L增加KFB^3H-TdR掺入率，第1、3天呈计量依赖关系（r1=0.709,P＜0．01；r3=0.806,P＜0．01）；不同浓度的大黄素（30－100μg/ml）第1、3和5抑制了AngⅡ10^-6mol/L诱导的KFB^3H-TdR掺入率，呈剂量依赖性特点。②AngⅡ在10^-6mol/L明显促进KFBG1向S期转化（P＜0．01）；大黄素在100μg/ml抑制了KFBG1向S期转化（P＜0．01）。③AngⅡ在10^-6mol/L增加了KFBI型胶原表达（P＜0．05），大黄素明显降低了AngⅡ诱导的I型胶原表达（P＜0．05）。结论：大黄素可抑制AngⅡ诱导的KFB增殖，I型胶原表达，在预防肾间质纤维化可能起重要作用。     

Effect of angiotensin Ⅱ and angiotensin Ⅱ type 1 receptor antagonist on the proliferation,contraction and collagen synthesis in rat hepatic stellate cells

Background Angiotensin Ⅱ （Ang Ⅱ） is a very important vasoactive peptide that acts upon hepatic stellate cells （HSCs）, which are major effector cells in hepatic cirrhosis and portal hypertension. The present study was aimed to investigate the effects of Ang Ⅱ and angiotensin Ⅱ type 1 receptor antagonist （AT1RA） on the proliferation, contraction and collagen synthesis in HSCs.
Methods HSC-T6 rat hepatic stellate cell line was studied. The proliferation of the HSC cells was evaluated by MTT colorimetric assay while HSC DNA synthesis was measured by ^3H-thymidine incorporation. The effects of angiotensin Ⅱ and AT1RA on HSCs contraction were studied by analysis of the contraction of the collagen lattice. Cell culture media were analyzed by RT-PCR to detect secretion of collagen Ⅰ （Col Ⅰ）, collagen Ⅲ （Col Ⅲ） and transforming growth factor β1 （TGF-β1） by enzyme linked immunosorbent assay. HSC was harvested to measure collagen Ⅰ, collagen Ⅲ and tissue inhibitor of metalloproteinase-1 （TIMP-1） mRNA expression.
Results Ang Ⅱ （（1×10^-10-1×10^-4）mol/L）stimulated DNA synthesis and proliferation in HSCs compared with untreated control cells. AT1RA inhibited angiotensin Ⅱ induced proliferation of HSCs. A linear increase in the contractive area of collagen lattice correlated with the concentration of angiotensin Ⅱ （1×10^-9-1×10^-5 mol/L） and with time over 48 hours. AT1RA blocks angiotensin Ⅱ induced contraction of collagen lattice. Col Ⅰ, Col Ⅲ and TGF-β1 levels of the Ang Ⅱ group were higher than those of control group and this increase was downregulated by AT1RA. The mRNA expressions of Col Ⅰ, Col Ⅲ and TIMP-1 were higher in HSCs from the Ang Ⅱ group than the control group and downregulated by AT1RA.
Conclusions Angiotensin Ⅱ increased DNA synthesis and proliferation of HSCs in a dose-dependent manner, stimulated the contraction of HSCs dose- and time-dependently. Angiotensin also promoted excretion of Col I, Col Ⅲ and TGF-β1 lev     

肝窦内皮细胞凝集素抑制肝星形细胞增殖、胶原合成与分泌的实验研究

目的:探讨肝窦内皮细胞凝集素(LSECtin)对肝脏星形细胞(HSCs)增殖和胶原分泌的影响。方法:离体培养大鼠肝星形细胞系HSC-T6,分为对照组和LSECtin处理组。采用噻唑蓝(MTT)比色法和[~3H]-胸腺嘧啶核苷(H~3-TdR)掺入法检测HSC-T6细胞的增殖情况,分别采用[~3H]-脯氨酸掺入法和比色法检测HSC-T6细胞胶原合成与分泌的情况。结果:LSECtin剂量依赖性的抑制HSC-T6细胞增殖,其中10~(-7)mol/L的LSECtin对HSC-T6细胞增殖的抑制率为50%。另外,LSECtin对于HSC-T6细胞胶原的合成与分泌也有显著地抑制效应,并呈剂量关系。其中,10~(-7) mol/L的LSECtin对HSC-T6细胞胶原合成与分泌抑制率分比为55%和52%。结论:LSECtin是肝星形细胞的增殖、胶原合成与分泌的抑制因子,对于肝纤维化具有潜在的治疗价值。     

反义N-ras-1基因对成纤维细胞生长因子诱导的血管平滑肌细胞

应用反义Ｎ－ｒａｓ１基因阻断成纤维细胞因子的促增殖作用,为防治以血管平滑肌细胞增殖为特征的主要特征的血管损伤后再狭窄等心血管疾病提供进一步探索的途径。方法 利用构建的含反义Ｎ－ｒａｓ１基因的逆转录病毒质粒转染于培养的血管平滑肌细胞,ｆｐＧｖ１－ＭＴ逆转录病毒空载质粒及未转染质粒的细胞为对照,观察对ｂＦＧＦ诱导的ＶＳＭＣ的影响。     

反义N-ras-1基因对成纤维细胞生长因子诱导的血管平滑肌细胞增殖的抑制作用

目的应用反义Ｎ－ｒａｓ１基因阻断成纤维细胞生长因子（ｂＦＧＦ）的促增殖作用，为防治以血管平滑肌细胞（ＶＳＭＣ）增殖为主要特征的血管损伤后再狭窄等心血管疾病提供进一步探索的途径。方法利用构建的含反义Ｎ－ｒａｓ１基因的逆转录病毒质粒（ｆｐＧｖ１－ＭＴ－ＡｎｔｉｓｅｎｓｅＮ－ｒａｓ１）转染于培养的血管平滑肌细胞（ＶＳＭＣｓ），ｆｐＧｖ１－ＭＴ逆转录病毒空载质粒及未转染质粒的细胞为对照，观察其对ｂＦＧＦ诱导的ＶＳＭＣ的影响。结果反义Ｎ－ｒａｓ１细胞数为（１６．８±１．３）×１０４（细胞／ｍｌ），空载质粒对照细胞为（３０．１±１．２）×１０４，两者差异有显著意义（Ｐ＜０．００１）；反义Ｎ－ｒａｓ１细胞３Ｈ－ＴｄＲ掺入率为７６４３±６７２（ｃｐｍ），空载质粒对照细胞为１５１３１±１３８（ｃｐｍ），两者差异有非常显著意义（Ｐ＜０．００１），同时应用反义Ｎ－ｒａｓ１基因的细胞ＲａｓｍＲＮＡ表达水平明显降低，其表达蛋白ｐ２１也明显降低。结论反义Ｎ－ｒａｓ１基因对ＶＳＭＣ及ｂＦＧＦ诱导ＶＳＭＣ增殖有抑制作用。     

重组平颏海蛇磷脂酶A2抑制晚期糖基化终产物诱导的大鼠血管平滑肌细胞增殖

OBJECTIVE: To observe the effects of recombinant Lapemis hardwickii phospholipase A(2) (rPLA(2)) on vascular smooth muscle cell (VSMC) proliferation stimulated by advanced glycation end products (AGEs). METHODS: Rat aortic VSMCs were cultured in vitro and stimulated with AGEs of different concentrations prior to co-treatment with rPLA(2) and AGEs. The response of the VSMCs to these treatments was observed in comparison with that of the control group. Non-radioactive MTS/PES assay was adopted for the quantification of the cell proliferation ratio. RESULTS: Compared with the control group, AGEs significantly stimulated VSMCs proliferation (P < 0.05), but even with AGEs stimulation, rPLA(2) inhibited the growth of VSMCs (0.753+/-0.098 vs 1.100+/-0.226, P < 0.05). CONCLUSION: rPLA(2) can significantly inhibit the proliferation of VSMCs stimulated by AGEs.     

舒脉胶囊对AngⅡ诱导的血管平滑肌细胞增殖及细胞周期的影响

目的 观察舒脉胶囊及其拆方药物血清对血管紧张素Ⅱ(AngⅡ) 诱导的血管平滑肌细胞增生及其对细胞周期的影响.方法 组织贴块法进行血管平滑肌细胞(VSMC)培养, AngⅡ10-7 mol/L 作为刺激因子,将药物血清分为舒脉胶囊全方组、活血化瘀拆方组和补脾益肾拆方组,MTT比色法检测细胞增殖活性,流式细胞仪检测细胞周期.结果 舒脉胶囊全方组和活血化瘀拆方组的OD值比AngⅡ组和补脾益肾拆方组低,并有统计学差异.在细胞周期方面G0/G1期所占百分比补脾益肾拆方组比空白组和AngⅡ组低,有统计学差异;S期所占百分比空白组、舒脉胶囊全方组、活血化瘀拆方组比AngⅡ组和补脾益肾拆方组低,有统计学差异,且舒脉胶囊全方组S期百分比大于空白组,小于活血化瘀拆方组;G2/M期所占百分比活血化瘀拆方组、补脾益肾拆方组比空白组和Ang Ⅱ组高,有统计学差异.结论 舒脉胶囊具有抑制细胞增殖的效应,并且是通过抑制细胞周期从G0/G1期向S期转化而发挥,全方作用强于活血化瘀拆方组,而补脾益肾拆方组不但没有抑制细胞增殖的作用,而且还有促进细胞增生的作用.     

川芎嗪对内毒素刺激肝星状细胞增殖和胶原表达的影响

目的 观察川芎嗪对内毒素刺激的大鼠肝星状细胞（HSC）增殖和胶原表达的影响,探讨川芎嗪抗肝纤维化的作用机制.方法 于内毒素中刺激大鼠HSC的基础上加川芎嗪分组培养;并采用MTT法检测川芎嗪对HSC生长增殖的抑制作用,免疫细胞化学染色法观察HSC α-平滑肌肌动蛋白（α-SMA）的表达,同时采用ELISA法检测其上清液Ⅰ、Ⅲ型胶原水平.结果 川芎嗪对内毒素刺激的HSC增殖有抑制作用,能下调活化HSC α-SMA的表达,对HSC Ⅰ、Ⅲ型胶原的分泌也有明显抑制作用,并呈剂量依赖性.结论 川芎嗪能抑制内毒素刺激的HSC活化增殖和分泌胶原,为探索川芎嗪抗肝纤维化的分子机制提供了实验依据.