荧光光谱分析5种黄连生物碱与蛋白和DNA的作用

目的 了解5种黄连生物碱（巴马亭、黄连碱、表小檗碱、药根碱和小檗碱）与生物大分子蛋白质和DNA的作用关系及其差异。 方法 将黄连生物碱巴马亭、黄连碱、表小檗碱、药根碱和小檗碱均配成浓度分别为0、1.95×10^-6、3.9×10^-6、7.8×10^-6、1.56×10^-5和3.12×10^-5 mol/L的PBS稀释液后,分别量取1.5 mL与0.5 mL牛血清白蛋白（BSA,1.10×10^-5 mol/L）溶液作用,采用F-4500型荧光分光光度计,在280 nm激发波长条件下扫描300~500 nm范围的荧光发射光谱。将浓度均为0、1.95×10^-6、3.9×10^-6、7.8×10^-6 和1.56×10^-5mol/L的5种黄连生物碱PBS稀释液各量取1.5 mL与0.5 mL百分浓度为0.1%的质粒DNA作用后,在368 nm激发波长条件下扫描480~650 nm范围的荧光发射光谱。 结果 5种黄连生物碱对BSA荧光均有很强的淬灭作用,各生物碱之间的荧光淬灭作用差异不大。5种黄连生物碱与质粒DNA作用后,均能增强发射荧光,且各生物碱之间的荧光增强作用差异很大,荧光增强作用由大到小依次为表小檗碱、黄连碱、巴马亭、小檗碱和药根碱,其中,表小檗碱和黄连碱增强作用远大于其余3种黄连生物碱;5种黄连生物碱的最强荧光作用浓度均为7.8×10^-6mol/L。 结论 5种黄连生物碱与蛋白和DNA均存在很强的相互作用。5种黄连生物碱与蛋白之间的作用差异较小,与DNA之间的作用差异较大,提示黄连生物碱与DNA的作用强度与其分子结构有关,该类分子中9,10-亚甲二氧基和2,3-二甲氧基结构有利于与DNA作用后的荧光增强作用。     

荧光猝灭法研究马钱子碱、士的宁与人血清白蛋白的相互作用

目的 研究马钱子碱、士的宁与人血清白蛋白(HSA)间非共价结合特性。方法 采用荧光猝灭法计算药物与蛋白间的结合常数与结合位点数；根据不同作用温度时药物-蛋白非共价结合复合物的热力学参数变化，分析药物与蛋白间的主要作用力类型。结果 当作用温度分别为25 ℃和35 ℃时，马钱子碱与HSA的结合常数(K)分别为2.12×10⁴ L/mol和1.97×10⁴ L/mol，结合位点数(n)分别为1.07和1.07；士的宁与HSA的K分别为6.34×10.3 L/mol和3.05×10³ L/mol，n分别为1.01、0.97。马钱子碱、士的宁与HSA间的作用力主要为氢键和范德华力。结论 马钱子碱、士的宁与HSA能自发形成不发荧光的复合物，这种药物蛋白结合可能对马钱子碱、士的宁的药动学过程产生一定影响。     

光谱法研究槲皮苷与人血清白蛋白的相互作用

目的 研究槲皮苷与人血清白蛋白（HSA）的相互作用,并探讨葡萄糖对二者结合的影响。方法 应用光谱法研究槲皮苷与HSA的作用机制,以双对数方程和能量转移原理计算槲皮苷与HSA的结合常数、结合位点数和结合距离;根据热力学参数判断二者的作用力类型;用同步荧光光谱考察槲皮苷对HSA构象的影响;观察葡萄糖浓度对反应结合常数和结合位点数的影响。结果 槲皮苷对HSA的荧光猝灭过程为生成复合物的静态猝灭;结合常数和结合位点数随温度的升高而降低;结合距离小于7 nm;二者主要以疏水作用力相结合;槲皮苷与HSA的相互作用改变了色氨酸残基所处的微环境;葡萄糖的加入使结合常数和结合位点数均增加。结论 槲皮苷能与HSA结合并改变HSA的构象,生理浓度的葡萄糖可增加槲皮苷与HSA的结合常数和结合位点数。     

MPA稳定的CdTe量子点合成及Cu2+检测应用

通过水相法制备3-巯基丙酸(MPA)稳定的碲化镉量子点(CdTe QDs),即MPA-CdTe QDs。研究Cu²⁺对发射波长为599 nm的MPA-CdTe QDs荧光猝灭效应,发现Cu²⁺浓度与荧光猝灭强度之间满足Stern-Volmer修正方程的线性关系。通过多项式拟合得出Cu²⁺浓度在2.28×10^-6~18.24×10^-6 mol/L和4.8×10^-7~12×10^-7mol/L两个区间范围内与MPA-CdTe QDs的荧光强度F₀/F的多项式关系分别为:F₀/F=7.999-2.470c+0.339c²,F₀/F=3.154-0.160 c+0.049 c²,拟合度分别为0.991,0.993。MPA-CdTe QDs对Cu²⁺检测限可达1.326×10^-7 mol/L。     

荧光法研究姜黄素与牛血清白蛋白的结合作用

目的 研究姜黄素（CU）与牛血清白蛋白（BSA）之间的作用机制。方法 采用变温试验研究二者之间的猝灭类型,求算结合数（n）和结合常数。结果 静态猝灭是导致BSA荧光猝灭的主要原因,CU与BSA结合反应的平衡常数（K₀）为5.26×10⁶（21 ℃）和4.60×10⁶（31 ℃）,n为1.35。通过计算结合反应的热力学参数,推断CU与BSA之间的作用力以疏水力为主。结论 荧光法适合于研究CU与蛋白质的结合反应,具有简便快速、灵敏度高等优点。     

遮荫对南五味子光合特性的影响

目的 研究南五味子Kadsura japonica栽培中的耐荫能力。方法 对南五味子进行不同遮荫处理,利用7230G分光光度计测定叶片的叶绿素量;利用Li-6400光合测定仪测其气体交换数据;利用PAM-2100脉冲调制荧光仪测定叶片的叶绿素荧光参数。结果 随着遮荫强度的增加,叶绿素总量、光饱和点（LSP）、净光合速率（Pn）迅速上升而后又降低,在70%遮荫处理时达最大值,分别为(2.013±0.263) mg/dm², (749±10.84) μ mol/(m²·s), (7.26±0.15) μ mol/(m²·s);光补偿点（LCP）表现为先降低后升高趋势,在70%遮荫处理时最小,为(4.92±0.20) μ mol/(m²·s)。开放系统Ⅱ（PSⅡ）反应中心光化学效率F_V/Fm总体变化不显著,光电子产额（Yield）、电子传递速率（ETR）、叶绿素荧光的光化学猝灭（qP）和叶绿素荧光的非光化学猝灭（qN）则是先上升后降低,与Pn变化一致,均在70%遮荫处理时达峰值,分别为0.761±0.027、(3.583±0.674) μ mol/(m²·s)、0.990±0.011、0.892±0.030。结论 适度遮荫有利于南五味子生长,这主要是适度遮荫条件下更有利于各种酶活性的激发。     

苦味酸类成分蛇麻酮和葎草酮对大鼠成骨细胞和破骨细胞的干预作用

目的 研究苦味酸类成分蛇麻酮和葎草酮对大鼠成骨细胞及破骨细胞活性的干预作用。方法 以新生24 h的Wistar大鼠所分离的成骨细胞和破骨细胞为研究对象,设置对照组,蛇麻酮处理低（10^-15 mol/L）、中（10^-14 mol/L）、高（10^-13 mol/L）剂量组,以及葎草酮处理低（10^-15 mol/L）、中（10^-14 mol/L）、高（10^-13 mol/L）剂量组。药物处理后,分别用MTT法、碱性磷酸酶（ALP）活性检测以及茜素红染色法评价蛇麻酮和葎草酮对成骨细胞增殖、分化及骨矿化水平的影响。采用破骨细胞计数以及抗酒石酸酸性磷酸酶（TRAP）活性检测评价蛇麻酮和葎草酮对破骨细胞活性的影响。采用试剂盒法检测骨钙素（OCN）水平,采用蛋白质印迹法检测骨形成相关蛋白骨桥蛋白（OPN）、骨涎蛋白（BSP）、骨形成蛋白（BMP-2）以及骨吸收相关蛋白组织蛋白酶K（CK）、基质金属蛋白酶9（MMP-9）的表达,评价蛇麻酮和葎草酮在骨代谢调控方面的作用。结果 在大鼠成骨细胞水平上,与对照组相比,蛇麻酮在10^-15、10^-14 mol/L浓度下可促进成骨细胞增殖（P<0.05）,在10^-14、10^-13 mol/L浓度下可提高ALP活性以及骨矿化水平（P<0.05,P<0.01）,在10^-13 mol/L浓度下可促进OCN的表达（P<0.01）,在10^-14、10^-13 mol/L浓度下可提高骨形成相关蛋白BSP和BMP-2的表达（P<0.05）;葎草酮在10^-15~10^-13 mol/L浓度下可促进成骨细胞增殖、提高ALP活性以及骨矿化水平（P<0.01）、提高骨形成相关蛋白OCN、OPN的表达（P<0.05,P<0.01）,在10^-14、10^-13 mol/L浓度下可促进BSP和BMP-2的表达（P<0.05）。在大鼠破骨细胞水平上,与对照组相比,蛇麻酮和葎草酮在10^-15~10^-13 mol/L浓度下均可降低破骨细胞数目（P<0.01）,抑制CK的表达（P<0.05,P<0.01）;葎草酮在10^-15~10^-13 mol/L浓度下可抑制MMP-9的表达（P<0.05,P<0.01）。结论 本研究在细胞水平上初步明确了蛇麻酮和葎草酮可通过促进成骨细胞骨形成、抑制破骨细胞骨吸收来防治骨丢失,为骨质疏松药物的开发提供了新资源。     

HPLC法测定咳喘清片中盐酸麻黄碱和盐酸伪麻黄碱

目的 建立咳喘清片中盐酸麻黄碱和盐酸伪麻黄碱的同时测定方法。方法 采用高效液相色谱法,色谱柱为DIONEX Acclaim^? C₁₈(250 mm×4.6 mm,5 μm,Dionex Bonded Silica Products);柱温：40 ℃;流动相为0.02 mol/L磷酸二氢钾溶液(磷酸调节pH值至2.7)-乙腈(97∶3,含0.1%三乙胺);体积流量：1.3 mL/min;检测波长：210 nm;进样量：20 μL。结果 盐酸麻黄碱在13.0~201.0 μg/mL(r=0.999 9),盐酸伪麻黄碱在6.2~98.5 μg/mL(r=0.999 9)线性关系均良好,回收率RSD均小于5%。结论 该方法准确、稳定、可靠,更好地用于咳喘清片中盐酸麻黄碱和盐酸伪麻黄碱的质量控制。     

黄芪总苷对地塞米松和β-淀粉样肽蛋白联合诱导大鼠海马神经元损伤的影响

目的 探讨黄芪总苷 (astragalosides) 对地塞米松 (Dexamethasone, DEX) 与β-淀粉样蛋白 (Amyloid β-peptide protein, Aβ) 联合诱导大鼠海马神经元损伤的影响。方法 通过检测海马神经元细胞活性,探讨黄芪总苷能否抑制 Aβ和 DEX 引起海马神经元活力下降;通过检测海马神经元胞内 Ca²⁺浓度 (［Ca²⁺］_i),探讨黄芪总苷是否通过降低 ［Ca²⁺］_i 抑制海马神经元凋亡;通过检测 P-tau-Thr231 蛋白水平,进一步探讨黄芪总苷抗 Aβ 和 DEX 引起的海马神经元毒性机制。结果 黄芪总苷 (10、20、40 μg/mL) 对体外 DEX (10 μmo/L)+Aβ_25-35 (5 μmol/L) 引起胎鼠海马神经元的损伤有保护作用 (P＜0.01);黄芪总苷能明显降低 DEX (10 μmol/L)+Aβ_25-35 (5 μmol/L) 升高的海马神经元［Ca²⁺］_i、P-tau 蛋白水平 (P＜0.05)。结论 黄芪总苷对 Aβ和 DEX 诱导的大鼠海马神经元损伤有一定的保护作用。     

RP-HPLC法测定普乐安片中槲皮素和山柰素

目的 建立RP-HPLC法测定普乐安片中槲皮素和山柰素的方法。方法 色谱柱为Hypersil ODS2 C₁₈（250 mm×4.6 mm,5 μm）,流动相为甲醇-0.4%磷酸溶液（49∶51）,体积流量1.0 mL/min,检测波长360 nm,柱温25 ℃,进样量10 μL。结果 槲皮素和山柰素分别在1.526～305.300 μg/mL（r＝1.000 0）、2.26～451.90 μg/mL（r＝1.000 0）线性关系良好;平均回收率分别为98.05%（RSD＝1.72%）和99.82%（RSD＝1.23%）。结论 方法操作简便、准确,重现性好,可用于普乐安片的质量控制。     

荧光分析法测定元宝枫叶中总黄酮含量的研究

目的 采用荧光分析方法,对元宝枫叶总黄酮含量进行测定研究.方法 以芦丁为标准对照品,利用黄酮与Al3＋形成稳定荧光络合物的性质,选择激发波长λex=470 nm,发射波长λem=547 nm,研究乙醇的体积分数、5%Al（NO3）3的加入量、pH、放置时间以及绿原酸对荧光强度的影响.结果最佳测定条件是以60%乙醇溶液作为溶剂,在10 mL的容量瓶中加入1 mL 5% Al（NO3）3,并使测定溶液pH=5.该方法测定芦丁质量浓度在6.55×10-6mol/L～3.20×10-5mol/L与荧光强度具有良好的线性关系,且回归方程为y=1.147 7x ＋ 0.430 4,R2=0.999 1.结论 采用荧光分析法,通过改变激发光的波长,能够减小绿原酸对黄酮测定的干扰,可作为元宝枫叶总黄酮含量测定的参考方法.     

M-CSF对卵泡颗粒细胞功能调节及其分子机制

目的 探讨巨噬细胞集落刺激因子(M-CSF)对卵泡颗粒细胞的功能调节及其分子机制。方法 取2014年7月~2014年10月间,在浙江大学医学院附属妇产科医院接受体外受精-胚胎移植的30例因男性因素不孕妇女的卵泡液,患者平均年龄30.8±2.1岁,提取颗粒细胞培养24h后,分为空白对照组、M-CSF组(10、25、50、100ng/ml rhM-CSF)、M-CSF+来曲唑组(0、10、25、50、100ng/ml rhM-CSF+10^-6mol/L来曲唑)、FSH组(10、25、50、100IU/ml rhFSH)、FSH+来曲唑组(0、10、25、50、100IU/ml rhFSH+10^-6mol/L来曲唑),继续培养24h,用ELISA法测定培养液E₂浓度,RT-PCR法测定颗粒细胞FSH受体mRNA及M-CSF受体mRNA的表达。取指数生长期的人卵巢肿瘤颗粒细胞系COV434,给予不同浓度(0、10、25、50、100ng/ml)的人重组M-CSF,于37℃、5%CO₂温箱内培养24h,MTS比色实验测定细胞增殖率。用Western blot法检测rhM-CSF(50ng/ml)处理后COV434细胞MAPK通路相关蛋白的表达。结果 颗粒细胞培养液中雌二醇(E₂)浓度与rhM-CSF或rhFSH浓度呈正相关(P<0.05)。rhFSH在一定浓度范围(<25IU/ml)内可促进颗粒细胞M-CSF受体mRNA表达(P<0.05),与来曲唑联合作用后,不同浓度组颗粒细胞M-CSF受体mRNA的表达水平与对照组相比均明显升高(P<0.05)。rhM-CSF单独或与来曲唑联合作用,均可促进颗粒细胞FSH受体mRNA表达(P<0.05)。随着rhM-CSF浓度的升高,COV434细胞的增殖能力也呈上升趋势。50ng/ml浓度的rhM-CSF能以时间依赖的方式瞬间激活JNK及P38信号通路,分别使用JNK抑制剂SP600125、P38抑制剂SB203580预处理后,并不影响各组雌激素水平。结论 M-CSF可能在促进颗粒细胞的增殖分化以及雌激素的合成分泌过程中起重要作用。     

二噻吩基喹喔啉的氧化聚合及其酸致变色性能

以双三苯基膦二氯化钯(Pd(PPh₃)₂Cl₂)为催化剂,通过Stille偶联反应合成二噻吩基苯并噻二唑,将其作为原料分别与5,6二酮-1,10-邻菲罗啉、菲醌、苊醌和联苯甲酰反应,分别制备了4个二噻吩基喹喔啉衍生物(P1、P2、P3、P4)。以无水FeCl₃作为氧化剂,4个二噻吩基喹喔啉衍生物通过溶液氧化聚合为4个均聚物。用FT-IR和¹H-NMR等测试手段对单体及聚合物的结构进行了表征。通过UV-Vis-NIR光谱和荧光光谱法,研究了聚合物本征态以及与不同浓度的三氟乙酸(TFA)作用时的光学性能。结果显示,聚合物P2~P4对低浓度TFA具有良好的敏感性,其中聚合物P2与8.0×10^-4 mol/L的TFA作用后,P2的CHCl₃溶液的颜色发生明显变化,并且其UV-Vis-NIR光谱在600~1 100 nm出现新的宽吸收带。P2~P4具有一定的荧光性能,且向溶液中加入一定浓度TFA时,聚合物荧光强度减弱且发射波长发生蓝移,其中聚合物P2与8.0×10^-6 mol/L的TFA作用时其荧光发射强度明显减弱。     

基于荧光光谱的硫酸阿托品拮抗中乌头碱毒性的机制研究

目的 研究模拟生理条件下中乌头碱（MA）与牛血清白蛋白（BSA）的键合作用,以及硫酸阿托品（AS）对其相互作用的影响。方法 主要采用荧光光谱法及紫外吸收光谱法进行研究。结果 MA对BSA有较强的荧光猝灭作用,猝灭机制为动态猝灭。MA与BSA表观结合常数（K_b）和结合位点数（n）均随着温度升高而增大,二者之间的相互作用力类型主要为疏水作用,结合距离为4.44 nm,该反应是自发进行的。同步荧光光谱图的信息表明MA对蛋白微环境有影响。AS使MA和BSA的K_b和n均减小;抑制MA对BSA构象的改变。结论 MA与BSA能发生相互作用,AS与MA间存在竞争作用,能够增加游离型MA浓度,通过减少MA在生物体内的积累,加快代谢,发挥解毒作用。     

叶酸受体靶向土大黄苷前药与HSA相互作用研究

目的 从分子水平上研究叶酸受体靶向土大黄苷前药(FRHA)与人血清白蛋白(human serum albumin,HSA)的结合作用.方法 模拟生理条件,采用荧光光谱和紫外-可见光谱研究FRHA与HSA结合反应的光谱学特征,探讨药物对蛋白质内源性荧光的淬灭机制,并结合三维、同步荧光光谱和圆二色谱分析FRHA对HSA微环境及构象的影响.结果 FRHA-HSA复合物的形成将导致HSA发生荧光淬灭,298、302、306和310 K时FRHA与HSA相互作用的结合常数分别为1.4322×105、1.1793×105、0.9334×105和0.7896×105 L/mol.由实验计算出热力学参数焓变ΔH为-38.772 kJ/mol,熵变ΔS为-31.39 J/(mol·K).结论 FRHA-HSA复合物的形成是自发进行的,范德华力和氢键作用力是使该复合物稳定的主要作用力,并且复合物的形成使HSA的微环境和构象发生改变,进而导致HSA发生荧光淬灭,淬灭机制为静态淬灭.     

Inhibitory effects of chlorpheniramine and astemizolum on contraction of isolated rat and rabbit uteri induced by oxytocin and PGF2α

Summary The contraction of isolated rat and rabbit uteri induced by oxytocin and PGF_2α was markedly inhibited by chlorpheniramine (Chl) and astemizolum (Ast), both of which also decreased the resting tension of uteri, and their spontaneous contraction. The inhibitory effects of both drugs were dose-dependent. At high concentrations, Chl 7.4× 10^-4 mol/L and Ast 10^-4 mol/L could counteract the contraction of the uteri induced by Oxy and PGF_2α, and their spontaneous contraction as well. They decreased the resting tension to the lower level. The mechanism of their non-special relaxed action on uteri could not be completely explained only by their H₁-receptor blocking action. Whether they act by blocking calcium channel or by inhibiting calmodulin (CaM) remains to be further explored.     

石墨烯量子点荧光猝灭-恢复法测定Cu2+与谷胱甘肽的含量

通过在温和条件下氧化石墨粉的方法合成高分散性、高荧光强度的石墨烯量子点(GQDs),并运用此GQDs对Cu²⁺和GSH具有荧光猝灭-恢复的效应,建立对这两种物质简便、快捷的检测方法。Cu²⁺与GSH的浓度分别在1.0~10.0 mmol/L、0.1~1.0 mmol/L范围内与GQDs的荧光强度呈良好线性关系,检测限分别为0.01和0.1 mmol/L。此外,在实际样品的检测中,加标法测得的回收率分别为93%~101%、96%~107%。该方法操作简便,测定准确,精密度高,且常见的金属离子及潜在共存物质对Cu²⁺与GSH的检测均没有干扰。     

Effects of Benzo(a)pyrene on the Contractile Function of the Thoracic Aorta of Sprague-dawley Rats

ObjectiveTo evaluate the possible vascular effects of an environment carcinogen benzo(a)pyrene (BaP).MethodsThe cytotoxicit of BaP and rat liver S9 (0.25 mg/mL)-activated BaP were examined by MTT assay. Thoracic aortic rings were dissected from Sprague-Dawley rats. Contraction of aortic rings was induced by 60 mmol/L KCl or 10^?6 mol/L phenylephrine (PE) in an ex-vivo perfusion system after BaP (100 μmol/L) incubation for 6 h. [Ca²⁺]_i was measured using Fluo-4/AM. For in-vivo treatment, rats were injected with BaP for 4 weeks (10 mg/kg, weekly, i.p.).ResultsBaP (1–500 μm) did not significantly affect cell viability; S9-activated BaP stimulated cell proliferation. BaP did not affect the contractile function of endothelium-intact or -denuded aortic rings. BaP did not affect ATP-induced ([Ca²⁺]_i) increases in human umbilical vein endothelial cells. In BaP-treated rats, heart rate and the number of circulating inflammatory cells were not affected. Body weight decreased while blood pressure increased significantly. The maximum aortic contractile responses to PE and KCl and the maximum aortic relaxation response to acetylcholine were significantly decreased by 25.0%, 34.2%, and 10.4%, respectively.ConclusionThese results suggest, in accordance with its DNA-damaging properties, that metabolic activation is a prerequisite for BaP-induced cardiovascular toxicity.     

高效液相 (HPLC) 荧光法同时测定人血浆中4种硫醇物的浓度

 目的  建立同时测定人血浆中半胱氨酸(cysteine,Cys)、同型半胱氨酸(homocysteine,Hcy)、半胱氨酰甘氨酸(cysteinylglycine,CysGly)和谷胱甘肽(glutathione,GSH)等4种硫醇物的高效液相色谱法(high-performance liquid chromatography,HPLC)。方法  血浆经磷酸盐缓冲液(phosphate buffered saline,PBS)稀释后,用三(2-羧乙基)膦盐酸盐［tris-(2-carboxyethyl)-phosphine hydrochloride,TCEP］还原,用三氯乙酸(trichloroacetic acid,TCA)溶液进行蛋白沉淀,再用7-氟苯呋咱-4-硫酸铵盐(7-fluorobenzofurazan-4-sulfonic acid ammonium salt,SBD-F)进行衍生化反应,荧光检测器检测。色谱条件:色谱柱为Kromasil C18 (250 mm×4.6 mm,5 μm),柱温29 ℃;流动相为甲醇:0.1 mol/L醋酸盐缓冲液(pH=4.5,3.5∶96.5,V/V),流速为0.8 mL/min,等度洗脱。激发波长385 nm,发射波长515 nm。采用外标法定量。结果  Cys、Hcy、CysGly和GSH的线性范围分别为50~800 μmol/L、4~64 μmol/L、10~160 μmol/L和2.5~40 μmol/L。Cys、Hcy、CysGly和GSH的最低检测浓度分别为2.5 μmol/L、1.0 μmol/L、1.0 μmol/L和1.0 μmol/L。各组分日内、日间精密度RSD均<12 %。平均回收率为95.01 %~116.17 %。结论  该方法具有检测时间短、灵敏性高、精密度和准确度好的特点,适用于临床人血浆中硫醇物浓度的常规检测。