灵芝酸A对人前列腺癌细胞DU-145细胞凋亡的影响

目的 初步探讨灵芝酸A对人前列腺癌细胞DU-145细胞凋亡的影响.方法 培养DU-145细胞,然后使用0、0.1、0.25以及0.5 mmol/L灵芝酸A进行诱导,处理DU-145细胞24 h后收集细胞然后提取总RNA;处理DU-145细胞48 h后收集细胞提取总蛋白;采用荧光定量PCR和Western blot检测凋亡相关基因Bcl-2、Bax、Caspase-3和LivinαmRNA水平和蛋白水平的表达变化.结果 采用灵芝酸A处理人前列腺癌细胞DU-145细胞能够显著上调Bax和Caspase-3 mRNA水平和蛋白水平的表达量(P<0.01),显著下调Bcl-2以及LivinαmRNA水平和蛋白水平的表达量(P<0.01),促进前列腺癌细胞DU-145细胞凋亡,并且随灵芝酸A剂量的升高细胞凋亡增加.结论 灵芝酸A能够促进DU-145细胞凋亡,可能是通过调节凋亡相关基因Bcl-2、Bax、Caspase-3和Livinα的表达发挥作用.     

金荞麦Fr4对小鼠lewis肺癌细胞MMP-9、TIMP-1蛋白表达的影响

目的 探讨金荞麦提取物Fr4对小鼠lewis肺癌组织基质金属蛋白酶-9(matrix metalloproteinase，MMP-9)、金属蛋白酶组织抑制因子-1(tissue inhibitors of metallproteinase，TIMP-1)蛋白表达的影响。方法 利用C57／BL6小鼠移植性肿瘤lewis肺癌模型，观察金荞麦Fr4对小鼠lewis肺癌生长的影响；利用免疫组织化学SP法研究金荞麦Fr4对lewis肺癌中MMP-9、TIMP-1表达的影响。结果 金荞麦Fr4在400mg／kg剂量时可明显抑制C57／BL，6小鼠lewis肺癌生长；金荞麦Fr4可下调MMP-9的表达，但不影响TIMP-1的活性。结论 金荞麦提取物Fr4具有明显的抗肿瘤作用，分子机制可能与下调MMP-9的表达有关。     

MMP-9与TIMP-1的表达及其与宫颈癌浸润、转移的关系

目的检测MMP-9和TIMP-1在宫颈癌中的表达,探讨其临床病理学意义。方法应用免疫组化SP法检测64例宫颈癌、27例宫颈非典型增生和16例正常宫颈组织中MMP-9和TIMP-1的表达,分析其与宫颈癌临床病理分期、分化、淋巴结转移的关系及两者的相关性。结果MMP-9和TIMP-1在正常宫颈黏膜、非典型增生、癌组织中的表达差异有统计学意义（P〈0.05）,在宫颈癌不同临床病理分期、有无淋巴转移组中的表达差异有统计学意义（P〈0.05）,在不同分化组的表达差异无统计学意义（P〉0.05）;两者的表达呈负相关关系。结论MMP-9和TIMP-1在宫颈癌组织中的表达和临床分期、淋巴结转移有关,和分化无关,两者的表达具有相关性。     

辛伐他汀含药血清对U937单核巨噬细胞MMP-9及TIMP-1表达与分泌的影响

【目的】探讨辛伐他汀含药血清对U937单核细胞源巨噬细胞基质金属蛋白酶-9（MMP-9）及金属蛋白酶组织抑制因子-1（TIMP-1）表达与分泌的影响。【方法】15只新西兰大白兔随机分为正常对照组（NL,n=5）、粥样硬化模型组（AS,n=5）和辛伐他汀含药血清组（SIM,n=5）。通过喂养高脂饲料,建立兔动脉粥样硬化模型后,予辛伐他汀药液灌胃,获得含药血清。分别予不同浓度含药血清（5%、10%、20%）培养U937单核细胞源巨噬细胞24 h,应用逆转录聚合酶链反应检测MMP-9 mRNA及TIMP-1 mRNA的表达,以及应用酶联免疫吸附试验检测MMP-9及TIMP-1蛋白的分泌。【结果】与相同浓度AS组比较,5%、10%、20%SIM组U937单核细胞源巨噬细胞MMP-9 mRNA表达均显著性降低（P值为0.005、0.041和0.013）;5%、10%、20%SIM组TIMP-1 mRNA表达无显著性差异（P值均〉0.05）。而与相同浓度AS组比较,不仅10%、20%SIM组MMP-9分泌显著性减少（P值分别为0.009和0.001）,而且10%、20%SIM组TIMP-1分泌均显著性增加（P值分别为0.017和0.001）。【结论】辛伐他汀可抑制单核巨噬细胞MMP-9的表达和分泌,以及促进TIMP-1的分泌。     

MAPK和NF-κB通路抑制剂对IL-1β诱导滑膜细胞MMP-2活性的影响

目的研究白介素-1β(Interleukin-1β,IL-1β)对人膝关节滑膜细胞基质金属蛋白酶-2(Matrix metalloprotein-ase-2,MMP-2)活性的影响及MAPK和NF-κB信号通路抑制剂对该过程的影响。方法用不同浓度的IL-1β处理体外培养的滑膜细胞72 h,明胶酶谱法检测细胞培养液中MMP-2的活性;选取10 ng/ml的IL-1β单独或分别与4种信号通路抑制剂(NF-κB抑制剂Bay11-7082,MAPK抑制剂SB203580、PD98059和SP600125)处理滑膜细胞,处理后12、24、48、72 h检测MMP-2的活性。结果 IL-1β随浓度和处理时间的增加明显上调滑膜细胞MMP-2的活性(P<0.05);与IL-1β处理组比较,Bay11-7082明显抑制了IL-1β诱导MMP-2活性的上调,并使72 h时MMP-2的活性降至13%(P<0.01);其他抑制剂对IL-1β诱导MMP-2活性上调的影响无统计学差异(P>0.05)。结论 IL-1β以时间和剂量依赖方式,通过NF-κB信号通路诱导滑膜细胞MMP-2活性。     

急性脑梗死患者血清MMP-9及TIMP-1的表达及意义

目的观察急性脑梗死患者血清基质金属蛋白酶-9（matrix metaflOproteinase-9,MMP-9）及其抑制因子基质金属蛋白酶抑制因子-1（tissue inhibitor of matrixmetalloproteinase-1,TIMP-1）的含量变化,探讨其在脑梗死发生发展过程中的作用和意义。方法用ELISA法检测70例急性脑血栓形成,54例腔隙性脑梗死患者以及104例健康体检者血清MMP-9和TIMP-1的含量。同时采用免疫比浊法测高敏C-反应蛋白（high sensitive C—reactive protein,hs—CRP）水平,并进行外周血白细胞计数。结果急性脑血栓形成组的血清MMP-9、TIMP-1的水平显著高于腔隙性脑梗死组和健康对照组（P〈0.01）。脑血栓形成组血清MMP-9、TIMP-1水平与白细胞计数、hs—CRP呈正相关（P〈0.01）;与空腹血糖、总胆固醇、甘油三酯、低密度脂蛋白胆固醇无明显相关性（P〉0.05）。结论脑梗死急性期检测外周血MMP-9、白细胞计数、hs—CRP水平对于判断脑梗死的病灶大小、严重程度及近期预后有着一定的临床意义。     

银杏叶提取物对糖尿病大鼠肾组织MMP-2及TIMP-2表达的影响

目的:观察基质金属蛋白酶-2(MMP-2)、基质金属蛋白酶抑制因子-2(TIMP-2)在糖尿病大鼠肾组织中的表达及银杏叶提取物(EGB)对两者表达的影响。方法:30只雄性SD大鼠随机分为3组:正常对照组(C组),糖尿病组(DM组),EGB治疗组(EGB组,8 mg.kg-1.d-1)。腹腔注射链脲佐菌素(STZ)诱导大鼠造成糖尿病模型,EGB组用银杏叶提取物进行灌胃。8周后,用免疫组化方法检测各组大鼠肾皮质MMP-2、TIMP-2的蛋白表达。结果:糖尿病组大鼠肾小球MMP-2蛋白表达较正常对照组明显减少,TIMP-2蛋白明显升高(P<0.01);EGB组MMP-2较糖尿病组表达升高(P<0.01)、TIMP-2表达较糖尿病组减少(P<0.01)。结论:EGB可通过调节MMP-2/TIMP-2的平衡,减少细胞外基质积聚而对糖尿病大鼠起到肾脏保护作用。     

脑膜瘤组织中MMP-9、TIMP-1的表达

目的:探讨脑膜瘤组织中基质金属蛋白酶- 9(MMP- 9)及其组织抑制因子 (TIMP)- 1的表达。方法:采用免疫组化S- P法检测 10例正常蛛网膜组织、28例良性脑膜瘤组织和 16例恶性脑膜瘤组织中MMP -9及TIMP- 1的表达水平。结果:正常蛛网膜组织、良性脑膜瘤组织和恶性脑膜瘤组织中MMP- 9的阳性表达率分别为 0%、25. 0%和 62. 5%,恶性脑膜瘤组织中MMP- 9阳性率高于良性脑膜瘤组织,差异有统计学意义(P<0. 01);正常蛛网膜组织中TIMP 1的表达率最高 (100. 0% ),良性脑膜瘤组织次之 (89. 3% ),恶性脑膜瘤组织最低 18. 8%,各组间比较差异有统计学意义(P<0. 01)。结论:MMP- 9的高表达和TIMP 1的低表达与脑膜瘤的发病过程有关。     

蝎毒提取物抑制Lewis肺癌化疗期间再增殖实验研究

目的 观察转移性Lewis肺癌在5-Fu化疗期间再增殖加速现象及蝎毒提取物（PESV）对再增殖的抑制作用。方法 C57BL/6小鼠尾iv Lewis肺癌细胞,从第7天开始,每隔7天ip 5-Fu 1次,建立Lewis肺癌化疗期间再增殖模型,以PESV干预,每隔7天处死6只动物,统计肺转移灶数目和肺质量,并以免疫组织化学方法检测Lewis肺癌增殖细胞核抗原（proliferating cell nuclear antigen,PCNA）、血管内皮生长因子（vascular endothelial growth factor,VEGF）表达水平和微血管密度（microvessel dentity,MVD）。结果 模型组从第21天到第28天,大肿瘤转移灶数目平均增加2.5个,而从第14～21天仅平均增加0.8个;模型组肺质量增加在第21～28天显著大于第14～21天;模型组PCNA表达在第21天表达最低,在第28天最高,但第28天与第14天差异无显著性,PESV高、低剂量组在第28天表达水平皆低于模型组,以PESV高剂量组作用显著。模型组VEGF表达在第28天显著上调（与模型组第21天相比,P＜0.01）。与模型组相比,PESV高剂量组在第21、28天肿瘤组织VEGF表达下调,尤其是在第28天表达显著下调（P＜0.01）,而PESV低剂量组仅在第28天与模型组差异存在显著性（P＜0.05）。MVD计数显示,模型组在第21天最低,在第28天最高,但在第28天和第14天差异无显著性。而在PESV高剂量组,第14天高于第21天,第21天高于第28天,差异均有显著性。在PESV低剂量组,第14天高于第21天,但第21天与第28天差异无显著性。结论 在5-Fu对Lewis肺癌化疗期间存在再增殖加速现象,PESV可有效抑制此Lewis肺癌再增殖,作用机制之一是通过抑制肿瘤新生血管生成来抑制肿瘤细胞再增殖。     

蝎毒多肽提取物抑制胰腺癌肝转移作用的实验研究

目的探讨东亚钳蝎蝎毒多肽提取物（PESV）对胰腺癌肝转移的抑制作用。方法筛选出高肝转移的胰腺癌细胞亚型MIA PaCa2 3,用Transwell小室模型观察PESV对MIA PaCa2 3细胞体外侵袭能力的影响;尾静脉注射MIA PaCa2 3细胞建立高肝转移率的裸鼠胰腺癌模型,对比PESV和化疗药物吉西他滨（gemcitabine）以及抗血管生成剂TNP 470对裸鼠胰腺癌肝转移的抑制作用。 结果PESV可以抑制MIA PaCa2 3细胞穿过人工基底膜的能力;PESV处理组肝转移抑制率为70％（7/10）,与吉西他滨处理组相近（8/10）,明显高于TNP 470处理组（2/9）。结论PESV作为一种“抗血管-细胞毒”药物对胰腺癌肝转移具有明显的抑制作用。     

蝎毒多肽提取物对小鼠Lewis肺癌生长转移的抑制作用

目的 观察蝎毒多肽提取物(PESV)对Lewis肺癌(LLC)生长及转移的影响并探讨其作用机制.方法 采用30只C57BL/6J小鼠,右腋下接种Lewis肺癌细胞悬液,建立皮下种植瘤模型,随机分为荷瘤对照组、5-FU治疗组、PESV治疗组,连续灌胃给PESV18d,检测肿瘤体积并计算抑瘤率.另取20只C57BL/6J小鼠,尾静脉注射Lewis肺癌细胞悬液,建立Lewis肺癌实验转移模型,随机分为荷瘤对照组和PESV组,连续灌胃给PESV28d,观察肺部转移灶数目并计算转移抑制率;采用免疫组化法和ELISA法分别检测瘤组织及血清中骨桥蛋白(OPN)和基质金属蛋白酶-9(MMP-9)的表达.结果 PESV抑瘤率为46.02%,肺转移抑制率76.19%;与荷瘤对照组相比,瘤组织和血清中OPN和MMP-9的表达明显降低(P<0.05).结论 PESV能抑制小鼠Lewis肺癌的生长与转移,其机制可能与抑制OPN和MMP-9的表达有关.     

蝎毒多肽提取物对肿瘤生长和细胞免疫功能的影响

目的：观察蝎毒多肽提取物（PESV）对大鼠W256癌肉瘤抑制作用及其对荷瘤大鼠细胞免疫功能的影响。方法：将30只Wistar荷瘤大鼠,随机分为模型组、5-FU治疗组和蝎毒治疗组,连续灌胃给蝎毒多肽提取物7d,处死,计算各组抑瘤率;流式细胞术（FCM）检测外周血T淋巴细胞亚群变化;酶联免疫吸附试验（ELISA）法测定血清中细胞因子INF-γ和IL-4含量。结果：蝎毒治疗组抑瘤率为55.21%。与模型组相比较,蝎毒治疗组荷瘤大鼠外周血中CD4+T细胞比例明显提高,CD8+T细胞明显降低,CD4+T/CD8+T值明显增高,差异均具有统计学意义（P＜0.05）;血清中细胞因子INF-γ含量明显升高,而IL-4含量显著降低,差异均具有统计学意义（P＜0.05）。结论：蝎毒多肽提取物对W256荷瘤大鼠肿瘤有明显抑制作用,通过提高细胞免疫功能,逆转荷瘤机体Th1/Th2漂移,改变荷瘤机体免疫抑制状态,发挥抗肿瘤作用。     

线叶菊总黄酮抗细菌性感染实验研究

目的 探讨线叶菊总黄酮抗细菌性感染的作用。方法 采用管碟法进行体外抑菌试验,检测线叶菊总黄酮对临床常见致病细菌的抑菌效果;采用耐青霉素金黄色葡萄球菌腹腔感染小鼠模型,以保护率为指标,观察线叶菊总黄酮的体内抗菌活性;采用小鼠体内淋巴细胞转化实验及小鼠腹腔巨噬细胞吞噬功能实验,检测线叶菊总黄酮对小鼠免疫功能的影响;检测线叶菊总黄酮的急性毒性。结果 线叶菊总黄酮对多种实验菌均有抑制作用,尤其对耐青霉素金黄色葡萄球菌有明显抑菌作用,剂量为442 mg/kg时,明显降低感染耐青霉素金黄色葡萄球菌小鼠的死亡率;还可促进淋巴细胞的转化和增强小鼠腹腔巨噬细胞吞噬功能,与对照组比较差异显著（P＜0.01）。毒性实验未见小鼠死亡,属实际无毒级。结论 线叶菊总黄酮毒性低,体外对多种细菌有抑制作用,且体内、外对耐青霉素金黄色葡萄球菌均有良好的抑菌作用,并可提高小鼠的免疫功能。     

小檗碱抑制组织因子活性和静脉血栓形成的实验研究

目的 研究小檗碱体内外对抑制组织因子（tissue factor,TF）活性和静脉血栓形成的影响。方法 采用肿瘤坏死因子-α（TNF-α）活化人单核细胞株THP-1细胞模型,应用发色底物法测定TF的促凝活性,Western blotting检测TF蛋白表达,考察小檗碱体外对TF的作用;采用下腔静脉结扎致小鼠血栓模型,考察小檗碱体内给药对血浆TF活性及血栓形成的影响。结果 TNF-α（25 ng/mL）作用5 h能明显诱导THP-1细胞TF表达和活性增强,小檗碱（10～1 000 nmol/L）明显抑制TNF-α诱导的TF蛋白表达和促凝活性的增强,其IC₅₀约25.71 nmol/L;阳性药姜黄素1 000 nmol/L也具有明显抑制作用。小檗碱（1、10、100 mg/kg）单次ig给药,显著或非常显著降低下腔静脉结扎6 h致血栓模型小鼠升高的血浆TF促凝活性,并可明显减少血栓干、湿质量,阳性药华法林钠片1 mg/kg也有明显抑制作用。结论 小檗碱体内外给药均显著降低TF促凝活性及其蛋白表达,并可抑制TF相关的静脉血栓形成。     

蝎毒多肽提取物对人卵巢癌SKOV3细胞增殖及血管内皮生长因子、凝血酶敏感蛋白表达的影响

目的 观察蝎毒多肽提取物（简称蝎毒多肽）对人卵巢癌SKOV3细胞增殖及血管内皮生长因子（VEGF）、凝血酶敏感蛋白（TSP-1）表达的影响,进一步探讨蝎毒多肽的抗肿瘤作用机制。方法 MTT法检测蝎毒多肽对SKOV3细胞增殖的影响;免疫细胞化学法及Western boltting测定蝎毒多肽对SKOV3细胞VEGF、TSP-1蛋白表达的影响。结果 蝎毒多肽12.5～200 μg/mL对SKOV3细胞增殖有抑制作用,且呈明显的质量浓度相关性,质量浓度大于50 μg/mL时细胞增殖抑制作用显著（P＜0.01）。随着蝎毒多肽质量浓度的增加,SKOV3细胞TSP-1蛋白表达增加,VEGF蛋白表达下降（P＜0.01）。结论 蝎毒多肽能显著抑制VEGF的表达,促进TSP-1的表达,其抗肿瘤作用机制可能是通过抑制肿瘤细胞增殖、影响肿瘤细胞血管生成过程中关键因子的表达来实现的。     

异补骨脂查尔酮抑制IL-4产生及其机制研究

目的 从补骨脂单体化学成分中筛选抗哮喘的小分子化合物,并阐释其抗哮喘作用机制。方法 基于IL-4在哮喘病理中的作用,采用IL-4-GFP转基因报告小鼠（4get鼠）和流式细胞术,设计一种抑制白细胞介素-4（IL-4）产生的抗哮喘药物筛选新方法。结果 与DMSO组相比,异补骨脂查尔酮能显著抑制Th2细胞中IL-4的产生（P＜0.001）,减少转录因子GATA-3的表达（P＜0.01）,降低信号转导与转录激活因子STAT6磷酸化水平（P＜0.01）。结论 异补骨脂查尔酮通过抑制STAT6磷酸化而减少GATA-3的表达,从而抑制IL-4的产生,其具有开发成为治疗哮喘药物的潜力。     

白首乌新苷A抗肿瘤及诱导肿瘤细胞凋亡作用的研究

目的 评价白首乌新苷A (CA) 的体内外抗肿瘤活性及诱导肿瘤细胞凋亡的作用。方法 以3种人肿瘤细胞株为模型,用 MTT 法检测药物对肿瘤细胞增殖的影响;以小鼠移植性肉瘤 S₁₈₀ 为模型,检测药物对在体肿瘤生长的影响;以人乳腺癌细胞株 MCF-7 为模型,用 Wright′s-Giemsa 染色观察药物对细胞核形态的影响,并用流式细胞仪检测肿瘤细胞凋亡率;以体外培养的大鼠皮层神经元细胞为模型,评价药物对正常细胞的毒性。结果 CA 对3种人肿瘤细胞株的生长呈浓度依赖性抑制,其半数抑制浓度 (IC₅₀) 为 35.68～39.78 mg/L;CA 40、80、160 mg/kg 对 S₁₈₀ 内瘤生长的抑制率分别为 20.0%、28.0%、48.1%;CA 80 mg/L 处理后,MCF-7 细胞的凋亡率显著增高 (P＜0.01),细胞核出现固缩、断裂;CA 100 mg/L 对体外培养 8 d 的神经元无毒性。结论 CA 有明显的体内外抗肿瘤活性,诱导肿瘤细胞凋亡是其作用机制之一。     

东亚钳蝎蝎毒二级提取物XIII－2的钠通道阻滞作用

培养小鼠心肌细胞。用微电极胞内引导快反应心肌细胞动作电位。东亚钳蝎蝎毒二级提取物ＸＩＩＩ－２３μＧ·Ｍｌ－１使心肌细胞动作电位的除极有关参数全部减小，对动作电位时程与发放频率无影响。此效应于洗脱后立即消失。实验性钠通道失活同样使除极有关参数减小。应用钙通道阻滞剂后除极有关参数无改变。结果表明：ＸＩＩＩ－２有单纯钠通道阻滞作用。