整合子-基因盒系统与细菌耐药性

细菌耐药性的获得和传播主要与整合子-基因盒系统有关。它在细菌中捕获外来耐药基因水平传递,从而在整合子中形成多种耐药基因的组合和排列,是细菌耐药性传播的机制之一。一个整合子可捕获一个或多个基因盒,组成多重耐药整合子,介导细菌的耐药性。携带重组基因盒的整合子能插入到转座子或接合性质粒中,在细菌中传播耐药性并通过位点特异的基因重组使耐药基因发生播散,它对细菌间耐药基因的扩散和多重耐药性的产生起到重要作用。     

基因盒-整合子系统与细菌的耐药性

近年来,细菌对抗生素耐药性不断上升和耐药性快速传播已经成为临床感染性疾病治疗的难题。研究表明,细菌的耐药性大多在外环境诱导下经可动遗传因子,如质粒（plasmid）、转座子（transposon）、噬菌体（bacteriophage）、整合子（integron）／基因盒（genecas-sette）等的传递获得。目前,由具有捕获及表达外来耐药基因盒能力的整合子系统介导的细菌耐药机制越来越引起研究者们的关注,其对多重耐药性研究有着非常重要的意义。整合子1989年由StokesHW等首次提出。     

整合子-基因盒体系与细菌耐药关系及研究进展

目前,细菌耐药性已经对公共卫生问题构成严重威胁,整合子-基因盒体系是介导细菌获得耐药性与耐药基因播散的重要分子机制。整合子在整合酶作用下识别并俘获游离耐药基因盒,随着转座子或接合性质粒播散,造成细菌间耐药基因的扩散和多重耐药性的产生。本文就整合子-基因盒体系的结构、分类、分布、起源及播散机制等几方面研究近况开展讨论。     

志贺菌属整合子的耐药贡献与稳定性研究

目的分析志贺菌属整合子对耐药性的贡献及其稳定性。方法对志贺菌属1类、2类整合子的耐药基因盒分别克隆、转化DH5α,观察阳性克隆菌对多种抗生素敏感性的变化。将整合子阳性克隆菌与多重耐药志贺菌进行质粒接合实验,并测定耐药性的改变。对10株耐药谱不同、携带整合子不同的志贺菌属细菌进行无抗生素压力下连续多次传代实验,检测其耐药性及整合子的变化。结果志贺菌属1类整合子耐药基因盒dfrA17-aadA5阳性克隆菌对链霉素和甲氧苄啶的最低抑菌浓度(minimal inhibitory concentration,MIC)分别提高了8倍和32倍;2类整合子耐药基因盒dfrA1-sat1-aadA1阳性克隆菌对链霉素和甲氧苄啶的MIC分别提高了64倍和32倍;整合子阳性克隆菌经质粒接合传递后对抗生素的MIC无改变。1株携带2类整合子的志贺菌属菌株经过多次传代培养后丢失整合子及其耐药性。结论志贺菌属整合子-耐药基因盒系统可引起特定抗生素的耐药性,对质粒接合传递耐药性无影响。志贺菌属的2类整合子可发生丢失。     

临床分离多重耐药肠杆菌科细菌Ⅰ类整合子检测及耐药性研究

[摘要] 目的　检测临床分离多重耐药肠杆菌科细菌Ⅰ类整合子分布,分析I类整合子在细菌多重耐药中的作用。方法　标准纸片扩散法(Kirby-Bauer test)检测耐药性,PCR方法扩增I类整合酶基因,经电泳后检测扩增产物。\结果　在分离出的408株细菌中,共有246株检出I类整合子,总体检出率为60.3%(246/408),其中大肠埃希菌检出率为62.4%(126/202),肺炎克雷伯菌检出率为56.8%(71/125),阴沟肠肝菌检出率为60.5%(49/81)。整合子阳性株对多种抗生素的耐药率明显高于整合子阴性株,亚胺培南对所有菌株敏感。结论　I类整合子对细菌多重耐药性的产生和传播起着重要作用,应加强临床细菌基因水平的耐药监测,采取有效措施防止耐药性的传播。     

Ⅰ类整合子在革兰阴性菌中分布的初步探讨

目的 调查Ⅰ类整合子在革兰阴性菌中分布及其与细菌耐药性的关系.方法 用整合子特异引物采用聚合酶链反应（PCR）技术检测革兰阴性菌株中整合子基因.结果 49株临床分离的革兰阴性菌,Ⅰ类整合子阳性者有35株,占71%（35/49）,且35株菌均表现对β-内酰胺类、喹诺酮类等的多重耐药.结论 Ⅰ类整合子在革兰阴性菌中分布较广,并参与细菌耐药性的形成,常引起多重耐药.     

革兰阴性杆菌中1类整合子的分布与耐药关系

[目的]在革兰阴性杆菌中检测1类整合子,并分析整合子对细菌耐药性的影响.[方法]用VITEK-AMS微生物自动分析仪鉴定细菌和药敏试验,用PCR方法扩增1类整合酶基因,经电泳后检测扩增产物.[结果]266株革兰阴性细菌中检测出1类整合子66株,检出率为24.8%.主要阳性菌为大肠埃希菌34.3%(24/70)、肺炎克雷伯菌48.1%(26/54)、阴沟肠杆菌30%(6/20)、铜绿假单胞菌15.6%(7/45)、鲍曼不动杆菌4.8%(2/42)、产气肠杆菌20%(1/5).1类整合子阳性菌对氨基糖苷类、喹诺酮类及头孢菌素类药物表现出较高的耐药率.携带1类整合子菌株易表现出对至少4种抗菌素的多重耐药性,其多重耐药率为68.2%(45/66),明显高于1类整合子阴性菌株(28.5%),P＜0.05.[结论]1类整合子广泛地存在革兰阴性细菌中,1类整合子对细菌多重耐药性的产生和传播起着重要作用,应加强临床细茵基因水平的耐药监测,采取有效措施防止耐药性的传播.     

细菌多重耐药与整合子-基因盒系统

细菌的耐药性,尤其是多重耐药已成为临床治疗的大难题。修饰酶及灭活酶的产生、抗生素作用靶位的改变以及利用膜蛋白的缺失与主动外排泵系统过表达来减少抗生素在细胞内的浓度,是细菌的几个重要耐药机制。整合子介导耐药基因在染色体、质粒及转座子之间移动,从而导致细菌耐药性的传播,是细菌耐药性迅猛发展的重要原因。     

整合子-基因盒系统在细菌耐药性中的作用

随着抗生素的广泛使用,细菌的耐药性,甚至是多重耐药性开始大量出现,致使抗生素的疗效逐渐下降,这给临床治疗带来了极大的困难.因此,对细菌耐药性机制的研究,成为临床医师及微生物学家研究的热点.整合子-基因盒系统是近年来在细菌中发现的天然克隆表达系统,整合子(integron) 是一种基因片段,具有位点特异性重组功能,能识别、俘获及表达外来移动性基因盒.基因盒(gene cassette)是整合子上所携带的基因片段,常携带耐药基因.整合子通过位点特异的基因重组使耐药基因发生播散[1].本文就基因盒、整合子的结构及分类,基因盒的移动与表达,整合子-基因盒系统在细菌耐药性传播中的意义等方面进行综述.     

食品中大肠埃希菌耐药性与整合子的关系研究

目的研究食品中大肠埃希菌的整合子携带情况及其与耐药性之间的关系。方法PCR检测细菌总DNA中1、2、3类整合酶基因，确定细菌携带整合子的情况。阳性菌株进一步检测整合子的可变区，分析插入基因盒的序列。结果50株大肠埃希菌中19株携带1类整合子，2株携带2类整合子，集中分布在对4种以上抗生素耐药的菌株中。插入基因盒主要是dfr和aadA类基因盒，各种基因盒组合中最常见的是dfr17-aadA5。结论细菌的多重耐药性与整合子携带高度一致，但是单个菌株的耐药谱与整合子的耐药基因盒缺乏对应关系。     

揭阳地区妊娠期妇女定植无乳链球菌分子流行特征及耐药特点

目的 了解揭阳地区妊娠期妇女无乳链球菌的分子流行特征和耐药特征,为其引起感染的防控提供依据。方法收集揭阳地区妊娠35~37周妇女的阴道直肠拭子,对分离到的无乳链球菌进行多位点序列分型（multilocus sequence type, MLST）、分子血清分型、进行药敏试验并检测红霉素和克林霉素耐药基因（ermA、ermB、ermA/E和linB基因）。结果无乳链球菌检出率为9.6%（103/1 076）,共发现21个序列型（sequence type, ST）,来源于8个克隆群(clonal complexes,CCs),CC103占16.6%。共检出5个血清型,以Ⅲ（49.5%）、Ia（24.3%）和Ib（12.6%）为主。红霉素、克林霉素耐药率及多重耐药率分别为：71.8%、60.2%和62.1%。红霉素耐药菌均检出耐药基因,ermA、ermB和mefA/E阳性率为16.2%、83.8%和25.7%;linB基因阳性率为54.8%。共检出cMLSB、iMLSB和M型等3种红霉素耐药表型,分别占73.0%、8.1%和18.9%。结论揭阳地区的定植无乳链球菌具有较高的遗传多样性,其多重耐药率高,红霉素耐药以ermB基因介导的cMLSB型为主,部分克林霉素耐药由linB基因介导。CC103已成为该地区流行的主要CC之一;ST17/血清学Ⅲ型为该地区流行的主要定植菌株之一。      

多重耐药鲍曼不动杆菌主动外排系统adeA的分布

目的 探讨主动外排系统adeA与鲍曼不动杆菌多重耐药的关系.方法 采用聚合酶链反应(PCR)筛选鲍曼不动杆菌的主动外排基因adeA,应用琼脂稀释法检测主动外排抑制剂碳酰氰间氯苯腙(CCCP)联合抗菌药物对多重耐药鲍曼不动杆菌生长的影响.结果 收集的60株鲍曼不动杆菌临床分离株对亚胺培南、美罗培南耐药率分别80.0%和81.7%,对其它大多数抗菌药物的耐药率为90%以上;60株临床分离株检测出adeA主动外排基因52株,检出率为86.7%;CCCP可减少多重耐药鲍曼不动杆菌对抗菌药物的外排作用,增加抗生素对多重耐药鲍曼不动杆菌的抑制率.结论 鲍曼不动杆菌是医院感染重要的多重耐药病原菌,adeA主动外排作用可能在本地区鲍曼不动杆菌多重耐药中发挥非常重要的作用.     

Relationship between antimicrobial resistance and aminoglycoside- modifying enzyme gene expressions in Acinetobacter baumannii

Background Acinetobacter baumannii is one of the main gram-negative bacilli in clinical practice. Nosocomial infections caused by multi-drug resistance Acinetobacter baumannii is very difficult to treat. This study was designed to investigate the antimicrobial resistance characteristics and four resistant gene expressions of aminoglycoside-modifying enzymes including N-acetyltransferases and O-phosphotransferases in Acinetobacter baumannii. Methods Bacterial identification and antimicrobial susceptibility test were performed by Phoenix^TM system in 247 strains of Acinetobacter baumannii. Minimal inhibitory concentrations (MICs) of seven aminoglycosides including gentamicin, amikacin, kanamycin, tobramycin, netilmicin, neomycin and streptomycin in 15 strains of multi-drug resistant Acinetobacter baumannii were detected by agar dilution. Four aminoglycoside-modifying enzyme genes were amplified by polymerase chain reaction (PCR) and verified by DNA sequencer. Results The resistance rates of 247 strains of Acinetobacter baumannii against cefotaxime, levofloxacin, piperacillin, aztreonam, tetracycline, ciprofloxacin and chloramphenicol were more than 50%. Imipenem and meropenem showed high antibacterial activities with resistance rates of 3.2% and 4. 1%. MIC50 and MIC90 of gentamicin, amikacin, streptomycin and kanamycin in 15 strains of multi-drug resistant Acinetobacter baumanii were all more than 1024 mg/L, and the resistance rates were 100%, 100%, 100% and 93.3%, respectively. But their resistance rates to tobramycin, netilmicin and neomycin were 86.7%, 93.3% and 46.7%, respectively. Three modifying enzyme genes, including aacC1, aacC2 and aacA4 genes, were found in 15 strains, but aphA6 had not been detected. Their positive rates were 93.3%, 20. 0% and 20. 0%, respectively. These three genes existed simultaneously in No. 19 strain. Nucleotide sequences of aacC1, aacC2 and aacA4 genes shared 100%, 97.9% and 99.7% identities with GenBank genes (AY307113, S68058 and AY307114). Conclusion Multi-drug resistant Acinetobacter baumannii strains are rapidly spreading in our hospital, and their resistance to aminoglycosides may be associated with aminoglycoside-modifying enzyme gene expressions.     

鲍曼不动杆菌OXA-23 型碳青霉烯酶相关耐药基因分析

目的:分析鲍曼不动杆菌的耐药性及其产碳青霉烯酶的类型.方法:收集南京医科大学第一附属医院对碳青霉烯类药物中介或耐药的鲍曼不动杆菌22株及敏感菌3株,用琼脂纸片扩散法(KB法)及肉汤稀释法测定最低抑菌浓度(MIC),用聚合酶链反应(PCR)检测分析其耐药基因.结果:22株细菌均为多重耐药株,PCR检出22株耐药菌株中18株携带OXA-23基因,未能检出OXA-24摹因.3株敏感株均未检出OXA-23及OXA-24基因,PCR产物纯化后测序表明与鲍曼不动杆菌(AY795964.1)blaOXA-23基因序列100%同源.结论:携带OXA-23型碳青霉烯酶基因的鲍曼不动杆菌对临床常用抗菌药的耐药率高,其编码基因为blaOXA-23.     

儿科临床分离铜绿假单胞菌对β-内酰胺类耐药相关基因的研究

目的 研究儿科临床分离对β-内酰胺类抗生素耐药铜绿假单胞菌的耐药性及其对β-内酰胺类耐药相关基因的检出情况.方法 收集2004年1月至2006年12月北京儿童医院住院患儿中分离出的146株对β-内酰胺类抗生素耐药铜绿假单胞菌.使用琼脂稀释法进行药敏试验,测定抗菌药物的最低抑菌浓度(MIC)值,按照临床实验室标准化研究所(CLSI)推荐标准判断结果 ,再使用PCR方法 进行β-内酰胺类耐药相关基因的检测.采用WHONET 5.3软件进行数据分析.结果 146株对β-内酰胺类抗生素耐药铜绿假单胞菌多呈现多重耐药现象.产金属β-内酰胺酶的共46株(31.5%),IMP基因阳性38株(82.6%),VIM基因阳性8株(17.4%).外膜孔蛋白OprD2缺失的114株,占78.1%.对超广谱β-内酰胺酶TEM、SHV、OXA、PER、GES、CTX.M和质粒型AmpC酶DHA、MIR及FOX基因的检测均为阴性.结论 目前儿科临床分离对β-内酰胺类抗生素耐药铜绿假单胞菌,产生金属酶及外膜孔蛋白OprD2缺失是其耐药的主要原因,并且外膜孔蛋白OprD2缺失现象更为严重.     

小鼠内皮抑素基因的克隆及序列测定

目的 获取小鼠内皮抑素（endostatin)基因并进行序列测定,为今后研究其机制及应用创造条件。方法 以小鼠肝脏总RNA为模板,用RT-PCR法从中扩增endostatin基因,并将所得基因重组入pUC19载体质粒,采用自动测定仪及荧光素标记引物,测定目的基因序列。结果 从小鼠肝组织中成功扩增endostatin基因,莘成功克隆入pUC19载体。经酶切鉴定正确后,命名为pUC-Endo。经测序证实所获基因序列与已知的endostatin基因序列一致。结论 成功构建小鼠endo-statin基因的重组克隆pUC-Endo,为今后利用endostatin进行胶质瘤的抗血管生成治疗研究奠定了实验基础。     

沙门菌多重耐药基因岛研究进展

多药耐药基因组岛是指细菌染色体上一段具有典型特征的基因簇,携带有多种耐药基因,决定细菌的多药耐药性;多药耐药基因组岛具有移动元件的特征,如G+C百分比和密码子使用与宿主菌不同,常含移动基因,可以在同种甚至于不同种菌株间水平转移,加速了临床上多药耐药菌株的产生。目前已发现在沙门菌属和其他菌属的细菌中携带沙门菌多重耐药基因岛。由于沙门菌多重耐药基因岛1上的耐药基因具有可移动性,使其在细菌多重耐药获得与传播机制的研究中具有重要意义。     

新型给药载体在逆转肿瘤多药耐药方面的应用进展

肿瘤多药耐药（ multiple drug resistance,MDR）常出现于肿瘤治疗过程中,目前逆转肿瘤MDR的治疗主要有化学药物治疗、天然药物治疗和基因治疗等。部分化学药物和天然药物虽然在体内外都有明确的逆转肿瘤MDR作用,但由于存在给药途径受限、给药剂量较大、体内分布广、靶组织浓度不高、毒副作用明显等缺点限制了其临床应用。近年来国内外学者将一些新型给药载体如：脂质体、纳米粒、微乳以及微球等作为逆转剂的载体,在体内外开展逆转肿瘤MDR的研究。本文就新型载体剂型包载逆转剂在逆转肿瘤多药耐药方面的应用研究进展进行综述。