心肌干细胞研究进展

传统观点认为,成年哺乳动物的心肌细胞高度分化,没有再生能力,只能通过肥大等重构方式代偿.1994年,Soonpaa等[1]发现将小鼠胚胎干细胞移植到成年小鼠发生梗死的心肌部位,能够限制疤痕发展以及预防梗死后心衰的发生;继而有人发现心肌梗死后,在梗死灶边缘及正常心肌组织中有少量心肌细胞发生有丝分裂,说明病理状态下心肌细胞有自我更新的能力[2];提示成年心脏中大部分心肌细胞不可再分裂,但是仍然包含了部分可以再生的细胞,并不是终分化器官,而有内在的再生潜能.近年来,将不同来源包括心肌细胞来源的干/祖细胞体外培养诱导分化为心肌细胞,应用于心肌梗死或者心肌肥大症等,已经成为研究的热点.本文将就心肌干细胞(Cardiacstem cells,CSC)的调控、分化及其在心脏疾病治疗方面的进展进行简要综述.     

木黄酮对心肌成纤维细胞增殖的影响

观察木黄酮对心肌成纤维细胞 (CF)增殖的影响 .采用培养的新生大鼠CF ,以 [3 H]TdR参入率作为细胞增殖指标 ;流式细胞仪分析细胞周期 .结果显示木黄酮 (0 .5～ 50 μmol·L- 1)具有浓度依赖性地抑制 2 .5%胎牛血清刺激CF增殖的作用 ,并将CF细胞周期阻抑在G2 /M期 ;提示木黄酮有望成为防治心脏纤维化的物质     

胚胎干细胞的毒理学应用研究进展

自1995年我们在国内首先介绍胚胎干细胞(embryonic stem cells，ES)在发育毒理学体外研究中的应用以来，ES细胞的分离、培养以及定向分化等分子细胞生物学技术迅猛发展并日趋成熟，在积极应用基因组、蛋白质组以及报告基因和基因表达的系列分析(serial analysis of gene expression，SAGE)技术的基础     

牛磺酸抑制心肌成纤维细胞增殖的实验研究

目的：观察牛磺酸（Taurine，Tau）在血管紧张素Ⅱ（angiotensinⅡ，AngⅡ）诱导新生大鼠心肌成纤维细胞（cardiac fibroblast，CFb）增殖的过程中对蛋白激酶C alpha（p-PKCa）及其下游信号转导途径的影响。方法：胰酶消化分离培养新生大鼠CFb，以AngⅡ诱导促其增殖，运用PKC抑制剂作为工具药，     

脓毒症心肌抑制因子的研究进展

脓毒症目前仍是临床上急需解决的难题之一,有发病率高、病死率高及治疗费用高的特点。美国儿童严重脓毒症的流行病学调查显示:医院死亡率为10.3%,平均治疗时间为31天[1],花费为4.06万美元,估计国家每年的花费是19.7亿美元。严重脓毒     

Wnt3a在小鼠胚胎心肌分化中的作用

目的:探讨Wnt3a在小鼠胚胎心肌分化中的作用.方法:检测Wnt3a在小鼠胚胎干细胞心肌细胞分化过程中的表达和作用.实验组以二甲基亚砜(DMSO)作为诱导剂,对照组以DMSO和Frizzled-8/Fc作为诱导剂,诱导小鼠胚胎干细胞心肌细胞分化,检测分化过程中Wnt3a的表达,对比分化率.结果:两组在分化第二、三、四天Wnt3a表达,分化细胞具有自动收缩性;实验组分化率为91.67%,对照组分化率为37.50%,两组差异有显著性.结论:Wnt3a能够促进小鼠胚胎心肌分化.     

胰岛素对心脏细胞增殖的影响及其在心肌肥厚中的作用

目的　研究胰岛素对心肌细胞和心肌成纤维细胞增殖的影响 ,探讨其在心肌肥厚中的作用。方法　①乳鼠心肌细胞和心肌成纤维细胞的培养及光镜、电镜和免疫细胞化学染色的鉴定。②两种细胞在不同浓度胰岛素作用下细胞数量、代谢活性与DNA合成 (WST 1、BrdUELISA法 )的测定及细胞周期分析 (流式细胞仪 )。结果　①培养的心脏细胞分别为心肌细胞和成纤维细胞。②胰岛素作用下 ,心肌细胞的数量、WST 1与BrdU的OD值及S +G2 +M期细胞百分比无变化 (P >0 0 5 ) ;而心肌成纤维细胞的数量、WST 1与BrdU的OD值及S +G2 +M期细胞百分比均升高 (P <0 0 1或P <0 0 5 )。结论　胰岛素可促进培养的心肌成纤维细胞增殖 ,可能在心肌肥厚中起重要作用     

SFRP1通过抑制Wnt/β-catenin通路促进心肌细胞增殖的分子机制

目的 探讨SFRP1是否通过抑制Wnt/β-catenin通路促进心肌细胞增殖。方法 选取c57BL/6雄性小鼠18只,出生后1 d、7 d及28 d的c57BL/6小鼠各6只分为3组,分离和提取心肌组织,检测心肌组织中SFRP1的mRNA及蛋白表达水平。利用出生后1 d的乳鼠心脏培养小鼠原代心肌细胞,予SFRP1-shRNA慢病毒转染细胞,免疫荧光检测心肌细胞增殖标志物Ki67和PH3表达变化,Western blot检测胞浆β-catenin蛋白表达变化。结果 SFRP1 mRNA和蛋白水平在小鼠出生后逐渐下降(P<0.05)。转染SFRP1-shRNA慢病毒后,SFRP1蛋白表达水平均下降(P<0.05),其中shRNA-2干扰效果最好。与空载组相比,shRNA组细胞Ki67和PH3表达下降,同时胞浆β-catenin蛋白表达水平升高(P<0.05)。结论 SFRP1通过抑制Wnt/β-catenin信号通路促进心肌细胞增殖。     

干细胞-细胞心肌重建术的资源

以往认为成熟心肌细胞属于终末分化细胞,无再生能力.然而目前很多研究结果[1]给我们带来观念上的更新:其一,心脏不是终末分化器官,心肌中有75%的细胞是单核细胞,25%是双核细胞,这一比例不受疾病、年龄、性别、心肌肥大及心肌缺血等影响.其二,急性心肌损伤促进心肌细胞代偿性增殖.在生理条件下,每106个心室肌细胞中有14个心肌细胞正在有丝分裂.大约每年有0.61×109个新细胞生成.同时,正常个体在17～89岁之间每年有64×106个细胞死亡,心肌细胞缓慢更新[2].梗死区边缘地带的心肌细胞有丝分裂指数为0.08(800/106),离梗死区较远的心肌细胞有丝分裂指数为0.03(300/106).如果按有丝分裂30 min1个周期计算,心肌梗死后整个左室有1.796×103个有丝分裂的心肌细胞,心肌梗死后18 d就有107×109个单核心肌细胞可以替代心肌梗死时损失的细胞,但占比例极少.随着近年干细胞研究技术的发展,应用干细胞使心肌再生越来越引起人们的重视.     

胸苷激酶1-新型的细胞增殖动力学标志

胸苷激酶1（TK1）是DNA合成过程中的关键酶之一,作为细胞增殖动力学标志,其在正常细胞周期中的浓度变化与在肿瘤细胞周期中的浓度变化存在差异。研究表明,胸苷激酶1（TK1）与增殖病变进程、肿瘤分期、肿瘤预后因子等众多肿瘤信息存在相关性,因此血清胸苷激酶1检测在临床应用及体检应用方面具有广阔前景。     

cyclinD1和CDK4在低氧心肌中的表达及意义

目的研究低氧心肌细胞周期及缺氧过程中细胞周期蛋白D1(cyclinD1)和细胞周期蛋白依赖激酶4(CDK4)表达的变化,探讨缺氧心肌在凋亡前是否存在增殖能力和自身修复。方法采用SD大鼠乳鼠进行心肌细胞培养,建立心肌缺血模型,实验分正常对照、缺血6 h和缺血12 h三组;以四唑盐比色试验(MTT)检测心肌细胞活力,流式细胞术测定细胞周期,免疫组化检测cyclinD1和CDK4表达。结果与对照组比较,心肌细胞缺氧处理6 h后,细胞周期中S 期比例增高(P<0 01),12 h后,S期比例下降(P<0 05);cyclinD1胞浆表达和CDK4 胞核表达增加。结论在缺氧所致死亡、凋亡过程中心肌细胞经历了一定程度的增殖过程,cyclinD1 和CDK4 表达增加参与了细胞增殖,缺氧损伤可刺激心肌细胞增殖能力。     

人胚胎心肌细胞内糖原含量变化的图像分析

为探讨胚胎发育时期心肌细胞糖原含量的变化 ,采用组织化学方法 ,对 3～ 8个月胚胎心脏进行切片 ,并作图像分析 ,观察胚胎心肌细胞内糖原含量的变化。结果显示 ,心肌细胞内能源储备的增加 ,对提高心肌细胞收缩力起着重要作用     

纳米中药心肌益生散对心肌细胞增殖的影响

中草药是我国得天独厚的药物资源,具有丰富的理论和实践基础,为发现和寻找新药提供了丰富的来源,随着现代中医对冠心病心绞痛临床和实验研究的发展,中药所具有的改善心肌缺血、调节舒缩血管活性多肽的作用已经被证实[1～4],且避免了西药的较大副作用,适于长期服用.中药纳米化后出现了很多新功效.心肌细胞是人体最基本的结构和功能单位之一,无论何种心脏疾病,它所引起的心脏功能的变化,从本质上说都是心肌细胞的坏死造成的,心肌细胞在成熟个体中属永久性细胞,其增殖能力极其低下,传统的观点认为,心肌一旦坏死,即不能再生.     

过氧化氢诱导心肌细胞氧化应激中心肌蛋白变化规律的研究

目的探讨过氧化氢(H2O2)诱导心肌细胞氧化应激中心肌蛋白的变化规律。方法采用原代分离小鼠心肌细胞,H2O2刺激心肌细胞,分别于不同浓度H2O2刺激不同时段后,采用MTT法分析细胞活力变化,流式细胞仪测定细胞凋亡情况,ELISA试剂盒测定细胞内GSH和MDA水平,并采用蛋白印迹方法测定心肌细胞内心肌蛋白心肌肌钙蛋白T(cTnT)和间隙连接蛋白43(connexin 43)的变化规律。结果高浓度H2O2较低浓度降低心肌细胞细胞活力显著,H2O2刺激2h后细胞活力降低显著(P<0.05);高浓度H2O2刺激2h后细胞凋亡率显著升高(P<0.05);H2O2刺激减少心肌细胞谷胱甘肽(GSH)水平,增加丙二醛(MDA)含量(P<0.05);H2O2刺激增加心肌细胞内cTnT和connexin 43蛋白表达,呈现一定量效关系。结论 H2O2刺激心肌细胞,可抑制心肌细胞活力,促进细胞凋亡,造成心肌细胞氧化应激损伤,H2O2引起心肌细胞内cTnT和connexin 43表达代偿增高。提示减少氧化应激,提高抗氧自由基防御机制与疾病转归密切相关。     

心肌肥厚的病变机制研究进展

在高血压、心肌梗死、瓣膜病、先天性心脏病等许多心血管疾病中,心肌细胞肥厚是共有的病理过程,是一种基本的应答反应。长期应激导致的持续性病理性心肌肥大可发展为心脏扩大、充血性心力衰竭和猝死。心肌肥厚与多种心血管疾病发展过程有关,是心肌缺血、心律失常和心性猝死的独     

心肌肥厚模型建立方法的研究进展

目的:归纳总结心肌肥厚模型的建立方法。方法:以"心肌肥厚"等为关键词,查阅1991年1月至2013年3月中国知网和PubMed数据库中关于心肌肥厚模型的相关文献,根据诱发心肌肥厚的不同因素,分别从细胞水平和动物水平对建立心肌肥厚模型的方法及评价指标和方法进行综述。结果与结论:建立心肌细胞肥大模型的方法多数是通过分离并培养Wistar/SD大鼠的乳鼠心室肌细胞,并在此基础上给予不同药物刺激来诱导细胞肥大;建立动物心肌肥厚模型的方法有皮下或静脉注射肾上腺素类药物和手术两种。细胞水平建模的方法具有细胞专属性,能够排除成纤维细胞的影响;药物诱导动物心肌肥厚模型操作简单,能够模拟肾上腺素分泌量增加导致心肌肥厚的病理过程;手术主要是通过缓慢的病理变化模拟心肌肥厚,更接近真实病理过程。评价心肌肥厚模型建立方法的指标主要有全心质量指数和左心室质量指数,评价方法有心脏超声、免疫组化及Marker蛋白分析法。选择适宜的建模方法并进行正确评价,可为药物干预心肌肥厚疾病的基础研究提供科学的依据。     

5-氮胞苷诱导心肌组织中c-kit~+干细胞分化的实验研究

目的:创建小鼠心肌干细胞(cardiac stem cells,CSC)分离、培养的方法,借助干细胞表面标记c-kit纯化CSC,并用5-氮胞苷诱导CSC分化为心肌细胞。方法:用酶定时消化方法分离提取小鼠心脏组织中的细胞,进行体外培养;免疫磁珠法纯化c-kit阳性细胞,并用流式细胞仪检测纯化后细胞表面标记c-kit、lin和CD34的表达;以免疫细胞化学染色法检测诱导后心肌特异性蛋白T、连接蛋白-43、心肌细胞特异性结蛋白;结合形态学变化,分析不同诱导条件作用结果之间的差异。结果:从C57BL小鼠心肌组织中分离消化所得的细胞中,含有一种小而圆形、折光性强的细胞,经传代培养的细胞增殖速度比原代细胞明显为快,存在较多的类似于干细胞增殖和形态学特点的细胞。用免疫磁珠法可以分选出高纯度的c-kit+CSC,这种CSC基本不表达CD34和lin。在不同诱导条件下,此种CSC可以分化为搏动的细胞,并能表达心肌特异性蛋白。结论:从C57BL小鼠心肌组织中可以获得CSC,用免疫磁珠法可以分选出表型为c-kit+-CD34--lin-高纯度的CSC,经5-氮胞苷诱导或改变CSC生长的微环境后,此种细胞可以分化成心肌细胞,且能形...     

白藜芦醇对SGC-7901肿瘤细胞增殖的影响

目的研究白藜芦醇(Res)对SGC-7901肿瘤细胞增殖的影响。方法MTT法测定Res对SGC-7901细胞抑制率;流式细胞仪检测Res对肿瘤细胞凋亡和肿瘤细胞周期的影响;荧光显微镜从形态学鉴定肿瘤细胞凋亡。结果Res明显抑制肿瘤细胞的增殖,且呈一定剂量依赖关系,其IC50为164.69μmol·L-1,当Res剂量为44、88、176μmol·L-1时,肿瘤细胞的抑制率为:29.693%、33.986%、85.634%;此外,肿瘤细胞周期G1期细胞的比例减少,S期细胞的比例增加,G2/M期减小;通过形态学观察发现,随着Res剂量的增加,镜下凋亡细胞比例逐渐增加,肿瘤细胞的核质比减小,细胞核高度固缩,染色程度加深,凋亡小体的数量不断增加。结论Res明显抑制SGC-7901细胞的增殖且诱导其凋亡。     

心肌营养素1与心肌梗死

心肌营养素I(CT-1)是白介素6(IL-6)家族细胞因子,它与糖蛋白130/白血病抑制因子受体异二聚体相结合,诱导心肌细胞肥大,促进心脏成纤维细胞增生,抑制心肌细胞凋亡,与许多心脏疾病密切相关.本文就CT-1与心肌梗死之间的关系作一综述.