丹参对狼疮性肾炎成纤维细胞增殖、凋亡及c-myc蛋白表达的影响

观察丹参对人肾间质成纤维细胞生物学行为的影响。用狼疮性肾炎患者肾活检组织培养分离的成纤维细胞，观察丹参对人肾成纤维细胞＾３Ｈ－ＴｄＲ掺入率的影响，并用游戏工细胞仪检测了细胞凋亡及ｃ－ｍｙｃ蛋白表达情况。丹参对人肾成纤维细胞增殖有抑制作用，并通过使ｃ－ｍｙｃ蛋白高水平表达而诱导细胞凋亡。     

青藤碱对脂多糖诱导的人成纤维滑膜细胞增殖的影响

目的:探讨青藤碱(Sinomenine)对脂多糖诱导的人成纤维样滑膜细胞(Human fibroblast-like synoviocyte,HFLS)增殖的作用及其机制。方法:随机分为空白对照组、脂多糖模型组、青藤碱10~(-7)mol/L、10~(-6)mol/L、10~(-5)mol/L组。利用脂多糖诱导HFLS的增殖,48 h后加入不同浓度的青藤碱,通过MTT法检测细胞增殖,流式细胞仪检测细胞凋亡,Western Blot检测凋亡相关蛋白B淋巴细胞瘤-2(Bcl-2)、Bcl-2相关X蛋白(Bax)、P53、细胞周期依赖激酶4(CDK4)、细胞周期蛋白D(CyclinD)的表达,检测核转录因子-κB(NF-κB)、核因子κB受体活化因子(RANK)、核因子κB受体活化因子配体(RANK-L)蛋白表达;ELISA法检测白介素10(IL-10)、白介素6(IL-6)、肿瘤坏死因子-α(TNF-α)与白介素1β(IL-1β)的含量。结果:MTT结果显示与空白对照组比较,模型组细胞增殖明显;与模型组比较,不同浓度的青藤碱均能抑制脂多糖诱导HFLS增殖,结果呈浓度依赖性;流式结果表明青藤碱可促进HFLS的凋亡;Western Blot结果提示与模型组相比,青藤碱组Bax、P53的蛋白表达明显升高,Cyclin D、CDK4、NF-κB、RANK、RANK-L蛋白的表达显著降低。结论:青藤碱可以通过抑制RANK及NF-κB的活化减轻脂多糖诱导的HFLS细胞的炎症反应,促进HFLS凋亡,抑制其增殖。     

塔斯品碱对大鼠皮肤创伤和对成纤维细胞增殖及分泌的影响

目的:观察塔斯品碱(TA)对大鼠皮肤创伤愈合的作用及对成纤维细胞增殖和分泌生长因子的影响,探讨其促愈合作用机制.方法:建立大鼠皮肤损伤模型,采用组织学的方法评价愈合质量;体外培养L929成纤维细胞,MTT法观察TA对成纤维细胞增殖的影响,ELISA法测定TA对成纤维细胞分泌转化生长因子-β1(TGF-β1)及表皮生长因子(EGF)的影响.结果:TA 3.0和1.5 mg/ml溶液外涂对实验性大鼠皮肤损伤有加速修复作用;体外实验表明,0.05～0.4μg/ml TA可明显增加成纤维细胞对TGF-β1和EGF的分泌,其作用呈剂量依赖性,而对成纤维细胞的增殖无明显影响.结论:TA具有促伤口愈合作用,其作用可能与促进成纤维细胞分泌TGF-β1和EGF有关.     

通痹灵总碱对类风湿关节炎滑膜成纤维样细胞增殖的影响

目的：探讨通痹灵总旃对类风湿关节炎滑膜成纤维样细胞增殖的影响。方法：分离培养类风关患者滑膜成纤维样细胞，IL—ID刺激，不同浓度通痹灵总碱作用后，MTT法测定细胞增殖率。结果：通痹灵总碱能显著抑制滑膜成纤维样细胞增殖，并且抑制作用呈明显的量效关系。结论：通痹灵总碱可抑制类风关滑膜成纤维样细胞增殖。     

通痹灵总碱对类风湿关节炎滑膜成纤维样细胞增殖的影响

目的：探讨通痹灵总旗对类风湿关节炎滑膜成纤维样细胞增殖的影响。方法：分离培养类风关患者滑膜成纤维样细胞，IL-1D刺激，不同浓度通痹灵总碱作用后，MTT法测定细胞增殖率。结果：通痹灵总碱能显著抑制滑膜成纤维样细胞增殖，并且抑制作用呈明显的量效关系。结论：通痹灵总碱可抑制类风关滑膜成纤维样细胞增殖。     

粉防己碱对人增殖性瘢痕成纤维细胞增殖的抑制作用

目的：探讨粉防己碱对人增殖性瘢痕成纤维细胞增殖的影响。方法：取手术切除的人增生性瘢痕组织标本,分离培养成纤维细胞,加入不同浓度粉防己碱进行干预,MTT比色法检测各组瘢痕成纤维细胞增殖效应。结果：粉防己碱药物浓度由5μg／ml升至80μg／ml时,瘢痕成纤维细胞增殖活性逐渐降低,呈明显剂量依赖性。结论：粉防己碱对人增殖性瘢痕成纤维细胞增殖具有明显抑制作用。     

青藤碱对类风湿关节炎患者成纤维样滑膜细胞增殖及基质金属蛋白酶-3表达的影响

目的观察青藤碱对体外培养类风湿关节炎患者成纤维样滑膜细胞增殖以及基质金属蛋白酶-3（MMP-3）mRNA含量的影响。方法培养人成纤维样滑膜细胞，分为青藤碱高、中、低剂量组和空白对照组，经青藤碱干预后，用四甲基偶氮唑蓝法测定细胞增殖情况，用半定量RT-PCR方法检测成纤维细胞中MMP-3mRNA的表达。结果经青藤碱干预后的人成纤维样滑膜细胞的增殖率受到显著抑制（P〈0．05），其中高剂量组的改变差异尤为显著（P〈0．01）。MMP-3的mRNA表达水平较之空白对照组有显著下降（P〈0．05），且高剂量纽的差异尤为显著（P〈0．01）。结论青藤碱可以抑制类风湿关节炎患者成纤维样滑膜细胞的增殖并下调MMP-3的表达，推断这可能是青藤碱治疗类风湿关节炎的一种机理。     

辣椒碱对乳腺癌MCF-7细胞增殖及p21和FBI-1表达的影响

目的:观察辣椒碱对人乳腺癌MCF-7细胞增殖的影响及可能的分子机制。方法:设立辣椒碱组以及空白组,采用细胞计数试剂盒-8法(CCK-8)检测辣椒碱(50,100,150,200,250,300μmol·L-1)处理MCF-7细胞24,48,72 h后的细胞活性;克隆形成实验检测辣椒碱(100,150,200μmol·L-1)处理MCF-7细胞18 h再更换为完全培养基继续培养14 d后的克隆形成能力;实时荧光定量PCR(Real-time PCR)检测辣椒碱(100,150,200μmol·L-1)处理MCF-7细胞24 h后细胞中细胞周期依赖性蛋白激酶抑制因子p21(p21)和人类免疫缺陷病毒短转录诱导物连接因子-1(FBI-1)mRNA表达水平;蛋白质免疫印迹法(Western blot)检测辣椒碱(100,150,200μmol·L-1)处理MCF-7细胞24 h后细胞中p21和FBI-1蛋白的表达水平。结果:与空白组比较,辣椒碱(50,100,150,200,250,300μmol·L-1)在体外对MCF-7细胞活性具有明显的抑制作用(P0.05,P0.01),并且这种抑制作用呈浓度和时间依赖效应;与空白组比较,辣椒碱(100,150,200μmol·L-1)均能显著抑制MCF-7细胞的克隆形成能力(P0.01);与空白组比较,辣椒碱(100,150,200μmol·L-1)能显著上调MCF-7细胞中p21 mRNA和蛋白的表达水平(P0.01),下调FBI-1 mRNA和蛋白的表达水平(P0.01)。结论:辣椒碱干预在体外对乳腺癌MCF-7细胞增殖具有抑制作用,潜在机制可能与其上调细胞中p21 mRNA和蛋白的表达水平,下调细胞中FBI-1 mRNA和蛋白的表达水平有关。     

太白楤木对成纤维细胞增殖及功能的影响

目的探讨太白楤木对成纤维细胞增殖、活力及对培养上清中透明质酸(HA)产生的影响,研究太白楤木抗肝纤维化机制。方法采用体外培养的NIH3T3(成纤维细胞)作为肝星状细胞(HSC)的替代模型,常规培养,太白楤木中药血清作用于细胞,用MTT法检测太白楤木中药血清对NIH3T3细胞增殖的影响;用放射免疫法测定培养上清中HA的生成。结果太白楤木对细胞无明显毒性,5%浓度太白楤木中药血清可显著抑制细胞增殖(P<0.01),降低NIH3T3细胞培养上清中HA含量,与对照组比较差异显著(P<0.05)。结论太白楤木中药血清可显著抑制NIH3T3细胞增殖和HA的合成,在体外具有一定的抗肝纤维化作用。     

大黄素对人肾成纤维细胞增殖的影响

目的：研究大黄素对人肾成纤维细胞增殖的影响。方法：在体外人肾成纤维细胞培养的基础上，采用＾３Ｈ－ＴdＲ掺入法观察了不同浓度大黄素（１０、３０、５０、８０、１００ug/ml）对人肾成纤维细胞＾３Ｈ－ＴdＲ掺入率的影响。同时，利用流式细胞仪观察了大黄素（１０、５０、１００ug/ml）对细胞周期的影响。结果：大黄素以剂量信赖方式降低了 人肾成纤维细胞＾Ｈ－ＴdＲ掺入率（r＝０．９９５，Ｐ〈０．０１）。大黄素（５０和１     

高浓度葡萄糖对成纤维细胞增殖活性的影响

目的:探讨成纤维细胞在高浓度葡萄糖环境中的增殖活性。方法:分离培养人真皮成纤维细胞,传代后分别用含不同高浓度葡萄糖的DMEM培养基培养,在不同时段进行细胞记数并用流式细胞仪检测细胞凋亡率。结果:随着葡萄糖浓度的增高,成纤维细胞的增殖数量明显减少,凋亡细胞比例显著增加。结论:高浓度葡萄糖对成纤维细胞的增殖活性可能有抑制作用。     

丹参对粘连腹膜成纤维细胞增殖的影响

目的:研究丹参对粘连腹膜成纤维细胞增殖、迁移、坏死及胶原合成的影响,为术后粘连的中药治疗提供理论依据。方法:应用MTT法检测丹参对粘连成纤维细胞增殖的影响;羟脯氨酸碱水解法测定对胶原合成的影响;测定培养上清乳酸脱氢酶活性,反映对细胞坏死的影响;细胞划痕实验观察对细胞迁移的影响。结果:MTT比色法显示丹参对成纤维细胞的增殖有不同程度的抑制,在4~128μg/mL范围内呈剂量依赖性抑制作用;检测羟脯氨酸的含量,丹参剂量在24、48、96μg/mL时与对照组比较无显著性差异;96μg/mL的丹参培养液LDH活性显著增加,而24、48μg/mL的丹参培养液与对照组比较,LDH活性无显著性改变;对照组和48μg/L丹参组的细胞迁移率分别为(19.7+1.6)%和(7.6+1.6)%,丹参可显著抑制细胞迁移。结论:丹参能抑制粘连腹膜成纤维细胞增殖和迁移,降低成纤维细胞活性,但是对胶原合成无影响。     

小檗碱对高糖诱导心肌成纤维细胞增殖、胶原合成及Akt激活的影响

目的:探讨小檗碱对高糖诱导的新生大鼠心肌成纤维细胞增殖及Akt激活影响。方法:分离新生乳鼠心肌成纤维细胞,MTT法检测不同浓度小檗碱(10⁴0μM)对高糖(25 mM)诱导心肌成纤维细胞增殖的影响。采用qPCR法检测大鼠心肌成纤维细胞纤连蛋白(FN)的表达。采用Western blot法检测大鼠心肌成纤维细胞中增殖细胞核抗原(PCNA)、Akt的表达。结果:25 mM高糖刺激48 h后心肌成纤维细胞的细胞增殖显著增加,FN、PCNA、p-Akt表达升高,小檗碱以剂量依赖性方式抑制高糖诱导上述指标的改变。结论:小檗碱可以通过抑制高糖诱导的心肌成纤维细胞增殖及胶原合成,其机制可能与抑制Akt有关。     

脱氢紫堇碱对高糖培养心肌成纤维细胞增殖和胶原分泌的影响

目的观察中药延胡索主要有效成分脱氢紫堇碱（DHC）对高浓度葡萄糖培养的心肌成纤维细胞（CFs）增殖和胶原分泌的影响,为延胡索的临床应用提供实验依据。方法采用体外高糖培养的CFs模型进行实验。以胶原酶与胰蛋白酶联合消化分离出生24 h内乳鼠CFs,取2～4代细胞高浓度葡萄糖（25 mmol/L）培养,分别加入100、50、25 mg/L DHC干预,24、48 h后镜下观察细胞形态,MTT法检测细胞增殖,流式细胞仪检测细胞周期,ELISA测定Ⅰ型、Ⅲ型胶原含量。结果 CFs种植3 h后开始贴壁生长,高浓度葡萄糖培养液培养24、48 h后细胞增殖明显增加（P〈0.05,P〈0.01）,48 h后S＋G2＋M期细胞的百分率明显增加（P〈0.01）,细胞分泌Ⅰ型、Ⅲ型胶原量明显升高（P〈0.01）;DHC干预后可显著抑制CFs增殖（P〈0.01）,降低S＋G2＋M期细胞百分率（P〈0.01）,减少Ⅰ型、Ⅲ型胶原分泌（P〈0.05,P〈0.01）。结论 DHC能抑制高糖培养的CFs的增殖,减少胶原分泌,DHC具有潜在的抗心肌纤维化作用。     

益母草及益母草注射液总碱的提取及其对凝血系统的影响

目的:探讨益母草总碱部位和益母草注射液总碱部位对大鼠体外凝血功能和血小板聚集的影响。方法:首先以酸提取大孔树脂纯化制备益母草总碱(YMC-TA)和益母草注射液总碱(YMCJ-AT),采用HPLC法测定其所含水苏碱、葫芦巴碱含量;然后采用全自动血凝仪测定5.419、2.709、1.355 mg/m L的YMC-TA和10.836、5.419、2.709 mg/m L的YMCJ-AT对体外凝血功能(PT、APTT、TT、FBG)影响,25、18.75、14.06 mg/m L的YMC-TA、YMCJ-AT对二磷酸腺苷(ADP)诱导的体外血小板聚集率的影响。结果:YMC-TA和YMCJ-TA中均含有水苏碱和葫芦巴碱,含量分别是23.77%、34.49%;0.13%、0.14%。二者在试验剂量均能明显缩短体外大鼠血浆PT和APTT时间和降低FBG含量,同时延长TT时间;并且都明显降低ADP诱导的体外大鼠血小板最大聚集率,作用强于阿斯匹林。结论:YMC-TA和YMCJ-TA具有抗凝血和抗血小板聚集作用,但对TT呈促进作用,可能是益母草活血调经、益母草注射液缩宫止血作用的机制之一。     

通痹灵对大鼠滑膜成纤维细胞增殖反应的影响

采用组织块培养的方法获得滑膜成纤维细胞;ＭＴＴ法检测不同滑膜细胞培养上清液对滑膜成纤维细胞增殖反应的影响。结果：在佐剂性关节炎大鼠不同稀释度滑膜细胞培养上清液均可促进成纤维细胞增殖反应,其最适稀释度为１：４０,ＴＢＬ组的滑膜细胞培养上清液对成纤维细胞增殖无明显影响;甲氨喋呤组滑膜细胞培养上清液对成纤维细胞增殖有轻度的促进作用;     

白藜芦醇对长波紫外线辐射后皮肤成纤维细胞增殖及诱导型一氧化氮合酶表达的影响

 目的 探讨长波紫外线（ UVA ）对人皮肤成纤维细胞增殖及诱导型一氧化氮合酶（ inducible nitric oxide synthase , iNOS ）表达的影响,探讨白藜芦醇对此影响的防护作用及其机制。 方法 5 J·cm^-2 UVA 照射原代培养的成纤维细胞后予以 0.01 , 0.1 mmol·L^-1 浓度的白藜芦醇干预,四甲基偶氮唑盐 (MTT) 法检测细胞增殖活性,半定量逆转录聚合酶链反应（ RT-PCR ）和蛋白质印迹（ Western-blot ）方法检测细胞 iNOS mRNA 和蛋白的表达。 结果 UVA 辐射后成纤维细胞的增殖活性（ 0.345 ± 0.020 ）较正常对照组（ 0.581 ± 0.038 ）降低, iNOS mRNA/ 蛋白的表达水平［（ 0.834 ± 0.087 ） / （ 0.804 ± 0.021 ）］较正常对照组 ( 未见表达 ) 显著增加。 UVA 辐射后立即予以 0.01 或 0.1 mmol·L^-1 浓度的白藜芦醇处理发现成纤维细胞的增殖活性上升而 iNOS mRNA/ 蛋白的表达下调,与单独 UVA 辐射组相比,差异有统计学意义 (<>P<0.05) 。 结论 UVA 可抑制体外培养的真皮成纤维细胞的增殖,诱导 iNOS 的表达,而白藜芦醇对 UVA 辐射损伤的成纤维细胞有保护作用。     

小柴胡汤对人肺成纤维细胞增殖的影响

使用符合日本厚生省诊断标准,症状稳定的特发性间质性肺炎10例(年龄56～68岁,平均年龄52.5岁)和无肺部疾患的正常人10例(年龄24～68岁,平均43.5岁)的晨起空腹血清。对其中5例特发性间质性肺炎患者和5例正常人,在晨起6时,给予小柴胡汤7.5g,分别于给药前、给药1小时、3小时后采血,在-80℃下保存。所用细胞株为人肺成纤维细胞(HFL-1),HFL-1与含有5％患     

益母草碱对急性心肌梗死大鼠的影响

目的:观察益母草碱对急性心肌梗死造成的心肌缺血和心肌细胞损害的影响并探讨其作用机制。方法:雄性SD大鼠随机分为5组,分别为假手术组,模型组,益母草碱高、低剂量组(30,15 mg·kg-1·d-1)和卡托普利阳性药组(4 mg·kg-1·d-1),除假手术组外其余各组采用结扎冠状动脉左前降支的方法制备大鼠急性心肌梗死模型,所有动物冠脉结扎前1周按相应剂量ip药物,第8天造模,术后继续ip给药2 d后,处死动物,2,3,5-氯化三苯基四氮唑(TTC)染色法检测并计算心肌梗死面积,酶联免疫吸附测定(ELISA)试剂盒测定大鼠血清中乳酸脱氢酶(LDH),肌酸激酶(CK)的水平,超氧化歧化酶(SOD)活性和丙二醛(MDA)含量。结果:与假手术组比较,模型组大鼠心肌梗死面积明显增大,血清中LDH,CK,MDA含量水平明显升高,总超氧化物歧化酶(T-SOD)水平明显降低(P0.05,P0.01);与模型组比较,益母草碱能明显减小心梗大鼠左心室梗死面积,并能明显降低心梗大鼠血清中LDH,CK及MDA的水平,明显升高血清中T-SOD的活性(P0.05,P0.01)。结论:益母草碱对急性心肌缺血造成的心肌损伤有良好的预防性保护作用,其作用机制可能与提高心肌组织抗氧化能力有关。     

苦皮藤对类风湿性关节炎成纤维滑膜细胞增殖和相关细胞因子表达的影响

目的:观察苦皮藤不同提取部位对类风湿关节炎成纤维样滑膜细胞(HFLS-RA)增殖的影响,及其对肿瘤坏死因子-α(TNF-α)诱导的HFLS-RA中细胞因子表达的影响。方法:制备苦皮藤水提物(A)及其醇提物(B),对醇提物根据极性大小进行萃取,得到石油醚部位(C)、二氯甲烷部位(D)、乙酸乙酯部位(E)、正丁醇部位(F)、剩余层部位(G)。噻唑蓝(MTT)法检测苦皮藤各部位不同浓度(10、20、40、80、160μg/mL)干预细胞24 h、48 h、72 h,对细胞增殖的抑制作用;TNF-α(20 ng/mL)体外诱导HFLS-RA增殖,加入不同浓度的各个提取部位(10,40,160μg/mL)作用72 h后,酶联免疫吸附(ELISA)法检测细胞上清中白细胞介素-1β(IL-1β)、白细胞介素-6(IL-6)、基质金属蛋白酶-3(MMP-3)、前列腺素E 2(PGE 2)的含量。结果:MTT结果表明,苦皮藤的B、C、D(80,160μg/mL)能显著抑制HFLS-RA细胞的增殖(P<0.01),呈时间和剂量依赖性;A、E、F、G四组对细胞的活力均无明显影响。ELISA结果显示,与空白组比较,TNF-α组细胞上清中IL-1β、IL-6、MMP-3、PGE 2含量均显著提高(P<0.01);与TNF-α组比较,B、C、D(40,160μg/mL)能显著抑制IL-1β的表达(P<0.05,P<0.01),具有剂量依赖性;C(40,160μg/mL)能显著抑制IL-6的表达(P<0.05),D(160μg/mL)能显著抑制IL-6的表达(P<0.05);C、D(160μg/mL)能显著降低MMP-3含量(P<0.05);A、B、D(160μg/mL)可抑制PGE 2的表达(P<0.05),C(40、160μg/mL)能显著抑制PGE 2的表达(P<0.05,P<0.01)。结论:苦皮藤可抑制HFLS-RA增殖及其分泌IL-1、IL-6、MMP-3、PGE 2的能力。