21-羟化酶缺陷症基因诊断方法的建立及应用

目的建立一种荧光偏振检测技术联合直接测序法诊断先天性肾上腺皮质增生症中21-羟化酶缺陷症的新方法,并对中国人群中最常见的2种基因缺失和8种点突变进行检测。方法收集40例健康者及2例患者外周血,提取基因组DNA。设计通用引物,同时扩增CYP21A2和CYP21A1P等位基因片段,然后用序列特异的TAMRA荧光标记探针对扩增产物进行杂交检测,利用荧光偏振仪检测扩增杂交的荧光偏振值,确定是否存在该基因的缺失,同时用直接测序法验证检测结果;对Exon3Del 8bp(GAGACTAC)缺失进行检测时,将缺失的8个碱基设计在引物上,确保引物的特异性。同时根据CYP21A2基因与其假基因序列差异,设计5对特异性引物扩增CYP21A2基因,PCR后直接测序检测中国人群中最常见的8种点突变,包括P30L、i2g、I172N、E6Cluster、V281L、920-921insT、Q218X、R356W。结果荧光偏振法未检测到CYP21A2基因大片段缺失,检测结果与直接测序法结果对比差异无统计学意义(P0.05),一致率达100%,40例健康者未检测到点突变,1例患者检测出Exon1G56R,Exon7c.920-921InsT插入杂合突变,1例患者检测出Exon4I172N、Exon8Q318X杂合突变。结论荧光偏振检测法联合直接测序法诊断21-OHD是一种高效的检测手段,可以广泛用于临床,不仅能对患者基因突变类型进行分析,在指导遗传咨询及产前诊断方面亦发挥重要作用。     

先天性肾上腺皮质增生风险胎儿的CYP21基因分子产前诊断

目的 报告1例先天性肾上腺皮质增生(CAH)CYP21基因缺陷风险胎儿的分子产前诊断.方法 首先对携带者夫妇进行CYP21基因扩增和测序,确定这对夫妇均为CYP21基因缺陷的携带者.妻子孕29w时于B超的引导下抽取胎儿脐血,分离血浆进行17-羟孕酮的检测.从血细胞中提取DNA,用多态性位点D12S1701检测夫妇和胎儿DNA,以排除胎儿样本中无母体细胞污染,在此基础上,针对携带者突变位点对胎儿样本进行DNA扩增,PCR产物经正反方向测序分析.结果 携带者夫妇均存在CYP21因子外显子4突变(g.1122T＞A,p.I172N)和外显子6的丛集突变(g.1503T＞A,g.1506T＞A,g.1512T＞A,p.I236N,p.V237E,p.M239K).多态性位点检测排除胎儿样本中母体细胞污染,胎儿测序结果显示不带有与父母相同的突变.胎儿血浆17-羟孕酮结果正常.最后妻子足月分娩了一健康女婴.结论 产前分子诊断对于CAH风险胎儿是非常重要的.用测序技术进行CYP21基因的分子产前诊断是可行的.     

先天性肾上腺皮质增生症基因突变位点诊断方法的建立

目的 利用PCR产物直接测序、SNP位点分析和T-A克隆技术,建立先天性肾上腺皮质增生症的基因突变位点诊断方法.方法 收集临床诊断为21-羟化酶缺乏症(21-OHD)患者33例和17α-羟化酶缺乏症(17-OHD)患者2例及所有患者父母的外周血标本,以及105名健康对照者外周血标本.抽提外周血基因组DNA.根据CYP21A2基因与其假基因间的基因序列差异设计高特异性的PCR引物,扩增CYP21A2基因全长,通过PCR产物直接测序、SNP位点分析以及PCR产物T-A克隆分析检测CYP21A2基因突变.采用PCR扩增结合直接测序的方法进行CYP17A1基因突变的检测.结果 应用本研究建立的方法,可以对所有患者的基因突变进行诊断.33例21-OHD患者中,共发现13种不同形式的CYP21A2基因突变,其中IVS2-13A/C>G、p. I172N和融合基因分别占32%(21/66)、27%(18/66)和15%(10/66).91% CYP21A2基因突变源自于相应的假基因.2例17-OHD患者分别为CYP17A1基因IVS4-6A>G纯合突变及CYP17A1基因p.487_489del纯合突变.所有患者基因突变均来自父母.健康对照者均未检测出基因突变.结论 本研究建立了先天性肾上腺皮质增生症基因突变位点的诊断方法,为临床提供了可靠的确诊依据.     

血清胱抑素C值在妊娠期孕妇心功能的评估意义

选取本院2015年4月~2016年3月期间在广州市花都区妇幼保健院进行产检的花都区妇女,500例健康孕妇为试验组,采用化学发光法检测妊娠各期特异性血清血清胱抑素C(Cys C)浓度,200例健康未孕育龄妇女为对照组。按照纽约心功能分级的标准,进行心功能分级,并测定各级的脑钠肽浓度。结果正常妊娠妇女血清胱抑素C参考值范围分别是妊娠早期0.73±0.15mg/L、妊娠中期1.13±0.19mg/L、妊娠后期1.66±0.28mg/L,健康对照组血清胱抑素C参考值范围为0.74±0.11mg/L。心功能I级BNP浓度63.00±25.45ng/dl,心功能II级BNP浓度212.78±30.75ng/dl,心功能III级BNP浓度525.00±150.09ng/dl,心功能IV级BNP浓度856.76±303.34ng/dl。妊娠早期孕妇血清胱抑素C浓度同健康未孕妇女比较差异无统计学意义(P0.05),妊娠中、晚期胱抑素C浓度同健康未孕妇女比较差异有统计学意义(P0.05),血清胱抑素C浓度和脑钠肽浓度呈正相关(r=0.524,P0.05),两者都可以为鉴别诊断妊娠妇女的心力衰竭提供依据。     

乙型肝炎病毒携带者血清HBV DNA拷贝数与甲胎蛋白分析

目的 分析乙型肝炎病毒携带者的血清乙型肝炎病毒DNA拷贝数及甲胎蛋白含量,探讨乙型肝炎病毒DNA拷贝数与甲胎蛋白含量之间的相关性.方法 收集临床已确诊的乙型肝炎病毒携带者30例,其中男18例,女12例.通过实时荧光定量PCR法测定乙型肝炎病毒携带者的乙型肝炎病毒DNA拷贝数,采用化学发光法测定血清甲胎蛋白的含量.结果 乙型肝炎病毒携带者的血清甲胎蛋白含量均值为(5.2±3.3) g/L,比正常人的(3.8±1.3) g/L略高(P<0.05),但乙型肝炎病毒携带者的血清乙型肝炎病毒DNA拷贝数与甲胎蛋白含量相关性较弱,相关系数为 -0.201(P>0.05).结论 乙型肝炎病毒携带者的血清甲胎蛋白含量较正常人高,应定期随访和复查,但血清乙型肝炎病毒DNA拷贝数高低并不代表肝细胞损伤的严重程度.     

肿瘤标志物指数用于术前非小细胞肺癌的预后评估

目的评价基于癌胚抗原(CEA)和细胞角蛋白片段19(Cyfra21-1)的肿瘤标志物指数(TMI)对临床I期非小细胞肺癌(NSCLC)预后评估的意义。方法对351例术前为临床I期、病理类型均为腺癌或鳞癌的NSCLC病例进行回顾性分析,随访时间≥5年。比较血清CEA和Cyfra 21-1水平以及TMI与患者生存率的关系,并用单因素和多因素分析其风险比(95%可信区间)[OR(95%CI)]。结果血清CEA水平正常组[(5.14±1.65)ng/mL,n=266]和升高组[(45.88±27.78)ng/mL,n=85]5年生存率分别为89.85%和8.24%(χ2=299.30,P<0.01);血清Cyfra21-1水平升高组[(4.85±1.41)ng/mL,n=95]和正常组[(2.23±0.68)ng/mL,n=256]5年生存率分别为15.96%和90.27%(χ2=255.70,P<0.01)。TMI≤1.0组的5年生存率为96.81%,TMI>1.0组的5年生存率仅为3.02%(χ2=461.13,P<0.01)。单因素分析OR(95%CI)为104.15(48.600,223.218),P<0.01,多因素分析为107.435(49.722,232.138),P<0.01,均显示TMI作为预后判断的独立影响因素意义显著。结论 TMI可用于NSCLC的预后评估和治疗参考。     

用血浆铁蛋白水平评价有偿献血员铁储存量

该课题是为了研究有偿献血员体内储存铁的水平,以及在无偿和有偿献血员两组人群中评价血红蛋白测定的敏感性。作者把522名献血员分为3组,Ⅰ组,首次自愿献血者110人,Hb≥13g/dl;Ⅱ组、多次有偿献血员201人,Hb≥13g/dl;Ⅲ组、有偿献血员211人,Hb<13g/dl,该组被取消献血的原因是Hb<13g/dl。用酶联免疫法(Miles等改良法)测定各组献血员铁蛋白,根据铁蛋白值分为3组。缺铁组0—12ng/dl;临界值组,13—20ng/dl;正常组21—400ng     

围生期妇女血清N末端B型钠尿肽原水平测定及意义

目的 探讨围生期妇女血清N末端B型钠尿肽原(NT-proBNP)水平和意义.方法 采用电化学发光法分别检测57例正常妊娠妇女分娩前后、21例妊娠期高血压疾病患者和6例围生期心肌病患者血清NT-proBNP水平.结果 正常妊娠组妇女分娩前血清NT-proBNP浓度为(69.1±44.3)ng/L,分娩后血清NT-proBNP浓度为(138.8±110.6) ng/L,均比对照组(43.2±27.9)ng/L高,差异有统计学意义(P＜0.05);患者组妊娠期高血压疾病患者和围生期心肌病患者血清NT-proBNP浓度分别为(247.6±162.8)ng/L和(1 836.3±1 126.4)ng/L,比正常妊娠组明显增高(P＜0.05).结论 围生期妇女血清NT-proBNP水平不同于正常育龄未孕妇女,血清NT-proBNP水平检测对早期发现围生期妇女心功能异常有重要意义.     

不同负荷游泳运动对老龄雄性小鼠骨代谢水平的影响

目的　探讨不同负荷游泳运动对老龄雄性小鼠骨代谢水平的影响。方法　以 12月龄 (老龄 )雄性小鼠为研究对象 ,分为 3 0min组、60min组、60min 负重组、实验对照组及安静对照组 ,观察增龄及不同负荷游泳运动对老龄雄性小鼠腰椎骨、股骨胶原含量 (HOP)、血清性激素 (T ,E2 )、骨钙素、碱性磷酸酶及钙含量的影响。结果　当实验进行 8周后 ,60min组、60min 负重组小鼠的血清睾酮 ( 5 7.82 6± 13 .999ng/dl ,5 8.985± 12 .3 0 1ng/dl)、雌二醇 ( 3 0 .81± 4.14pg/ml ,3 2 .62± 5 .85pg/ml)水平及股骨羟脯氨酸含量 ( 12 .5 4± 0 .89μg/mg ,13 .47± 0 .84μg/mg)均显著高于对照组 (T :43 .3 3 7± 13 .946ng/dl,E2 :2 2 .3 2± 4.2 1pg/ml ,HOP :11.92± 1.0 7μg/mg ,均P <0 .0 5 )。结论　适宜负荷的游泳运动可减缓伴随增龄而发生的性激素水平降低及骨胶原丢失 ;而且该作用在较大负荷的游泳运动中表现得尤为明显     

溃疡性结肠炎患者血清和结肠组织白细胞介素8和白细胞介素10的表达

目的 检测溃疡性结肠炎(UC)患者的结肠组织及血清中白细胞介素8(IL-8)和白细胞介素10(IL-10)的含量,探讨IL-8和IL-10在UC发病中的作用及其相关性.方法 用放射免疫分析检测70例经内镜检查确诊的UC患者(UC组)结肠组织和血清标本,并与30例正常对照组(健康志愿者)比较.结果 UC组中患者血清和结肠组织中IL-8含量均比正常对照组升高,且随着病变范围的扩大和病变程度的加重逐渐升高(均P<0.01),轻度、中度、重度UC患者血清中IL-8含量分别为(107±11)ng/L、(151±36)ng/L、(201±47)ng/L(均P<0.01),结肠组织中分别是(300±10)ng/g、(777±96)ng/g、(907±185)ng/g,而血清和结肠组织中IL-10含量比对照组降低,且随着病变程度加重逐渐降低.轻度、中度、重度UC患者血清中IL-10含量分别为(41±11)ng/L、(35±14)ng/L、(20±6)ng/L(均P<0.01),结肠组织中分别是(80±12)ng/g、(61±11)ng/g、(20±10)ng/g;IL-8和IL-10表达水平呈负相关.结论 促炎因子IL-8含量升高,抑炎因子IL-10含量降低,体内免疫调节失衡,易诱发UC;IL-8、IL-10水平与疾病严重程度显著相关.     

白细胞介素-21及其受体与相关疾病的研究进展

白细胞介素-21(IL-21)具有广泛的免疫调节生物学功能,而这些功能的发挥又必须依赖其受体(IL-21R)的存在和协同作用.IL-21与IL-21R结合后,通过细胞内JAK/STAT信号传导通路,并将信号传导给下游效应分子,促进B细胞的增殖分化,免疫球蛋白的生成;调节T细胞、NK细胞、上调IFN-γ等细胞因子的分泌,增强细胞毒活性,提高其杀伤能力.     

K-ras基因突变和p21蛋白的表达与子宫内膜异位症恶性转化的关系

目的:探讨K-ras基因点突变和p21蛋白的表达与子宫内膜异位症(内异症)恶性转化的关系.方法:应用PCR-RFLP和免疫组织化学技术,对与内异症相关的3例卵巢子宫内膜样癌及3例卵巢透明细胞癌中K-ras基因第一外显子第12、13密码子的突变情况以及p21蛋白的表达进行研究,并将结果与和内异症不相关的卵巢子宫内膜样癌、卵巢透明细胞癌以及不典型内异症、卵巢内异症相比较.结果:起源于内异症的卵巢子宫内膜样癌和卵巢透明细胞癌中各有1例检测到K-ras基因第12密码子发生突变,突变类型为GGT→TGT,即甘氨酸→半胱氨酸,其余标本均未见第12、13密码子突变.p21蛋白在与内异症相关的卵巢肿瘤中的表达高于其他各组(P<0.05).结论:K-ras基因的改变与内异症恶性转化可能具有某种联系.p21蛋白在与内异症相关的卵巢癌中表达较高,说明它们的发病可能涉及不同的分子机制.     

胃癌中高表达的miR-21对胃癌细胞生物学行为的影响

目的:研究miR-21在胃癌中的表达情况及其对胃癌细胞生物学行为的影响。方法:通过实时荧光定量PCR检测30例胃癌手术切除组织和周围正常组织中以及10株胃癌细胞中miR-21的表达情况。通过CCK8法、Annexin-Ⅴ+PI、流式细胞仪检测、划痕实验,观察过表达miR-21对胃癌细胞增殖、凋亡、细胞周期、迁移等生物学行为的影响。结果:定量real-time PCR结果显示miR-21在胃癌组织中高表达(P0.05),miR-21过表达细胞株增殖能力增强,与阴性对照组和空白对照组对比差别具有统计学意义(P<0.01),miR-21转染细胞划痕愈合速度较对照组快。结论:miR-21在胃癌中呈高表达,过表达miR-21可以促进BGC-823胃癌细胞的增殖能力和迁移能力,但对凋亡和细胞周期影响不明显。     

SZ-21拮抗血管生成的初步研究

本研究的目的是从SZ-1，-2，-21，-51，-65及262(GPⅡb/Ⅲa McAb)中筛选出与ECV304（人脐静脉内皮细胞株）起反应的单抗，研究其抗血管生成的能力。用流式细胞仪筛选与ECV304起反应的单抗，用酶标法检测反应的单抗对ECV304、肺癌细胞株A549粘附、迁移的作用，采用鸡绒毛尿囊膜（CAM）血管生成分析法观察其体外抗血管生成作用，以Annexin Ⅴ TITC盒检测单抗对A549细胞的凋亡作用。结果表明：筛选出了与ECV304起反应的SZ-21，其对ECV304与基质纤连蛋白（Fn）、胶原蛋白（Col）Ⅳ间粘附、迁移均有抑制作用，鸡绒毛尿囊膜经TNF-α诱导血管生成后SZ-21可抑制其新生。进一步研究发现SZ-21对肿瘤细胞A549（肺癌细胞株）与基质Fn，ColⅣ间粘附、迁移亦有拮抗作用，对A549细胞可诱导其凋亡。结论：SZ-21通过对整合素（integrin）β3的抑制和诱导凋亡的作用表现了抗血管生成的能力，整合素与Fn，ColⅣ的结合部位也不限于RGD序列，而具有不同的识别信号。     

NF-κB在急性白血病患者骨髓细胞中的表达及其与P21,MMP-2和MMP-9表达的关系

本研究应用免疫细胞化学法检测初治急性白血病患者、缓解期患者及正常对照者骨髓细胞中NF κB ,Ras基因编码的P2 1蛋白及MMP 2和MMP 9表达阳性细胞的百分率 ,以明确核因子κB (nuclearfactor kappaB ,NF κB)在急性白血病细胞高表达的意义 ,及其与P2 1,基质金属蛋白酶 2和 9(matrixmetalloproteinase,MMP 2和MMP 9)表达间的关系。结果表明 :初治组NF κB ,P2 1及MMP 2和MMP 9的阳性率明显高于缓解组及正常对照组 (P <0 .0 5 ) ,而缓解组与正常对照组间没有显著性差异 (P >0 .0 5 ) ,且NF κB与P2 1蛋白 ,MMP 2和MMP 9表达均呈正相关 (r值分别为 0 .76 7,0 .72 9和 0 .80 3,P <0 .0 5 ) ,说明白血病细胞中NF κB及P2 1蛋白异常高表达。结论 :NF κB经Ras启动活化后可上调MMP 2和MMP 9在白血病细胞的表达 ,使其分解细胞外基质的能力明显升高而释放入血     

KX-21全自动血液分析仪血小板计数性能评价

血液分析仪的广泛使用使临床检验工作提高到了一个新的水平。不仅能检测更多的实验参数，而且大大提高了检测结果的准确性。但是仪器法计数血小板（PLT）存在着许多干扰因素，导致影响结果，因此在实验室使用全自动血液分析仪计数PLT前应对其进行较全面的性能评价。     

胆胃胶囊对鼠胆汁反流性胃炎癌基因蛋白表达的调控

目的:探讨胆胃胶囊对大鼠胆汁反流性胃炎癌基因蛋白表达的调控作用.方法:先将大鼠造成胆汁反流性胃炎模型,再分为胆胃胶囊大、中、小剂量组,对照组使用药物达喜,并用免疫组化法检测癌基因蛋白C-erbB-2、p21、Bcl-2、Ras的表达.结果:癌基因蛋白p21的表达在胆胃胶囊组中显著降低,C-erbB-2、Bcl-2、Ras无显著差异.结论:下调癌基因蛋白p21表达可能是胆胃胶囊治疗胆汁反流性胃炎的部分机制.     

急性髓细胞白血病M2/t(8;21)亚型临床研究

目的研究伴 t( 8;2 1)染色体易位的急性髓细胞性白血病 ( AML)预后及影响预后的相关因素。方法对 44例伴 t( 8;2 1)易位 M2亚型与同期无 t( 8;2 1)易位的 M2 亚型的临床表现、血液学异常及完全缓解率进行比较。结果两组在外周血象骨髓象及完全缓解率、生存期无明显差异。结论伴 t( 8;2 1)易位的 M2 亚型并不比其他类型 AML具有优越性 ,能否通过大剂量阿糖胞苷或组蛋白去乙酰化酶抑制剂及糖皮质激素治疗 ,可能有助于提高疗效     

核心蛋白聚糖与肿瘤

核心蛋白聚糖(decorin, DCN)是一种主要存在于结缔组织中与胶原纤维相关的蛋白聚糖,1978年由美国国立卫生研究院骨科研究所的Fisher教授首次分离、纯化[1].DCN的核心蛋白可以结合多种细胞因子(cytokines, CKS)及生长调节因子,包括转化生长因子β(transforming growth factor, TFG-β)和纤连蛋白(fibronetin, FN)、血栓素结合蛋白(thrombospondin)、DCN胞吞受体等.TFG-β被多种组织来源的肿瘤细胞产生,以自分泌和旁分泌的方式释放并调节肿瘤的生长,DCN与TFG-β发生特异性结合,可以中和和灭活TFG-β的生物活性.P21WAF/CIP是一种潜在的细胞周期依赖激酶的抑制剂,DCN直接干预P21WAF/CIP对细胞周期调控的诱导,影响细胞增殖分化及发展的过程[2].     

TLQP-21研究进展

TLQP-21是Batolomucci等最近发现的一种来源于大鼠脑组织提取物的血管生长因子（VGF）衍生肽。TLQP-21通过改变外周肾上腺素髓质激素水平和脂肪组织分解代谢，打破能量平衡，增加静息状态下的能量消耗，减少食物摄取，从而抑制饮食诱导的肥胖早期，为抑制肥胖提供了新的潜在靶点。