体外共培养体系中胆管癌细胞对人脐静脉内皮细胞b-FGF和VEGF表达的影响

目的 探讨体外共培养体系中胆管癌细胞(QBC939)对人脐静脉内皮细胞(HUVEC)、碱性成纤维细胞生长因子(b-FGF)和血管内皮生长因子(VEGF)表达的影响.方法 建立胆管癌QBC939细胞与HUVEC体外共培养体系,采用CCK-8法检测共培养不同时相HUVEC的增殖;ELISA检测共培养上清液中b-FGF含量;qRT-PCR和Western blot检测共培养不同时相点HUVEC细胞VEGF mRNA和蛋白质的表达.结果 共培养后12、24、48 h和72 h,HUVEC增殖较对照组显著增高(P＜0.01).与0h组比较,共培养12、24、48 h上清液中b-FGF含量显著增高(P＜0.05).共培养12 h时VEGF mRNA表达显著增加,并持续至72 h(P＜0.01),VEGF蛋白表达在共培养12h后显著增高,24、48、72 h时与对照组比较差异有统计学意义(P＜0.05).结论 人胆管癌QBC939细胞可促进血管内皮细胞增殖、增加b-FGF分泌和VEGF表达.b-FGF和VEGF表达增加与肿瘤血管新生,以及肿瘤的生长和转移可能具有相关性.     

三棱、莪术含药血清对培养的人脐静脉血管内皮细胞生长和VEGF表达的影响

目的 探讨三棱、莪术含药血清对血管内皮生长因子(vascular endothelial growth factor,VEGF)诱导的血管内皮细胞增殖和VEGF表达影响.方法 以三棱、莪术含药血清作用于VEGF诱导的人脐静脉血管内皮细胞(human umbilical vein endothelial cell-1,HUVEC-1),倒置相差显微镜观察细胞形态学改变,MTT法观察细胞增殖情况,Western blot和RT-PCR方法分别检测内皮细胞VEGF蛋白和mRNA的表达.结果 三棱、莪术5.0 g·kg-1·d-1、2.5 g·kg-1·d-1大鼠含药血清可使正常人脐静脉血管内皮细胞排列紊乱,明显梭形化.5.0 g·kg-1·d-1大鼠10%、5%、2.5%含药血清组和2.5 g·kg-1·d-1大鼠10%含药血清组HUVEC-1细胞的增殖显著低于空白血清相同浓度组(P＜0.05).5.0 g·kg-1·d-1、2.5 g·kg-1·d-1大鼠5%的含药血清使HUVEC-1细胞VEGF蛋白、VEGF mRNA表达均显著降低.结论 三棱、莪术含药血清可抑制VEGF诱导的血管内皮细胞增殖,其机制与抑制血管内皮生长因子表达密切相关.     

腺苷对脐静脉内皮细胞合成VEGF蛋白及表达VEGF mRNA的影响

目的:探讨腺苷对脐静脉内皮细胞(Human Umbilical Vein Endothelial Cell,HUVEC)合成血管内皮细胞生长因子(vascular endothelial growth factor,VEGF)蛋白及表达VEGF mRNA的影响.方法:实验分5组进行:组1为对照组,腺苷浓度0mol/L,组2～组5为实验组,腺苷浓度分别为10-4mol/L、10-6mol/L、10-8mol/L和10-10mol/L.用免疫组织细胞化学法检测VEGF蛋白质合成,原位杂交检测VEGF mRNA表达.结果:对照组和实验组均有VEGF蛋白在胞浆中表达,呈浅黄至深棕黄色颗粒,对照组的VEGF染色阳性细胞少,染色程度轻;10-4molv、10-6mol/L浓度的腺苷作用48h后,阳性细胞明显增加,染色深,10-8mol/L、10-10mol/L浓度的腺苷对VEGF染色基本无影响.对照组与实验组均有VEGF mRNA表达,对照组原位杂交后染色阳性细胞百分率为(29.00±4.18)%.10-4mol/L、10-6mol/L腺苷作用48h后,染色阳性百分率分别上升为(73.61±4.72)%和(68.42±2.28)%,与对照组比较有统计学意义(P＜0.05);10-8mol/L、10-10mol/L腺苷作用后染色阳性率分别为(34.04±5.92)%和(33.80±5.54)%,与对照组比较无统计学意义(P＞0.05).结论:腺苷有促进HUVEC合成和分泌VEGF蛋白的作用,并可上调VEGF mRNA的表达.     

碘对血管内皮细胞表达VEGF影响的研究

目的 研究碘对血管内皮细胞表达血管内皮生长因子(VEGF)的影响.方法 在含有不同浓度碘离子(I-)环境中培养血管内皮细胞,使用Western-blot和RT-PCR法检测VEGF的表达情况.结果 不同浓度的I-作用于血管内皮细胞后,VEGF表达未出现上调(P>0.05).结论 碘不促进血管内皮细胞合成VEGF,碘促进血管内皮细胞增殖与VEGF上调无关.     

阿托伐他汀对内皮细胞内皮脂酶mRNA表达的影响

目的:探讨阿托伐他汀对人脐静脉内皮细胞(HUVEC)内皮脂酶(EL)mRNA表达的影响。方法:将阿托伐他汀加入HUVEC培养基,使其终浓度分别为0(对照组)、2、4、6、8、10μmol/L,分别孵育2、4、8、12、24h后,用半定量RT-PCR法检测HUVEC内ELmRNA表达的改变。结果:阿托伐他汀抑制HUVEC内ELmRNA表达。相同时间内,药物浓度越高,ELmRNA表达量越少;相同浓度下,作用时间越长,ELmRNA表达量越少。与对照组相比,差异有统计学意义(P<0.05)。结论:阿托伐他汀抑制HUVEC内ELmRNA的表达,且呈时间-剂量依赖性。     

口腔恶性黑色素瘤中NOS和VEGF的表达与血管生成的关系

目的 研究血管内皮生长因子(VEGF)、诱导型一氧化氮合酶(iNOS)和内皮型一氧化氮合酶(eNOS)在口腔恶性黑色素瘤中表达的相关性；探讨三者与口腔恶性黑色素瘤血管生成的关系；研究一氧化氮(NO)和VEGF的相互作用及NO在VEGF促肿瘤生长中的作用机制。方法 应用免疫组织化学方法检测11例口腔恶性黑色素瘤手术切除标本VEGF、iNOS和eNOS的表达，第Ⅷ因子相关抗原(FⅧRAg)血管内皮细胞特异性染色计数肿瘤微血管密度(：MVD)。结果 ①7例口腔恶性黑色素瘤组织表达VDGF，6例表达iNOS，9例表达eNOS；②VEGF与iNOS的表达正相关，与eNOS的表达无相关；③VEGF、iNOS的表达与口腔恶性黑色素瘤MVE)呈正相关，eNOS的表达与口腔恶性黑色素瘤MVI)的差异无显著性意义。结论 ①iNOS对VEGF的生成和发挥作用的过程有重要影响；②MVD随着VEGF和iNOS表达的增强而增加，说明两者对口腔恶性黑色素瘤血管生成具有促进作用。     

紫外线照射对血管内皮细胞的损伤效应

目的探究不同剂量紫外线照射对人脐静脉血管内皮细胞（human umbilical vein endothelial cell,HUVEC）的细胞形态、细胞凋亡率、活性氧（reactive oxygen species,ROS）、血管内皮生长因子（vascular endothelial growth factor,VEGF）和碱性成纤维生长因子（basic fibroblast growth factor,bFGF）的影响。方法实验分正常组和3个不同剂量辐照组,辐照组分别采用10J·m^-2、20J·m^-2、40J·m^-2紫外线照射血管内皮细胞,通过流式细胞术（flow cytometry,FCM）检测各组细胞凋亡率,荧光试剂盒检测ROS的水平和酶联免疫吸附试验（enzyme-linked immunosorbent assay,ELISA）测定VEGF和bFGF的含量。结果与正常组相比,细胞经不同剂量紫外照射24 h后,细胞凋亡率随着照射剂量的增加而升高;ROS、VEGF、bFGF的含量随着照射剂量的增加而升高。结论紫外照射对血管内皮细胞有一定程度的损伤效应,可能与诱导细胞凋亡,释放ROS和激活VEGF和bFGF有关。     

人星形细胞瘤中eNOS和VEGF的表达与血管生成关系的研究

目的探讨内皮型一氧化氮合酶(eNOS)、血管内皮生长因子(VEGF)的表达与星形细胞瘤血管生成及恶性程度的相互关系.方法应用免疫组化方法检测37例星形细胞瘤和4例胶质增生组织eNOS、VEGF的表达水平,并检测Ⅷ因子相关抗原(FⅧRAg)以反映微血管密度.结果微血管密度随肿瘤恶性程度增高而显著增多(P＜0.05).eNOS、VEGF在血管内皮及肿瘤细胞胞质中均有表达,其阳性程度及标记指数(LI)均随血管密度及恶性程度增高而显著增高(P＜0.05).eNOS与VEGF的表达水平有明显的正相关性(P＜0.01).结论eNOS与VEGF可能相互影响促进肿瘤组织内血管生成,在星形细胞瘤的形成与发展过程中起着重要作用,其表达水平对判断恶性程度及预后有指导意义.     

AMPK在内皮细胞中对血管形成的影响

在真核细胞中,腺苷酸活化蛋白激酶(AMPK)是细胞及全身能量稳态的一个重要调节器,受体内AMP/ATP比率调节,通常被称为代谢敏感性激酶。新近的研究发现,AMPK的激活参与了许多细胞(如骨骼肌细胞、内皮细胞)的分化、迁移和管腔形成。该文就AMPK在血管生成这一生物效应中的显像和作用机制予以综述。     

他汀类药物对脓毒症一氧化氮合酶的影响

近年有研究显示，他汀类药物能改善脓毒症动物模型预后，提高生存率，其主要机理是通过抑制诱导型一氧化氮合酶表达（iNOS），促进内皮型一氧化氮合酶（eNOS）表达，恢复iNOS与eNOS平衡，保护内皮功能，现将其归纳作一综述。     

Changes in human umbilical vein endothelial cells induced by endothelial nitric oxide synthase traffic inducer

This study investigated the changes in human umbilical vein endothelial cells (HUVECs) induced by overexpression of endothelial nitric oxide synthase traffic inducer (NOSTRIN) and its role in cellular injury. Recombinant NOSTRIN-expressing and empty vectors were transfected into cultured HUVECs, and factor Ⅷ-related antigen was examined by using immunohistochemical analysis. Growth curves were generated for both transfected and untransfected cells and these indicated that the proliferative ability of cells overexpressing NOSTRIN was significantly decreased. The expression of NOSTRIN and eNOS proteins was detected by using Western blot analysis, endothelial NOS (eNOS) activity was assayed by using spectrophotometry, and NO 2 /NO 3 levels were measured using nitrate reductase. Immunohistochemical analysis demonstrated that all groups expressed NOSTRIN in the plasma membrane and cytoplasm, and Western blot analysis confirmed that NOSTRIN levels were significantly higher in cells transfected with the NOSTRIN plasmid (P<0.01). The activity of eNOS and the levels of NO 2 /NO 3 were significantly decreased in NOSTRIN overexpressing cells as compared with empty vector and untransfected cells (P<0.01 and P<0.01, respectively). Morphological and ultrastructural changes were observed under light and electron microscopy, and it was found that NOSTRIN-overexpressing cells were elongated with deformities of the karyotheca, injury to the plasma membrane, increased lipids in the cytoplasm, and shortened microvilli. This study showed that overexpression of NOSTRIN had a significant effect on eNOS activity in HUVECs and resulted in significant cellular damage.     

辛伐他汀对人脐静脉内皮细胞血管内皮生长因子表达影响的初步研究

目的:观察辛伐他汀对人脐静脉内皮细胞血管内皮生长因子(vascular endothelial growth factor,VEGF)及其受体表达的影响.方法:将人脐静脉内皮细胞分为辛伐他汀组、TNF-α组、辛伐他汀+TNF-α组、IL-1β组、辛伐他汀+IL-1β组和空白对照组.采用免疫细胞化学方法,观察TNF-α和IL-1β对细胞中VEGF及其受体表达的影响,并观察辛伐他汀的干预作用.结果:TNF-α组和IL-1β组的VEGF及其受体表达明显高于空白对照组(P＜0.05),辛伐他汀十TNF-α组和辛伐他汀+IL-1β组表达分别明显低于TNF-α组和IL-1β组(P＜0.05).结论:辛伐他汀可以抑制炎性刺激导致的人脐静脉内皮细胞VEGF及其受体的表达.     

牙龈卟啉单胞菌促进人脐静脉内皮细胞一氧化氮的生成

目的:观察牙龈卟啉单胞菌(Porphyromonas gingivalis,Pg)对人脐静脉内皮细胞(human umbilical vein endothelialcells,HUVEC)一氧化氮(NO)生成的影响,探讨Pg对内皮细胞功能损伤的途径,以期为牙周病在动脉粥样硬化发病机制中的作用提供依据.方法:用感染复数(multiplicity of infection,MOI)1∶10、1∶100Pg干预HUVEC,未受Pg干预的HUVEC作为阴性对照组,分别于4、8、12、24 h时收集细胞上清液,利用硝酸还原酶法测定细胞上清液中NO的浓度:Western.blot检测诱导型一氧化氮合酶(iNOS)和内皮型一氧化氮合酶(eNOS)蛋白表达水平;透射电镜观察Pg对HUVEC的黏附和入侵方式.结果:在24 h内,PgMOI 1∶10、1∶100能促进HUVEC NO的生成,与阴性对照组相比差异有统计学意义(P<0.05),PgMOII∶10,MOII∶100可以诱导HUVEC iNOS的蛋白表达,抑制eNOS的蛋白表达,与阴性对照组相比差异均有统计学意义(P<0.05),透射电镜观察Pg能够利用其菌毛黏附于HUVEC细胞表面并入侵到HUVEC细胞胞质内,定植于细胞内.结论:Pg能够黏附于HUVEC并入侵到细胞胞质内,诱导iNOS蛋白表达,抑制eNOS的蛋白表达,最终促进HUVEC NO的生成.过量的NO可能发挥细胞毒性作用,导致内皮功能失调.     

hVEGF121基因转染对人脐静脉内皮细胞生长的作用

目的:构建人血管内皮生长因子(hVEGF)-121的真核细胞复制表达质粒,将hVEGF121基因转染进人脐静脉内皮细胞(human umbilical vein endothelial cell,HUVEC),通过旁分泌作用来加快其生长速度.方法:采用RT-PCR方法,从人胚胎成纤维细胞中克隆hVEGF121前体蛋白全长cDNA,构建重组真核表达质粒pcDNA3-hVEGF121,用FuGENE 6介导转染入HUVEC.收集转染的HUVEC培养上清,用ELISA法定量检测hVEGF蛋白的表达情况;绘制细胞生长曲线,检测hVEGF121促进HUVEC增殖的生物学活性.设转染pcDNA3空质粒载体和不转染任何DNA的HUVEC做对照.结果:(1)成功构建了pcDNA3-hVEGF121真核表达质粒,经测序证明基因序列与GenBank中核酸序列一致,且插入方向正确;(2)转染细胞瞬时表达hVEGF蛋白,于转染1d后每104个细胞每天可分泌hVEGF蛋白59.95 Pg,约为对照组的100倍;之后表达水平先快后慢下降,于转染7d后仍较对照组高近1倍;(3)转染细胞生长速度明显加快,在转染3 d后细胞数与对照组相比即有显著性差异(P＜0.01),细胞倍增时间从对照组的7d以上缩短为3d左右.结论:成功构建了pcDNA3-hVEGF121真核表达质粒;该质粒能在HUVEC中表达有生物活性的hVEGF121蛋白,通过旁分泌作用明显促进HUVEC的分裂增殖.     

尼古丁对人脐静脉内皮细胞凋亡及坏死的影响

目的不同浓度尼古丁对人脐静脉内皮细胞(HUVECs)凋亡及坏死的影响。方法用CD34以免疫组织化学法鉴定HUVECs。通过3种不同浓度的尼古丁(3、30、300 ng/ml)刺激HUVECs 24 h后,用流式细胞仪检测其凋亡及坏死率。结果低浓度尼古丁促进细胞凋亡最强,而随着尼古丁浓度的增加,细胞凋亡率反而逐渐降低,各组差异具有统计学意义(P<0.05);此外,随着尼古丁浓度增加,细胞坏死率也日益增多,各组差异具有统计学意义(P<0.05)。细胞坏死率与尼古丁浓度呈正相关(r=0.675)。结论尼古丁对HUVECs凋亡的影响具有浓度依赖性,细胞坏死率与尼古丁浓度呈正相关。     

人脐静脉内皮细胞的原代培养

目的建立一种能大量分离人脐静脉内皮细胞(HUVEC)且操作方便的体外培养方法。方法采用不同浓度的Ⅱ型胶原酶(0.05%,0.1%和0.2%)对HUVEC进行灌注,并分别孵育不同的时间(10min,13min,15min和18min)进行消化,观察细胞的形态、数量以及生长融合情况。结果采用0.1%的胶原酶消化10-13min为最佳条件,经光学显微镜观察培养的细胞数量较多,生长、繁殖状态良好,培养3d左右细胞可达到融合状态。结论本实验建立的胶原酶法消化HUVEC培养方法简便,细胞获得量较多且生长状态良好。     

非诺贝特对LPC诱导脐静脉内皮细胞增殖、凋亡及eNOS基因表达的影响

目的：探讨非诺贝特对LPC诱导的脐静脉内皮细胞增殖、凋亡及内皮型一氧化氮合酶（eNOS）基因表达的影响。方法：体外培养人脐静脉内皮细胞（HUVECs），根据非诺贝特不同浓度分为正常对照组、LPC组、低浓度非诺贝特（10μmol／L）组、中浓度非诺贝特（50μmol／L）组、高浓度非诺贝特（100μmol／L）组，根据非诺贝特不同干预时间分为正常对照组、LPC组、非诺贝特（50μmol／L）干预6h组、12h组、24h组、48h组进行实验。分别观测不同浓度及不同时间非诺贝特内皮细胞增殖、凋亡、NO浓度及eNOS mRNA表达的变化。结果：与正常对照组比较，LPC抑制内皮细胞增殖，促进细胞凋亡，并使HUVECs eNOS mRNA表达降低，NO合成减少。非诺贝特可干预LPC对内皮细胞的作用，使内皮细胞增殖增强，细胞凋亡减少，eNOS mRNA表达升高，NO合成增加，且其作用呈时间-效应、浓度-效应依赖关系。结论：非诺贝特可改善LPC对HUVECs的影响，使内皮细胞增殖增强，凋亡减少，eNOS mRNA表达升高，NO合成增加，从而起到抗动脉硬化作用。     

TNF-α对人脐静脉内皮细胞中NO和eNOS的影响

目的 讨论肿瘤坏死因子-α（TNF—α）对内皮细胞一氧化氮（NO）产生及内皮型一氧化氮合酶（eNOS）活性的影响。方法 以人脐静脉内皮细胞（HUVEC）为实验材料，检测与不同浓度TNF—α作用不同时间后．细胞培养上清液和细胞中NO水平的变化，以及细胞eNOS活性的改变。结果 （1）随着TNF—α浓度的升高，eNOS的活性减弱，而细胞和上清液中NO的含量增加；（2）随着干预时间的延长，eNOS的活性减弱；而细胞和上清液中NO的含量在作用24h后升高，且明显高于对照组；（3）L一单甲基精氨酸（L—NMMA）和地塞米松（DXM）均能阻断TNF-α引起的细胞和细胞上清中NO的表达增加。结论 TNF-α降低eNOS活性，却在高浓度和长时间作用后增加NO的合成，可能与激活诱导型一氧化氮合酶有关，因为NO的变化可以被L—NMMA和DXM阻断。     

前列腺素E2对大鼠巨噬细胞株NR8383 合成血管内皮生长因子促进人脐静脉血管内皮细胞成管、迁移 的影响

目的探究前列腺素E2（PGE2）对大鼠巨噬细胞株NR8383细胞合成血管内皮生长因子（VEGF）的调控作用以及对人脐静 脉内皮细胞（HUVEC）趋化成管的影响。方法分别采用0.1 nmol/L PGE2、1 nmol/L PGE2、1 nmol/L PGE2+10 nmol/L EP2受体抑 制剂AH6809+10 nmol/L EP4受体抑制剂AH23848 处理的NR8383 细胞作为各实验组,选择未经PGE2以及其特异性受体抑制 剂处理的NR8383 细胞作为对照组,采用Western blot 和qPCR方法检测各组NR8383细胞内VEGF蛋白以及mRNA的表达水 平;收集以上各处理组的细胞培养上清液分别刺激HUVECs,运用TRANSWELL 小室、Matrigel 胶细胞成管实验等实验方法, 观察PGE2调控巨噬细胞对HUVEC 迁移效应和成管能力的影响。结果随着NR8383 细胞培养液中加入PGE2浓度增高,其 VEGF蛋白表达和VEGF mRNA的表达水平显著升高（P<0.05）;0.1 nmol/L、1 nmol/L PGE2处理过的NR8383细胞培养上清液 可以显著增加HUVEC细胞形成的小管面积,形成小管面积随着PGE2处理浓度的增加而增加（P<0.05）;HUVECs的迁移运动也 随着PGE2处理浓度的升高不同程度的增强,HUVECs趋化的数量显著升高（P<0.05）;研究发现PGE2特异性的EP2/EP4 受体拮 抗剂AH6809/AH23848,可以显著抑制PGE2 增强NR8383 细胞内VEGF mRNAs 表达的作用并且也显著抑制PGE2 增强 NR8383细胞促进HUVECs成管和趋化能力的效应（P<0.05）。结论PGE2可以通过作用NR8383细胞表面对应的EP2/EP4受体 调控VEGF的合成,促进HUVEC趋化和成管效应。