肺炎克雷伯菌生物膜形成的相关因素研究

目的探讨毒力荚膜血清型、常见毒力基因、耐药基因、碳青霉烯类耐药以及生物膜培养时间等因素与肺炎克雷伯菌生物膜形成的关系。方法比较结晶紫染色定量检测法检测耐碳青霉烯肺炎克雷伯菌组(CRKP组)和肺炎克雷伯菌组(KPN组)的吸光度值(A值),并在生物膜培养的不同时间进行A值比较。PCR扩增6种常见高毒力荚膜血清型基因(K2、K5、K16、K20、K54、K57)、5种常见毒力基因[magA(K1)、rmpA、mrkD、wabG、allS]以及8种耐药基因(blaTEM、blaSHV、blaCTX-M、blaKPC、blaIMP、blaNDM、blaVIM、blaOXA-M)。结果两组肺炎克雷伯菌菌株生物膜形成能力A值为0.454～0.936,在培养12h时,两组生物膜形成能力差异无统计学意义(P0.05)。在培养18h时,CRKP组形成生物膜的能力较KPN组强(P0.05)。比较培养12h和18h两个时间段生物膜的A值,CRKP组培养18h的生物膜形成能力较12h更强(P0.05);KPN组结果相同。24份标本均未检出毒力荚膜血清型基因(K2、K5、K16、K20、K54、K57),5种常见毒力基因[magA(K1),rmpA、mrkD、allS、wabG]仅检出1例(4%)。耐药基因blaTEM占54%、blaSHV占42%、blaKPC占46%、blaIMP占4%。结论培养时间影响结晶紫染色法在临床观察生物膜形成试验中的结果,影响生物膜形成的其他因素以及深层次的原因有待进一步研究和更多实验结果的支持。     

阿司匹林对铜绿假单胞菌生物膜形成和分散的影响

目的探讨阿司匹林对铜绿假单胞菌生物膜的形成和分散的作用。方法微量肉汤稀释法检测铜绿假单胞菌浮游菌对阿司匹林的敏感性;通过微孔板构建生物膜,结合结晶紫染色探讨阿司匹林对铜绿假单胞菌生物膜的形成和分散的影响;通过微孔板结合稀释平板计数法检测阿司匹林对铜绿假单胞菌初始粘附能力的影响。结果铜绿假单胞菌标准菌株PAO1和临床菌株PA18、PA53和PA67对阿司匹林MIC值分别为5 mg/mL、2.5 mg/mL、5 mg/mL和5 mg/mL。当阿司匹林浓度为2.5 mg/mL时可显著抑制PAO1和PA18生物膜的形成(t=5.65,P0.05;t=5.06,P0.05),当其浓度分别为1.25 mg/mL和0.313 mg/mL时能显著抑制PA67和PA53生物膜的形成(t=4.10,P0.05;t=5.12,P0.05)。2.5 mg/mL阿司匹林可显著分散PAO1和PA18培养24 h形成的生物膜(t=6.45,P0.05;t=6.26,P0.05),1.25 mg/mL和0.313 mg/mL时可显著分散PA67和PA53形成的生物膜(t=7.82,P0.05;t=9.18,P0.05)。2.5 mg/mL阿司匹林能显著抑制铜绿假单胞菌的初始粘附(P0.05)。结论阿司匹林能有效抑制铜绿假单胞菌的初始粘附能力和生物膜的形成,并对已形成生物膜具有分散能力。     

临床分离白色念珠菌的生物膜形成与耐药关系研究

目的分析临床标本分离的白色念珠菌生物膜形成情况,探讨其与耐药的关系,为临床诊疗白色念殊菌感染提供可靠依据。方法用黑马鉴定板和全自动细菌鉴定仪鉴别白色念珠菌120株,电镜下观察白色念珠菌生物膜形成,用M—H琼脂培养基进行药敏试验。结果白色念珠菌生物膜的阳性率为75．0％（90／120）。白色念珠菌有生物膜者对抗真菌伊曲康唑、氟康唑、酮康唑、伏立康唑、制霉菌素和两性霉素B药物的耐药率分别为83．3％,77．8％,61．1％,84．4％,44．4％和38．9％。而无生物膜者对抗真菌药物的耐药率分别为33．3％,26．7％,20．0％,36．7％,16．7％和10．0％。白色念珠菌有生物膜者对抗真菌药物的耐药率明显高于无生物膜者,两者比较差异有统计学意义（χ^2=7．41～27．23,P均〈0．01）。有生物膜的白色念珠菌对制霉菌素和两性霉素的耐药率均明显低于其它唑类抗真菌药物（χ^2=8．21～26．37,7．49～26．87,P均〈0．01）。对酮康唑的耐药率明显低于其它唑类（χ^2=3．48～5．24,P均〈0．05）。结论白色念珠菌的生物膜形成率较高,致使其对抗真菌药物的耐药性增加,可首选两性霉素B治疗。     

临床分离金黄色葡萄球菌药物敏感性和形成生物膜的相关性分析

目的 确定临床分离的金葡菌药物敏感性和生物膜形成能力之间的关系,为生物膜耐药机制的研究提供依据.方法 采用倍比稀释法检测细菌的MIC,96孔板番红染色法检测生物膜的形成,fisher精确概率法对细菌耐药性和生物膜形成能力进行相关性分析.结果 本组27株金葡菌中,除对万古霉素和米诺环素的敏感率为100%和81.5%外,对左氧氟沙星、阿米卡星、红霉素、苯唑西林、亚胺培南、克林霉素和环丙沙星均严重耐药;27株金葡菌中有17株形成了肉眼可见的生物膜,其中以X387和X409 2株最明显.结论 金葡菌的耐药性与其形成生物膜的能力无相关性.     

高水平莫匹罗星耐药MRSA体外生物膜形成能力及相关基因检测

目的 了解高水平莫匹罗星耐药甲氧西林耐药金葡菌(MuH MRSA)体外生物膜形成能力及介导生物膜形成相关基因的分布.方法 对分离自上海和浙江省温州地区5所教学医院的803 株临床分离MRSA进行莫匹罗星纸片扩散法检测最低抑菌浓度(MIC),mupA基因PCR扩增筛选MuH MRSA,分光光度计检测MuH MRSA菌株体外生物膜的形成能力,PCR扩增生物膜形成相关基因(icaA、icaD、agr、sarA、sasG、bap和ccpA).结果 共筛选出53株MuH MRSA,其中仅5株(9.4%,5/53)具有体外形成生物膜的能力;基因检测显示,icaD和agr基因存在于全部MuH MRSA菌株中,而icaA、sarA、sasG和ccpA基因则分别存在于83.0%、86.8%、84.9%和92.5%的菌株中,仅有1株细菌携带bap基因.结论 大部分生物膜形成相关基因广泛分布于MuH MRSA菌株中,但仅agr基因可能是该类菌株体外生物膜形成能力的主要影响因素.     

医院常见致病菌生物膜形成能力的研究进展

医院细菌生物膜是指在医院诊疗环境中细菌嵌入、附着于活体或非生物表面的细胞外聚合物(ex-tracellular polymeric substance,EPS)中的有组织的细菌群落[1].细菌生物膜形成能力是指细菌在适宜的条件下通过分泌EPS形成细菌群落的能力.随着临床诊疗中静脉留置针、插管、导管、人工心瓣膜和人工关节...     

葡萄球菌生物膜的形成及影响因素

目的了解临床标本中葡萄球菌形成生物膜的状况，及葡萄糖、乙醇、氯化钠对生物膜形成的影响。方法采用刚果红、微量平板法检测生物膜形成及葡萄糖、乙醇、氯化钠对生物膜形成的影响。结果刚果红法检测金黄色葡萄球菌(金葡菌)、凝固酶阴性葡萄球菌(CNS)生物膜阳性率分别为26．2％和12．7％；生物膜半定量法，金葡菌：普通肉汤、0．25％葡萄糖、2％、4％乙醇、2％、4％氯化钠阳性率分别为14．7％、29．6％、32．7％、19．6％、13．1％和14．6％；CNS分别为13．9％、27．8％、26．5％、18．5％和21．5％。结论临床标本葡萄球菌相当一部分能产生生物膜，葡萄糖、乙醇能促进生物膜形成。     

不同耐药表型肺炎克雷伯菌生物膜形成能力与RyhB基因的关联性

目的 探讨呼吸道感染分离的不同耐药表型肺炎克雷伯菌(KP)生物膜形成能力与RyhB基因的相关性及其临床意义.方法 收集2018年10月2019年10月该院呼吸道感染分离的46株KP,检测菌株的耐药性,构建KP体外感染模型并通过结晶紫染色法定量检测KP生物膜形成能力;采用PCR法扩增RyhB基因.结果 46株KP根据耐药...     

冷处理对单增李斯特菌生物膜形成能力的影响

目的研究冷处理对不同食品来源及不同血清型的单增李斯特菌生物膜形成能力的影响,为食品中单增李斯特菌的防治提供基础信息。方法使用结晶紫染色法对单增李斯特菌食品分离株在37 ℃、4 ℃冷胁迫及4 ℃冷适应条件下生物膜形成能力进行测定,并对代表菌株的生物膜相关基因hpt、luxS及sigB进行基因序列分析及表达量差异分析。结果37 ℃条件下,1/2c血清型单增李斯特菌生物膜形成能力较强,不存在生物膜形成能力弱株。 37 ℃条件下的生物膜形成能力强组（3株）以及中组（10株）菌株中,9株菌的hpt基因发生非同义突变。 冷处理条件下4株中组菌株中,1株菌的sigB基因表达量增多,3株菌的hpt基因表达量增多。结论单增李斯特菌生物膜形成能力与血清型相关,1/2c血清型菌株在37 ℃条件下具有较强生物膜形成能力。 hpt基因突变株在37 ℃下具有较强生物膜形成能力,冷处理使得病原菌生物膜形成能力降低,但hpt及sigB基因的过量表达会增强4 ℃条件下单增李斯特菌生物膜形成能力。     

金黄色葡萄球菌生物膜形成与ica操纵子关系探讨

目的了解不同部位分离金黄色葡萄球菌在不同时间生物膜形成与ica操纵子关系。方法采用结晶紫法测定不同部位在不同时间形成生物膜的含量;采用PCR法测定菌株是否含有ica基因。结果生物膜形成能力强的菌株则ica基因大部分为阳性。结论含有ica基因的金黄色葡萄球菌则生物膜形成的能力较强。     

金黄色葡萄球菌生物膜形成与ica操纵子关系探讨

目的 了解不同部位分离金黄色葡萄球菌在不同时间生物膜形成与ica操纵子关系.方法采用结晶紫法测定不同部位在不同时间形成生物膜的含量;采用PCR法测定菌株是否含有ica基因.结果生物膜形成能力强的菌株则ica基因大部分为阳性.结论含有ica基因的金黄色葡萄球菌则生物膜形成的能力较强.     

132株MRSA的临床分布情况和耐药性分析

目的分析耐甲氧西林金黄色葡萄球菌（Methicillin—resistant Staphylococcus aureus,MRSA）的临床分布情况和耐药性分析,指导临床合理使用抗生素。方法本院2009年10月-2010年5月临床分离的耐甲氧西林金黄色葡萄球菌（MRSA）132株,利用天地人微生物分析系统进行细菌鉴定和药敏实验,分析其感染分布和耐药性。结果共分离出MRSA132株,占金黄色葡萄球菌的40.49%,主要分布在门诊（18.98%）,ICU病房（14.39%）,神经内科（13.64%）,呼吸内科（12.88%）,而感染标本以痰液（59.54%）为主;所有的分离株对万古霉素都敏感,所有菌株对苯唑西林、青霉素、美罗培南、拉氧头孢、哌拉西林/他唑巴坦都耐药,对红霉素、环丙沙星、诺氟沙星、克林霉素、四环素、庆大霉素、利福平、呋喃妥因耐药率分别为91.70%、81.10%、80.30%、78.80%、69.70%、68.90%、53.00%、19.70%。结论 MSRA的的感染率高,耐药现象严重,具有多重耐药的特点,应长期进行耐药性监测,临床应根据药敏结果合理选用抗茵药物治疗感染,首选药物为万古霉素。     

肺炎链球菌生物膜形成的调节

肺炎链球菌是社区获得性肺炎的常见病原菌,近年来,该菌耐药性不断增加,其中生物膜(biofilm)的形成与肺炎链球菌在人体定植、反复感染密切相关.生物膜形成不仅使细菌对抗生素不敏感,还使细菌逃避宿主的免疫系统.现就外界环境因素、菌株自身特点、细胞外基质及信号调节等方面对肺炎链球菌生物膜形成的影响作一综述. 一、生物膜的基本概念 生物膜概念的提出最早可以追溯到20世纪80年代.1976年Marshall提到生物膜主要指细胞外多聚纤维,可以帮助细菌黏附到物质表面.随着对生物膜研究的深入,人们不仅认识到生物膜中细菌具有不可逆地黏附到物质表面且埋藏于基质中的特征,而且还认识到膜内细菌所发生的不同于浮游菌的生长速度与基因表达的改变.     

4种方法检测表皮葡萄球菌生物膜形成能力的应用价值探讨

目的比较4种方法检测表皮葡萄球菌体外生物膜形成能力的应用价值,帮助临床选择检测生物膜形成能力的可靠方法。方法用刚果红实验、半定量粘附实验、扫描电镜实验、PCR扩增icaA分别检测临床分离的45株表皮葡萄球菌生物膜的形成能力,经行×列表χ2检验比较阳性检出率,并以扫描电镜检测法为＂金标准＂计算其他3种方法的灵敏度和特异性。结果 4种方法检出表皮葡萄球菌生物膜形成的阳性率分别为31.1%、40.0%、40.0%、28.9%,无统计学差异（χ2=1.80,P〉0.05）。刚果红实验、半定量粘附实验、PCR扩增icaA检测生物膜形成能力的灵敏度分别为77.8%、100%、77.2%,而特异性均为100%。结论 4种方法均可用于体外生物膜检测。     

临床分离表皮葡萄球菌相关基因与生物膜表型的关系

目的：分析临床分离表皮葡萄球菌 icaA、aap 、atlE、sarA 基因与生物膜表型的关系。方法收集临床分离的表皮葡萄球菌78株,采用 PCR 法扩增 icaA、aap 、atlE、sarA 基因,组织细胞培养板黏附法检测生物膜表型,χ2检验分析上述基因与生物膜表型的关系,Wilcoxon 符号秩检验分别分析 icaA ＋菌及 icaA -菌在胰酶大豆肉汤（TSB）与TSB＋3％氯化钠中生物膜表型光密度（OD）值的差异。结果78株表皮葡萄球菌 icaA、aap 、atlE、sarA 基因阳性率分别为24．4％（19/78）、79．5％（62/78）、73．8％（57/78）、82．1％（64/78）。产生物膜株阳性率为51．3％（40/78）,其中高产生物膜16株,均携带 icaA 基因;弱产生物膜24株。经统计学分析,上述基因与生物膜表型之间有相关性,icaA 基因与高产生物膜表型有相关性。icaA ＋菌及 icaA -菌在 TSB 与TSB＋3％氯化钠中生物膜 OD 值的差异有统计学意义（P ＜0．05）。结论表皮葡萄球菌生物膜表型涉及多种因子参与,而 icaA 基因有助于高产生物膜表型形成。环境因素也可影响表皮葡萄球菌生物膜表型。     

金黄色葡萄球菌生物膜形成能力及其耐甲氧西林相关性

目的研究金黄色葡萄球菌临床分离菌株耐药性及其生物膜形成能力。方法采用药敏试验和人工生物膜培养方法,观察金黄色葡萄球菌耐药性及其生物膜形成能力。结果共检测201株临床分离的金黄色葡萄球菌,耐甲氧西林金黄色葡萄球菌(MRSA)为138株,占68.66%;甲氧西林敏感型金葡菌(MSSA)为52株,占25.87%。临床分离的金黄色葡萄球菌培养48 h后生物膜经结晶紫染色后的吸光度值MRSA与MSSA在生物膜形成能力方面无统计学差异。结论该医院临床分离的金黄色葡萄球菌中MRSA比例较高;可用结晶紫染色检测吸光度值的方法来测定生物膜形成能力。需进一步通过生物膜筛选法研究耐药性与生物膜形成能力之间的关系。     

单增李斯特菌1/2c血清型菌株生物膜形成能力的研究

目的 比较在不同压力条件下,单增李斯特菌1/2c血清型与其他血清型菌株生物膜形成能力,以了解单增李斯特菌1/2c血清型菌株的环境适应能力。方法 采用96孔培养板结晶紫染色法,检测不同温度、不同培养基、不同pH值条件下,单增李斯特菌1/2c血清型与其他血清型菌株的生物膜形成能力。结果 在25 ℃、TSB、10%TSB和pH 7~8条件下,1/2c血清型菌株生物膜形成能力强于其他血清型菌株(P0.05)。结论 在室温、富营养/低营养条件、中性略偏碱性环境中单增李斯特菌1/2c血清型菌株的生物膜形成能力强于其他血清型菌株,提示可能是食源性单增李斯特菌1/2 c血清型菌株分离率较高的原因之一,为该菌的预防控制措施提供了参考依据。     

头孢曲松对表皮葡萄球菌生物膜形成的抑制作用

目的观察头孢曲松等4种抗生素抑制表皮葡萄球菌生物膜的作用,探讨抗生素防治葡萄球菌感染的作用环节。方法用半定量粘附实验筛选出形成生物膜的表皮葡萄球菌15株,观察不同浓度的药物对生物膜形成的抑制作用。结果发现头孢曲松能抑制生物膜形成,而头孢他啶、红霉素无抑制葡萄球菌生物膜的作用,万古霉素对葡萄球菌有很强的杀菌作用,但无抑制生物膜的作用。结论头孢曲松能抑制葡萄球菌生物膜形成,可利用头孢曲松抑制生物膜的作用,通过阻止粘附来阻断葡萄球菌引起的粘附相关感染,达到预防感染的目的。     

头孢曲松对表皮葡萄球菌生物膜形成的抑制作用

目的观察头孢曲松等4种抗生素抑制表皮葡萄球菌生物膜的作用,探讨抗生素防治葡萄球菌感染的作用环节。方法用半定量粘附实验筛选出形成生物膜的表皮葡萄球菌15株,观察不同浓度的药物对生物膜形成的抑制作用。结果发现头孢曲松能抑制生物膜形成,而头孢他啶、红霉素无抑制葡萄球菌生物膜的作用,万古霉素对葡萄球菌有很强的杀菌作用,但无抑制生物膜的作用。结论头孢曲松能抑制葡萄球菌生物膜形成,可利用头孢曲松抑制生物膜的作用,通过阻止粘附来阻断葡萄球菌引起的粘附相关感染,达到预防感染的目的。     

MRSA的发生及对策

抗甲氧苯青霉素金黄色葡萄球菌（ＭＲＳＡ）在世界各地的蔓延已成为全球性问题。它的传播与大量使用广谱抗生素和控制感染措施不当及洗手方法不正确有很大关系。重点阐述了ＭＲＳＡ的发生原因及预防对策。