实验性大鼠液压冲击脑损伤神经功能评分与脑水肿、水通道蛋白4表达的关系

目的 观察液压冲击脑损伤大鼠神经功能评分,及其与脑水肿和水通道蛋白4(AQP4)高表达的关系.方法 制作SD大鼠液压冲击脑损伤模型并对动物进行神经功能评分,应用干湿重法测定脑组织含水量,免疫组织化学染色方法和免疫蛋白印迹检测AQP4表达变化.结果 TBI 组动物神经功能评分12h出现下降[(11.17±1.32)分],24h下降至最低值[(10.17±0.75)分],3d逐渐升高[(10.66±1.37)分];脑含水量12h明显增加[(80.27±1.47)％],24h达到最高[(82.19±0.97)％],持续至3d开始下降[(81.74±1.69)％];Western Blot结果显示AQP4表达于12h明显增高(OD:0.65±0.05),24h达到最高值(OD:0.72±0.08),3d下降(OD:0.56±0.07),7d(OD:0.49±0.09)仍高于对照组(OD:0.15±0.05);免疫组化显示AQP4表达趋势与Western Blot结果一致.线性相关分析发现神经功能评分与脑含水量之间存在负相关性(r=-0.615,P＜0.01);神经功能评分与AQP4蛋白表达之间也呈负相关(r=-0.605,P＜0.05).结论 液压冲击伤大鼠的神经功能评分降低,其与脑水肿和AQP4表达呈负相关,可能与AQP4通过介导脑水肿的发生、间接参与神经功能损伤有关.     

大鼠液压冲击脑损伤炎性细胞因子表达与神经功能评分的关系

目的观察大鼠液压冲击脑损伤炎性细胞因子白细胞介素一1β（IL一1β）、白细胞介素一6（IL一6）、肿瘤坏死因子一仪（TNF—Oα）、细胞问黏附分子一1（ICAM一1）表达变化,探讨其与神经功能评分的关系。方法成年雄性sD大鼠48只,制作液压冲击颅脑损伤模型,术后6h、12h、24h、3d、7d对动物进行神经功能评分,并用干湿重法、免疫组化法分别测定水肿脑组织含水量及其IL一1B、IL一6、TNF—Or．、ICAM-1表达。结果神经功能评分6h出现下降[（3．78±0．84）分],24h下降至最低值[（2．65±0．32）分],3d逐渐升高[（4．75±0．71）分];免疫组化显示水肿脑组织IL一6、IL一1β、TNF—α、ICAM一1的表达均6h开始增高,24h至3d达到高峰,7d后降低。线性相关性分析发现IL一6、IL一1β、TNF—α．、ICAM一1表达与神经功能评分呈负相关关系（相关系数分别为r：-0．912,r=-0．892,／r=一0．794,r=一0．887,P〈0．05）。结论大鼠颅脑液压冲击伤IL．1B、IL-6、TNF一仪、ICAM一1均出现高表达,与神经功能评分呈负相关,可能与炎l生因子造成的继发l生脑损伤有关。     

缺血后适应对大鼠缺血再灌注损伤时Bcl-2及GAP-43表达变化的影响

目的 观察缺血后适应对大鼠缺血再灌注损伤时Bcl-2和GAP-43表达变化的影响.方法 50只成年健康雄性SD大鼠随机分为缺血2h再灌注组（n=25）、缺血4.5 h后适应组（n=25）.线栓法制备大脑中动脉闭塞模型（MCAO）,Lumila Belayev12分、Zea Longa5分和悬吊实验术后24 h进行神经功能评分,TTC法染色后测量脑梗死体积,免疫组织化学方法和Western Blot检测Bcl-2及GAP-43蛋白.结果 与缺血2h再灌注组相比,缺血4.5 h后适应组神经功能评分和脑梗死体积差异没有统计学意义（P＞0.05）.缺血4.5 h后适应组Nogo-A表达降低,GAP-43表达增加,差异有统计学意义（P＜0.05）.结论 缺血后适应能够改善神经功能损伤,减小脑梗死体积,增加GAP-43的表示以及减少Nogo-A的表达,对缺血的脑组织起保护作用.     

头孢曲松钠对大鼠液压脑损伤后TLR4介导的神经炎症反应的作用

目的 观察头孢曲松钠(Cef)治疗对大鼠液压冲击脑损伤后TLR4介导的神经炎症反应的影响.方法 选用雄性SD大鼠72只,随机分为假手术组、脑损伤组、Cef治疗组,每组24只.采用液压冲击法制备SD大鼠脑损伤模型,Cef治疗组于致伤前5d注射Cef(200 mg/kg),连续5d.通过干湿比重法检测各组大鼠脑组织含水量,ELISA法检测大鼠脑皮层TNF-α、IL-1β水平,免疫组织化学及Western blot法检测脑皮层TLR4的蛋白表达情况.结果 与脑损伤组比较,Cef治疗组明显减轻液压冲击性脑损伤的脑组织含水量(P＜0.05),降低大鼠脑皮质组织中炎性因子TNF-α、IL-1β水平(P＜0.05),明显下调TLR4蛋白的表达量(P＜0.05).结论 Cef可以通过抑制TLR4介导的神经炎症反应,下调炎症因子的表达,改善脑水肿情况.     

颅脑损伤后脑组织中水通道蛋白4表达的变化

目的研究颅脑损伤后水通道蛋白4（AQP-4）在脑组织中表达的变化及其临床意义。方法对27例颅脑损伤患者行开颅手术,将术中取得的挫伤水肿脑组织（损伤组）和颞极减压获得的相对正常脑组织（对照组）进行AQP-4的免疫组化和re-al- time PCR检测。结果损伤组各时点挫伤水肿脑组织AQP-4的表达量均明显高于对照组（均P＜0.05）;损伤24h后周围水肿脑组织中的AQP-4表达量显著升高。结论颅脑损伤后脑水肿的形成和发展与AQP-4的异常表达密切相关。     

重型脑损伤后AQP4表达与脑水肿的关系

目的观察重型脑损伤后水通道蛋白-4（AQP4）表达变化，及其与脑损伤后脑水肿之间的关系。方法健康成年Wistar大鼠，随机分成创伤性脑损伤（TBI）组和各假手术（SO）组。自由落体硬膜外撞击方法致重度脑创伤模型。于伤后4h、8h、12h、1d、3d、5d、7d取出大鼠脑组织，免疫组化（IHC）和原位杂交（ISH）检测AQP4的表达变化，干湿重法计算脑组织含水量。结果IHC和ISH显示，脑损伤后AQP4在脑组织中的表达上调，1d达高峰，持续至3d后下降，7d接近SO组水平。与SO组相比，除7d亚组外，TBI其余各亚组中AQP4表达水平均明显增高（P〈0、05）。脑损伤后4h脑组织含水量即比SO组增加（P〈0、05），随时间延长，脑组织含水量亦逐渐增加，伤后1-3d达高峰。AQP4表达和脑组织含水量呈正相关，r=0．978，P〈0，01。结论脑损伤后，随着脑水肿加重，AQP4表达上调。提示脑损伤后AQP4的表达变化与脑水肿的形成密切相关，AQP4在损伤后脑水肿的形成中发挥着重要作用。     

胰岛素样生长因子-1对局灶性脑缺血大鼠神经功能评分及碱性成纤维生长因子表达的影响

目的 探讨胰岛素样生长因子-Ⅰ（IGF-1）对脑缺血大鼠神经功能及碱性成纤维生长因子（bFGF）蛋白和bFGF mRNA表达的影响.方法 72只SD大鼠随机分为假手术组、脑缺血组和IGF-1治疗组,制备脑缺血模型,分别于脑缺血后12h、24 h、3d、7d采用改良mNSS评分量表评价大鼠的运动、感觉、平衡功能及反射等神经功能,采用免疫组织化学方法检测各组大鼠脑缺血皮层bFGF蛋白表达的变化,采用RT-PCR方法检测各组大鼠脑缺血皮层bFGF mRNA表达的变化.结果 在12h、24 h、3d、7d各时间点,IGF-1治疗组的mNSS评分值[（8.67±1.21）分,（7.50±1.52）分,（4.33±1.03）分,（3.67±1.37）分]均低于脑缺血组[（11.0±1.26）分,（9.83±1.33）分,（7.83±1.17）分,（7.17±1.72）分]（P＜0.05）.IGF-1治疗组各时间点bFGF蛋白表达均较脑缺血组升高（P＜0.05）,尤其是脑缺血后12h有统计学意义（P＜0.01）.IGF-1治疗组各时间点bFGF mRNA表达均较脑缺血组高（P＜0.05）,脑缺血后24 h有统计学意义（P＜0.01）.结论 IGF-1可促进脑缺血大鼠的神经功能恢复,可能与调控bFGF蛋白和bFGF mRNA表达有关.     

TLR4在实验性脑出血小鼠脑组织表达变化及其与神经功能缺损的相关性

目的 探讨Toll样受体4(Toll-like receptor4,TLR4)在脑出血小鼠血肿周围脑组织中的表达变化及其与神经功能缺损的相关性.方法 采用自体尾动脉血注入法复制脑出血小鼠模型,将30只雄性C57BL小鼠按照区组随机分组法分为假手术组、模型组,造模完毕后采取同样随机分组法根据不同时间点(术后6、24、48、72 h,5 d)分为5个亚组,每组3只.各组于不同时间点取材,采用荧光定量多聚酶链反应法(real-time PCR)检测小鼠脑组织TLR4 mRNA的表达,同时测定神经功能缺损评分,并分析二者间的相关性.结果 两组各时间点TLR4 mRNA均表达;与假手术组相比模型组TLR4 mRNA表达显著升高(P<0.05),且在72 h达高峰.模型组相同时间点TLR4 mRNA的表达与假手术组比较均明显增高,差异有统计学意义(P<0.05).脑出血后神经功能缺损明显加重(P<0.05),以48～72 h为著.相关分析显示,TLR4的表达与神经功能缺损呈直线相关(r2=0.973,P<0.05).结论 结果提示TLR4可能在脑出血后脑损伤中具有重要作用.     

骨髓间充质干细胞移植对缺血再灌注大鼠脑神经细胞凋亡及Bcl-2、Bax蛋白表达的影响

目的:探讨骨髓间充质干细胞(MSCs)移植对缺血再灌注大鼠脑组织神经细胞凋亡及Bcl-2、Bax蛋白表达的影响.方法:SD大鼠84只,随机分为假手术组(n=12)、模型组(n=24)、磷酸盐缓冲液(PBS)组(n=24)和MSCs组(n=24).模型组、PBS组和MSCs组采用线栓法建立大鼠大脑中动脉缺血模型,假手术组除不插尼龙线外,其余步骤相同.PBS组和MSCs组分别于建模成功后24 h分别经颈动脉注入等体积的PBS液和已制备好的同种异体MSCs悬液.每组于脑缺血2 h再灌注2 d、4 d、6 d、8 d时行神经功能缺损评分及脑灌注固定取材,采用免疫组化染色及TUNEL检测脑组织Bcl-2、Bax蛋白的表达及凋亡细胞数.结果:假手术组在各时间点神经功能评分为0分,无神经功能缺损,未见细胞凋亡,未见Bcl-2和Bax表达.与模型组和PBS组比较,脑缺血2 h再灌注4 d开始,MSCs组神经细胞凋亡数、Bax蛋白表达和神经功能缺损评分较低,Bcl-2蛋白表达较高,差异有统计学意义(P＜0.05).结论:骨髓间充质干细胞移植能改善脑损伤大鼠的功能;上调Bcl-2蛋白表达,下调Bax蛋白表达,减少神经细胞凋亡,可能是其主要机制之一.     

不同冲击压力脑损伤大鼠神经功能评分差异性与病理学特征的关系

目的 观察不同冲击压力液压冲击脑损伤大鼠神经功能评分差异性,探讨与病理学变化的关系及其临床意义.方法 采用0.1,0.2,0.3 NPa三种不同打击压力,制作不同冲击压力大鼠液压冲击脑损伤模型,观察生命体征变化、比较死亡率,观察造模后1h、6h、12h、24h、3d、7d时神经功能评分和脑水含量,比较其组织学演变趋势.结果 应用0.1MPa冲击,动物出现一过性呼吸减弱,死亡率2.08％,神经功能评分最低降至(7.17±0.75)分,但恢复较快,脑含水量最高达(81.12±0.03)％,脑损伤仅累及冲击伤处脑皮层的浅层;应用0.2MPa冲击,动物呼吸暂停时间(10.88±2.69)s,死亡率4.17％,神经功能评分最低降至(4.83±0.75)分,脑水含量最高达(82.74±1.11)％,脑损伤深达海马结构;应用0.3MPa冲击,大鼠呼吸暂停时间(20.60±3.02)s,死亡率16.67％,神经功能评分最低降至(2.67±0.52)分,而且恢复较慢,脑水含量最高达(83.89±0.04)％,脑损伤深达海马下结构、脑干.结论 轻、中、重三种不同冲击压力液压脑损伤大鼠神经功能评分依次降低,与其病理学的严重程度呈正相关.     

控制性脑皮质撞击致不同损伤程度颅脑创伤大鼠模型的建立

目的 应用控制性脑皮质撞击仪（CCI）建立不同损伤程度的颅脑创伤（TBI）大鼠模型,为探索TBI病理生理进程提供实验依据.方法 40只雄性Wistar大鼠按数字表随机分为4组（3组实验组、1组假手术组）,每组10只.应用电子控制性皮质撞击仪（eCCI-6.3）,设定不同打击参数,对大鼠顶叶大脑皮质区进行精确撞击.其中,实验组打击速率分别为4 m/s、5m/s、6m/s,打击时间均为200 ms,打击深度均为2 mm.假手术组仅开骨窗不行撞击.致伤24 h后采用神经功能缺陷评分（NSS）观察大鼠行为学改变,应用多普勒流量计测定大鼠脑损伤周围区域局部脑血流（rCBF）.致伤48 h后处死大鼠,取脑组织行甲苯胺蓝染色观察脑组织缺损程度,HE染色评估脑组织病理学改变,透射电镜观察神经细胞超微结构.结果 大鼠脑损伤程度与打击强度相关,打击速率4m/s模拟轻度TBI、5m/s模拟中度TBI、6m/s模拟重度TBI.与假手术组比较,TBI各组大鼠神经功能受损,局部脑血流量降低（均P＜0.01）,脑组织神经元皱缩、细胞周围空泡、线粒体结构异常,而且损伤程度随打击速率增强而递增,组间差异有统计学意义（P＜0.05）.结论 应用eCCI脑皮质撞击仪成功建立TBI大鼠模型,通过调整打击速率给予轻度、中度和重度TBI分级,为进一步研究TBI病理生理机制提供了一种精确有效的TBI动物模型制作方法.     

大鼠创伤性脑损伤后损伤区周围脑组织脑脂结合蛋白的表达变化

目的观察大鼠创伤性脑损伤（TBI）后不同时间点脑损伤区周围脑组织脑脂结合蛋白（BLBP）的表达变化。方法采用大鼠颅脑液压损伤模型,在伤后1、3、7、14 d用Western blot检测损伤区周围脑组织BLBP的表达,用免疫荧光双标法检测BLBP和波形蛋白。结果 TBI后1 d,BLBP含量显著下降,后逐渐上升,至伤后7 d达到高峰,伤后14 d又急剧下降（均P〈0.01）。BLBP和波形蛋白双标阳性细胞主要分布在损伤区周围皮质及损伤侧胼胝体,损伤侧皮质阳性细胞大多为反应性星形胶质细胞形态;损伤侧胼胝体阳性细胞基本呈放射状胶质细胞（RGCs）形态。结论 TBI后损伤区周围脑组织RGCs样细胞可能与皮质神经再生和神经功能恢复有关。     

孕酮通过NF-κB调控脑损伤后大鼠海马神经元COX-2的表达

目的：研究NF-κB对脑损伤大鼠海马神经元环氧合酶-2（COX-2）的表达调控作用,探讨孕酮（PROG）对脑损伤（TBI）后大鼠海马神经元保护作用及其可能机制.方法：雄性SD大鼠45只随机分为假手术组、损伤组和PROG治疗组,按照改良的Feeney自由落体损伤装置制作大鼠脑损伤模型,用Nissl染色法、免疫组织化学法及免疫蛋白印记法,观察大鼠海马CA1区NF-κB,COX-2以及前列腺素E2（PGE2）的表达变化;并观察孕酮对上述指标的影响.结果：与假手术组大鼠相比,损伤组大鼠海马CA1区NF-κB（24.0±2.5）,COX-2（35.9±2.7）,PGE2（34.4±2.9）阳性神经元的数量较假手术组NF-κB（1.9±0.9）,COX-2（1.5±0.7）,PGE2（1.7±0.7）显著增加（P〈0.05）;PROG治疗组与损伤组比较,海马CA1区NF-κB（14.2±1.8）,COX-2（16.6±2.7）,PGE2（16.5±2.0）阳性神经元的数量明显减少（P〈0.05）.结论：NF-κB对脑损伤后海马神经元COX-2表达起调控作用;PROG可能通过影响NF-κB而调控COX-2的表达,对大鼠海马神经元起保护作用．     

右美托咪定抑制大鼠创伤性脑损伤后神经细胞凋亡

  目的  探讨右美托咪定（DEX）对创伤性脑损伤（TBI）的神经保护作用是否与抑制神经细胞凋亡有关，是否涉及SIRT1信号通路。  方法  将SD大鼠随机分为Sham组、TBI + NS组、TBI + DEX组和TBI + DEX + EX527组。采用干/湿重法评估脑创伤后脑组织含水量；神经功能缺损评分检查神经功能受损情况；Western blot法检测大鼠皮质Bcl-2和Bax蛋白的表达水平。  结果  实验结果显示DEX干预后可减少脑创伤后促凋亡的调控蛋白Bax表达，差异有统计学意义（P < 0.05），增加抑制凋亡的调控蛋白Bcl-2表达，差异有统计学意义（P < 0.05），减轻脑水肿，差异有统计学意义（P < 0.05）和改善神经功能，差异有统计学意义（P < 0.05），上述观测指标的变化可被SIRT1抑制剂EX527逆转。  结论  提示DEX通过抑制神经细胞凋亡而减轻脑创伤后的继发性损害，该神经保护作用与SIRT1信号通路之间存在一定相关性。     

小剂量地塞米松对创伤性脑水肿AQP4的影响

目的通过观察地塞米松对脑创伤模型大鼠脑组织中水通道蛋白4(AQP4)的影响,探讨地塞米松减轻脑水肿的机制,旨在为临床脑水肿的治疗提供新思路。方法采用改进Feeney’s自由落体硬膜外撞击方法致颅脑损伤模型。随机分为假手术组(SO),创伤性脑损伤(Traumatic Brain Injury,TBI)组和地塞米松干预组(Dex)。Dex组于TBI后立即腹腔注射地塞米松(1mg·kg-1),2次/d。TBI组和Dex组再按时间顺序分为6h、12h、24h,3d和5d共五个时相组,观察各时间点大鼠脑组织含水量及AQP4mRNA和蛋白的表达。结果 TBI脑组织含水量从术后6h开始上升(79.49±0.45)%,依次增高,到24h达到最大值(81.61±0.68)%;3d时为(80.88±0.93)%仍维持在较高水平,于伤后5d(80.08±0.85)%有所下降。TBI组AQP4mRNA表达变化与脑含水量和AQP4蛋白表达趋势一致;TBI组AQP4表达从伤后6h时(0.18±0.01)开始升高,到24 h达到最大值(0.18±0.01),并持续至3d时为(0.20±0.01),5d时为(0.19±0.01),仍较高;虽然TBI组脑组织含水量及AQP4蛋白和mRNA水平表达变化情况与DEX组趋势一致,但在同一时间点上,DEX组脑组织肿胀及AQP4蛋白和mRNA水平表达程度明显低于TBI组。两组在各个时间点比较差异有统计学意义。结论小剂量地塞米松可能通过下调脑组织AQP4mRNA和蛋白的表达减轻脑水肿。     

PDTC对重度颅脑损伤后NF-κB表达的影响

目的：观察核转录因子-κB（NF-κB）在大鼠创伤性脑损伤（TBI）后脑组织损伤区的表达变化，同时探讨吡咯烷二硫代氨基甲酸酯（PDTC）对其表达的影响。方法：参照改良Feeney自由落体脑损伤装置制备大鼠重度脑损伤模型，将72只大鼠随机分为TBI组、PDTC干预组和假手术对照组，每组分别于伤后2h、12h、24h、48h断头，取出损伤区脑组织，检测各组的NF-κBmRNA表达水平。结果：TBI组NF-κB于伤后2h表达增强，12h表达明显增加，24h达到高峰，48h略有下降，与假手术对照组相比差异显著（P〈0．05）。PDTC干预组与TBI组相比，NF—κBmRNA表达明显下降，差异显著（P〈0．05）。结论：大鼠重度TBI后，NF—κB的活化及过度表达参与了继发性脑损伤过程，PDTC可以通过抑制NF—κB的表达，对TBI起到保护作用。     

兔颅脑创伤后血清抗脑抗体变化及脑组织谷氨酸的表达

目的：研究家兔颅脑创伤后抗脑抗体的变化及脑组织谷氨酸的表达。方法：16只成年新西兰白兔分为两组,颅脑创伤组（n=8）、假手术对照组（n=8）,建立兔脑单侧重型液压冲击创伤模型,收集所有家兔创伤前2h及创伤后3、7、14、21、28、35、42、49d各时间点血清标本。用ELISA法检测血清抗脑抗体的浓度：用免疫组化方法检测脑组织谷氨酸（Glu）的表达。结果：在予以单侧液压打击后,颅脑创伤组家兔血清中抗脑抗体浓度增高并有峰值出现,假手术对照组抗脑抗体浓度变化则不明显,两组比较差异有统计学意义（P〈0．05）;颅脑创伤组家兔脑组织Glu的表达较假手术组增高,两组比较差异有统计学意义（P〈0．05）。结论：颅脑创伤后,血清中抗脑抗体与伤前相比有明显升高;颅脑创伤后脑组织Glu的表达增高,提示抗脑抗体可能是颅脑创伤后出现癫痫的原因之一。     

促红细胞生成素对心肺复苏后大鼠神经功能及脑细胞凋亡的影响

目的 探讨促红细胞生成素（EPO）对心肺复苏后大鼠神经功能及脑细胞凋亡的影响.方法 将成年雄性SD大鼠随机分为对照组和EPO组,每组24只,采用窒息法制备心肺复苏模型,神经功能缺损评分（NDS）法评价复苏后12 h、24 h大鼠的神经功能,于复苏后0h、12 h、24 h用RT-PCR法检测大脑皮层组织凋亡诱导因子（AIF）、caspas-3 mRNA的水平.结果 EPO组心肺复苏后12 h、24h NDS评分分别为（70.50±4.04）分和（65.88±2.64）分,与对照组[12 h：（60.00±3.38）分;24h：（54.50±2.56）分]比较,差异有统计学意义（P＜0.01）;EPO组AIF基因mRNA表达水平在复苏后12h和24 h分别为（1.31±0.26）、（1.87±0.17）,与对照组[12h：（1.88±0.18）;24h：（2.71±0.24）]比较显著降低（均P＜0.01）;EPO组caspase-3基因的mRNA表达水平在复苏后12h和24 h分别为（1.49±0.15）、（1.56±0.10）,与对照组[12 h：（1.68±0.10）;24h：（1.84±0.16）]比较显著降低（均P＜0.01）;结论 EPO可降低AIF、caspase-3 mRNA的转录,减少脑缺血和再灌注损伤导致的皮层神经细胞凋亡,改善心肺复苏后大鼠的脑功能.     

急性乙醇中毒对大鼠颅脑损伤后神经系统的影响及其氧自由基损伤机制的研究

目的 探讨急性乙醇中毒对大鼠颅脑创伤后神经系统的影响及其氧自由基损伤机制.方法 Feeney法制作大鼠重型颅脑损伤模型,乙醇灌胃法建立急性乙醇中毒模型.48只雄性SD大鼠随机分为单纯急性乙醇中毒组（A组）、单纯颅脑创伤组（B组）、急性乙醇中毒合并颅脑创伤组（C组）和假手术组（D组）各12只.在伤后1、6、24、72h进行行为学评分;在伤后72h,各组随机取其中6只在麻醉下经心脏灌注4%多聚甲醛固定脑组织,TUNEL法测凋亡细胞数;其余6只快速断头取水肿带脑组织,测定脑组织内SOD活性及MDA含量.结果 C组大鼠的行为学评分最低,恢复最慢;其脑组织内MDA含量最高,SOD含量最低;其神经细胞凋亡最多.结论 急性乙醇中毒可加重颅脑创伤后氧自由基的损害,增加神经细胞的凋亡,影响神经功能的恢复.