脑益康对阿尔茨海默病大鼠tau蛋白过度磷酸化及其相关酶类表达的影响

目的探讨脑益康对阿尔茨海默病（AD）模型大鼠海马神经元tau蛋白过度磷酸化及其相关酶类表达的影响。方法采用β-淀粉样蛋白1-40（Aβ1-40）右侧海马注射制备AD大鼠模型,免疫组化法和Western blot法检测大鼠海马神经元tau蛋白在Ser404位点的磷酸化水平、蛋白磷酸酯酶2A（PP-2A）的表达情况,ELISA法检测糖原合酶激酶-3β（GSK-3β）蛋白的水平。结果AD模型组大鼠海马组织p-tau（Ser404）、GSK-3β表达增加,PP-2A表达减少,与假手术组的差异有高度统计学意义（P〈0.01）;脑益康治疗组大鼠的p-tau（Ser404）、GSK-3β表达显著减少,PP-2A表达显著增加,差异均有高度统计学意义（均P〈0.01）。结论脑益康可通过增加PP-2A的表达和抑制GSK-3β的表达减轻AD模型大鼠tau蛋白的过度磷酸化。     

马钱苷通过抑制蛋白磷酸酶2A催化亚基C磷酸化降低tau蛋白过度磷酸化

目的 探讨马钱苷对tau蛋白过度磷酸化的影响及其作用机制。方法 马钱苷（500、1 000 μmol/L）与人神经母细胞瘤细胞株（SK-N-SH细胞）预孵育24 h,之后加入PI3K抑制剂Wortmannin（WT）及PKA抑制剂GF-109203X（GFX）与SK-N-SH细胞孵育3 h,采用Western blotting方法观察马钱苷对tau蛋白在Thr205、Thr217、PHF-1位点的磷酸化,GSK-3β-Ser9、GSK-3β、PP2A催化亚基C（protein phosphatase 2A catalytic subunit C,PP2Ac）磷酸化/甲基化及PP2Ac的表达。结果 WT/GFX明显抑制p-GSK-3β-ser9的表达,引起GSK-3β活性增高,从而导致tau蛋白Thr205、Thr217、PHF-1位点高度磷酸化。马钱苷能够明显抑制模型细胞tau蛋白在Thr205、Thr217、PHF-1位点的过度磷酸化,但是不能增高p-GSK-3β-ser9的表达,提示马钱苷抑制tau蛋白磷酸化的作用不是通过影响GSK-3β通路实现的。但是实验显示马钱苷能够抑制PP2A催化亚基C Tyr307位点的磷酸化,但对Leu309位点甲基化无影响。结论 马钱苷能够抑制tau蛋白过度磷酸化,机制可能与其抑制PP2A催化亚基C Tyr307位点的磷酸化,提高PP2A活性有关,与GSK-3β通路无关。     

人参皂苷Rb1、Re对Aβ25-35诱导SK-N-SH细胞损伤的保护作用

目的观察人参皂苷Rb1和Re对Aβ25-35诱导损伤SK-N-SH细胞的保护作用进而研究其内在机制。方法用Aβ25-35处理人神经母细胞瘤细胞(SK-N-SH细胞),模拟阿尔茨海默病的神经元损伤,并以适当浓度人参皂苷Rb1或Re处理。采用MTT法测定细胞存活率,荧光探针法检测细胞内ROS水平变化,Western blot法检测tau蛋白磷酸化水平及活性GSK-3β蛋白表达。结果培养基中添加Aβ25-35后SK-N-SH细胞存活率明显下降,而人参皂苷Rb1和Re均能显著提高损伤细胞的存活率,降低细胞内ROS水平,降低活性GSK-3β的表达,造成tau蛋白396位点的磷酸化程度下降,缓解tau蛋白的过度磷酸化。结论人参皂苷Rb1和Re对Aβ25-35诱导损伤的SK-N-SH细胞具有一定的保护作用。     

冈田酸所致微管相关蛋白tau Ser396位点过度磷酸化抑制细胞凋亡

目的 探讨磷酸酯酶活性降低致tau过度磷酸化与细胞凋亡的关系.方法 稳定表达人tau eDNA的鼠成神经瘤细胞(N2a/tau)分3组.对照组不处理;十字孢碱(staurosporine,STP,凋亡诱导剂)处理6 h为STP组;用磷酸酯酶PP-2A的抑制剂冈田酸(okadaic acid,OA)处理4 h,再用STP处理6 h为OA+STP组.流式细胞仪检测凋亡率,免疫印迹检测Ser396位点磷酸化tau(Ser396 p-tau)和总tau的表达,免疫荧光双标检测Ser396 p-tau的阳性产物与活化的半胱氨酸蛋白酶(Cleaved Caspase-3)阳性产物的共定位关系.结果 ①凋亡率:对照组为(4.37±1.47)%,STP组为(19.84±3.25)%,OA+STP组为(12.12±2.46)%;②免疫印迹:OA+STP组Ser396 p-tau的表达明显高于另两组,总tau表达组间无差异;③免疫荧光双标:进一步印证免疫印迹结果,且3组均显示活化的Caspase-3和Ser396 p-tau阳性产物大多不共定位于相同细胞.结论 PP-2A活性降低所致tau Ser396位点的过度磷酸化可抑制细胞凋亡,结合前期的实验进一步明确特殊位点过度磷酸化的tau可抑制细胞进入快速的凋亡程序.     

天麻素对阿尔茨海默病小鼠的脑内氧化应激及tau蛋白磷酸化的影响

目的研究天麻素对AD模型小鼠脑内氧化应激及tau蛋白磷酸化水平的影响。方法实验分为正常对照组、AD模型组(tau转基因小鼠)和天麻素治疗组,治疗组小鼠选取tau转基因小鼠,隔日给予天麻素[5 mg/(kg·d)]灌胃处理3个月,对照组和模型组小鼠(tau转基因小鼠)则均给予生理盐水灌胃处理。通过分子生物学及形态学相关技术检测各组小鼠脑内p-tau202磷酸化水平及CHAT的表达;并考察氧化应激相关指标的变化。结果 Western blot及免疫荧光结果显示,模型组小鼠脑内p-tau202的表达高于对照组小鼠,而天麻素治疗组小鼠脑内p-tau202的表达水平较模型组小鼠降低;氧化应激结果显示,天麻素干预处理后,小鼠脑内的MDA含量降低,SOD活性明显升高;Western blot结果显示,与模型组小鼠相比较,天麻素治疗组小鼠脑内CHAT表达水平降低。结论天麻素能够通过减少氧化应激进而降低AD模型小鼠脑内tau蛋白的磷酸化水平,最终起到对神经元的保护作用。     

补体C3/C3aR 在冈田酸诱导的SH-SY5Y 细胞tau 蛋白过度磷酸化中的作用及机制研究

目的：tau 蛋白过度磷酸化与AD 的发病机制直接相关,本实验通过冈田酸（okadaic acid,OA）诱导SH-SY5Y 细胞tau 蛋白过度磷酸化实验模型,研究补体C3/C3aR 在 OA 致SH-SY5Y 细胞 tau 蛋白过度磷酸化的作用及机制。通过对以上问题的阐明将为研究针对C3/C3aR 这一靶点开发新型药物保护Tau 蛋白病尤其是 AD 提供理论基础。方法：①采用OA 诱导 SH-SY5Y 细胞,以 tau 蛋白过度磷酸化和细胞活性的变化为观察指标,建立用于 AD 研究的细胞模型。②CCK8 法检测细胞活性。③Western blot 测定 SH-SY5Y 细胞 Ser396,Thr231,Thr205 位点磷酸化tau 蛋白水平。④Western blot 法测定tau 蛋白磷酸化关键调节酶GSK3β,Cdk5,PP2A 的蛋白表达水平。结果：①OA 处理SH-SY5Y 细胞,CCK8 法检测显示细胞活性显著降低,作用随着 OA 浓度的增高和作用时间的延长而增强;40 nmol·L-1 OA 作用 SH-SY5Y 细胞不同时间,可见细胞中 Ser396,Thr231,Thr205 位点磷酸化 tau 蛋白水平于作用后 3 h 开始升高,24 h 达高峰,随后开始下降,48 h 的水平仍高于基础值,提示 OA 可诱导 SH-SY5Y 细胞活性下降和tau 蛋白过度磷酸化。②C3a 受体拮抗剂SB290157 预处理24 h 后,再给予40 nmol·L-1 OA 处理 SH-SY5Y 细胞12 h,检测细胞中Ser396,Thr231,Thr205 位点磷酸化 tau 蛋白水平,可见 Ser396,Thr231,Thr205 位点磷酸化tau 蛋白水平变化同时下调,显著低于单独OA 处理组,提示在 OA 诱导SH-SY5Y 细胞tau 蛋白过度磷酸化过程中,补体C3/C3aR 可能参与其中,C3aR 受体拮抗剂可显著抑制tau 蛋白过度磷酸化。③C3a 受体拮抗剂SB290157 预处理,western blot 结果显示SB290157 可抑制GSK-3β和Cdk5 的蛋白表达,但可上调蛋白磷酸酶PP-2A 的蛋白表达。④通过转染C3aR-siRNA,同样发现OA 不能诱导tau 的过度磷酸化及其调节蛋白的改变。结论：①OA 可诱导SH-SY5Y 细胞活性下降和tau 蛋白过度磷酸化,该细胞模型可用于AD 研究。②在OA 诱导SH-SY5Y 细胞tau 蛋白过度磷酸化过程中,C3a受体拮抗剂SB290157 可抑制SH-SY5Y 细胞 Ser396,Thr231,Thr205 位点磷酸化 tau 蛋白水平。③C3a 受体拮抗剂对过磷酸化tau 蛋白水平的抑制,可能是通过抑制GSK-3β 和 Cdk5 ,同时上调蛋白磷酸酶PP-2A 实现的。     

IGF-1对Aβ1-40诱导PC12细胞tau蛋白过度磷酸化的保护作用及其机制研究

目的 探讨胰岛素样生长因子-1(IGF-1)对β样淀粉蛋白(Aβ1-40)引起的PC12细胞tau蛋白磷酸化的保护作用及其机制.方法 通过MTT法观察不同浓度的IGF-1对PC12细胞存活的影响.应用蛋白免疫印迹方法,检测Aβ1-40处理后PCI2细胞tau蛋白磷酸化、总tau蛋白、糖原合成激酶3 β(GSK-3β)和磷酸化GSK-3βSer9的表达情况;观察IGF-1或GSK-3β特异性抑制剂氯化锂(IACl)对Aβ1-40诱导PCI2细胞上述指标变化的影响.结果 不同浓度的IGF-1均能提高PC12细胞生存率,1μg/mL IGF-1作用最明显.tau蛋白Ser396、Ser199/202位点的磷酸化水平在Aβ1-40诱导后3 h开始增高,12 h达到高峰;总tau蛋白的变化趋势与tau蛋白磷酸化的改变大体一致.在tau蛋白磷酸化达高峰时,GSK-3β的表达增加而磷酸化GSK-3βSer9的表达减少.用IGF-1或LiCl处理后,可减轻Aβ1-40所诱导的tau蛋白过度磷酸化,同时GSK-3β的表达下降而磷酸化GSK-3βSer9的表达增加.结论 Aβ1-40可使PC12细胞tau蛋白Ser396、Ser199/202位点的磷酸化水平增高,该作用主要通过激活GSK-3β实现.IGF-1可抑制GSK-3β的活性,最终达到减轻Aβ1-40所诱导的PC12细胞tau蛋白过度磷酸化的作用.     

褪黑素对冈田酸致NG108-15细胞tau蛋白过度磷酸化的影响

目的 观察褪黑素（MLT）对冈田酸（OA）致大鼠神经母细胞和小鼠胶质细胞瘤细胞的杂交细胞系NG108—15细胞tau蛋白过度磷酸化的影响。方法 10nmol／LOA作用于NG108—15细胞0，3，6，12及24h，免疫细胞化学法和免疫印迹法（Western blot法）观察Ser-396位点磷酸化tau蛋白，观察MLT对细胞内Ser-396位点磷酸化tau蛋白的影响。结果 在OA作用后3h增高，6h达到峰值，之后逐渐降低。选取OA作用6h，低、高剂量MLT较模型组Ser-396位点磷酸化tau蛋白水平明显降低。结论MLT 可对抗tau蛋白过度磷酸化，可能是其发挥抗阿尔茨海默病作用的机制之一。     

瘦素降低全反式维甲酸诱导的SH-SY5Y细胞tau蛋白过度磷酸化

目的探讨瘦素（leptin）与阿尔茨海默病发生发展过程的联系。方法全反式维甲酸（all-trans retinoic acid,ATRA）诱导人神经纤维母细胞瘤细胞系SH-SY5Y产生过度磷酸化tau蛋白,模型成功后给予外源性leptin处理,检测磷酸化tau蛋白表达水平。结果模型诱导成功后,PCR检测leptin长型受体ObRb表达上升（P〈0.01）;给予leptin后,Western Blot显示磷酸化tau蛋白表达显著降低（P〈0.01）,细胞形态也随之改变。结论 leptin能够在体外降低阿尔茨海默病相关的过度磷酸化tau蛋白。     

早老蛋白-1过度表达对神经母细胞瘤NG-108的tau蛋白磷酸化的影响

目的观察早老蛋白-1（Presenilin-1,PS1）的过度表达对tau蛋白磷酸化的影响。方法在NC-108细胞上转染不同的PS1质粒,利用免疫双标,免疫印记,免疫细胞化学,MTT,Western blot等方法,观察早老蛋白-1的过度表达对tau蛋白磷酸化的影响。结果免疫双标显示,在散发性AD（sporadic Alzheimer disease）患者脑内,PS1主要分布于神经元,并与磷酸化tau蛋白部分共存。免疫印迹显示,与空质粒组相比,转染野生型PS1组和转染一种家族性AD（familial Alzheimer disease,FAD）突变型早老蛋白-1（mPS1）质粒组的NG-108细胞中磷酸化的tau蛋白均增加。MTT方法未检测到这两组的转染细胞与对照组有显著差异。用Confocal显微镜观察PS1-EGFP质粒转染组,发现在转染后早期12h,PS1-EGFP主要分布在细胞膜表面或细胞器上,随后PS1-EGFP主要在细胞浆中弥散分布。同时,免疫细胞化学检测显示,部分PS1-EGFP转染细胞中有明显的tau蛋白磷酸化,并且这些磷酸化tau蛋白能与PS1-EGFP蛋白一起形成聚集体。在给予磷酸酯酶抑制剂岗田酸后,PS1-EGFP转染细胞比未转染细胞含有更多的磷酸化的tau蛋白。结论野生型PS1可能参与了散发性阿茨海默氏病中的tau蛋白的病理改变。     

短链脂肪酸对肝细胞糖脂代谢调节的作用机制研究

目的:探究肠道菌群代谢产物短链脂肪酸对小鼠肝细胞AML12糖脂代谢的影响。方法:将AML12小鼠肝细胞分别在1、2、4、8和16mmol/L浓度的乙酸钠、丙酸钠和丁酸钠中孵育24h,Western印迹检测糖脂代谢信号通路中关键蛋白蛋白激酶B（Akt）、糖原合成酶激酶-3β（GSK-3β）、腺苷酸活化蛋白激酶（AMPK）和乙酰辅酶A羧化酶（ACC）的磷酸化水平以及AMPK总蛋白的表达量。结果:16mmol/L丙酸钠显著升高Akt磷酸化水平,为对照组的（1.56±0.09）倍（F=3.251,P<0.05）,丁酸钠在8mmol/L时即可显著增加Akt的磷酸化,为对照组的（1.66±0.18）倍（F=8.249,P<0.05）,而乙酸钠不影响Akt的磷酸化。8mmol/L丁酸钠即可显著上调GSK-3β的磷酸化水平,为对照组的（1.61±0.14）倍（F=4.690,P<0.05）,而乙酸钠和丙酸钠不影响GSK-3β的磷酸化。乙酸钠、丙酸钠和丁酸钠在不影响AMPK总蛋白表达的情况下,分别在2、1、2mmol/L时即可显著升高AMPK磷酸化水平,分别为对照组的（1.40±0.13）倍（F=4.720,P<0.05）、（1.66±0.18）倍（F=16.54,P<0.05）和（1.70±0.13）倍（F=23.50,P<0.05）。乙酸钠、丙酸钠和丁酸钠分别在16、4、1mmol/L即可显著升高ACC磷酸化水平,分别为对照组的（2.01±0.30）倍（F=4.807,P<0.01）、（1.66±0.18）倍（F=7.507,P<0.05）和（1.79±0.06）倍（F=7.028,P<0.01）。结论:短链脂肪酸可能通过调节肝细胞Akt/GSK-3β和AMPK/ACC通路减少肝脏脂质积聚并降低血糖。     

脑脊液tau蛋白和磷酸化tau蛋白测定在阿尔茨海默病诊断中的应用价值

目的探讨脑脊液tau蛋白和磷酸化tau（p-tau）蛋白检测在阿尔茨海默病（AD）诊断中的应用价值。方法选取2012年4月~2014年4月在中国人民解放军第309医院和佳木斯大学附属医院接受治疗的AD患者（AD组）、血管性痴呆患者（VD组）及非神经系统疾病患者各50例为研究对象,检测并分析患者脑脊液tau蛋白和p-tau蛋白的含量。结果 AD组患者脑脊液p-tau蛋白含量为（190.3±83.1）pg/mL,显著高于VD组患者的（73.4±36.2）pg/mL和非神经系统疾病组的（55.4±35.2）pg/mL（P〈0.05）;VD组患者脑脊液中p-tau蛋白含量与非神经系统疾病组相比,差异有统计学意义（P〈0.05）。以tau蛋白含量≥370pg/mL为AD诊断标准时,灵敏度、特异度、检验可靠性和与VD患者鉴别率分别为89.6%、78.8%、82.4%和66.8%;以p-tau蛋白含量≥120pg/mL为AD诊断标准时,灵敏度、特异度、检验可靠性和与VD患者鉴别率分别为93.5%、89.9%、91.7%和82.6%。结论脑脊液p-tau蛋白可作为临床鉴别诊断AD患者的辅助指标。     

p38丝裂原活化蛋白激酶在β淀粉样肽+缺氧缺糖所致SHSY5Y细胞损伤中的作用

目的探讨p38丝裂原活化蛋白激酶(p38MAPK)活性在β淀粉样肽(Aβ)+缺氧缺糖(OGD)所致SHSY5Y细胞损伤中的作用。方法体外培养SHSY5Y神经母细胞瘤株,以OGD、伴或不伴Aβ(5μmol/L)处理,以MTT检测SHSY5Y细胞活性,Westernblot方法检测p38MAPK活性,fluo-3/AM的荧光强度检测SHSY5Y细胞内钙离子的浓度。结果与对照组相比,OGD、Aβ、OGD+Aβ组SHSY5Y细胞活性显著下降,分别为对照组的(63±4)%、(68±7)%、(56±1)%,(P<0.05或P<0.01);p38MAPK活性在OGD、Aβ、OGD+Aβ组显著升高,分别为对照组的(121±3)%、(132±4)%、(165±5)%,(P<0.05或P<0.01);fluo-3/AM的荧光强度在OGD、Aβ、OGD+Aβ组显著升高,分别为照组的(169±4)%、(176±4)%、(220±7)%,(P<0.05或P<0.01)。结论与OGD、Aβ比较,OGD+Aβ对SHSY5Y细胞具有更显著的细胞毒性作用。OGD+Aβ通过激活p38MAPK,进而促进细胞内钙超载,最终导致SHSY5Y细胞死亡。     

姜黄素对铜绿假单胞菌诱导人肺上皮细胞产生细胞因子的影响及其分子机制研究

目的 探讨姜黄素对铜绿假单胞菌（pseudomonas aeruginosa,Pa）感染的肺上皮细胞的体外抗炎效应.方法 体外培养肺上皮细胞系NCI-H292,加入姜黄素和培养的Pa感染不同时间.Western blot检测和实时定量PCR分别检测NCI-H292细胞中红素氧合酶1（Heme oxygenase-1,HO-1）mRNA和蛋白表达情况;ELISA检测IL-1β和IL-8的产生.同时采用RNA干扰HO-1表达后,观察对Pa诱导IL-1β和IL-8产生的影响.结果 Pa感染NCI-H292细胞后,IL-1β和IL-8含量分别为（87.52±7.96）pg/mL和（205.63 ±34.25） pg/mL,50 μg/mL姜黄素孵育8h后,其含量分别降至（15.78±10.74）pg/mL和（49.82±14.28）pg/mL,处理前后差异有统计学意义（P＜0.05）.同时,姜黄素能在转录翻译水平分别调控HO-1 mRNA和蛋白表达,其中50 μg/mL姜黄素能将HO-1 mRNA增高19倍,蛋白表达水平提高4.8倍（P＜0.05）.HO-1 siRNA沉默HO-1表达后,与Pa组相比,IL-1β和IL-8分泌进一步增高.结论 姜黄素可能通过上调HO-1的表达而发挥对肺上皮细胞的抗炎作用.     

糖原合酶激酶-3β磷酸化抑制顺铂诱导卵巢癌细胞凋亡的研究

目的 探讨增加糖原合酶激酶-3β(GSK-3β)的磷酸化状态对顺铂诱导的卵巢癌细胞凋亡的作用.方法 体外培养人卵巢癌细胞株OV2008细胞,运用GSK-3β特异性抑制剂LiCl增加磷酸化GSK-3β的表达,应用流式细胞仪检测不同浓度顺铂诱导的细胞凋亡,Western blot检测GSK-3β及磷酸化GSK-3β蛋白的表达.结果 流式细胞仪检测结果显示,梯度增加的顺铂(40、80、120 μmol/L)作用于OV2008细胞24 h,其凋亡率不断增加,分别为(4.55±1.64)%、(25.50±0.94)%和(53.80±1.62)%;而应用抑制剂预孵育的细胞,不同浓度顺铂作用24 h后凋亡率分别为(2.10±0.80)%、(15.75±0.97)%和(20.45±0.87)%;Western blot显示,抑制剂LiCl作用后,细胞的磷酸化GSK-3β表达明显增加,并且顺铂作用亦可引起磷酸化GSK-36表达上调;流式结果还显示,P13K的特异性抑制剂LY294002作用后使顺铂诱导的细胞凋亡率从(18.75±0.70)%增加至(28.40±1.50)%.结论 磷酸化GSK-3β表达增加可抑制顺铂诱导的卵巢癌细胞的凋亡.     

瘦素减轻鱼藤酮诱导的SH-SY5Y细胞损伤

目的 探讨瘦素对鱼藤酮（rotenone） 所诱导的人神经母细胞瘤SH-SY5Y 细胞凋亡的抑制作用。 方法 建立鱼藤酮诱导的SH-SY5Y 细胞损伤模型,用瘦素进行干预,采用MTT 比色法检测细胞存活率,锥虫蓝检测细胞死亡率,细胞形态学观察,并用Western blot 法检测Bcl-2、Bax、p-GSK-3β（Ser9） 和GSK-3β 的表达水平,免疫荧光检测α-synuclein 的表达水平。 结果 成功建立了鱼藤酮诱导的SH-SY5Y 细胞损伤模型。在模型的基础上,瘦素干预后,细胞状态改善,细胞存活率提高约14%（P ＜ 0.05）,细胞死亡率降低约17%（P ＜ 0.05）,α-synuclein 的浓度下降,Bcl-2 和p-GSK-3β 的表达显著提高。 结论 瘦素对鱼藤酮诱导的SH-SY5Y 细胞损伤具有明显的抑制作用,可能是通过抑制GSK-3β 的活性上调Bcl-2/Bax 的比率和降低α-synuclein 的表达而得以实现。     

人参多糖对人白血病细胞株K562细胞信号转导的调控

目的：研究人参多糖（GPS）对人红白血病细胞株（K562）信号转导的调控.方法：采用细胞体外培养技术,免疫细胞化学、Western Blot检测GPS诱导后K562细胞蛋白酪氨酸激酶JAK2、核因子NF-κBp65和信号传导及转录激活因子5（STAT5）的表达,免疫沉淀法检测GPS对K562细胞JAK2磷酸化的影响,RT-PCR技术检测GPS诱导后K562细胞c-myc,p53表达的变化.结果：免疫细胞化学和WesternBlot检测GPS诱导后K562细胞,JAK2蛋白表达明显增强,随着剂量的加大、时间的延长更加明显[（12.33±2.05）vs（88.18±13.57）];NF-κBp65[（79.48±9.56）vs（6.98±1.45）]和STAT5[（71.56±16.28）vs（10.23±2.16）]蛋白表达明显减弱;GPS（40mg/L）作用K562细胞6d后,加入GM-CSF继续刺激5～10min,JAK2酪氨酸磷酸化增强,而刺激20min后JAK2酪氨酸磷酸化明显减弱.GPS（40mg/L）诱导K562细胞3,6d后,c-myc mRNA明显减弱[（196±12）vs（136±11）],而p53mRNA无明显变化[（202±16）vs（181±16）].结论：GPS激活了酪氨酸蛋白激酶JAK2,促进其磷酸化,同时抑制STAT5,NF-κB信号转导途径,下调原癌基因c-myc表达,促进K562细胞凋亡与分化.     

丹皮酚对结肠癌细胞系LoVo细胞增殖、凋亡的影响及其机制

目的观察丹皮酚对人结肠癌细胞系LoVo细胞增殖、凋亡的影响及探讨可能的作用机制。方法用不同浓度丹皮酚处理体外培养的LoVo细胞24、48、72、96 h,CCK-8比色法测定其对结肠癌LoVo细胞的活力的影响;倒置显微镜下观察细胞的形态学变化;根据CCK-8结果分为丹皮酚组(浓度31.25、62.50、125 mg/L)和对照组,处理48 h后,流式细胞仪检测细胞凋亡;激光共聚焦显微镜检测细胞内Ca2+浓度的变化;RT-PCR和Western blot法检测RUNX3基因表达情况。结果丹皮酚能显著降低LoVo细胞存活率,呈剂量、时间依赖性;倒置显微镜下可观察到典型的细胞凋亡形态;丹皮酚组(浓度31.25、62.50、125 mg/L)处理细胞48 h后,凋亡率分别为(12.3±1.3)%、(22.4±1.5)%、(36.2±2.1)%,与对照组[凋亡率(2.3±0.9)%]比较,差异均有统计学意义(P<0.05);丹皮酚组处理48 h后,细胞钙离子荧光强度分别为(41.36±4.62),(57.51±3.83)和(69.43±3.76),与对照组[荧光强度(24.45±3.74)]比较,差异均有统计学意义(P<0.05);丹皮酚能上调RUNX3基因的表达,呈剂量依赖性。结论丹皮酚能抑制LoVo细胞的增殖并诱导其凋亡,其作用机制可能与增加细胞内Ca2+含量和上调RUNX3基因的表达有关。