胃癌组织miRNA差异表达的初步分析

目的 分析胃癌组织特异性微小RNA（miRNA）表达谱,为深入研究miRNA与胃癌发生和发展的关系以及寻找新的胃癌分子标志物奠定基础。方法 利用miRNA芯片就21对胃癌和癌旁配对正常组织的miRNA表达谱进行检测和初步生物信息学分析,Real-Time PCR验证miRNA芯片检测结果。结果 miRNA芯片检测发现,在胃癌及其癌旁配对正常组织中共有88个差异表达miRNA,其中上调最明显的是miR-21、miR-196b、miR-301a、miR-431*、miR-550*、miR-18a和miR-135b;下调最明显的是miR-139-3p、miR-628-3p、miR-596、miR-99b*和miR-638。Real-Time PCR对其中2个上调（miR-181、miR-19b）和2个下调（miR-134、miR-31）miRNA的验证结果与芯片检测所示具有较好的一致性。结论 胃癌组织具有特异性的miRNA表达谱,这些差异表达的miRNA有可能成为新的胃癌分子标志物。     

急性单核细胞白血病全基因组微小RNA的表达谱分析

目的研究急性单核细胞白血病（AMoL）全基因组的微小RNA（miRNA）表达谱。方法应用Illumina高通量测序技术对10 例AMoL 患者和10 例非恶性血液病患者骨髓样本的miRNA 表达水平进行检测,分析两者的表达差异,并通过茎环引物实时荧光定量PCR（Stem-loop qPCR）技术对部分Illumina 测序结果进行验证。结果两组样本共发现差异表达的miRNA 285个,其中,199 个miRNA 在AMoL组呈表达上调,86 个miRNA呈表达下调。6 个miRNA 的Stem-loop qPCR 验证结果与其测序结果具有相同的变化趋势。结论miR-126-3p 和miR-29b-3p 可作为潜在的分子靶点用于AMoL发病机制的进一步研究。     

结核性胸膜炎患者外周血miR-365a-3p、miR-29a-3p的表达及意义

目的 探讨外周血微小RNA （miRNA）在结核性胸膜炎患者和健康对照者之间的差异表达.方法 选取30例结核性胸膜炎患者为实验组,30例健康者为对照组,采集外周血,Trizol法抽提外周血总mRNA,RT-PCR合成cDNA,荧光定量PCR检测外周血miR-365a-3p、miR-29a-3p的表达.结果 结核性胸膜炎组患者外周血miR-365a-3p表达（0.66±0.60）明显高于健康对照组（0.33±0.29）,差异有统计学意义（P＜0.05）,而结核性胸膜炎组患者外周血miR-29-3p表达（0.74±0.65）与健康对照组（0.75±0.31）相似,差异无统计学意义（P＞0.05）.结论 外周血miR-365a-3p可能与结核性胸膜炎发生密切相关,并可能成为诊断结核性胸膜积液的靶点之一.     

系统性红斑狼疮患者外周血CD4＋T淋巴细胞中miRNAs表达谱分析

目的 通过基因芯片技术筛选系统性红斑狼疮（SLE）患者外周血T淋巴细胞中miNRAs的表达情况,寻找SLE与健康者外周血CD4＋T淋巴细胞中差异表达的miNRAs,探讨CD4＋T淋巴细胞参与SLE的发病机制.方法 采集43例SLE患者作为实验组,23例健康者作为对照组,取受试者外周静脉血,用磁珠分选法分离外周血CD4＋T淋巴细胞,提取RNA进行芯片分析,筛选差异表达的miRNAs.其筛选结果通过荧光实时定量PCR在43例重度活动期SLE患者和23例健康者中进行验证.结果 与对照组相比,SLE患者外周血CD4＋T淋巴细胞中有13个miNRA表达差异具有统计学意义（P＜0.05）,其中上调基因8个,下调基因5个.进一步通过荧光实时定量PCR检测了miR-NAs的表达情况,最终确定miR 410与miR-181在SLE患者外周血T淋巴细胞中明显下调,miR-31在SLE患者外周血T淋巴细胞中明显上调.结论 CD4＋T淋巴细胞中的miRNA很可能参与了SLE患者的病情活动.     

系统性红斑狼疮患者B细胞中microRNA-155的表达及干预后效应

目的分析microRNA-155（miR-155）在系统性红斑狼疮（SLE）患者外周血B细胞中的表达及干预后B细胞表达IgG水平。方法收集66例SLE患者及10例健康人群外周血,分离出B细胞,采用实时荧光定量PCR（qRT-PCR）检测miR-155在B细胞中的表达水平,利用电转染技术使miRNA抑制剂干预SLE患者外周血B细胞miR-155的表达,然后以ELISA检测B细胞干预后培养液上清液IgG的水平。结果qRT-PCR结果显示,与健康人比较,SLE患者外周血B细胞中miR-155表达上调（P＜0.05）,通过miRNA抑制剂下调SLE患者B细胞中的miR-155的表达后,B细胞分泌的IgG水平明显降低。结论SLE患者的B细胞中表达上调的miR-155可能参与了SLE患者B细胞功能调控。     

胃癌组织miRNA差异表达的初步分析

目的分析胃癌组织特异性微小RNA（miRNA）表达谱,为深入研究miRNA与胃癌发生和发展的关系以及寻找新的胃癌分子标志物奠定基础。方法利用miRNA芯片就21对胃癌和癌旁配对正常组织的miRNA表达谱进行检测和初步生物信息学分析,Real-TimePCR验证miRNA芯片检测结果。结果 miRNA芯片检测发现,在胃癌及其癌旁配对正常组织中共有88个差异表达miRNA,其中上调最明显的是miR-21、miR-196b、miR-301a、miR-431＊、miR-550＊、miR-18a和miR-135b;下调最明显的是miR-139-3p、miR-628-3p、miR-596、miR-99b＊和miR-638。Real-TimePCR对其中2个上调（miR-181、miR-19b）和2个下调（miR-134、miR-31）miRNA的验证结果与芯片检测所示具有较好的一致性。结论胃癌组织具有特异性的miRNA表达谱,这些差异表达的miRNA有可能成为新的胃癌分子标志物。     

结肠癌患者血清miRNA表达谱分析

目的：探讨结肠癌患者血清中miRNA分子的表达差异,寻找潜在的结肠癌诊断分子标记物。方法以12例正常人血清样本为对照组,采用miRNA芯片技术对12例结肠癌患者血清样本的miRNA表达谱进行分析;随后,扩大患者样本量至40例,扩大对照组样本量至45例,采用实时荧光定量PCR (Real-time PCR)技术对差异表达的miRNA分子进行验证分析。结果芯片结果显示,与对照组比较,结肠癌患者血清miRNA表达谱发生了显著的变化,其中3条miRNA表达水平上调,21条miRNA表达水平下调;Real-time PCR验证实验结果表明,与对照组比较,结肠癌患者血清中miR-508和miR-502-5p的表达水平明显下调。结论 miR-508和miR-502-5p可作为结肠癌诊断的潜在分子标记物进行开发。     

转化生长因子β 1 (TGF-β 1)对胃癌细胞microRNA表达谱的影响

 目的 探讨转化生长因子β 1 (transforming growth factor β 1,TGF-β 1)对胃癌细胞BGC823 microRNA (miRNA)表达谱的影响及其意义。方法 应用microRNA芯片检测TGF β1处理胃癌细胞BGC823前后的miRNA表达谱;对miRNA 表达谱进行差异性分析;实时荧光定量RT PCR验证差异表达的miRNA;用生物信息学技术分析差异表达miRNA可能调控的靶基因及其意义。结果 TGF-β1处理胃癌细胞BGC823 24 h 和36 h后,miRNA的表达谱存在6个相同的差异表达miRNA,包括3个(miR-27a,miR-29b 1和 miR-194)表达上调,3个(miR-193b,miR-574 3p和miR-130b)表达下调。实时荧光定量RT-PCR结果与芯片一致。结论 TGF-β 1能够影响胃癌细胞miRNAs的表达,这些上调或下调表达的miRNAs可能参与了胃癌的浸润转移。     

结肠癌血清microRNA 表达谱的检测及临床应用价值

目的 找寻潜在的新型的结肠癌血清microRNA（miRNA）表达谱,探讨其临床应用价值。方法miRNA 微阵列芯片技术检测结肠癌患者和正常人血清中miRNA 表达的差异,并对有差异表达的miRNA 在60 例结肠癌患者血清和60 例正常对照组血清中的表达进行实时荧光定量聚合酶链反应（qRT-PCR）验证。结果①芯片杂交结果中共有87 种miRNAs 在结肠癌患者血清和正常人血清标本中有差异表达,其中上调表达有39 个,下调表达有48 个。② qRT-PCR 对miRNAs 进行验证,其中miR-31、miR-141、miR-224-3p、miR-576-5p 和miR-4669 这5 个miR 分子在结肠癌症患者中的表达相对于正常对照组差异具有统计学意义（P <0.05）。③ miR-31、miR-141、miR-224-3p、miR-576-5p 和miR-4669 这5 个miR 分子组成的miR- 表达谱诊断结肠癌的效率较高（ROC 曲线下面积为0.992）。结论 临床检测结肠癌患者miR-31、miR-141、miR-224-3p、miR-576-5p 和miR-4669 循环分子标志物表达谱有助于诊断结肠癌,有望成为结肠癌患者临床诊疗评估的重要指标。     

精神分裂症患者血清差异 microRNA 谱的检测

目的：目前精神分裂症的临床诊断缺乏统一的标准。文中研究精神分裂症患者血清中差异miRNA表达谱,为该病的临床诊断提供依据。方法采用FlashTag TM Biotin RNA芯片技术和SAM软件筛选精神分裂症患者与健康受试者血清中差异表达的miRNA,用实时荧光定量逆转录PCR（RT-PCR）进行验证。结果筛选出3个差异表达的miRNA,其中hsa-miR-1281上调,表达倍数变化为1．50881;hsa-miR-2861、hsa-miR-638下调,表达倍数变化分别为0．64193和0．51624。实时定量PCR结果证实,精神分裂症患者较健康受试者hsa-miR-2861与hsa-miR-638表达下调,分别为[（0．037±0．037） vs （3．159±2．761）,χ2＝4．089, P＜0．05]及[（0．006±0．006） vs （0．689±0．314）,χ2＝4．083, P＜0．05],hsa-miR-1281在精神分裂症患者组呈高表达[（1．221±0．041） vs （0．145±0．036）,χ2＝5．333,P＜0．05）。结论精神分裂症患者血清中存在差异表达的miRNA谱,miR-1281、miR-2861和miR-638可作为诊断精神分裂症的一个新的血清标志物。     

慢性心力衰竭患者血浆miRNA表达谱分析

目的：对慢性心力衰竭(CHF)患者的血浆miRNA进行二代测序,探讨CHF患者血浆中miRNA的表达差异。方法收集2013年7月至2015年6月间在北京大学深圳医院治疗的40例CHF患者和10例健康对照个体,应用第二代高通量测序技术对其血浆miRNA进行测序,寻找差异表达的miRNA。另收集同期CHF患者和健康对照个体各96例,用逆转录-实时荧光定量聚合酶链反应对差异表达的miRNA进行验证。结果与健康对照者相比,高通量测序显示在CHF患者的血浆中miR-184、miR-651-5p、miR-130b-5p、miR-203a-3p、miR-548e-3p和miR-106a-5p的表达水平存在显著上调,miR-31-5p和miR-5091的表达水平存在下调,逆转录-实时荧光定量聚合酶链反应检测血浆miRNA的表达差异与高通量测序的结果相符。结论 CHF患者的血浆miRNA与健康个体的表达谱存在差异,差异表达的miR-184、miR-651-5p、miR-130b-5p、miR-203a-3p、miR-548e-3p、miR-106a-5p、miR-31-5p和miR-5091或许与CHF的发生有关。     

抗结核药物肝毒性对血浆miRNA分子表达的影响

目的探讨抗结核药物肝毒性（ATDH）对患者血浆中微RNA（miRNA）分子表达的影响。方法对3例活动性肺结核患者用药前和发生ATDH后的血浆标本进行miRNA芯片检测。对存在差异性表达的miRNA分子,采用Real Time-PCR进行验证。应用互联网miRNA靶基因预测软件对经证实存在差异性表达的miRNA进行靶基因预测,采用PANTHER蛋白分类系统查找靶蛋白基因本体（GO）功能分类。结果ATDH发生后,血浆中共筛选出22个与用药前比较差异性表达的miRNA分子,表达上凋和下调的miRNA各11个。RealTime-PCR验证结果显示：ATDH发生后,患者血浆中显著上调的miRNA有5个,分别为miR-378i、miR-125b-5P、miR-1224-5P、miR-194-5P和miR-34a-5P;下调的miRNA有3个,分别为miR-1260a、miR-338．3P和miR-4286。结论ATDH发生患者血浆中存在与用药前比较差异性表达的miRNA分子,这些分子的存在可能与ATDH的发生有关。     

心肌缺血预适应大鼠循环血微囊泡中miRNAs 表达谱分析

目的:分离提取心肌缺血预适应（IPC）模型大鼠循环血中的细胞微囊泡（MVs）,探究IPC处理对循环血MVs中microRNAs （miRNAs）表达的影响。方法:健康雄性Wistar 大鼠8只,随机分为IPC-MVs组和假手术对照（Sham-MVs）组,每组4 只。建立 大鼠心肌IPC 模型,提取循环血IPC-MVs,采用Microarray 分析两组循环血MVs 中的miRNAs,利用生物信息学进行靶基因预 测及功能分析。结果: 与Sham-MVs组比较,IPC-MVs组中循环血差异表达显著上调的miRNAs 共3 个（P<0.01,FER<0.05）: miR-1-3p、miR-133a-3p 和miR-133b-3p（t=3.194、3.002、3.389,均P<0.05）。基因本体研究会数据库（GO）和京都基因与基 因组百科全书（KEGG）分析显示,这些miRNAs 可能通过调节心肌细胞中丝裂原活化蛋白激酶（MAPK）信号通路和Ras信号 通路,发挥抗心肌缺血/再灌注（I/R）损伤的保护作用,可能参与调控的核心靶基因包括Ntrk2、Igf1、Gnai3 和Bcl2l1。结论:IPC 处 理可使大鼠循环血MVs中miR-1-3p、miR-133a-3p 和miR-133b-3p表达显著上调。     

精神分裂症患者血浆及单核细胞中microRNA表达水平差异的研究

目的 探讨精神分裂症患者血浆和外周血单核细胞内microRNA（miRNA或miR）表达水平的差异.方法 对连续入组60例精神分裂症患者和72例正常对照,使用实时荧光定量PCR技术检测病例组和对照组血浆和外周血单核细胞内9种miRNA（miR-30e、miR-34a、miR-181b、miR-195、miR-346、miR-432、miR-7、miR-132、and miR-212）的相对表达水平.结果 病例组血浆miRNA-132、miRNA-195、miRNA-30e、miRNA-7（5.06± 1.16、2.99± 1.27、1.88±1.62、9.59±1.85）较对照组（5.91±0.93、4.45±1.06、3.56± 1.30、11.8±2.53）显著上调（P＜0.05 ～ P＜0.001）.病例组外周血单核细胞miRNA-212、miRNA-34a、miRNA-30e（0.28±0.54、2.69± 1.10、-4.72± 1.01）较对照组（0.84±0.64、3.97±1.01、-3.55±1.26）同样显著上调（P＜ 0.05～ P＜0.001）.ROC曲线分析显示,miR-30e在血浆和单核外周血中均具有较高诊断价值.从血浆提取的microRNA-30e的AUC是0.767 （95％CI：0.608～0.926）,敏感度90.90％,特异度60.00％;从外周血单核细胞提取的miRNA-30e的AUC是0.756（95％ CI：0.584～0.929）,敏感度81.80％,特异度68.00％.结论 精神分裂症患者外周血血浆及单核细胞中microRNA的表达水平不同,无明显的相关性.miR-30在血浆和单核外周血中具有较高的诊断价值.     

血浆miRNA表达谱与胰腺癌相关性的研究

目的:探讨血浆miRNA的表达水平与胰腺癌发病的关联?方法:通过TLDA(TaqMan low density array )芯片系统筛选24例胰腺癌患者和24例健康对照间差异表达的miRNA,对差异表达miRNA采用实时荧光定量PCR法进行单个样本验证?结果:miR-451和miR-409-3p的表达水平在胰腺癌组和对照组中有显著的差别,P值分别为0.004 1和0.005 7?这2个miRNAs的组合以93.8%的受试工作者曲线下面积(area under the ROC curve,AUC)将健康对照组和胰腺癌患者组分开(灵敏度为95.8%,特异度为91.7%)?结论:血浆miR-451和miR-409-3p的表达水平可有效区分胰腺癌患者和健康个体?     

miRNA-769-5p在乙型肝炎相关肝细胞癌中的表达

目的:研究乙型肝炎相关性肝细胞癌中异常表达的微小RNA(miRNAs)及其与肝细胞癌患者根治术预后的关系。方法:通过Taqman低密度芯片(TLDA)分析了显微切割福尔马林固定石蜡包埋(FFPE)样本中的肝细胞癌组织及癌旁组织中miRNA的表达,并在48例样本中验证了其中1个差异表达的miRNA(miR-769-5p)及与肝细胞癌患者根治性切除术预后的关系。结果:miR-769-5p在癌组织较癌旁组织中高表达,在48例显微切割的有、无早期复发肝细胞癌样本中验证了该结果并分析了miR-769-5p与肝细胞癌患者根治术预后的关系,结果发现miR-769-5p在早期复发者的癌组织中表达高于无早期复发者。但是,肿瘤中miR-769-5p的表达水平与复发时间及总生存时间无关。进一步分析发现miR-769-5p的表达可能与肿瘤的数目相关,而与肿瘤大小、包膜及肿瘤的分期无关。结论:miR-769-5p在乙型肝炎相关肝细胞癌组织中较癌旁组织高表达,且其表达水平可能与肿瘤的数目相关。     

miR-182-5p在阿尔兹海默病的表达及生物信息学分析

目的探究miR-182-5p在阿尔兹海默病（AD）病人血清中的表达水平,并采用生物信息学方法对其进行靶基因预测及功能分析。方法从GEO数据库获取AD相关miRNAs芯片数据集GSE104514,利用GEO2R在线工具分析差异表达的miRNAs,选择差异最大的miR-182-5p进行深入研究。收集AD病人28例（AD组）及健康者15名（对照组）,应用实时荧光定量聚合酶链反应法检测血清中miR-182-5p的表达水平。通过miRBase数据库分析miR-182-5p在不同物种间的保守性;运用miRcode、miRDB、miRWalk和Target Scan数据库预测miR-182-5p靶基因,并取交集靶基因;应用DAVID和KOBAS数据库对miR-182-5p靶基因进行GO功能及KEGG信号通路富集分析。结果AD小鼠脑组织的miR-182-5p表达明显高于野生型小鼠（P < 0.05）,AD病人血清中的miR-182-5p表达量（2.022±1.225）明显高于对照组（0.486±0.442）（P < 0.01）;保守性分析显示miR-182-5p成熟体序列在不同物种间高度保守;在线数据库预测获得miR-182-5p潜在的交集靶基因共23个。GO富集结果显示,miR-182-5p靶基因主要参与于锌离子的结合、生物过程的负调控、杂环类化合物的结合、主要代谢过程的调节、GTPase的活性、膜的内在成分的组成、大脑的发育、部分细胞形态的发生、转移酶的活性、信号的调节、泛素结合酶的结合、耳蜗的发育、组蛋白H4-K16的乙酰化作用、咽系统的发育、神经元演化方向的规范、大脑皮层细胞的迁移、大脑皮层细胞的放射状定向迁移等多个生物学过程。KEGG分析结果显示,miR-182-5p靶基因主要参与肾集合管的酸分泌、醚脂类代谢、志贺菌病、细胞的黏附、细菌侵袭上皮细胞等5条信号通路。结论miR-182-5p在AD病人血清中高表达,其可能通过多条信号通路参与AD的发展过程。