下丘脑弓状核微量注射NMDA受体拮抗剂和蛋白激酶抑制剂对神经病理性痛觉过敏的抑制作用

目的观察大鼠下丘脑弓状核（ARC）内微量注射NMDA受体拮抗剂及受体后蛋白激酶抑制剂对神经病理性痛觉过敏的影响,探索脊髓上水平痛觉过敏的中枢敏感化机制。方法建立大鼠坐骨神经部分结扎（PSL）神经病理性疼痛模型,采用压爪缩腿法和辐射热缩腿法测定大鼠的机械痛阈和热痛阈,观测ARC内微量注射MK801（NMDA受体非竞争性拮抗剂）、APV（NMDA受体竞争性拮抗剂）、PP2（Src家族蛋白酪氨酸激酶抑制剂）、GF109203X（蛋白激酶C抑制剂）后70min内PSL模型大鼠痛阈的变化。结果 PSL模型大鼠术后数小时痛阈即明显降低（P〈0.05）,出现机械痛敏和热痛敏。ARC内微量注射MK801（5nmol）、APV（1.5nmol）后,大鼠机械痛阈和热痛阈明显升高,痛敏现象明显减轻（P〈0.05）;ARC内注射PP2（5nmol）、GF109203X（0.04nmol）后,痛阈升高幅度更大,痛敏现象也明显减轻（P〈0.05）。结论下丘脑弓状核内的NMDA受体及受体后蛋白酪氨酸激酶、蛋白激酶C在痛觉过敏的脊髓上中枢敏感化的形成和维持过程中可能起重要的作用。     

外周炎症性疼痛诱导下丘脑弓状核c-fos表达及其机制

目的观察下丘脑弓状核（ARC）神经元在炎症性痛觉过敏中的激活状态,分析NMDA受体在ARC神经元活动与痛觉过敏中的作用。方法用完全弗氏佐剂建立大鼠炎症性痛觉过敏模型,用辐射热-缩腿法测定痛阈,用c-fos检测神经元激活状态,用体视学无偏差测量系统计数免疫阳性细胞,用MK801观测NMDA受体的作用。结果佐剂组的痛阈均有明显下降（P〈0.05）,ARC中Fos蛋白阳性细胞计数明显上调（P〈0.05）;在侧脑室微量注射MK801后痛阈可恢复至正常水平,ARC中Fos蛋白阳性细胞计数回落接近正常水平。生理盐水组在这两方面都无明显变化。结论 ARC神经元的激活对炎症性痛觉过敏的产生和维持有重要作用,该作用主要通过NMDA受体介导。中枢敏感化也可发生在脊髓以上的高位痛觉调节中枢。     

大鼠侧脑室微量注射硝普钠和亚甲基蓝对痛觉调制作用的影响

目的 观察侧脑室微量注射硝普钠和亚甲基蓝对大鼠痛阈的影响,分析和探讨中枢神经系统的一氧化氮（NO）在大鼠痛觉调制中的作用和作用机理。方法 本实验以钾离子透入引起大鼠甩尾的电流强度（mA)作为痛反应指标,研究大鼠侧脑室内微量注射硝普钠（SNP）、亚甲基蓝（MB）、血红蛋白（Hb)等,对大鼠痛阈的影响。结果 侧脑室微量注射NOU前体L－Arg及供体物质SNP均引起明显的痛敏效应。而注射SNP和Hb混合液大鼠痛阈无显著性改变。微量注射L－NAME和MB后大鼠痛阈升高非常显著,侧脑室微量注射MB和L－Arg混合液后,大鼠痛阈较单纯注射MB组表现出明显降低的趋势,但和L－Arg组相比大鼠痛阈升高明显。结论（1）提高中枢神经系统内NO水平具有明显的痛敏效应,而降低中枢神经系统NO水平表现出显著镇痛作用。（2）中枢神经系统NO对大鼠痛觉的调制作用至少一部分是通过NO－cGMP途径实现的。     

脊髓NMDA受体对心包内注射缓激肽诱发大鼠心脏-躯体运动反射的调节作用

目的：观察鞘内注射N-甲基-D-天门冬氨酸（NMDA）受体激动剂NMDA及拮抗剂5-甲基-二氢-丙环庚烯-亚胺马来酸（MK801）对心包内注射缓激肽（BK）诱发大鼠心脏-躯体运动反射 (CMR) 的影响,探讨脊髓水平的谷氨酸受体亚型-NMDA对心脏伤害性感受的调节作用。方法：26只雄性SD大鼠随机分为BK组(n=8)、BK+NMDA组(n=6)、BK+MK801组(n=6)及BK+MK801+NMDA组(n=6),观察大鼠心包内注射BK诱发的CMR及鞘内注射药物后CMR的变化,CMR以背斜方肌肌电（EMG）反应为观测指标。结果：心包内间隔40 min 重复4次注射BK诱发的CMR无明显改变（P>0.05）;鞘内注射NMDA后EMG由基础对照的100%增加到（149.86±8.54）%,射前后EMG比较差异有统计学意义（P<0.05）;鞘内注射MK801后EMG由基础对照的100%减少到（96.22±2.31）%,但注射前后EMG比较差异无统计学意义（P>0.05）;鞘内联合注射MK801和NMDA,EMG由基础对照的100%增加到（103.09±4.13）%,但注射前后EMG比较差异无统计学意义（P>0.05）。结论：心包内注     

MK-801及CNQX 对尾末端截断后小鼠血清褪黑素含量变化的影响

 目的观察谷氨酸N-甲基-D-天冬氨酸（NMDA）受体拮抗剂5-甲基二氢丙环庚烯亚胺马来酸（MK-801）、а-氨基3-羟基5-甲基4-异恶唑丙酸/海人藻氨酸（AMPA/Kainate）受体拮抗剂6-氰基-7-硝基喹喔啉-2,3-二酮（CNQX）对尾末端截断后小鼠血清褪黑素（MLT）含量变化的影响,为进一步研究截肢后中枢的可塑性变化提供依据。方法用ELISA 法测定尾末端2.5 cm截断后2 h小鼠血清MLT 含量,并观察静脉注射MK-801、CNQX 对断尾后小鼠血清MLT含量变化的影响。结果与对照组比较,断尾后2 h小鼠血清MLT含量降低;MK-801、CNQX 分别拮抗断尾引起的小鼠血清MLT 含量的降低。结论断尾后2 h小鼠血清MLT含量降低;NMDA受体、AMPA/Kainate 受体参与断尾引起小鼠血清MLT 含量降低的过程。     

谷氨酸对大鼠离体下丘脑内侧基底部弓状核神经元电活动的影响

目的 探讨谷氨酸(Glu)对大鼠下丘脑弓状核(ARC)神经元电活动的影响.方法 采用电生理学方法,细胞外记录大鼠离体下丘脑内侧基底部ARC神经元的电活动,观察Glu及N-甲基-D-门冬氨酸受体激动剂NMDA对ARC神经元放电的影响.结果 Glu(200 μmol/L)可使ARC神经元电活动增强,ARC神经元放电频率由给药前的(1.26±0.31)Hz增加至(1.78±0.59)Hz;NMDA(25 μmol/L)也可使ARC神经元电活动增强,ARC神经元放电频率由给药前的(1.27±0.22)Hz增加至(2.36±0.68)Hz;NMDA受体拮抗剂MK-801(100 μmol/L)能阻断Glu、NMDA引起的ARC神经元放电频率加快效应.结论 Glu、NMDA均可显著增强ARC神经元电活动,在下丘脑弓状核神经元电活动的调节中有Glu机制的参与.     

脊髓NK1受体与非NMDA受体对大鼠心脏-躯体运动反射的调节作用

目的观察脊髓水平神经激肽-1（NK1）受体和非N-甲基-D-天门冬氨酸（NMDA）受体对大鼠心脏-躯体运动反射的调节作
用。方法鞘内注射NK1受体激动剂Sar-SP及拮抗剂CP-96345与非NMDA受体激动剂NMDA及拮抗剂6,7-二硝基喹喔啉-2,
3-二酮（DNQX）,观察心包内注射缓激肽（BK）诱发大鼠心脏-躯体运动反射的变化,该反射以背斜方肌肌电（EMG）为观测指
标。结果鞘内注射NK1受体激动剂Sar-SP后,对心包内BK诱发的背斜方肌EMG有明显的易化作用（P<0.05）,这种易化作用
被鞘内预先注射NK1 拮抗剂CP-96345 完全阻断;鞘内注射非NMDA受体激动剂NMDA后,对心包内BK诱发的背斜方肌
EMG有显著的易化作用（P<0.05）,这种易化作用被鞘内预先注射非NMDA受体拮抗剂DNQX部分阻断;鞘内联合注射Sar-SP
与NMDA,对EMG的易化作用较单一注射Sar-SP或NMDA显著增强（P<0.05）。结论脊髓水平的NK1受体与非NMDA受体
参与了大鼠心脏-躯体运动反射的调节。
     

家兔中脑导水管周围灰质中阿片肽及去甲肾上腺素对皮肤痛与内脏痛的影响

以电刺激内脏大神经或耳尖部皮肤测定清醒家兔内脏或皮肤痛阈,观察中脑导水管周围灰质(PAG)中阿片肽和去甲肾上腺素在内脏镇痛和皮肤镇痛中的作用。结果:PAG内微量注射α受体阻断剂酚妥拉明(5μg/μl),皮肤痛阈明显升高,并增强和延长电针镇皮肤痛,但内脏痛阈无明显变化。微量注射β受体阻断剂普萘洛尔(5μg/μl),内脏痛阈和皮肤痛阈均无变化。PAG内微量注射阿片受体激动剂依托啡(1 μg/μl)后,内脏痛阈及皮肤痛阈明显上升,且可被纳洛酮(0.4mg/kg)iv所翻转。提示PAG内去甲肾上腺素α受体参与皮肤痛的调制,而阿片肽参与皮肤痛和内脏痛的调制。     

AMPA受体和NMDA受体在leptin参与神经病理性痛机制中的作用

【目的】 观察离子型谷氨酸受体AMPA受体和NMDA受体在leptin参与神经病理性痛机制中的作用.【方法】 用膜片钳全细胞模式记录leptin是否影响正常大鼠脊髓切片背角Ⅱ层神经元AMPA受体和NMDA受体介导的电流;大鼠鞘内注射leptin,持续14 d,在第1,3,7,14天检测热痛阈和机械痛阈,在第14天处死动物,用免疫组化法和western blot检测脊髓背角AMPA受体和NMDA受体的表达.【结果】 灌流液中加入leptin能增加NMDA受体介导的电流,并有剂量依赖性,100 nmol/L leptin的作用最显著,leptin对AMPA受体介导的电流无影响;大鼠鞘内注射leptin,在第14天明显降低热痛阈和机械痛阈;leptin增加了脊髓背角NMDA受体亚单位NR1的表达,但是对AMPA受体亚单位GluR1的表达无影响,NMDA受体拮抗剂MK-801可抑制并逆转leptin诱导的痛行为及抑制leptin诱导的NR1表达增多.【结论】 Leptin可能通过影响NMDA受体参与神经病理性痛的发生.     

组胺受体3拮抗剂对神经病理性疼痛的治疗作用

目的探讨脑室内注射组胺受体3拮抗剂对神经病理性疼痛大鼠的治疗作用。方法选择左侧坐骨神经部分结扎致神经病理性疼痛大鼠30只．脑室内给药。大鼠随机分为脑室内对照组、脑室内组胺受体3（H3R）拮抗剂-thioperamide组（50μg）、脑室内H3R激动剂R-α-甲基组胺组（RAMH,4μg）,评价注药后痛阈的改变。结果与对照组相比,脑室内给予thioperamide 10min后起效,持续至100min,能显著提高大鼠对机械性刺激的痛阈（P〈0．011．缓解疼痛。同时予RAMH30-50min后引起疼痛且能加重痛觉过敏（P〈0．05）。结论神经病理性疼痛时．采用组胺受体3拮抗剂脑室内给药能提高痛阈,可以缓解疼痛。     

室旁核内iGluRs对旋转刺激诱发的大鼠心血管反应的影响

[目的]探讨下丘脑室旁核(PVN)内的促离子型谷氨酸受体(iGluRs)对旋转刺激诱发的心血管反应的影响.[方法]以旋转刺激为应激刺激,在电脑控制的代谢笼内记录大鼠清醒状态、自由活动时的心血管活动变化情况的同时,分别向PVN局部灌流2种离子型谷氨酸受体阻断剂,观察其对旋转刺激诱发的心血管反应的影响.[结果]向PVN区灌流N-甲基-D-天冬氨酸(NMDA)受体阻断剂MK-801,再给予旋转刺激,大鼠血压从(99.9±0.5)mmHg上升至(104.5±1.0)mmHg,心率从(357.3±9.1)次/min加快至(387.2±8.5)次/min,MK-801旋转组大鼠血压及心率的增加反应与对照组相比较明显受到抑制;向PVN区灌流非NMDA受体阻断剂CNQX,再给予旋转刺激,大鼠血压从(104.9±2.3)mmHg上升至(113.2±1.3)mmHg,心率从(375.2±5.7)次/min加快至(421.1±5.4)次/min,CNQX旋转组大鼠心血管反应未受到明显的影响.[结论]PVN内NMDA受体参与旋转刺激诱发的心血管反应的调节过程.     

离子型谷氨酸受体拮抗剂MK-801和NBQX对胶原诱导型关节炎大鼠的镇痛作用

目的：在大鼠胶原诱导关节炎( collagen-induced arthritis,CIA )模型中,使用不同离子型谷氨酸受体拮抗剂,即N-甲基-D-天冬氨酸（N-methyl-D-asparticacid,NMDA）受体拮抗剂MK-801及非NMDA受体拮抗剂NBQX,通过阻断谷氨酸与相应受体结合而产生镇痛作用,进而研究两种拮抗剂在镇痛作用方面对大鼠行为的影响,以及对分子生物学指标产生的影响,即应用上述拮抗剂后大鼠血清及组织液中环氧化酶-2（cyclooxygenase-2,COX-2)和Janus激酶-3(Janus-activated kinase,Jak3)等表达的变化。方法： 建立大鼠CIA模型,通过体内研究,向大鼠关节腔内注射不同离子型谷氨酸受体拮抗剂MK-801和NBQX,观察CIA大鼠行为和分子生物学指标的改变。行为评估内容包括大鼠的触痛及关节肿胀情况,触痛情况使用机械性缩足阈值（paw-withdrawal threshold,PWT）来评价,同时使用排水法测足容积来评估肿胀情况。分子生物学指标相关研究即由大鼠心脏采血,并取组织匀浆液,检测血清及组织液中在拮抗剂使用后COX-2和Jak3等表达的变化。结果： MK-801和 NBQX在单独或联合使用时均能表现出镇痛作用(P＜0.01), 且镇痛作用持续时间均大于24 h,两种拮抗剂均在注射后4 h达到镇痛作用的峰值,且NBQX比MK-801镇痛作用更强（P＜0.05）;MK-801和 NBQX在单独及联合使用时,均不能改变CIA大鼠的足跖肿胀（P＞0.05）;MK-801可降低CIA大鼠COX-2的表达（P＜0.01）,NBQX则未见此作用（P＞0.05）;MK-801和NBQX对CIA大鼠的Jak3表达增高均未见产生影响（P＞0.05）。结论： MK-801及NBQX均可产生镇痛作用,且NBQX比MK-801表现更强,但两者对肿胀均未见效果;NMDA受体与COX-2炎症通路有一定的交叉作用,而对于Jak3尚不能发现其与离子型谷氨酸信号通路存在交叉作用。     

NMDA受体和IP3受体介导NMDA诱导的小脑颗粒神经元内Ca2＋超载

目的探讨N-甲基-D-天门冬氨酸（NMDA）诱导的小脑颗粒神经元（CGNs）钙超载与NMDA受体（NMDAR）及细胞内钙库受体三磷酸肌醇受体（IRR）和兰尼定受体（RyR）之间的关系。方法取出生后8dSD大鼠小脑进行颗粒神经元体外培养。用NMDA（100μmol／L）急性损伤神经元,在激光扫描共聚焦显微镜（LSCM）扫描开始前30min,或扫描开始后4,9,14min分别加入NMDAR、IRR、RyR拮抗剂MK．80l、2-APB和DAN,检测神经元内Ca^2＋浓度的动态变化。结果MK-801预孵育神经元经NMDA急性刺激后,神经元内ca2’的荧光强度不再升高,NMDA刺激后加入MK-801,上升的ca^2＋水平立即下降,最终下降至基线水平;NMDA急性刺激2-APB预孵育神经元,神经元内ca^2＋的荧光强度升高,但升高幅度明显低于未经NMDA刺激组,NMDA刺激后加入2-APB,细胞内升高的Ca^2＋水平急剧下降,最终下降至接近基线水平;DAN预孵育的神经元经NMDA急性刺激后,胞内ca^2＋的荧光强度急剧升高,达到NMDA刺激组水平,NMDA刺激后加入DAN,神经元内ca^2＋水平无明显下降。结论NMDA诱导的神经元ca^2＋超载,主要由细胞膜钙通道NMDAR和细胞内钙释放通道IP3R介导,而细胞内钙释放通道RyR不起主导作用．     

实验性癫癎时海马内兴奋性氨基酸受体对内阿片肽基因表达的影响

目的阐明在癫发作与发展中起着重要作用的脑内兴奋性氨基酸类递质和内阿片肽之间的关系。方法应用原位杂交方法观察了青霉素致及海马内微量注射ＮＭＤＡ受体阻断剂ＭＫ－８０１（５－ｍｅｔｈｙ１－１０,１１－ｄｉｈｙｄｒｏ－５Ｈ－ｄｉｂｅｎｚｏ［ａ,ｄ］ｃｙｃｌｏｈｅｐｔａｎ－５,１０－ｉｍｉｎｅｍａｌｅａｔｅ）和非ＮＭＤＡ受体阻断剂ＤＮＱＸ（６,７－ｄｉｎｉｔｒｏｑｕｉｎｏｘａｌｉｎｅ－２,３－ｄｉｏｎｅ）后,大鼠海马内前脑啡肽原和前强啡肽原ｍＲＮＡ表达的变化。结果在青霉素致４ｈ后,海马ＣＡ１区、ＣＡ３区、齿状回前脑啡肽原ｍＲＮＡ和海马ＣＡ３区、齿状回前强啡肽原ｍＲＮＡ的表达明显增加。在青霉素致前分别在海马内微量注射ＭＫ８０１（６μｇ）和ＤＮＱＸ（４μｇ）,则在减弱发作的同时,海马内前脑啡肽原ｍＲＮＡ的表达明显减少,而前强啡肽原ｍＲＮＡ的表达继续增加。结论青霉素致引起大鼠脑内脑啡肽和强啡肽的变化可能和ＮＭＤＡ受体及非ＮＭＤＡ受体对其基因表达的调节有关     

低剂量MK-801对小鼠焦虑、抑郁及学习记忆的影响

目的观察非竞争性NMDA受体拮抗剂地艹卓西平马来酸盐（MK-801）在低剂量时对小鼠焦虑、抑郁以及学习记忆能力的影响。方法将昆明小鼠随机分成对照组和MK-801组,采用高架十字迷宫、强迫游泳实验、悬尾实验、开场实验以及Morris水迷宫等方法,检测药物对小鼠行为的影响。结果与对照组相比,MK-801组抑郁模型中的不动时间减少（P〈0.01）;焦虑模型中在入开臂次数及停留时间的百分比增加（P〈0.01）,入臂总次数与总时间也增加;开场实验中运动能力增加（P〈0.01）;Morris水迷宫中小鼠学习记忆能力下降（P〈0.01）。结论低剂量MK-801并未对小鼠产生抗焦虑以及抗抑郁的效果,但可降低学习记忆能力。     

大鼠孤束核内谷氨酸受体亚型对心脏伤害性感受信息的调控作用

目的：探讨大鼠孤束核(NTS)内谷氨酸受体亚型对心包内注射辣椒素诱发的心脏-躯体运动反射(CMR)的影响,阐明NTS对心脏伤害性信息调控的作用机制。方法：SD大鼠60只随机分为鹅膏蕈氨酸(IBO)组、谷氨酸组、5-甲基二氢丙环庚烯亚胺马来酸（MK-801）组、α-甲基,4-羧基苯丙氨酸（MCPG）组、MCPG联合MK-801组和6,7-二硝基喹喔啉-2,3-二酮（DNQX）组;各组大鼠孤束核内分别微量注射13 mmol•L^-1 IBO　100 nL,100、200、500 mmol•L^-1谷氨酸100 nL,NMDA受体拮抗剂 40和60 mmol•100•^-1 MK-801 100　nL,代谢型谷氨酸受体拮抗剂 25 和50 mmol•L^-1 MCPG 100 nL,25 mmol•L^-1MCPG 50 nL联合40 mmol•L^-1MK-801 50 nL,非NMDA受体拮抗剂20和50 mmol•L^-1 DNQX 100 nL;观察各组大鼠CMR的变化。结果：与对照组比较, IBO组大鼠CMR减少(P<0.05);谷氨酸组随着谷氨酸浓度的增加,大鼠CMR不断增加(P<0.05); MK-801和MCPG组CMR均减少(P<0.05); MCPG联合MK-801组CMR减少(P<0.05); DNQX组CMR无明显变化(P>0.05)。结论：NTS对心脏伤害性感受信息有易化调控作用,这种易化调节作用主要由NMDA和mGluRs受体介导。     

鞘内注射MK-801对骨癌痛小鼠的镇痛作用及脊髓NR2B蛋白表达的影响

目的探讨MK-801连续鞘内注射对骨癌痛小鼠的镇痛作用及脊髓背角N-甲基2-天冬氨酸亚基（NR2B）蛋白表达的影响。方法C3H／HeJ小鼠32只,随机分为4组（n=8）：正常对照组、假手术组、骨癌组＋生理盐水组、骨癌组＋MK-801组。分别测定术后9、12、15、18、21d小鼠机械缩腿阈值（MWT）和热缩腿潜伏期（TwL）;骨癌组＋生理盐水组、骨癌组＋MK-801组分别在肿瘤细胞种植后第10日鞘内给予MK-80110nmol／5μl和生理盐水5μl,每日1次,连续7日,采用免疫组织化学法检测各组脊髓背角NR2B蛋白表达的变化。结果骨癌组＋生理盐水组MWT与TwL显著下降,脊髓背角有大量NR2B阳性表达（P〈0．01）;骨癌组＋MK-801组仅出现轻度痛敏症状,NR2BmRNA表达受到明显抑制（P 〈0．01）。结论NR2B表达上调可能是骨癌痛的发病机制之一,MR-801组可抑制其表达从而发挥一定程度的镇痛作用。