PTEN对髓系白血病细胞VEGF及MMP表达的影响简

 目的 探讨在慢性髓系白血病中与张力蛋白同源的10号染色体缺失的磷酸酶基因(PTEN)对血管内皮生长因子(VEGF)及金属基质蛋白酶(MMP)相互影响及其作用机制。方法 1)研究10例慢性髓系白血病慢性期CML-CP、10例急变期CML-BC及10例正常人骨髓单个核细胞内PTEN、VEGF、MMP-2和MMP-9 mRNA表达水平变化。2)将携带有野生型PTEN和绿色荧光蛋白的腺病毒（Ad-PTEN-GFP）及对照载体腺病毒（Ad-GFP）转染人慢性髓系白血病细胞系K562。MTT检测细胞增殖;荧光定量PCR（FQ-PCR）检测PTEN、VEGF、MMP-2和MMP-9 mRNA水平变化,Western blot及明胶酶谱检测PTEN、p-Akt、VEGF、MMP-2和MMP-9蛋白表达。结果 CML-BC患者中PTEN mRNA表达水平低于CML-CP及正常对照组(P<0.05),而VEGF、MMP-2、MMP-9 mRNA在CML-BC患者中均高于CML-CP及正常对照组(P<0.05)。以MOI=200转染K562细胞3d后Ad-PTEN-GFP组K562细胞内VEGF、MMP-2、MMP-9 mRNA表达水平均明显低于Ad-GPF组和未转染组(P<0.05),PTEN与VEGF、MMP-2、MMP-9 mRNA表达水平负相关,转染Ad-PTEN-GFP组与转染Ad-GFP组比较VEGF、MMP-2、MMP-9 mRNA表达水平分别降低4.80、5.88、5.72倍,p-Akt及VEGF、MMP-2、MMP-9蛋白表达水平分别降低26.0、5.23、2.86、4.76倍。结论 PTEN基因可能通过抑制VEGF、MMP-2、MMP-9表达,抑制髓系白血病细胞血管新生及侵袭。     

野生型PTEN基因增强青蒿琥酯抑制K562细胞的作用

 目的: 探讨野生型PTEN转染人白血病K562细胞系对青蒿琥酯敏感性的影响及其分子作用机制。方法: 将野生型PTEN以腺病毒为载体转染(感染复数为200)人白血病K562细胞(Ad-WT-PTEN),同时以转染空载体腺病毒(Ad)及未转染细胞为对照组,与青蒿琥酯(ART)联合作用,观察野生型PTEN增强青蒿琥酯抑制K562细胞的作用。根据IC₅₀计算PTEN对青蒿琥酯的增敏倍数。以四甲基偶氮唑蓝(MTT)法检测细胞活力,流式细胞术检测细胞凋亡率,real-time PCR检测PTEN 的mRNA水平,Western blot检测PTEN、蛋白激酶B(Akt)及磷酸化Akt(p-Akt)的蛋白水平;caspase活性检测试剂盒检测caspase-3/7的活性。结果: Ad-WT-PTEN转染K562细胞后,对青蒿琥酯敏感性明显增加,依据IC₅₀计算增敏倍数为2.25倍。至第3天,Ad-WT-PTEN +ART组较Ad+ART组细胞活力下降、凋亡率升高。Ad-WT-PTEN转染K562细胞后PTEN 的mRNA及蛋白表达明显增加,p-Akt水平及caspase-3/7活性下调,以PTEN及青蒿琥酯联合作用组下调尤为明显。结论: 野生型PTEN可能通过降低K562细胞Akt磷酸化的水平,并增加caspase-3/7活性,增强细胞对青蒿琥酯的敏感性。     

PTEN对髓系白血病细胞VEGF及MMP表达的影响

目的探讨在慢性髓系白血病中与张力蛋白同源的10号染色体缺失的磷酸酶基因(PTEN)对血管内皮生长因子(VEGF)及金属基质蛋白酶(MMP)相互影响及其作用机制。方法 1)研究10例慢性髓系白血病慢性期CML-CP、10例急变期CML-BC及10例正常人骨髓单个核细胞内PTEN、VEGF、MMP-2和MMP-9 mRNA表达水平变化。2)将携带有野生型PTEN和绿色荧光蛋白的腺病毒(Ad-PTEN-GFP)及对照载体腺病毒(Ad-GFP)转染人慢性髓系白血病细胞系K562。MTT检测细胞增殖;荧光定量PCR(FQ-PCR)检测PTEN、VEGF、MMP-2和MMP-9 mRNA水平变化,Western blot及明胶酶谱检测PTEN、p-Akt、VEGF、MMP-2和MMP-9蛋白表达。结果 CML-BC患者中PTEN mRNA表达水平低于CML-CP及正常对照组(P0.05),而VEGF、MMP-2、MMP-9 mRNA在CML-BC患者中均高于CML-CP及正常对照组(P0.05)。以MOI=200转染K562细胞3d后Ad-PTEN-GFP组K562细胞内VEGF、MMP-2、MMP-9 mRNA表达水平均明显低于Ad-GPF组和未转染组(P0.05),PTEN与VEGF、MMP-2、MMP-9 mRNA表达水平呈负相关,转染Ad-PTEN-GFP组与转染Ad-GFP组比较VEGF、MMP-2、MMP-9 mRNA表达水平分别降低79.12%,82.99%,82.52%,p-Akt及VEGF、MMP-2、MMP-9蛋白表达水平分别降低96.15%,80.88%,65.03%,78.99%。结论 PTEN基因可能通过抑制VEGF、MMP-2、MMP-9表达,抑制髓系白血病细胞血管新生及侵袭。     

盐霉素通过下调miR-221抑制乳腺癌MCF-7细胞增殖的实验观察

目的探讨盐霉素抑制乳腺癌细胞和乳腺癌干细胞增殖与microRNA-221(miR-221)及其调控的PTEN/PI3K/Akt信号通路的关系。方法脂质体转染miR-221模拟物至乳腺癌MCF-7细胞,盐霉素(1μmol/L)处理后检测细胞增殖能力和乳腺球形成能力。筛选miR-221稳转MCF-7细胞,构建裸鼠荷瘤模型,给予盐霉素腹腔注射治疗。实时荧光定量PCR(real-time quantitative PCR,RT-qPCR)检测细胞和皮下瘤组织中miR-221和PTEN mRNA水平,Western blot法检测PTEN、p-Akt以及ALDH1蛋白表达。结果 RT-qPCR结果显示盐霉素(1μmol/L)可明显降低MCF-7细胞中内源性miR-221表达水平(P 0. 05)。与miR-221组相比,Sal-miR-221组乳腺球体积明显变小,数量明显减少(117±9. 4 vs 180±15. 6,P 0. 05);RT-qPCR显示miR-221表达水平明显降低(P 0. 05),PTEN mRNA水平则显著升高(P 0. 05);Western blot结果显示PTEN蛋白表达增高,p-Akt和ALDH1蛋白表达降低。Sal-miR-221组裸鼠异体移植瘤体积呈明显减小趋势;瘤组织内miR-221表达明显低于对照组(P 0. 05),而PTEN mRNA表达明显高于对照组(P 0. 05);PTEN蛋白表达亦明显升高,p-Akt和ALDH1蛋白则降低。结论体内外实验结果表明盐霉素抑制乳腺癌细胞和乳腺癌干细胞增殖,可能是通过下调miR-221促进PTEN表达,抑制PI3K/Akt信号通路实现的。     

脂多糖通过PI3K/Akt/mTOR通路调控巨噬细胞自噬*

 目的： 观察脂多糖对巨噬细胞自噬活化的影响及相关信号通路的探讨。方法: 体外培养巨噬细胞株RAW264.7,分为对照组、饥饿状态激活自噬组、单纯脂多糖（LPS）刺激组、LPS+PI3K抑制剂（hVps34）组和LPS+mTOR抑制剂（雷帕霉素）组。构建荧光真核表达载体pcDNA3.1-GFP-LC3,转染巨噬细胞,通过荧光显微镜观察各组细胞中自噬体形成情况。qRT-PCR方法检测各组中与细胞自噬相关的Atg5、Atg7、LC3-II和Bnip3 mRNA表达水平的改变。利用Western blotting检测LC3-II、p-Akt和p-mTOR蛋白在各组中的表达情况,以评价LPS激活巨噬细胞自噬的分子通路。结果: 成功构建稳定表达GFP-LC3的巨噬细胞,在荧光显微镜下可以观察到自噬在饥饿状态组、LPS+hVps34组和LPS+雷帕霉素组均有明显增强;qRT-PCR检测到Atg5、LC3-II和Bnip3 mRNA的表达在饥饿状态组、LPS+hVps34组和LPS+雷帕霉素组均有明显增强,而在LPS组中略微下降;Western blotting 检测发现p-Akt在饥饿状态组、LPS组和LPS+雷帕霉素组中表达明显升高;p-mTOR在饥饿状态组、LPS+hVps34组和LPS+雷帕霉素组表达明显下降;LC3-II的表达在饥饿状态组、LPS+hVps34组和LPS+雷帕霉素组中表达要高于对照组和LPS组。结论: LPS参与巨噬细胞自噬的调控,其可能的信号通路为PI3K/Akt/mTOR通路,但仍存在其它有效的调控通路。     

雷帕霉素增强子宫内膜癌细胞对阿霉素的敏感性

目的: 探讨mTOR抑制剂雷帕霉素联合阿霉素对子宫内膜癌细胞株的影响及其机制。方法: 选用2株不同 PTEN 状态的子宫内膜癌细胞株:HEC-1A( PTEN 野生型)和Ishikawa( PTEN 突变型),分别给予低浓度雷帕霉素预处理24 h,再使用阿霉素,MTT法检测联合用药前后阿霉素24 h IC₅₀及细胞生存率的变化,计算两药的联合指数;流式细胞术检测细胞凋亡率, Western blotting观察PI3K/Akt通路的蛋白磷酸化和凋亡蛋白caspase-3的变化。结果: (1)雷帕霉素或阿霉素单药使用时均明显抑制2株子宫内膜癌细胞的生长。抑制率与时间、剂量呈正相关。使用10 nmol/L雷帕霉素预处理24 h后,阿霉素作用Ishikawa细胞的IC₅₀由(21.3±3.8)μmol/L降到(11.9±1.2) μmol/L(P<0.05);而HEC-1A细胞的IC₅₀由(14.3±2.8)μmol/L降到(8.2±0.9)μmol/L(P<0.05);2株细胞中阿霉素与雷帕霉素的联合指数均大于1.15,提示在2种细胞株中两药均有协同作用;(2)联合用药后,凋亡率较单药使用组明显升高(P<0.05);同时,p-Akt蛋白表达下降,而活化的caspase-3表达上调。结论: 雷帕霉素能增加子宫内膜癌细胞对阿霉素的敏感性,从而降低肿瘤细胞对药物的耐药性,具有良好的抗肿瘤前景。     

人质膜型唾液酸酶与人红白血病细胞多药耐药相关

目的探讨人质膜型唾液酸酶(Neu3)与人红白血病细胞多药耐药的关系。方法分别或联合柔红霉素(DNR)与唾液酸酶特异性抑制剂(NeuAC2en)处理K562和K562/ADM细胞,MTT法检测细胞生存率;RT-PCR检测多药耐药基因(MDR)、多药耐药相关蛋白(MRP)、06-甲基鸟嘌呤-DNA甲基转移酶(MGMT)、谷胱甘肽S转移酶(GST)、BCL-xl、BAX和BCL-2mRNA表达;Western blot法检测MDR基因蛋白产物P-糖蛋白(P-gp)蛋白表达;TBA法检测唾液酸酶活性。结果与K562细胞相比,K562/ADM细胞对DNR具有一定的抵抗性,NeuAC2en与DNR有协同作用(P<0.01);应用NeuAC2en或DNR后K562和K562/ADM细胞Neu3活性均明显下降,两种药物联合应用Neu3活性下降最明显(P<0.01);相同处理条件下,与K562细胞相比,K562/ADM细胞中Neu3、MDR1、BCL-xl和BCL-2表达增加,BAX无明显变化;应用DNR后,MDR1、Neu3、BCL-xl、BCL-2表达均下降,而DNR与NeuAC2en联合应用,以上基因表达水平下调最明显。...     

白藜芦醇通过影响AKT信号转导增强雷帕霉素对多种乳腺癌细胞株的抗肿瘤活性

mTOR抑制剂雷帕霉素通过介导P13K和ERK-MAPK信号通路发挥其抗肿瘤活性。用雷帕霉素处理乳腺癌细胞(包括对雷帕霉素抵抗的细胞株MDA-MB-231和对雷帕霉素敏感的细胞株MCF-7)可观察到AKT磷酸化有一定程度的增加。白藜芦醇是一种天然植物抗毒素,对多种乳腺癌细胞株均有抑制磷酸化的作用,由此抑制PI3K/AKT通路的激活。在表达野生型PTEN、MCF-7和MDA-MB-231的乳腺癌细胞株中,白藜芦醇对mTOR/p70S6K通路的激活也有较弱的抑制作用。白藜芦醇和雷帕霉素联合使用导致对乳腺癌细胞生长的适度累积性抑制,提示白藜芦醇可能通过抑制AKT信号增强雷帕霉素对肿瘤细胞的生长抑制作用,并阻止雷帕霉素抗药性的发生。实验数据显示PTEN对白藜芦醇的生长抑制效应和与雷帕霉素     

沉默DLL3基因增强白血病K562/ADM细胞对阿霉素的敏感性

目的 探讨沉默Delta-like ligand 3（DLL3）基因对白血病K562/ADM细胞对阿霉素（ADM）耐药性的影响及其分子机制。 方法 将干扰人DLL3基因表达的shRNA质粒和无义对照质粒转染K562/ADM细胞,采用RT-PCR法检测DLL3的mRNA表达水平,采用CCK-8法检测ADM对K562和K562/ADM细胞的毒性作用,采用流式细胞术检测细胞凋亡和细胞内ADM浓度,采用Western blotting方法检测DLL3、谷胱甘肽S转移酶-π（GST-π）和P-糖蛋白（P-gp）的蛋白表达水平。 结果 K562/ADM细胞DLL3的mRNA和蛋白表达水平均显著高于其亲代K562细胞（P<0.05）;ADM对K562和K562/ADM细胞的IC₅₀ 分别为1.08 mg/L和34.93 mg/L;沉默DLL3基因后,K562/ADM细胞的耐药倍数下降至13.12,反转倍数为2.47;尽管抑制DLL3基因表达未对K562/ADM细胞凋亡产生影响,但可下调P-gp和GST-π的蛋白表达水平（P<0.05）,增加K562/ADM细胞内ADM的蓄积量（P<0.05）,从而增强ADM诱导的K562/ADM细胞凋亡（P<0.05）。 结论 沉默DLL3基因可反转K562/ADM细胞对ADM的耐药性,这可能与下调P-gp和GST-π蛋白水平、从而减少K562/ADM细胞内阿霉素蓄积量有关。     

脊髓损伤模型大鼠星形胶质化形成与Akt/mTOR/p70S6K信号通路的激活

背景：既往研究集中于如何促进大鼠脊髓损伤后的神经再生,但对于如何抑制脊髓损伤后星形胶质细胞过度增殖反应的因素、从而改善神经再生的环境研究尚少。 目的：观察Akt/mTOR/p70S6K蛋白激酶信号转导通路对大鼠脊髓损伤后反应性星形胶质化形成的影响,从而为改善脊髓损伤后神经再生环境、修复脊髓损伤提供分子学机制依据。   方法：建立SD大鼠轻型脊髓损伤模型,分为4组：实验组造模后行ATP治疗7 d;对照组造模后行等量生理盐水治疗7 d;干预组造模后行等量的ATP联合雷帕霉素治疗7 d;假手术组椎板切除后行等量生理盐水治疗7 d。分别于造模后1,3,7,14 d采用免疫组化、Western blot法检测Akt、p-Akt、mTOR、p-mTOR、p70S6K、p-p70S6K、胶质纤维酸性蛋白表达变化,并采用 BBB 运动功能评分评价大鼠脊髓损伤后经不同方法治疗后运动功能的恢复情况。  结果与结论：假手术组大鼠脊髓中Akt/mTOR/p70S6K信号通路分子呈低水平表达,在脊髓损伤后其表达增加。外源性ATP可显著增强大鼠受损脊髓中Akt/mTOR/ p70S6K信号分子的表达,而雷帕霉素可明显抑制ATP诱导的表达上调。激活的Akt/mTOR/p70S6K信号通路可显著减弱受损脊髓组织中胶质纤维酸性蛋白的表达、抑制脊髓损伤后过度的星形胶质细胞增生反应,促进脊髓损伤后BBB运动功能评分增加,而雷帕霉素阻碍了由ATP诱导的上述效应。结果证实,ATP通过诱导Akt/mTOR/p70S6K信号通路激活抑制大鼠脊髓损伤后星形胶质瘢痕的形成,具有改善脊髓损伤后神经再生环境、促进脊髓损伤修复和改善神经功能的潜能,此信号通路是治疗脊髓损伤的重要干预环节。 中国组织工程研究杂志出版内容重点：肾移植;肝移植;移植;心脏移植;组织移植;皮肤移植;皮瓣移植;血管移植;器官移植;组织工程全文链接：     

羟氯喹通过PI3K/Akt通路对系统性红斑狼疮外周血单个核细胞凋亡的作用研究

目的：探讨羟氯喹对SLE患者外周血单个核细胞的凋亡作用及其相关机制。方法：对30例活动期SLE患者及15例正常健康人抽血分离PBMCs细胞进行培养,分为正常对照组、SLE组、羟氯喹5 mg/L、羟氯喹25 mg/L组,MTT法检测细胞生长抑制,采用Annexin V/PI流式细胞仪细胞检测凋亡率,Western blot方法检测BAX、BCL-2、PI3K、pAKt及mTOR等相关蛋白的表达影响。同时加入羟氯喹HCQ 25 mg/L和PI3K/AKT通路抑制剂LY294002 20 μmol/L,作用SLE患者的PBMCs细胞48 h,检测PBMCs细胞生长抑制和凋亡率。结果：SLE组比正常对照组PBMCs细胞生长抑制率和凋亡率显著升高（P<0.05）;与SLE组相比,羟氯喹5 mg/L和25 mg/L组细胞生长抑制率和凋亡率显著升高（P<0.05）。羟氯喹组与SLE组比较,PI3K、pAKt、mTOR、bcl-2的表达明显下降,差异有统计学意义（P<0.05）,bax和caspase-3的表达增加,差异有统计学意义（P<0.05）。PI3K/AKT抑制剂 LY294002能够阻断羟氯喹导致的SLE患者PBMCs细胞凋亡。结论：羟氯喹能够通过PI3K/Akt信号通路促进SLE患者体外PBMCs的凋亡。     

As_2O_3逆转K_(562/ADM)细胞多药耐药的研究

目的　阐述As2 O3 (三氧化二砷 )治疗人红白血病机制。方法　采用人红白血病多药耐药株K562 / ADM作为实验模型 ,研究As2 O3 对该细胞MDR逆转的可能性。结果　①K562 / ADM 细胞对ADM具有明显的抗性 ,与K562 细胞相比 ,抗性倍数约为 4 0倍 ,而两者对As2 O3 的IC50 接近 ,无显著差异 ;②低毒剂量的As2 O3 (1 0 μmol/L)与ADM(4 0 μg/ml)联合运用 ,可升高细胞内ADM的浓度 ,降低细胞对ADM的IC50 ,使该细胞对ADM的抗性有数倍逆转。结论　As2 O3 是一种有效的MDR逆转剂。     

PI3K/Akt/mTOR信号通路在巨噬细胞自噬及动脉粥样硬化斑块不稳定中的作用

 目的：探讨磷脂酰肌醇3-激酶（PI3K）/蛋白激酶B(Akt)/哺乳动物雷帕霉素靶蛋白(mTOR)信号通路在巨噬细胞自体吞噬以及动脉粥样硬化斑块不稳定中的作用。方法：利用Akt抑制剂康士得（20 μmol/L）、mTOR抑制剂雷帕霉素（10 nmol/L）及mTOR-siRNA（30 nmol/L）体外处理小鼠RAW 264.7 巨噬细胞株 48 h后,透射电镜观察巨噬细胞自噬体的变化,细胞免疫荧光法及Western blotting法检测微管相关蛋白LC3-II表达,实时荧光定量qRT-PCR和Western blotting法检测Akt、mTOR及自噬相关蛋白Beclin 1的表达,ELISA检测巨噬细胞分泌炎症因子水平。体内实验中, 24只雄性新西兰兔给予球囊损伤+ 1%胆固醇喂养8周,然后随机分为对照组、康士得（1.0 mg·kg-1·d-1）组和雷帕霉素（0.5 mg·kg-1·d-1）组,每组8只,干预4周。血管内超声（IVUS）检测斑块的影像学特征,透射电镜观察斑块中巨噬细胞超微结构的改变,免疫荧光法检测微管相关蛋白LC3-II表达,免疫组织化学法检测巨噬细胞Akt和mTOR的蛋白表达。 结果：与对照组比较,康士得、雷帕霉素及mTOR-siRNA干预巨噬细胞后,透射电镜下观察到自噬体明显增多,微管相关蛋白LC3-II和自噬相关蛋白Beclin 1的表达水平明显上调,而Akt及mTOR 的mRNA及蛋白表达水平明显减少,巨噬细胞分泌的IL-10明显降低,而IFN-γ的分泌显著增加。体内实验： IVUS显示,与对照组比较,康士得组及雷帕霉素组的外弹性膜面积（EEMA）、斑块面积（PA）及斑块负荷（PB）明显减少,透射电镜下观察到巨噬细胞中自噬体增加,组织免疫荧光法示LC3-II明显增加,HE染色显示斑块纤维帽的厚度明显增加,内、中膜厚度显著减低,组织免疫组化染色显示巨噬细胞RAM-11及p-mTOR染色显著减少。结论：选择性抑制PI3K/Akt/mTOR信号通路能诱导巨噬细胞自噬,减少斑块巨噬细胞的浸润, 抑制炎症反应进而稳定动脉粥样硬化易损斑块。     

腺病毒介导的shRNA下调PTEN表达对活化肝星状细胞骨架蛋白F-actin的影响

目的:探讨腺病毒介导的shRNA下调第10号染色体缺失的磷酸酶张力蛋白同源物(PTEN)基因表达对体外培养的活化肝星状细胞(HSC)纤丝状肌动蛋白(F-actin)的影响。方法:体外培养大鼠活化HSC(HSCT6),将携带靶向PTEN的RNA干扰序列[短发夹RNA(shRNA)]并表达绿色荧光蛋白(GFP)的重组腺病毒AdshRNA/PTEN及仅表达GFP的对照空病毒Ad-GFP转染HSC,实时荧光定量PCR及Western blotting实验检测HSC的PTEN mRNA及蛋白表达;利用激光扫描共聚焦显微镜检测HSC的形态、F-actin的分布及荧光强度、伪足以及应力纤维的变化,并采用钙荧光探针Rhod-2/AM负载检测HSC内Ca~(2+)浓度的变化。实验分为对照(control)组(在腺病毒转染步骤以DMEM代替腺病毒液)、Ad-GFP组(转染表达GFP的空病毒Ad-GFP)和Ad-shRNA/PTEN组(转染重组腺病毒Ad-shRNA/PTEN)。结果:靶向PTEN的shRNA成功转染体外活化HSC,显著下调HSC的PTEN mRNA及蛋白表达(P0.05);PTEN表达下调使活化HSC呈星形向四周伸展,F-actin排列紧密规则,数量增多,伪足充分向外伸展,应力纤维丝增长增粗;Ad-shRNA/PTEN组F-actin的荧光强度较control组及Ad-GFP组显著增强(P0.05),而control组与Ad-GFP组间差异无统计学显著性;Ad-shRNA/PTEN组HSC内Ca~(2+)浓度较control组及Ad-GFP组明显升高(P0.05),而control组与Ad-GFP组间差异无统计学显著性。结论:PTEN表达下调使体外活化肝星状细胞骨架蛋白F-actin的形成及细胞骨架的重构增强,并增加了HSC内的Ca~2浓度。     

三氧化二砷联合顺铂抑制C6胶质瘤细胞增殖的实验研究

目的探讨三氧化二砷(As2O3)联合顺铂(CDDP)抑制C6神经胶质瘤细胞增殖情况及其分子机制。方法体外实验采用MTT法检测对C6神经胶质瘤细胞的抑制率,流式细胞法检测C6胶质瘤细胞的凋亡及周期,Western blot检测caspase-3、PTEN、PI3K、Akt蛋白表达水平;体内实验采用免疫组化法检测caspase-3、IκB-α调控因子的表达,并观察大鼠的生存情况。结果 As2O3、CDDP及联合应用分别作用于C6神经胶质瘤细胞24 h后的细胞增殖最大抑制率分别为34.37%、31.73%和76.40%,其相应药物浓度分别为12.5、10.0、(12.5+10.0)μmol/L;两者联用后对C6胶质瘤细胞作用24 h后的凋亡率分别为从单独用药时的(4.60±1.12)%、(14.59±0.79)%提高到(36.13±1.55)%;采用PI单染检测的细胞周期也进一步证明了联合用药增加了C6细胞的周期抑制作用。Caspase-3、PTEN蛋白在联合组C6胶质瘤细胞中表达显著上调,而PI3K、Akt蛋白在联合组C6胶质瘤细胞中表达下调;免疫组化法检测结果显示,caspase-3调控因子在联合组用药的C6胶质瘤细胞中的表达上调,而IκB-α调控因子表达下调;但体内实验表明,在18 d观察期内各组大鼠的生存期无明显差异(P=0.2531)。结论 As2O3联合CDDP通过上调caspase-3和PTEN,下调PI3K、Akt及IκB-α抑制胶质瘤细胞体内外的生长。     

人胚胎干细胞Pten基因表达及PI3K/Akt/mTOR信号通路下游蛋白的磷酸化

背景：各种磷酸化蛋白质表达水平对人胚胎干细胞维持未分化状态或定向分化的影响逐渐成为人胚胎干细胞的研究热点,研究发现磷酸化蛋白质表达水平可能决定着人胚胎干细胞的命运。 目的：对PI3K/Akt途径下游的关键蛋白磷酸化水平进行检测,寻找PI3K/Akt途径中能够维持人胚胎干细胞未分化状态的下游蛋白。 方法：用胎鼠成纤维细胞作为饲养层,二维培养的方法培养人胚胎干细胞,胶原酶消化后待测;以饲养层细胞、K562细胞株为对照。观察人胚胎干细胞生长状态;RT-PCR检测Pten基因表达;Western Blot检测p-PTEN、p-mTOR、p-P70S6K、p-4E-BP1 4种蛋白的表达。 结果与结论：人胚胎干细胞在未分化状态时Pten mRNA表达高于肿瘤细胞K562,而且Pten抑制的mTOR信号通路中关键蛋白表达均明显低于K562,尤其以p-4E-BP1表达最低。提示PI3K/Akt/mTOR信号通路下游磷酸化蛋白在人胚胎干细胞活性较低,如果抑制负调节蛋白PTEN或直接激活该通路正调节关键蛋白,可能会加快人胚胎干细胞增殖、减少凋亡,进而为定向分化、再生医学提供更多的细胞来源。