TNF-α单克隆抗体治疗大鼠肝肺综合征的机制研究

目的：探讨肿瘤坏死因子-α抗体（TNF-α-McAb）抑制肝肺综合征大鼠TNF-α作用后肺组织诱导型一氧化氮合酶(iNOS)的表达情况,从而探讨TNF-α单克隆抗体对肝肺综合症治疗作用的机制。方法：采用胆总管结扎（CBDL）致大鼠肝肺综合征模型,将60只雄性SD大鼠随机分成假手术组、模型组和TNF-α-McAb干预组。采用HE染色观察肺组织病理变化,采用RT-PCR方法检测iNOS在肺组织中mRNA表达水平,免疫组织化学方法检测iNOS在肺组织中分布及含量的动态变化,采用Western blotting方法检测iNOS在肺组织中蛋白表达情况。结果：肺组织病理显示干预组病理改变炎症反应较模型组轻,TNF-α-McAb干预组大鼠肺组织中iNOS mRNA的表达、蛋白含量明显低于模型组。结论：肿瘤坏死因子-α单克隆抗体通过抑制iNOS的表达对肝肺综合征起到治疗作用。     

抗TNF-α单克隆抗体对大鼠肝肺综合征的治疗作用

目的:探讨抗肿瘤坏死因子-α单克隆抗体(TNF-αmAb)对肝肺综合征(HPS)大鼠的治疗作用。方法:采用胆总管结扎(CBDL)建立大鼠HPS模型,将60只雄性SD大鼠随机分为假手术组、模型组和干预组。模型组:分别于结扎后1、2、3、4及5周麻醉动物(每个时间点6只大鼠);干预组:于结扎后第2周,开始腹腔注射抗TNF-αmAb(0.1mg/kg.2d),干预后1、2、3及4周麻醉动物(每个时间点6只大鼠);假手术组(6只大鼠)与5周模型组动物同批麻醉,留取各组动物的肝组织,分别行HE和Masson染色后,观察肝组织病理变化。抽取动脉血进行血气分析,计算肺泡、动脉氧分压差的变化。抽取各组动物的静脉血并分离血清,检测肝功能、内毒素、TNF-α、NO的水平。结果:干预组肝组织的炎症和纤维化明显减轻,动脉血气分析显示干预组动脉-肺泡氧分压差明显减少(P0.05),肝功能、内毒素、TNF-α及NO的水平较模型组明显好转(P0.05)。结论:抗TNF-αmAb对HPS大鼠具有治疗作用。     

高压氧处理对大鼠大脑缺血缺氧再灌注损伤保护作用的研究

目的 研究高压氧处理对大鼠大脑组织缺血缺氧再灌注损伤的保护作用及其可能机制。方法雄性SD大鼠32只随机分成假手术对照组（n=4）、线栓模型组（n=14）和高压氧治疗组（n=14）。Bederson方法评定大鼠神经功能;TTC染色测量大鼠脑组织梗死体积;免疫组化染色测定大鼠脑组织中TNF-α和NF-κB p65表达量;Western blot检测大鼠脑组织中NF-κB p65含量。结果 与假手术对照组大鼠比较,线栓模型组和高压氧治疗组大鼠的神经功能均有损害,并出现明显的局灶性梗死（P<0.05）;与线栓模型组比较,高压氧治疗组大鼠神经功能损害较轻,梗死面积也较小（P<0.01）。与假手术对照组大鼠比较,线栓模型组和高压氧治疗组大鼠大脑组织TNF-α和NF-κB p65表达量（IOD值）均较低（P<0.01）,但高压氧治疗组降低更为明显（P<0.01）。Western blot测定显示,经高压氧处理7d后,大鼠大脑额叶皮层内NF-κB p65相对表达量明显降低（P<0.01）。结论 高压氧治疗可能通过下调TNF-α和NF-κB p65表达减少实验性缺血缺氧再灌...     

沙立度胺对大鼠肝纤维化核因子-κB和肿瘤坏死因子-α表达的影响

目的： 观察沙立度胺抗大鼠肝纤维化的疗效和对NF-κB和TNF-α表达的影响。方法： 四氯化碳腹腔注射诱导大鼠肝纤维化模型，治疗组于造模同时用沙立度胺10 mg·kg^-1·d^-1和100 mg·kg^-1·d^-1灌胃8周。观察肝组织病理学改变，检测肝功能、血清肝纤维化指标及肝组织羟脯氨酸含量，免疫组化检测NF-κB p65、α-SMA 在肝内的表达和分布，Western blotting检测肝组织NF-κB p65、IκBα、TNF-α蛋白的表达，RT-PCR检测肝组织TNF-α mRNA表达。结果： 高剂量沙立度胺治疗组肝脏炎症及纤维化程度低于模型组；其ALT、AST水平,HA、LN及羟脯氨酸含量，肝组织细胞核NF-κB p65和肝组织α-SMA蛋白表达，以及肝组织TNF-α mRNA和蛋白表达均低于模型组(P<0.01）；而PA水平和细胞质中IκBα蛋白表达高于模型组(P<0.01)。结论： 沙立度胺可有效地抑制实验性大鼠肝纤维化的发展，通过抑制IκB解离和降解从而减弱NF-κB通路对TNF-α表达的诱导可能是它发挥疗效的机制之一。     

LPS致大鼠肺泡巨噬细胞NF-κB促进TNF-α分泌

目的: 观察脂多糖（LPS）致大鼠肺泡巨噬细胞（AMs）中核因子NF-κB活性及其调控肿瘤坏死因子-α（TNF-α）分泌的作用。 方法: LPS作用大鼠AMs后，用电泳迁移率改变分析法（EMSA）测NF-κB活性；用特异的反义寡核苷酸阻断NF-κB亚基（p65）后，Western blotting检测p65表达变化；ELISA法检测细胞上清中TNF-α的含量。 结果: 于LPS作用AMs后4 h，NF-κB活性达到峰值，24 h仍维持在高水平；作用后4 h上清中TNF-α的含量达到峰值。反义寡核苷酸阻断NF-κB亚基（p65）表达后，LPS致AMs上清中TNF-α的含量显著低于未阻断组（P<0.01）。结论: LPS致大鼠AMs中NF-κB正向调控TNF-α分泌。     

“失血加LPS”大鼠肺脏IκBα和TLR4基因表达及参麦的肺脏保护作用

目的： 探讨参麦注射液的抗休克效果及其作用机制。 方法： 大鼠随机分为单纯失血性休克（HS）组、失血加脂多糖（HS+LPS）组、地塞米松（HS+LPS+Dex）组和参麦注射液（HS+LPS+SM）组。HS+LPS组大鼠模型复制：首先，大鼠放血至MAP 40 mmHg,维持10 min（失血性休克），然后舌下静脉注射LPS（1.5 mg/kg）。4h后留取肺脏组织,RT-PCR法测定IκBα和TLR4 mRNA表达、ELISA法测TNF-α含量，并进行肺脏组织电镜观察。 结果： HS+LPS+SM组TLR4 mRNA表达明显低于HS+LPS组（P<0.05）；HS+LPS+SM组IκBα mRNA表达明显高于HS+LPS组（P<0.05）；HS+LPS+SM组肺脏组织匀浆TNF-α含量明显低于HS+LPS组（P<0.05）；HS+LPS+SM组肺组织病理损伤显著轻于HS+LPS组。 结论： 参麦注射液能够下调肺脏组织中TLR4 mRNA表达，同时上调IκBα的表达，进而抑制促炎介质TNF-α释放，提示参麦注射液可能通过调节NF-κB信号转导途径抑制炎症反应而对机体细胞起保护作用。     

黄芩苷对急性肺损伤大鼠炎性因子表达的影响

目的探究黄芩苷对急性肺损伤大鼠肺组织炎性因子表达的影响。方法将56只雄性SD大鼠随机分为对照组、黄芩苷组与模型组,每组又细分为1 h、4 h与8 h三个亚组,每组8只,采用腹腔注射LPS(10 mg/kg)建立大鼠肺损伤模型。HE染色观察肺组织病理形态学改变,测定并计算各组大鼠肺湿/干重比,免疫组织化学法测定肺组织NF-κB水平,酶联吸附法检测IL-1β、IL-8及TNF-α水平。结果 HE染色结果显示,模型组大鼠肺组织炎性细胞浸润明显,肺泡结构损坏严重;与模型组相比,同一时间点黄芩苷组大鼠炎性细胞浸润减轻,肺泡结构较为完整。与模型组相比,同一时间点黄芩苷组大鼠肺湿/干比重显著降低,肺组织NF-κB蛋白表达的平均光密度值显著降低,血清IL-1β、IL-8及TNF-α的表达水平显著降低(P<0.05)。结论黄芩苷能够通过抑制肺部炎症反应,降低急性肺损伤大鼠的肺组织损伤程度。     

TNF-α与香烟烟雾在诱导气道上皮细胞株黏蛋白表达的相互作用

目的 探讨肿瘤坏死因子TNF-α与香烟提取物共同诱导气道黏液高分泌的相互关系及作用特点。方法 培养的人气道上皮细胞BEAS-2B,转染核转录因子（NF）-κB"decoy"寡核苷酸（ODNs）,并以乱序NF-κB ODNs为对照转染组,各组均分别予以TNF-α、10%香烟提取物（CSE）单独刺激及共同刺激,以Western blot、ELISA及RT-PCR法检测各组刺激前后磷酸化表皮生长因子受体（p-EGFR）、黏蛋白（MUC5AC）蛋白及mRNA水平。结果 转染乱序NF-κB ODNs的细胞予以TNF-α、10% CSE刺激后,各组细胞中p-EGFR蛋白水平较对照组升高,伴随MUC5AC蛋白含量及基因转录水平的提高(P<0.05);共孵育组中较单独刺激组升高更为显著（P<0.05）。转染NF-κB"decoy"ODNs组再予以TNF-α刺激,细胞中MUC5AC蛋白含量及mRNA水平与未转染组相比升高不明显,而单用CSE刺激组中的MUC5AC、p-EGFR水平仍有明显升高（P<0.05）;共孵育组显示出与CSE单独刺激组相似的结果。结论 TNF-α、CSE能协同促进气道上皮细胞中黏蛋白合成,转录因子NF-κB主要参与TNF-α所致的MUC5AC表达,而在CSE诱导的效应过程中作用不明显。     

PKC/Raf-1/NF-κB信号通路在低氧诱导大鼠单核细胞表达TNF-α中的作用

目的：研究PKC/Raf-1/NF-κB信号通路在低氧诱导大鼠外周血单核细胞（PBMCs）肿瘤坏死因子α（TNF-α）表达中的作用，探讨低氧与全身炎症反应综合征(SIRS)的关系，为进一步研究老年多器官功能障碍综合征(MODSE)的肺启动机制奠定基础。方法:采用明胶法分离大鼠外周血单核细胞，分为chelerythrine+低氧组、forskolin+低氧组和单纯低氧组。Chelerythrine+低氧组和forskolin+低氧组细胞在低氧前分别予10 μmol/L chelerythrine和50 μmol/L forskolin预处理。然后各组均于低氧条件下（3 % O2, 5 % CO2, 92 % N2）培养0、1、3、6、9、12、24 h后，收集细胞及培养液上清，分别采用PKC、Raf活性检测试剂盒、电泳迁移分析法（EMSA）、逆转录PCR（RT-PCR）和酶联免疫吸附试验（ELISA）检测PKC、Raf-1、NF-κB活性及TNF-α表达量。结果:低氧1-9 h，PKC、Raf-1活性、NF-κB结合活性及TNF-α表达量显著高于正常对照组（P<0.01）。低氧后1-24 h，PKC、Raf-1活性、NF-κB结合活性与TNF-α mRNA和蛋白表达水平间呈显著正相关（P<0.01，P<0.05）。10 μmol/L chelerythrine可显著抑制低氧诱导的PKC、Raf-1、NF-κB活性升高和TNF-α表达。50 μmol/L forskolin可显著抑制低氧诱导的Raf-1、NF-κB活性升高及TNF-α表达。结论:低氧可显著增强大鼠外周血单核细胞的PKC、Raf-1活性及NF-κB结合活性,并可诱导其产生大量的促炎症因子TNF-α，这些变化可能与急性呼吸窘迫综合征（ARDS）时血浆中大量促炎症因子持续存在密切相关。     

来氟米特活性代谢产物对肿瘤坏死因子-α诱导肾小管上皮细胞内核因子-κB活性的影响

目的:探讨来氟米特活性代谢产物对TNF-α诱导肾小管上皮细胞内NF-κB活性表达的影响。方法:培养的肾小管上皮细胞为空白组;对照组为肾小管上皮细胞加TNF-α5000U/ml共同培养;干预组先于上皮细胞中加不同浓度来氟米特的活性代谢产物(A771726)培养不同时限,30min后再加入TNF-α5000U/ml。EMSA法检测各组NF-κB活性表达的变化。结果:A771726在不同浓度及时限均可抑制TNF-α诱导的肾小管上皮细胞内NF-κB活性表达,且呈剂量与时限依赖性。结论:来氟米特活性代谢产物可抑制TNF-α诱导的肾小管上皮细胞内NF-κB的活性表达。     

抑制核因子-κB活性对TNF-α诱导的肾小球系膜细胞血管紧张素原表达的影响

目的： 研究抑制核因子-κB（NF-κB）活性对肿瘤坏死因子-α（TNF-α）诱导的SD大鼠肾小球系膜细胞血管紧张素原表达及血管紧张素Ⅱ产生的影响。方法：分离SD大鼠肾小球系膜细胞分为下列3组：对照组,TNF-α处理组,TNF-α＋NF-κB抑制剂吡咯烷二硫氨基甲酸酯（PDTC）处理组（TNF-α＋PDTC处理组）。以电泳迁移率变动分析法（electrophoretic mobility shift assay,EMSA）检测NF-κB 活性,放射免疫分析法检测培养液血管紧张素Ⅱ水平,RT-PCR方法检测血管紧张素原mRNA表达,蛋白质印迹法（Western blotting）检测血管紧张素原蛋白表达。结果： TNF-α处理组NF-κB活性［（20.67±9.14）×102 μg/cell］显著高于对照组［（8.25±4.35）×102 μg/cell,P<0.01］与TNF-α＋PDTC处理组［（7.20±4.57）×102 μg/cell,P<0.01］,TNF-α＋PDTC处理组与对照组比较无显著差异。血管紧张素原mRNA表达TNF-α处理组（0.27±0.05）显著高于对照组（0.20±0.05,P<0.05）,与TNF-α＋PDTC处理组（0.22±0.06,P>0.05）比较无显著差异;蛋白表达TNF-α处理组［（0.60±0.19） μg/cell］显著高于对照组［（0.37±0.15） μg/cell,P<0.05］及TNF-α＋PDTC处理组［（0.37±0.17） μg/cell,P<0.05］,TNF-α＋PDTC处理组与对照组比较无显著差异（P＞0.05）。培养液血管紧张素Ⅱ水平在TNF-α处理组［（9.73±2.38）×10-5 ng·L-1/cell］显著高于对照组［（7.50±1.51）×10-5ng·L-1/cell,P<0.05］及TNF-α＋PDTC处理组［（6.94±1.46）×10-5 ng·L-1/cell,P<0.05］,TNF-α＋PDTC处理组与对照组比较无显著差异（P＞0.05）。结论：TNF-α可激活SD大鼠肾小球系膜细胞NF-κB,并诱导血管紧张素原表达及血管紧张素Ⅱ产生增加;抑制NF-κB活性可降低血管紧张素原表达及血管紧张素Ⅱ产生。结果提示NF-κB介导TNF-α诱导的肾小球系膜细胞血管紧张素原表达及血管紧张素Ⅱ产生。     

PDTC对肝纤维化大鼠核转录因子-κB、α-平滑肌肌动蛋白和Ⅰ型胶原表达影响研究

目的探讨吡咯烷二硫代氨基甲酸酯(PDTC)对二甲基亚硝胺(DMN)所致肝纤维化大鼠肝组织中核转录因子-κB(NF-κB)、α-平滑肌肌动蛋白(α-SMA)和Ⅰ型胶原(Col-1)表达的影响及其意义。方法雄性SD大鼠38只,随机分为A、B、C组。A组为正常对照组,B、C组再各自随机分为2周及4周组并腹腔注射DMN诱导大鼠肝纤维化模型,C组造模同时给予PDTC灌胃。应用化学发光凝胶电泳迁移率(EMSA)检测肝组织NF-κBp65活性;采用实时定量聚合酶链反应(Real-time PCR)检测肝组织NF-κBp65和Col-1的mRNA表达;应用免疫组化检测NF-κBp65、α-SMA和Col-1的表达。结果 B组及C组NF-κBp65活性及其mRNA表达、Col-1 mRNA表达、NF-κBp65免疫组化阳性细胞数、α-SMA及Col-1阳性面积均明显高于A组(P<0.01或P<0.05),且随着时间的延长,4周组高于2周组(P<0.01或P<0.05);同期比较发现C组NF-κBp65活性及其mRNA表达、Col-1 mRNA表达、NF-κBp65免疫组化阳性细胞数、α-SMA及Col-1阳性面积均明显低于B组(P<0.01或P<0.05)。NF-κBp65活性与NF-κBp65 mRNA表达、Col-1 mRNA表达、NF-κBp65免疫组化阳性细胞数、α-SMA及Col-1阳性面积呈正相关(r=0.747,0.780,0.779,0.658,0.780,P均<0.01)。结论 NF-κB与大鼠肝纤维化密切相关;PDTC可能通过抑制NF-κB的活性及α-SMA、Col-1表达从而产生抗肝纤维化作用。     

壮药五叶泡醇提物抗大鼠急性痛风性关节炎的作用机制

目的 探讨五叶泡醇提物抗大鼠急性痛风性关节炎的作用机制。方法 采用注射尿酸钠的方法建立大鼠急性痛风性关节炎模型,测定踝关节肿胀度,进行步态观察及评分,检测各组大鼠踝关节滑膜组织肿瘤坏死因子α(TNF-α)、白介素1β(IL-1β)、IL-6含量;qRT-PCR法检测大鼠踝关节滑膜组织核因子κB(NF-κB)P65、NF-κB抑制因子α(IκBα)mRNA的表达;观察大鼠踝关节滑膜组织病理学,运用免疫组化法检测大鼠滑膜NF-κB p65的表达。结果 与模型组比较,五叶泡醇提物中、高剂量组踝关节肿胀度、步态评分较模型组有显著降低（P<0.05或P<0.01）,滑膜组织TNF-α含量显著降低（P<0.05或P<0.01）;五叶泡醇提物高剂量组滑膜组织IL-1β、IL-6含量显著降低（P<0.05）,NF-κB P65 mRNA表达明显降低（P<0.05）;五叶泡醇提物中、高剂量组大鼠滑膜组织IκBα mRNA表达明显升高（P<0.05）。病理结果显示五叶泡醇提物能改善滑膜组织病理损伤;免疫组化结果显示五叶泡醇提物高剂量组比模型组阳性着色细胞减少,染色...     

首发精神分裂症PBMCNF-κB活性及其mRNA表达与IL-1β、IL-6、TNF-αmRNA表达的关系

目的：探讨首发精神分裂症患者外周血单个核细胞（PBMC）NF-κB的活性及其mRNA表达与IL-β、IL-6、TNF-α mRNA表达的相互关系，为临床应用NF-κB调节剂提供理论依据。方法：应用NF-κB活性ELISA试剂盒，检测精神分裂症组和健康对照组PBMC中NF-κB活性，并采用RT-PCR方法，测定两组PBMC中NF-κB mRNA表达及IL-1β、IL-6、TNF-α mRNA表达。结果：①精神分裂症组PBMC中NF-κB的活性及NF-κB mRNA表达量与对照组相比均明显增高，差异有显著性（P〈0．05）；②精神分裂症组PBMC中IL-1β、IL-6、TNF-α mRNA表达量与对照组相比均明显增高，差异有显著性（均P〈0．05）；③在精神分裂症组及对照组中，PBMC中NF-κB的活性与其mRNA表达量无明显相关（均P〉0．05）；④在精神分裂症组和对照组中，PBMC中NF-κB的活性与IL-1β、TNF-α mRNA均呈正相关（均P〈0．05）；无论是在精神分裂症组或对照组中，PBMC中NF-κB的活性与IL-6 mRNA均无明显相关（均P〉0．05）。结论：精神分裂症患者PBMC中NF-κB mRNA表达及活性均增高，对NF-κB活性的检测更能反映NF-κB的转录调控功能情况；活化的NF-κB对IL-1β、TNF-α的基因转录起了重要的调控作用。     

TNF-α对肠上皮细胞PIgR、NF-κB亚单位表达影响

目的:研究肿瘤坏死因子-α(TNF-α)对Caco-2细胞表达多聚免疫球蛋白受体(pIgR)和核因子-κB(NF-κB)亚单位RelA/RelB的影响。方法:采用Real-time PCR方法检测肠上皮细胞表达pIgR、RelA和RelB的变化。结果:与无TNF-α刺激比较,用不同浓度TNF-α刺激后pIgR、RelA和RelB基因的表达明显增加(P<0.01)。结论:TNF-α促进肠上皮细胞表达pIgR、NF-κB亚单位基因表达,TNF-α通过NF-κB通路激活pIgR基因的转录。     

腺苷预处理对大鼠脑缺血-再灌注损伤后脑内肿瘤坏死因子α和核因子κB表达的影响

目的 通过观察腺苷预处理对脑缺血-再灌注（IR）损伤后大鼠脑内肿瘤坏死因子α（TNF-α）和核因子κB（NF-κB）表达的影响,探讨腺苷对大鼠脑缺血-再灌注损伤的保护机制。方法 Sprague-Dawley大鼠60只随机分为假手术组（F组）、缺血-再灌注组（IR组）和腺苷预处理缺血-再灌注组（AP组）,每组动物按照缺血-再灌注后2 h、6 h、24 h及48 h这4个时间点随机分组,每组5只。采用大脑中动脉阻塞（MCAO）法制备大鼠大脑中动脉闭塞模型。通过对以上3组脑缺血 再灌注48 h后的大鼠脑组织行头颅MRI、HE染色以及对以上60只大鼠进行神经功能缺损评分,通过免疫组织化学方法观察大鼠脑组织中TNF-α和NF-κB的平均积分吸光度值进一步验证腺苷预处理对大鼠脑缺血-再灌注损伤的脑保护作用,探讨腺苷对大鼠脑缺血-再灌注损伤的保护机制。结果 F组大鼠术后无神经功能缺损体征,AP组和IR组大鼠术后均出现明显神经功能缺损体征。AP组和IR组大鼠神经功能缺损评分显著高于F组,AP组大鼠神经功能缺损评分显著低于IR组,差异均具有统计学意义（P＜0.05）。F组大鼠术后MRI中T1WI、T2WI均未见明显异常,AP组和IR组大鼠脑梗死体积显著高于F组,AP组大鼠脑梗死体积显著低于IR组,差异均具有统计学意义（P＜0.05）。AP组和IR组术后大鼠脑组织中TNF-α和NF-κB的表达显著高于F组,AP组术后大鼠脑组织中TNF-α和NF-κB的表达显著低于IR组,差异均具有统计学意义（P＜0.05）。结论 腺苷预处理可通过减少大鼠缺血-再灌注损伤后脑内TNF-α和NF-κB的表达而减轻神经细胞损伤,达到其脑保护作用。     

TNF-α诱导类风湿关节炎滑膜细胞NF-κB信号通路活化的探讨

目的研究TNF-α对类风湿关节炎(rheumatoid arthritis,RA)滑膜细胞NF-κB信号转导通路活化的影响。方法原代培养类风湿性关节炎滑膜细胞;应用Western blot检测滑膜细胞p65-NF-κB和ΙκBα蛋白的表达变化;应用免疫荧光技术分析NF-κB核移位的变化。结果 TNF-α刺激不同时间后p65-NF-κB蛋白在滑膜细胞核内表达增加,而在胞浆表达减少,30 min时最明显;同时,免疫荧光显示TNF-α可促使NF-κB向滑膜细胞核内移位;TNF-α刺激20 min后ΙκBα蛋白降解明显增加。结论TNF-α诱导类风湿关节炎滑膜细胞NF-κB信号通路活化,可能与类风湿关节炎炎症进程有关。     

肿瘤坏死因子-α激活大鼠心肌细胞核转录因子-κB活性

目的 探讨肿瘤坏死因子-α(TNF-α)对大鼠心肌细胞(H9C2)核转录因子-κB(NF-κB)活性的影响.方法 体外培养大鼠心肌细胞(H9C2),以TNF-α刺激,凝胶迁移滞后实验(EMSA)检测NF-κB活性,Westen blot及Alamarblue法分别检测P65蛋白与细胞增殖.结果 TNF-α刺激后NF-κB活性明显增高,且TNF-α对细胞生长有抑制作用.结论 TNF-α对大鼠心肌细胞(H9C2)的调节作用,部分是通过激活NF-κB信号通路实现的.     

人参二醇皂苷对"失血-内毒素双打击"大鼠肺的保护作用及对血清肿瘤坏死因子-α和白细胞介素-6的影响

目的：研究失血-内毒素双打击大鼠血清肿瘤坏死因子（TNF-α）和白细胞介素-6（iL-6）含量的变化，以及人参二醇皂苷（PDS）对其的影响，探讨人参二醇皂苷对“双打击”大鼠肺的保护作用，为人参二醇皂苷临床治疗的应用奠定基础。方法：Wistar大鼠（230-250g），每组9只，随机分为假手术对照组（SCG）；失血-内毒素双打击组，（HLG）：失血-内毒素双打击地塞米松预治疗组（HLDG）；失血-内毒素双打击人参二醇皂苷预治疗组（HLPG）。①应用“失血-回输-内毒素入血”三种因素相继作用机体的方法，复制大鼠“双打击”模型。大鼠失血性休克1h后，将放出的1／2血液加等容积的生理盐水缓慢回输，再经腹腔注射LPS（2mg／kg），复制二次打击模型，观察6h后处死动物。HLDG和HI．PG于腹腔注射LPs前10min腹腔注射地塞米松（2mg／ks）和人参二醇皂苷（45ms／ks）。②愎主动脉取血，分离血清，应用放免试剂盒检测血清中TNF-α和IL-6水平。③取肺组织，10％中性福尔马林固定，脱水、浸蜡，常规包埋切片，HE染色，光镜观察。④取肺组织，提取核蛋白，用Westem blotting方法检测肺组织NF-κB p65表达。     

TNF-α对内皮细胞白介素-8基因表达的影响

IL-8作为一种趋化细胞因子在炎症反应中具有重要作用,其在内皮细胞内的表达受多种细胞因子的调节。本文用TNF-α孵育培养的人脐静脉内皮细胞不同时间后,用RT-PCR法检测内皮细胞内IL-8mRNA的表达,并用免疫细胞化学染色法检测内皮细胞内NF-κB的激活。结果发现(1)未用TNF-α孵育的内皮细胞IL-8表达量很少,TNF-α孵育1小时后IL-8表达明显增加,3h进一步增加;6hIL-8表达降低,9h进一步降低至基础水平;(2)未用TND-α孵育的内皮细胞核NF-κBp65免疫细胞化学染色呈阴性,NF-α孵育1,3h后NF-κBp65免疫细胞化学染色呈阳性,6h时后呈弱阳性,9h后呈阴性。提示TNF-α可诱导内皮细胞表达IL-8并可激活内皮细胞内NF-κB,二者的时相过程基本一致。作者认为TNF-α诱导IL-8在内皮细胞内表达可能与转录因子NF-κB的激活有关。