转化生长因子β1对体外成牙本质细胞分化的影响

目的：观察转化生长因子β1（transforming growth factorβ1，TGF－β1）对体外培养鼠牙乳头成本本质细胞分化的影响。方法：取17d胎龄小鼠下颌第一磨牙牙胚，胰腺蛋白消化分离牙乳头，置半固态培养基培养6d，半固态培养基中加入重组转化生长因子β1和肝素，组织学观察。结果：TGF－β1加肝素可诱导牙乳头周边细胞发生极化，并分泌胸外基质，单独加入TGF－β1未见细胞极化，但基质分泌增加，结论：TGF－β1能诱导前成牙本质细胞的细胞学和功能上分化。     

牙本质陶瓷粉、牙本质陶瓷粉复合TGF-β1盖髓的初步研究

目的：观察牙本质陶瓷粉（Ceramic Dentin Powder;CDP),CDP复合转化生长因子（Transforming growth factors-TGF－β1(CDP/TGF－β1)对大鼠修复性牙本质形成的作用。方法：牙本质粉煅烧后与TGF－β1复合，用SD大鼠牙作直接盖髓实验，并用组织学方法评价材料对修复性牙本质形成的作用。结果：术后14d,CDP组：穿刺下方成牙本质细胞的正常排列消失，周围有炎细胞浸润；CDP／TGF－β1组；穿髓孔周围见成纤维细胞增殖，呈团块状包绕穿髓孔。术后28d,CDP组：穿髓下方可见少量修复性牙本质团块形成；CDP／TGF－β1组；在成纤维细胞下方可大量修复性牙本质形成；结论：CDP／TGF－β1能控制炎症的蔓延，促进大鼠牙体，牙髓组织修复。     

TGF—β1在修复性牙本质形成早期的基因表达

目的：利用原位杂交技术，观察TGF－β1在大鼠牙髓修复性牙本质形成早期的基因表特征。方法：在Wistar大鼠上下颌第一磨牙近中面制备一单面洞。分别观察3天和15天后处死动物。组织学处理后切片。体外转录合成单链RNA探针并标记地高辛。将标记探针与标本进行原位杂交。利用生物素标记的抗地高辛抗体和SABC标记，DAB显示杂交信号。苏木素复染。结果：TGF－β1mRNA在备洞3天后的成牙本质细胞和成牙本质细胞层下方的牙髓细胞内表达强阳性。15天后，修复性牙本质下方的成牙本质细胞样细胞表达TGF－β1。结论：在牙髓修复早期，TGF－β1通过自分泌途径，参与了修复性牙本质的形成。     

窝洞清洁剂暴露的牙本质中TGF—β超微结构定位

目的：了解不同窝洞清洁剂暴露窗洞内牙本质中TGF－β的能力。方法：采用金标记免疫组化染色，扫描电镜观察。结果：170g/L的EDTA处理组牙本质中有大量TGF－β1暴露，表面玷污层去除彻底；30g/L次的人和100g/L柠檬酸处理组有一定量的TGF－β1暴露，玷污层被部分去除；而PBS且只有少量TGF－β1被暴露。TGF－β2、β3在各组中均未测得。结论：TGF－β1是牙本质中最主要的TGF－β异构体，EDTA是所测试剂中暴露TGF－β最有效的窝清洁剂。     

miR－21调控TGF－β1诱导的大鼠BMSCs向肌成纤维细胞分化的机制研究

目的：在细胞水平探索miR－21在调控TGF－β1诱导的大鼠骨髓间充质干细胞向肌成纤维细胞分化中的作用。方法：全髓培养法培养原代大鼠骨髓间充质干细胞,培养至第三代时用TGF－β1分组诱导培养,检测TGF－β1对大鼠BMSCs促纤维化的作用及该过程中不同浓度梯度TGF－β1诱导以及不同时间段miR－21的表达变化;通过转染miR－21 mimics（高表达）不同时间点检测其对α－SMA表达的影响。结果：TGF－β1能促进大鼠骨髓间充质干细胞向成纤维,肌成纤维细胞分化;大鼠骨髓间充质干细胞向成纤维,肌成纤维细胞分化后miR－21表达上调;上调miR－21能促进大鼠BMSCs的纤维化作用。结论：miR－21 mimics能够促进大鼠BMSCs的纤维化作用。     

多种生长因子对胚胎面突外胚间充质细胞向成牙本质样细胞分化的诱导作用

目的: 探讨转化生长因子β1(TGFβ1)、牙本质非胶原蛋白(DNCP)、TGFβ1 DNCP、肝素 胰岛素样生长因子1(IGF-1)在诱导面突外胚间充质细胞向成牙本质样细胞分化中的作用.方法:取妊娠12.5 d SD大鼠胎鼠颌突外胚间充质细胞(第4代),在转化生长因子β1(TGFβ1)(2 ng/mL)、牙本质非胶原蛋白(DNCP)(100 μg/mL)、TGFβ1(2 ng/mL) DNCP(100 μ/mL)、肝素(1 μg/mL) IGF-1(100 ng/mL)的诱导下,通过形态学观察、免疫组化、RT-PCR等方法,探索生长因子在外胚间充质细胞向成牙本质样细胞分化中的作用.结果:6 d后,在DNCP、TGFβ1 DNCP作用下,胎鼠面突外胚间充质细胞出现明显的形态改变,细胞由成纤维样变为梭形,部分核极化,有很长的突起,部分细胞呈现平行排列趋势.TGFβ1组部分细胞出现极化改变.DNCP、TGFg 1 DNCP诱导组抗牙本质涎蛋白(DSP)呈阳性反应,RT-PCR显示mRNA水平表达成牙本质细胞特异的牙本质涎磷蛋白(DSPP),另外DMP1亦呈阳性表达.TGFβ1组不表达DSPP、DMP1.肝素 IGF-1组在细胞形态和蛋白、mRNA上均未出现成牙本质细胞特异的表达.结论:胎鼠面突外胚问充质细胞在DNCP和TGFβ1 DNCP的作用下能分化为成牙本质样细胞.表明在诱导中起关键作用的是DNCP.TGFβ1可诱导细胞在形态学上分化成类成牙本质细胞.本结果与该细胞在三维体系中的诱导分化结果相似,表明胚胎面突外胚间充质细胞在体外被诱导分化为成牙本质样细胞不是偶然现象,这为研究牙齿的分化和发育提供了良好的模型和实验依据.     

体外三维培养下诱导人胚胎面突外胚间充质干细胞向成牙本质样细胞分化

目的: 探讨人胚胎面突外胚间充质干细胞向成牙本质样细胞分化的过程.方法:采用体外细胞三维立体培养的方法在转化生长因子β1(TGFβ1)、牙本质非胶原蛋白(DNCP)的诱导下通过形态学观察、免疫组化、RT-PCR等方法探索外胚间充质干细胞向成牙本质样细胞分化的可能性及生长因子在其中所起的作用.结果:人胚胎面突外胚间充质干细胞在胶原中生长良好.培养4 d在TGFβ1+DNCP组中细胞出现核极化有很长的突起细胞平行排列.诱导的细胞有许多与成牙本质细胞相似的超微结构.抗牙本质涎蛋白(DSP)呈阳性反应.碱性磷酸酶活性增强.细胞在矿化液中能形成矿化结节.RT-PCR显示mRNA水平表达成牙本质细胞特异的牙本质涎磷蛋白(DSPP).结论:三维立体培养下人胚胎面突外胚间充质干细胞在TGFβ1及DNCP的作用下能分化为成牙本质样细胞.本结果将外胚间充质干细胞作为前体诱导分化出成牙本质样细胞为研究牙齿的发育及分化提供了良好的模型和实验依据.     

aFGF和TGFβ1联合诱导猪牙乳头细胞向成牙本质样细胞分化

目的建立猪牙乳头细胞向成牙本质样细胞分化的体外诱导方案。方法联合应用aFGF和TGFβ1对体外培养的猪牙乳头细胞进行平面诱导,观察诱导后细胞的形态学变化,通过Von Kossa染色检测诱导后细胞的矿化能力,并采用免疫荧光染色和RT-PCR检测成牙本质细胞特异性标志物——DSP蛋白和DSPP mRNA在诱导后细胞中的表达。结果诱导后部分细胞出现细长的单侧细胞突起,在矿化液培养2周后形成典型的矿化结节,并且表达DSP蛋白和DSPP mRNA。结论联合应用aFGF和TGFβ1可以诱导体外培养的猪牙乳头细胞向成牙本质样细胞分化。     

TGF-β1对MDPC-23细胞DPP表达调控的体外研究

目的 :研究转化生长因子 β1(TGF -β1)对成牙本质细胞表达DPP的调控作用。方法 :给体外细胞培养的MDPC -2 3成牙本质细胞不同浓度的TGF -β1刺激 ,利用原位杂交的方法观察细胞内DPPmRNA的变化 ,所得结果进行图像分析和统计处理。结果 :TGF -β1刺激前后的成牙本质细胞均表达DPPmRNA ,但刺激后的成牙本质细胞DPPmRNA表达下降 ,不同浓度TGF -β1刺激成牙本质细胞后DPPmRNA表达程度不等。结论 :外源性TGF -β1下调成牙本质细胞表达DPP ,并有浓度差异。     

体外三维培养下诱导人胚胎面突外胚问充质干细胞向成牙本质样细胞分化

目的：探讨人胚胎面突外胚间允质干细胞向成牙本质样细胞分化的过程。方法：采用体外细胞三维立体培养的方法，在转化生长因子B1(TGFβ1)、牙本质非胶原蛋白(DNCP)的诱导下，通过形态学观察、免疫组化、RT-PCR等方法，探索外胚间充质干细胞向成牙本质样细胞分化的可能性及生长因子在其中所起的作用。结果：人胚胎面突外胚间充质干细胞在胶原中生长良好。培养4d，在TGFβ1 DNCP组中细胞出现核极化，有很长的突起，细胞平行排列。诱导的细胞有许多与成牙本质细胞相似的超微结构。抗牙本质涎蛋白(DSP)呈阳性反应。碱性磷酸酶活性增强。细胞在矿化液中能形成矿化结节。RT-PCR显示mRNA水平表达成牙本质细胞特异的牙本质涎磷蛋白(DSFP)。结论：三维立体培养下，人胚胎面突外胚间充质干细胞在TGFB1及DNCP的作用下能分化为成牙本质样细胞。本结果将外胚间充质干细胞作为前体，诱导分化出成牙本质样细胞，为研究牙齿的发育及分化提供了良好的模型和实验依据。     

TGF-β1对成牙本质细胞系MDPC-23中 Smads mRNA表达的影响

目的：研究TGF—β1对成牙本质细胞系MDPC-23细胞中Smads mRNA表达的影响，探讨成牙本质细胞内Smads分子基因表达调控机制。方法：培养MDPC-23细胞，细胞分为5组，分别用TGF—β1刺激0、0．5h、1．5h、4h、24h，提取总RNA。用半定量RT—PCR观察Smad2、Smad3和Smad7mRNA表达变化。结果：MDPC-23细胞表达Smad2、Smad3和Smad7 mRNA。在TGF—β1作用24h内，MDPC-23细胞内Smad2 mRNA表达水平无明显变化。在TGF—β1作用4h后，Smad3 mRNA表达水平下调。Smad7 mRNA水平在TGF—β1作用下1．5h达到最高峰，以后逐渐下降。结论：在成牙本质细胞内，TGF—β1可能通过不同的方式调控其细胞内信号分子Smad2、Smad3和Smad7的表达，从而使成牙本质细胞对Smad介导的TGF—β1信号得到精确调控。     

c-jun原癌基因在鼠牙胚中的表达

目的 通过观察ｃ－ｊｕｎ原癌基因在鼠牙胚中的表达，探讨成牙本质细胞分化的转录调节。方法 利用免疫组化方法检测ｃ－ｊｕｎ原癌基因在鼠牙胚中的表达。结果 ｃ－ｊｕｎ原癌基因在小鼠牙胚的蕾状期、帽状期呈阴性表达，在钟状期牙胚的成牙本质细胞中呈阳性表达。结论 ｃ－ｊｕｎ可能参与了成牙本质细胞分化的转录调节，并且可能成为牙本质细胞的标志分子之一。     

转化生长因子β1(TGF-β1)和骨形成蛋白2(BMP2)体外联合诱导成牙本质细胞样细胞分化

目的：观察转化生长因子β1（transforming growth factor β1,TGF-β1）和骨形成蛋白2（bone morphogenetic protein 2,BMP2）联合应用对体外培养的鼠牙乳头成牙本质细胞分化的影响。方法：取17d胎龄小鼠下颌第一磨牙牙胚,胰蛋白酶消化分离牙乳头,置半固态培养基培养6d,半固态培养基中单独加入重组TGFβ1、BMP2,或分别与肝素联合,或TGFβ1和BMP2联合,组织学观察牙乳头的形态学变化。结果：TGF-β1或BMP2单独加入时未见细胞极化,但基质分泌增加。TGF-β1或BMP2加肝素可诱导牙乳头周边细胞发生极化,并分泌胞外基质。半固态培养基中同时加入TGF-β1和BMP2的牙乳头培养6d后,牙乳头周边细胞出现极化和功能性分化,牙乳头周边胞外基质沉积明显,且可见牙乳头尖形态的维持及从牙乳头尖至牙乳头基底部成牙本质细胞分化梯度的维持。结论：本研究结果证实,在没有内釉上皮和完整的基底膜存在的情况下,TGF-β1和BMP2加肝素可诱导培养的牙乳头出现成牙本质细胞分化,并促进胞外基质的分泌。TGF-β1和BMP2均能诱导成牙本质细胞的细胞学分化和分泌功能,二者联合应用可协同发挥作用增强诱导效果。     

人牙胚发育过程中Smad2分子的表达与分布变化

目的 观察转化生长因子β（transforming growth factor－β，TGF－β）特异的细胞内信号转导分子Smad2在人牙胚发育过程中的表达与分布变化，探讨Smad2在牙发育过程中的作用。方法 制备人牙胚发育各期标本，免疫组化方法检测Smad2分子的表达。结果 Smad2在牙胚发育的各个时期存在特异的时空分布模式，其分布与TGF－β有相似之处。结论 首次观察到Smad2信号分子在人牙胚发育过程中的表达，Smad2作为TGF－β细胞内信号分子，可能参与上皮－间充质的信号诱导，同时也参与成釉细胞和成牙本质细胞的分化本质细胞原分化以及牙釉质和牙本质的形成。     

转化生长因子-β超家族成员在牙本质发生发育中的作用

转化生长因子（TGF）超家族是一类在细胞分化、增殖和程序性死亡中参与调控的重要生长因子，具有相似的蛋白质高级结构，其中包括TGF-β、骨形态发生蛋白（BMP）和生长分化因子（GDF）、激活蛋白（ACT）和抑制蛋白等，它们通过其相应的受体介导转导信号。牙本质是牙体组织结构中的主要支持部分，由成牙本质细胞分泌的基质矿化而成。当成牙本质细胞分泌胞外基质并矿化时，TGF-β参与基质形成和矿化的调控，调控成牙本质细胞排列；BMP参与调节多种转录因子的表达，介导牙发生发育中上皮间质的相互作用；GDF在牙发生发育时调控牙周组织形成；ACT则调节细胞增殖分化，参与免疫应答，修复损伤等。本文就TGF-β超家族成员在牙本质发育中的作用等研究进展作一综述。     

TGF-β、rhBMP-2体外诱导下颌突外胚间充质细胞向平滑肌细胞分化

目的：探讨TGFβ、rhBMP-2体外诱导下颌突外胚间充质细胞向平滑肌细胞分化的能力。方法：取妊娠12．5d胎鼠第三代下颌突外胚间充质细胞，分别在含60、100mmol/L的TGF－β和1．6、3.2mmol/L的rhBMP-2的DMEM／F12中培养，相差显微镜下观察细胞的形态变化，免疫组化鉴定细胞性质。结果：培养2d,60pmol/L的TGF－β组细胞形态发生明显变化，细胞变得大而扁平，培养4d，免疫组化鉴定约70％的细胞分化为平滑肌细胞，rhBMP-2组细胞形态未见明显改变，1.6nmol/L组免疫组化鉴定约5％的细胞分化为平滑肌细胞，未能诱导分化出神经元细胞。未加LIF的对照组细胞出现向平滑肌细胞的自然分化。结论：TGFβ、rhBMP-2可诱导外胚间充质细胞向平滑肌细胞分化。     

人牙源性间充质细胞向成牙本质细胞的诱导分化

目的:建立人牙源性间充质细胞向成牙本质细胞分化的体外诱导方案。方法:应用bFGF IGF 1或TGF β1分别对培养早期的人牙源性间充质细胞进行平面定向诱导,观察诱导后细胞的形态学改变,采用免疫荧光染色和RT PCR方法检测成牙本质细胞标志物———DSP蛋白和DSPPmRNA在诱导后细胞中的表达,并通过VonKossa染色检测诱导后细胞的矿化能力。结果:诱导后部分细胞出现单侧较长的细胞突起,表达DSP蛋白和DSPPmRNA,体外连续培养可自发形成矿化结节,出现较典型的成牙本质细胞的形态和功能特征。结论:bFGF IGF 1或TGF β1可促进牙源性间充质细胞向成牙本质细胞分化。     

TGF-β1诱导小鼠成牙本质细胞系MDPC-23细胞凋亡

目的:研究转化生长因子β1(transforminggrowthfactorβ1,TGFβ1)是否诱导成牙本质细胞系MDPC23细胞凋亡。方法:培养MDPC23细胞,用不同浓度的TGFβ1刺激培养48h后,分别用3种检测细胞凋亡的方法,包括膜联蛋白V(AnnexinV)和碘化丙啶(propidiumiodide,PI)双染色法、细胞凋亡的酶联免疫分析法、以及DNA琼脂糖凝胶电泳法,检测MDPC23细胞凋亡情况。结果:TGFβ1能诱导MDPC23细胞凋亡,且呈剂量依赖性。结论:TGFβ1在成牙本质细胞凋亡过程中发挥一定的作用     

转化生长因子—β超家族成员及其受体在牙胚发育中的作用

牙胚的发育受多种生长因子的调控，近年来对转化生长在子β超家族成员在牙胚发育中的生物学作用研究颇多，如诱导早期牙形态发生，成牙本质细胞分化，胸外基持形成等。本文综述了转化生长在子－β超家族成员及其受 牙胚发育中的表达及可能的作用机理。     

转化生长因子β2 mRNA在小鼠磨牙牙胚发育过程中表达的研究

目的：探讨转化生长因子β2（transforminggrowthfactor-β2，TGFβ2）mRNA在小鼠磨牙牙胚发育过程中的表达及其意义。方法：制备小鼠磨牙各发育阶段标本，用原位杂交分析TGFβ2mRNA在牙胚中的表达与分布。结果：TGFβ2mRNA在小鼠磨牙牙胚不同发育阶段呈时间一空间特异性模式表达。结论：TGFβ2mRNA在牙形态发生过程中可能通过自分泌和旁分泌机制协同调控上皮一间充质相互作用及成牙本质细胞和成釉细胞的分化。