气质联用技术定量研究TTS-12对白念珠菌甾醇合成途径的影响

目的:研究天然产物TTS-12对白念珠菌甾醇生物合成途径的影响。方法:用微量液基稀释法测定TTS-12对不同真菌的最低抑菌浓度。采用气相色谱-质谱法测定白念珠菌经TTS-12作用前后麦角甾醇、羊毛甾醇的含量。结果:TTS-12对白念珠菌、新型隐球菌具有抑制作用。对照组白念珠菌麦角甾醇、羊毛甾醇含量为(53·2±4·8)%、(3·5±0·6)%;TTS-12作用后,麦角甾醇、羊毛甾醇含量为(5·6±0·8)%、(16·5±3·2)%。结论:TTS-12可能作用于白念珠菌细胞膜麦角甾醇合成途径,抑制麦角甾醇的生物合成而发挥抗真菌活性。     

马尾松叶低极性部位的GC-MS分析及协同氟康唑抗耐药白念珠菌活性研究

目的 研究马尾松叶低极性部位的主要化学成分,以及其与氟康唑联用对氟康唑耐药白念珠菌的抗真菌活性.方法 马尾松叶经80％乙醇热提取后,用石油醚萃取得到低极性部位,运用GC-MS法检测其化学成分,所测结果与标准谱库进行比对分析,用峰面积归一法计算各个成分的相对含量.采用棋盘式微量稀释法测试低极性部位协同氟康唑对耐药白念珠菌...     

气质联用法定量分析白念珠菌中甾醇含量

目的 建立气质联用法(GC-SIM-MS)测定白念珠菌中羊毛甾醇和麦角甾醇的含量.方法 白念珠菌经离心、皂化、提取出甾醇部分后溶解于环己烷中,采用HP-5毛细管柱进行气相色谱分析,柱温:程序升温150～ 320℃,起始温度150℃,按10℃/min升至300℃,再按20℃/min升至320℃;检测器温度270℃;进样口温度270℃;载气:氦气1 ml/min;质谱检测器:EI离子源,电力电压70 eV;SIM Scan;the selected ions:3.00～ 17.50 min,275,386;17.50 ～ 19.00 min,363,396;19.00～ 30.00min,411,426;进样量:lμl;无分流比.结果 羊毛甾醇和麦角甾醇线性关系良好(r分别为0.999 8和0.999 5),回收率在91.2％ ～117.3％ (RSD＜2.5％),最低检测限分别为18.29 ng/ml和68.13 ng/ml,日内及日间精密度良好(RSD均小于1.2％).结论 本方法准确、灵敏、专属性强,结果可靠,为抗真菌药物研究提供了有力的工具.     

氟康唑治疗老年口腔念珠菌40例临床观察

目的观察氟康唑在治疗老年口腔念珠菌的临床效果。方法选取我院2011年10月～2012年4月老年口腔白念珠菌患者80例,按照患者本人的用药情况将其分为观察组和对照组各40例。观察组给予氟康唑治疗,对照组给予制霉菌素治疗,比较两组患者的临床疗效。结果观察组的总有效率95.0%明显高于对照组87.5%,但差异无统计学意义(P0.05);停药6个月进行复查,观察组复发率(27.5%)明显低于对照组(47.5%),差异有统计学意义(P0.05)。结论氟康唑和制霉菌素单纯使用在治疗老年口腔念珠菌病上均有疗效,但氟康唑是长期疗效的首选药物。     

白念珠菌氟康唑耐药的分子生物学进展

随着白念珠菌临床感染的不断增加，以及以氟康畦为主的畦类抗真菌药物的广泛应用，畦类耐药现象亦随之增多，并成为困扰临床念珠菌感染治疗的难题之一。出现耐药可能的原因包括：①编码药物靶酶羊毛甾醇14α去甲基酶的ERG11基因的过度表达和点突变导致真菌细胞膜上的麦角固醇的生物合成发生异常；②药物外流泵相关的基因有ATP结合盒转运子基因—CDR1、CDR2和主要易化子超家族基因的过度表达导致药物在真菌细胞内有效浓度的减少，氟康畦耐药的发生可能同时出现不同的机制。     

体外诱导白念珠菌对氟康唑耐药性的研究

目的:建立白念珠菌耐氟康唑模型,研究白念珠菌耐药前后相关生物学特性变化。方法:体外用氟康唑诱导敏感白念珠菌SC5314和y01.09成为耐药子代SC5314R和y01.09R,利用微量液基稀释法和小鼠体内实验确定耐药表型,通过生长动力学、菌丝和生物膜形成实验观察生物学特性变化。结果:氟康唑对耐药子代SC5314R和y01.09R的MIC80分别为>128μg/mL,64μg/mL。无药培养35代后,MIC80分别为>128μg/mL,16μg/mL。有/无氟康唑环境下,敏感母本和耐药子代倍增时间无显著差异。氟康唑作用下,SC5314和y01.09菌丝形成受到抑制,SC5314R和y01.09R仍有菌丝形成;SC5314R和y01.09R可以形成牢固生物膜,SC5314和y01.09形成松散生物膜。结论:本实验成功诱导对氟康唑产生高度耐药的白念珠菌菌株,其耐药性通过体内外实验获得证实。     

白念珠菌ERG11基因突变与氟康唑耐药性的关系

探讨白念珠菌氟康唑作用的靶酶编码基因 (ERG11)突变与耐药性的关系。分离抽提分别对氟康唑敏感和耐药的白念珠菌基因组 DNA,根据 ERG11编码序列设计一对上下游引物 ,对靶酶活性中心血色素结合区和疏水端螺旋区的基因表达序列进行 PCR扩增 ,经 DNA测序比较敏感和耐药菌株的碱基差异。结果 :6株氟康唑耐药白念珠菌此段序列有 5个位点发生突变 ,其中 5株第 1344 bp位点 G→A的突变致所编码的第 44 8个氨基酸由甘氨酸 (G)变为谷氨酸 (E)。结论 :ERG11基因突变致所编码的氨基酸改变与氟康唑耐药有关。     

蒲公英提取物对白念珠菌的抑制作用及机制研究

目的 研究蒲公英提取物对白念珠菌（Candida albicans）的抑制作用及机制。方法 纸片抑菌法研究蒲公英提取物对白念珠菌的抑制作用;分光光度计测定蒲公英提取物最小抑菌浓度（MIC）并研究其抑菌动力学和细胞膜通透性;利用扫描电镜、核酸吸光度法研究蒲公英提取物对白念珠菌的抑菌机制。结果 蒲公英提取物对白念珠菌有良好的抑制作用,其MIC为32.0 mg·mL^-1。抑菌动力学曲线分析表明蒲公英提取物主要作用于白念珠菌的对数生长期。扫描电镜发现蒲公英提取物可破坏白念珠菌的细胞结构,导致细胞表面凹陷,形成褶皱。核酸吸光度法结果发现蒲公英提取物可以增加白念珠菌细胞膜的通透性,从而抑制其生长。结论 蒲公英提取物对白念珠菌有较好的抑制效果,该抑制作用可能是其破坏细胞壁进而导致菌体内容物外泄,从而破坏菌体细胞膜结构,对细胞增长产生抑制作用,最终导致细胞死亡。     

氟康唑治疗口腔白念珠菌感染52例

目的：观察氟康唑治疗老年人口腔黏膜白念珠菌感染的效果。方法：将104例老年口腔白念珠菌患者随机分为治疗组和对照组各52例。治疗组用氟康唑注射液治疗，第1天200 mg，以后每天100 mg，疗程14 d；口服氟康唑100 mg·d 1，疗程7～14 d。对照组制霉菌素常规治疗，100万U，tid，疗程14 d。结果：治疗组痊愈44例(84.62%)，显效6例(11.54%)，有效2例(3.85%)，总有效率100.0%；对照组痊愈34例(65.38%)，显效4例(7.69%)，有效3例(5.77%)，无效11例(21.15%)，总有效率78.85%。两组总有效率比较，差异有极显著性(χ2＝95.72，P＜0.01)。结论：氟康唑是治疗老年性口腔白念珠菌感染的有效药物。     

氟康唑和他克莫司联用对光滑念珠菌耐药基因表达量的影响

摘 要 目的： 评价氟康唑和他克莫司联用对光滑念珠菌耐药基因表达量的影响。方法: 采用实时定量PCR定性筛查联用药物对各耐药基因氟康唑耐药基因ERG11,CDR1,PDH1和SNQ2表达水平的影响,并用RT-qPCR定量检测各耐药基因在不同药物处理下的表达量。结果: 与对照组相比,氟康唑和他克莫司联用使ERG11和SNQ2基因的表达量分别减少了90%和66%, CDR1基因的表达量则增加了311.6%（P<0.05或P<0.01）,对PDH1基因的表达无显著影响（P>0.05）。结论: 他克莫司和氟康唑联合用药可能是克服光滑念珠菌对氟康唑耐药性的方法。     

35株念珠菌对氟康唑的敏感性及与环孢素联合的体外协同作用

目的研究肺部感染患者痰中念珠菌对氟康唑（抗真菌药）的敏感性及与环孢素（免疫抑制剂）联合的体外协同作用.方法按M-27A药敏试验,绘制氟康唑对念珠菌的杀菌曲线,分析氟康唑与环胞素联合对念珠菌的体外协调作用.结果大部分念珠菌对环孢素和氟康唑敏感;联合试验中,氟康唑对念珠菌的最小抑菌浓度未改变;当氟康唑浓度＞MIC时,与环孢素呈协同作用,杀菌作用增强;增加念珠菌接触浓度后,真菌生长计数减少.结论绝大多数念珠菌对氟康唑敏感;与环孢素合用后,杀菌作用增强.     

衍生化—毛细管气相色谱法定量分析白念珠菌中甾醇含量

目的:建立衍生化-毛细管气相色谱法测定白念珠菌中羊毛甾醇和麦角甾醇等甾醇的含量。方法:白念珠菌经破碎、离心、皂化、提取出甾醇部分后再经1-三甲基甲硅烷咪唑(TMSI)硅烷化后,其TMSI衍生物采用HP 50毛细管柱进行气相色谱分析,柱温:程序升温150～290℃,起始温度150℃,按15℃·min~(-1)升至290℃恒定;检测器温度280℃;进样口温度270℃。柱头压35kPa;载气:氮气,流速82mL·min~(-1);每次进样量:1μL;分流比为100:1。结果:在0.1862～1.862mg·mL~(-1)衍生物的氯仿溶液范围羊毛甾醇和麦角甾醇线性关系良好(r分别为0.9996和 0.9969),回收率分别大于97％和93％(RSD<5％),最低检测限分别为1.86ng·mL~(-1)和2.54ng·mL~(-1),日内精密度良好(RSD均在5％以内)。结论:本方法准确、灵敏、专属性强,结果可靠,为抗真菌药物研究提供了有力的工具。     

Microwave assisted extraction for the determination of ethyl glucuronide in urine by gas chromatography-mass spectrometry

Alcohol is the most frequently abused 'addictive substance' that causes serious social problems throughout the world; thus alcoholism is of particular interest in clinical and forensic medicine. Ethyl glucuronide (EtG) is a marker of recent alcohol consumption that detects alcohol use reliably over a definite time period. The present paper describes a new method for the determination of EtG in urine. It was based both on microwave assisted extraction (MAE) to extract the analyte from urine samples, and gas chromatography-mass spectrometry (GC-MS) to identify and quantify the EtG in selected ion monitoring (SIM) mode. The method was applied to 33 urine samples from alcohol users, obtaining positive results in all cases. It was fully validated including a linear range (0.1-100 microg ml(-1)) and the main precision parameters. In summary, the use of microwave assisted extraction turned out to be a substantially simpler, faster and more sensitive procedure than any other conventional sample preparations.     

白色念珠菌对氟康唑耐药性的诱导和回复研究

目的　研究体外能否以氟康唑诱导白色念珠菌产生耐药性 ,以及诱导耐药株的稳定性。方法　将临床分离的白色念珠菌敏感菌株增菌后分别加入含氟康唑 4、8、16 μg/ ml的 YPD液体培养基中传代 ,测定诱导后各代菌株的 MIC,以观察达到耐药水平所需的天数。以 16 μg/ ml氟康唑诱导形成的耐药株 ,在不含氟康唑的 YPD液体培养基中连续传代 ,测定各代的 MIC,观察其回复敏感性所需的天数。结果　三种不同浓度的氟康唑体外诱导敏感菌株后 ,分别经 30、36、5 2 d呈现耐药 ,耐药株在不含氟康唑的培养基上连续传代后MIC逐渐下降 ,至第 9代恢复对氟康唑的敏感性。结论　敏感白色念珠菌体外经氟康唑诱导后可呈现耐药 ,且同时对三唑类其他品种也耐药 ;但该耐药性不稳定 ,在无氟康唑的环境中会逐渐回复敏感性。     

特比萘芬与氟康唑或伊曲康唑体外联合抗白念珠菌的作用

目的探讨特比萘芬与氟康唑或伊曲康唑体外联合抗白念珠菌的作用。方法采用微量液体稀释法测定特比萘芬、氟康唑、伊曲康唑对生殖器部位分离的36株白念珠菌药敏试验，应用棋盘微量稀释法测定特比萘芬与氟康唑或伊曲康唑对36株白念珠菌的联合药敏试验。结果白念珠菌菌株对氟康唑、伊曲康唑、特比萘芬耐药株分别为3株（8．33％）、4株（11．11％）、6株（16．67％）。特比萘芬和氟康唑联用MIC几何平均数较其单独应用均显著降低（t=3．590，P〈0．05；t=3．252，P〈0．05），15株有协同作用（42％），18株有相加作用（50％），3株无关作用（8％）；特比萘芬和伊曲康唑联用后的MIC几何平均数较其单独应用均显著降低（t=3．849，P〈0．001；t=2．409，P〈0．05），表现为协同作用有14株（39％），相加作用的有17株（47％），无关作用的有5株（14％）；均未发现拮抗作用。结论特比萘芬与氟康唑或伊曲康唑联合应用对大部分白念珠菌能产生协同作用和相加作用，提示特比萘芬与氟康唑或伊曲康唑联合应用能增强抗白念珠菌的作用。     

Determination of tryptamine in rat brain by gas chromatography-mass spectrometry

Tryptamine (TA) occurs in trace levels in the brain, but its role in the central nervous system is not clear. However, there is evidence that TA may be a neuromodulator since it binds to specific binding sites in the brain. TA was measured as a diheptafluorobutyryl derivative in rat whole brain by capillary gas chromatography—mass spectrometry using negative chemical ionization (NCI) and single ion monitoring (SIM). d₄-TA was used as the internal standard. The ions m/z 532 and m/z 536 were monitored to identify TA and d₄-TA, respectively and to calculate the concentration of TA in rat whole brain which was found to be 0.19 ± 0.08 ng g⁻¹ (n = 8). The results confirm the earlier TA concentrations measured by GC—MS using positive electron impact ionization. However, NCI improved the signal/noise ratio of the method increasing its sensitivity for TA.     

液质联用方法测定白色念珠菌中海藻糖的含量

目的采用液质联用方法测定白色念珠菌中海藻糖的含量,考察白色念珠菌在感应分子法尼醇作用后海藻糖的变化。方法色谱柱：Shisheido CAPCELL NH2（150 mm×4.6 mm,5μm）,柱温：25℃,流动相：乙腈-水溶液（75：25,V/V）,流速：1 ml/min,分流比3：1。质谱检测器,ESI（-）模式,选择离子检测,碎片电压120 V。结果海藻糖和内标峰形均良好,海藻糖含量在0.05~50μg/ml范围内线性关系良好,r=0.999 3。日内日间精密度RSD值分别为1.8%和2.1%。结论该方法简便易行,选择内标之后含量测定更精确,灵敏度提高。