Aβ_(1～42)及二氮嗪预处理对神经细胞Na~+-K~+-ATP酶β亚基蛋白表达的影响

目的探讨Aβ1~42及二氮嗪预干预对神经细胞Na+-K+-ATP酶β亚基蛋白表达的影响。方法原代培养大鼠皮层海马神经细胞,随机分为空白对照组、Aβ1~42组(2μmol/L)、二氮嗪(50μmol/L)预处理1 h后Aβ1~42组、单独二氮嗪预处理组,各组又分为24、72 h两个时间点,采用免疫荧光及免疫印迹法检测干预后不同培养时间细胞Na+-K+-ATP酶β亚基蛋白表达水平的变化。结果免疫荧光显示:Aβ1~42作用细胞72 h降低了Na+-K+-ATP酶β亚基荧光强度;而经二氮嗪预处理后Aβ1~42作用72 h,与单独Aβ1~42组相比较荧光强度有所增强。Western印迹显示:二氮嗪预处理神经细胞1 h协同Aβ1~42作用24 h后及单独二氮嗪组Na+-K+-ATP酶β亚基的蛋白表达明显低于对照组及单独Aβ1~42组(P0.01)。Aβ1~42作用神经细胞72 h后,Na+-K+-ATP酶β亚基蛋白表达较对照组显著降低(P0.05);二氮嗪预处理1h协同Aβ1~42共同作用于神经细胞72 h后,与单独Aβ1~42组相比较,增加了Na+-K+-ATP酶β亚基蛋白表达量(P0.05)。结论 Aβ1~42作用72 h,Na+-K+-ATP酶β亚基蛋白表达量降低,二氮嗪预处理1 h协同Aβ1~42共同作用于神经细胞72 h,Na+-K+-ATP酶β亚基蛋白表达量升高。     

丁基苯酞通过p38丝裂原活化蛋白激酶通路拮抗β淀粉样蛋白致皮质神经元凋亡

目的研究丁基苯酞是否可以通过p38丝裂原活化蛋白激酶(MAPK)信号通路,抑制β淀粉样蛋白(Aβ)_(1 42)致原代培养皮质神经元凋亡。方法将原代培养的皮质神经元随机分为对照组、Aβ_(1-42)干预组(干预组)、Aβ_(1-42)+丁基苯酞0.1μmol/L组(A组)、Aβ_(1-42)+丁基苯酞1μmol/L组(B组)、Aβ_(1 42)+丁基苯酞10μmol/L组(C组)。Aβ_(1-42)作用24 h后,采用免疫荧光法染色观察细胞形态及凋亡比率,Western blot定量检测总p38、p-p38、caspase 3蛋白表达水平。结果免疫荧光双染显示,对照组神经元细胞体边缘光滑,突触长,细胞核完整;干预组细胞边缘塌陷,突触缩短,细胞核碎裂。与对照组比较,干预组、A、B、C组细胞凋亡率明显升高(P<0.05),干预组p p38和caspase-3蛋白表达明显增加(P相似文献   

Aβ_（1-42）对大鼠基底前脑神经元脑红蛋白表达的影响

目的 研究β-淀粉样蛋白(Aβ1-42)对原代培养基底前脑胆碱能神经脑红蛋白(NGB)表达的影响,探讨NGB在阿尔茨海默病(AD)发病中的机制.方法 运用细胞原代培养方法培养大鼠基底前脑胆碱能神经元并进行鉴定,用2 μmol/L的Aβ1-42对原代培养细胞进行干预,RT-PCR及Western印迹观察干预后不同时间(分别为24、48、72 h)细胞NGB mRNA和蛋白表达水平的变化.结果 Aβ1-42作用胆碱能神经元24 h后,NGB的表达与对照组相比显著增多(P＜0.05),48 h后NGB的表达与对照组相比,仍显著增高(P＜0.05),而72 h后,NGB表达与对照组相比,无明显变化(P＞0.05).结论 Aβ1-42作用胆碱能神经元不同的时间(24、48、72 h),NGB在24、48 h的表达均显著增高,而在72 h变化不明显;NGB可能在AD早期阶段起到神经保护作用.     

大鼠全脑缺血再灌注后海马CA1区神经元凋亡机制的研究

目的 研究大鼠全脑短暂缺血再灌注后海马CA1区椎体神经元的死亡机制.方法 采用经典的四血管夹闭法制作大鼠全脑缺血再灌注模型,取缺血再灌注后不同时间(6 h、24 h、48 h)的海马CA1区脑组织,用ELISA检测Caspase-3的活性变化.同时运用免疫印记方法检测PKC、NMDA受体NR2A及NR2B亚基磷酸化水平的变化.结果 与对照组相比,Caspase-3检测显示缺血再灌注6 h、24 h、48 h海马CA1区椎体神经元呈现逐渐凋亡增多的迟发性死亡.磷酸化蛋白激酶C在缺血6 h即有明显增高,并且于24 h、48 h达到表达高峰(P<0.05);NMDA受体亚基NR2A和R2B的磷酸化水平缺血再灌注后均呈现明显升高趋势.讨论 PKC、NR2B、CaMⅡ级联反应的发生可能是大鼠全脑缺血再灌注后海马CA1区锥体神经元发生迟发性死亡的重要机制.     

左旋丁基苯酞对Aβ_（1-42）诱导的体外原代培养神经元损伤的影响

目的研究左旋丁基苯酞对β-淀粉样蛋白（Aβ）诱导的原代培养海马及基底前脑神经元损伤的保护作用。方法运用细胞原代培养的方法培养大鼠基底前脑及海马胆碱能神经元并进行鉴定,用2μmol/L的Aβ1-42建立神经细胞损伤模型,将细胞分为对照组、Aβ1-42模型组和Aβ1-42＋左旋丁基苯酞（0.1、1、10μmmol/L）处理的低、中、高剂量组。倒置显微镜下观察给药前后细胞形态变化,Western Blot检测NF-κB及nNOS的含量。结果与对照组比较,Aβ1-42作用于原代神经元48 h后,神经细胞形态发生显著改变,NF-κB表达增高,nNOS表达降低（P均〈0.05）,低、中、高剂量的左旋丁基苯酞能够显著改善细胞形态,抑制NF-κB活化,提高nNOS的表达（P均〈0.05）。结论左旋丁基苯酞对Aβ1-42诱导的原代神经元保护作用可能与其抑制NF-κB活化,上调nNOS的表达有关。     

人参皂苷Rd预处理对局灶性脑缺血再灌注大鼠NR2B受体和核酸内切酶G表达的影响

目的:观察人参皂苷Rd预处理对局灶性脑缺血再灌注大鼠基底节区N-甲基-D-天冬氨酸(NMDA)受体亚单位NR2B蛋白和核酸内切酶G(EndoG)表达变化的影响,探讨人参皂苷Rd治疗缺血性卒中的可能机制.方法:栓线法建立大鼠大脑中动脉闭塞模型,免疫组织化学染色和图像分析法检测局灶性脑缺血1 h再灌注1、6、24、72 h后基底节区NR2B和EndoG表达,评价人参皂苷Rd对NR2B和EndoG表达和脑梗死体积的影响.结果:缺血再灌注组缺血侧基底节区NR2B阳性表达显著增加,EndoG在细胞核内表达显著;再灌注不同时间点人参皂苷Rd处理组NR2B和EndoG阳性表达均显著降低(P<0.05或P<0.01),脑梗死体积显著缩小(P<0.01).结论:脑缺血再灌注后NMDA受体亚单位NR2B和凋亡诱导因子EndoG表达显著增加;人参皂苷Rd预处理能显著降低NR2B和EndoG表达,通过抑制兴奋性神经毒性和阻断神经细胞凋亡,缩小脑梗死体积,从而起神经保护作用.     

灯盏乙素调节ATP敏感性钾通道对抗β-淀粉样蛋白的毒性作用

目的观察灯盏乙素(Scu)对β-淀粉样蛋白(Aβ)_(1～42)诱导的细胞模型中ATP敏感性钾(KATP)通道的影响,探讨其对抗Aβ毒性损害的作用机制。方法将神经母细胞瘤细胞分为对照组、Scu处理组、Aβ处理组、Scu+Aβ处理组及二氮嗪(DZ)+Aβ处理组,用生物化学方法检测各组细胞内的ATP含量;用Western印迹法检测各组细胞中KATP通道亚基Kir6.1、Kir6.2、SUR1、SUR2的蛋白表达情况;用荧光探针定量法检测各组细胞的细胞膜和线粒体膜膜电位变化;用流式细胞术测定各组细胞总凋亡率。结果与对照组和Scu处理组相比,Aβ处理组细胞中的ATP含量明显降低(P0.01),Kir6.1和SUR2的蛋白表达上调(P0.01),细胞膜和线粒体膜膜电位去极化(P0.05),细胞总凋亡率增加(P0.01),Scu的干预调节了上述指标趋向于正常。DZ+Aβ处理组的各指标变化与Scu+Aβ处理组基本一致。结论 Scu能够调控ATP介导的Kir6.1/SUR2亚基KATP通道的开放来抑制Aβ毒性所致的细胞凋亡,从而发挥神经元保护作用。     

炎症后内脏高敏感大鼠前扣带回皮质NR2A、NR2B表达变化

背景:研究显示N-甲基-D-天冬氨酸(NMDA)受体参与了伤害性信号的传递,中枢前扣带回皮质(ACC)在内脏高敏感大鼠内脏疼痛反应的调节中起重要作用,该作用是由NMDA受体活性增强介导的。目的:检测炎症后内脏痛觉过敏大鼠ACC区域NMDA受体亚基NR2A、NR2B的表达变化,探讨两者在炎症后内脏高敏感形成中的作用。方法:以去氧胆酸结肠灌注建立炎症后内脏痛觉过敏大鼠模型。造模3周后观察实验组和对照组结肠组织病理学改变,以对结直肠扩张(CRD)的内脏运动反射(VMR)幅值为指标评价内脏痛敏感性的变化,以免疫荧光法和蛋白质印迹法检测ACC区域NR2A、NR2B表达情况。结果:实验组和对照组大鼠结肠组织均未见明显病理学改变。CRD压力为60 mm Hg(伤害性刺激)时,实验组VMR幅值显著高于对照组(P0.05)。与对照组相比,实验组ACC区域NR2A、NR2B荧光强度和蛋白表达量均显著上调(P0.05)。结论:ACC区域NMDA受体亚基NR2A、NR2B表达上调在炎症后内脏高敏感的形成中发挥重要作用。     

电针对脑缺血再灌注模型大鼠纹状体NMDA受体NR2亚基蛋白表达的影响

目的 观察脑缺血再灌注模型大鼠受损侧纹状体组织中NMDA受体调节亚单位NR2A和NR2B蛋白表达及其电针干预后的变化,探讨电针对缺血再灌注兴奋性氨基酸毒性的拮抗作用,进一步阐明电针治疗缺血性脑血管疾病的机制.方法 用数字随机表将15只SD大鼠随机分成3组:假手术组、模型组、电针组,每组各5只.采用改良Longa线栓法制作大脑中动脉短暂性缺血再灌注模型,电针组大鼠在再灌同时电针“百会”、“大椎”两穴(连续波,频率3 Hz,电流强度1～3 mA),30 min,深度均为10 mm.免疫组织化学法及图像处理系统检测分析大鼠受损侧纹状体NR2A、NR2B蛋白表达情况.结果 与假手术组相比,模型组大鼠纹状体组织中NR2A的表达量明显下降,而NR2B的表达量明显升高,给予电针“百会”、“大椎”穴后的大鼠纹状体组织NR2A表达细胞数及含量均明显高于模型组,表达NR2B的细胞数及含量均明显降低.结论 电针可能通过激活NR2A受体蛋白表达,抑制NR2B受体蛋白的过量表达,从而调节NMDA受体复合物的整体功能活性,减少NMDA受体介导的兴奋性氨基酸毒性反应,减轻脑缺血再灌注引起的局灶性脑损伤,发挥一定的脑神经保护作用.     

二氮嗪预处理对原代培养海马神经元化学性缺氧的影响

目的 研究二氮嗪预处理对原代培养海马神经元化学性缺氧再灌注损伤的保护作用.方法 海马神经元分离培养10天后,随机分为4组:正常培养组,单纯缺氧组,预处理缺氧组,复合预处理缺氧组.后3组加入碘乙酸终浓度150 mmol/L,孵育2.5 h,再灌注,制备化学缺氧再灌注模型.预处理缺氧组缺氧前15 min进行不同药物预处理.观察细胞形态,进行细胞死亡和凋亡的检测.结果 正常培养组细胞死亡率(1.2.5±2.1)%,单纯缺氧组(80.5±3.8)%,差异有统计学意义(P＜0.01),预处理缺氧组细胞死亡率明显降低(40.7±6.0)%,与单纯缺氧组比较,差异有统计学意义(P＜0.01),复合预处理缺氧组与单纯缺氧组比较无统计学差异(P＞0.05).结论 二氮嗪对海马神经元缺氧损伤具有明显的保护作用,5-羟基癸酸盐预处理可阻断二氮嗪的保护作用.     

左旋丁基苯酞对Aβ1-42诱导的原代培养神经元Caspase-3的影响

目的观察左旋丁基苯酞对Aβ1-42原代培养海马及基底前脑神经元Caspase-3表达影响,并探讨其脑保护机制。方法运用细胞原代培养的方法培养大鼠基底前脑及海马胆碱能神经元并进行鉴定,用2trmol／L的Aβ1-42建立神经细胞损伤模型,用不同剂量左旋丁基苯酞处理48h后,噻唑蓝（MTT）法测定细胞的存活率,免疫印记检测Caspase-3的含量变化,观察Aβ1-42对神经元的损伤及不同剂量的左旋丁基苯酞对神经元的影响。结果与正常组相比,Aβ1-42作用于基底前脑及海马神经元48h后,存活率显著下降,Caspase-3增高（P〈0．01）,不同剂量左旋丁基苯酞能够显著增高神经元存活率,抑制Caspase-3表达（P〈0．05）,且以中、高剂量组的作用显著。结论Aβ1-42能够诱导原代培养神经元Caspase-3表达,左旋丁基苯酞能够降低Aβ1-42诱导的基底前脑和海马神经元Caspase-3的激活。     

Fyn信号通路参与β-淀粉样蛋白对大鼠皮层神经元的毒性损伤作用

目的探讨β-淀粉样蛋白(Aβ)对原代培养皮层神经元的毒性损伤以及Fyn信号转导通路在此过程中的作用。方法孕17～18 dSD大鼠,体外分离培养皮层神经元,培养7 d后加入Aβ1～42,孵育8 h建立毒性损伤模型,采用生化方法检测神经元细胞培养上清中的乳酸脱氢酶(LDH)释放率,以免疫荧光法、Western印迹法分别检测Fyn和Fak的表达情况。结果与对照组比较,经终浓度5μmol/L的寡聚体Aβ1～42诱导损伤8 h,神经元细胞培养上清中的LDH释放增加,免疫荧光和Western印迹法分别检测到Fyn和Fak的表达增加。结论 A可明显诱导原代培养皮层神经元的毒性损伤,Fyn信号通路参与这一毒性损伤作用。     

姜黄素及其衍生物对Aβ42引起神经元损伤的保护作用

目的 探讨姜黄素及其衍生物对Aβ42引起神经元损伤的保护作用及对阿尔茨海默病(AD)的治疗机制.方法 采用无血清体外培养胎鼠原代海马神经元,用神经元特异性标记物--微管相关蛋白免疫荧光染色鉴定.用化学法合成姜黄素及其衍生物,以质谱和核磁共振谱表征结构.体外培养的大鼠原代海马神经元用5 μmol/L Aβ42,同时分别加入1 μg/ml姜黄素以及衍生物作用24 h后,MTT法分析Aβ42对海马神经元的毒性作用和姜黄素以及衍生物对Aβ42引起神经元损伤的保护作用.结果 经质谱和核磁共振谱分析证实成功合成了母体姜黄素(P2)及3种姜黄素衍生物(P1、P3、P4).用10、5、2.5、1.25和0.625 μmol/L Aβ42处理后神经元的存活率分别为38%、63%、72%、79%和82%,而姜黄素(P1)及其衍生物(P3)能对抗Aβ42(5 μmol/L)对神经元的毒性作用,分别使神经元的存活率上升22%,26%.结论 Aβ42对海马神经元具有毒性作用,姜黄素及其衍生物对Aβ42引起的海马神经元损伤有明显的保护作用.     

NMDA受体NR1、NR2A/B在丘脑前核-海马CA1、CA3脑区和齿状回的分布与表达

目的 探讨NMDA受体NR1、NR2A/B在丘脑前核-海马CA1、CA3脑区和齿状回的分布与表达,以及丘脑前核-海马神经元的学习记忆功能及作用机制.方法 运用原位杂交检测技术观测丘脑前核及海马CA1、CA3和齿状回内NMDA受体NR1、NR2A 及NR2B mRNA的分布特点.结果 ①原位杂交阳性产物呈棕黄色,主要分布在神经元的胞浆中,胞核基本不着色.②在丘脑前核,阳性神经元分布较密集,细胞形态较一致.③在海马锥体层阳性神经元分布较多,呈带状.在分子层、多形层分布少.④NR1、NR2A/B在丘脑前核和海马CA1、CA3脑区及齿状回均有表达,其中NR1在齿状回表达水平最强,NR2B在丘脑前核、海马CA1、CA3和齿状回表达水平基本相同.结论 在丘脑前核-海马的局部神经元环路中NMDA受体NR1、NR2A及NR2B mRNA分布广泛.其中NR2B mRNA在丘脑前核和海马CA1、CA3脑区及齿状回表达水平基本相同,可能与此环路学习记忆有关.     

实验性氟中毒对SH-SY5Y细胞NMDA受体、Ca~(2+)及凋亡的影响

目的研究氟对SH-SY5Y细胞中NMDA受体、细胞内Ca~(2+)浓度及细胞凋亡的影响,探讨高氟蓄积对神经系统损伤的机制。方法体外培养SH-SY5Y细胞,加入终浓度为0.2 mmol/L和2 mmol/L的氟化钠,并用10μmol/L的NMDA受体拮抗剂MK801对染氟组进行干预。免疫荧光检测细胞内Ca~(2+)的浓度变化,流式细胞仪测定细胞凋亡率,Western blot法检测NMDA受体亚型NR1、NR2A、NR2B蛋白的表达。结果与对照组相比,高氟组中细胞凋亡率和细胞内Ca~(2+)平均荧光值明显增加,NR1和NR2A蛋白表达增加(P0.05)。对高氟组进行MK801干预后,细胞凋亡率和细胞内Ca~(2+)浓度减低(P0.05)。结论在SH-SY5Y细胞中NMDA受体亚型NR1和NR2A的过度表达参与了高氟诱导的神经细胞凋亡和坏死的过程,这种损伤机制可能是由于细胞内Ca~(2+)大量聚集所致。     

脊髓背角NMDA受体NR2B亚基对舒芬太尼耐受形成的作用

目的探究脊髓背角N-甲基-D-天门冬氨酸(NMDA)受体NR2B亚基对舒芬太尼耐受形成的作用。方法将大鼠随机分为舒芬太尼组和空白对照组,皮下注射舒芬太尼复制舒芬太尼耐受大鼠模型,检测两组于皮下注射前和注射第3、9天机械性刺激痛阈和热缩足潜伏期,检测注射第3、9天脊髓背角NR2B蛋白及mRNA表达。结果舒芬太尼组注射后第3、9天机械性刺激痛阈值和热缩足潜伏期均显著大于注射前,且注射后第3天显著大于注射后第9天(P0. 05);舒芬太尼组注射后第3、9天NR2B亚基蛋白及mRNA表达水平均显著大于空白对照组,且注射后第3天均显著小于注射后第9天(P0. 05)。结论舒芬太尼诱导大鼠耐受性形成的机制可能是通过促进脊髓背角NMDA受体NR2B亚基的表达量增加。     

盐酸美金刚对血管性痴呆大鼠N-甲基-D天冬氨酸受体的影响

目的观察盐酸美金刚对血管性痴呆(vascular dementia,VaD)大鼠学习记忆能力及对N-甲基-D天冬氨酸受体3个亚基(NR1、NR2A、NR2B)的影响。方法将30只成年雄性SD大鼠随机分为假手术组、模型组和美金刚组,每组10只,后2组采用永久性结扎双侧颈总动脉方法制作VaD大鼠模型。美金刚组于术后1周给予美金刚10mg/(kg·d)灌胃治疗4周,模型组给予等量生理盐水。于术后5周采用Morris水迷宫测试各组大鼠的学习记忆水平,用Western blot方法测定各组大鼠海马区NR1、NR2A和NR2B蛋白的表达水平。结果与假手术组比较,模型组大鼠术后水迷宫实验逃避潜伏期显著延长(P=0.001),跨越目标象限百分率明显减少(P=0.002),海马区NR1、NR2A、NR2B蛋白表达水平明显下降(P<0.05)。与模型组比较,美金刚组学习记忆水平明显改善(P<0.05);NR1、NR2A、NR2B蛋白的表达显著增加(P<0.05),但仍低于假手术组(P<0.05)。结论美金刚对VaD大鼠海马区NR1、NR2A和NR2B蛋白表达均具有上调作用,从而改善其学习记忆能力。     

β淀粉样蛋白诱发的内质网应激及特异性凋亡因子的影响

目的 探讨在阿尔茨海默病(AD)脑损伤中,β淀粉样蛋白(Aβ)神经毒性对内质网应激分子伴侣GRP78及特异性凋亡因子caspase12的表达变化及何首乌提取物二苯乙烯苷(TSG)的干预作用. 方法 采用立体定向仪于海马部位注射微量Aβ(1-42)造模,反转录聚合酶链反应(RT-PCR)及免疫印迹法检测24、48、72 h的海马神经元内质网分子伴侣GRP78及特异性凋亡因子caspase12 mRNA及蛋白的表达变化. 结果 模型组GRP78的mRNA及蛋白的表达一致,蛋白表达在24h开始升高,48h达峰值,72h下降,各时间点与对照组比较,差异有统计学意义(F=239.79,P<0.05);TSG干预后在72h时GRP78蛋白仍有较高表达,与各组比较,差异有统计学意义(F=228.72,P<0.05);模型组caspase12在24 h时表达即达高峰,48 h开始下降,72 h仅少量表达.各时间点与对照组比较,差异有统计学意义(F=512.0,P<0.05);TSG干预后caspase12在24h时的表达强度明显减弱,与各组比较,差异有统计学意义(F=142.43,P<0.05). 结论 海马神经元在受到Aβ刺激后,可上调内质网特异性的caspase12凋亡因子表达,同时分子伴侣GRP78表达升高,启动内质网自稳调节系统,对受损细胞产生保护作用;二苯乙烯苷可通过上调GRP78和下调caspase12的表达而发挥脑保护作用.     

N-甲基-D-天冬氨酸受体NR2B亚基与神经元凋亡

神经元凋亡是缺血性卒中神经元死亡的重要形式之一.在神经元凋亡过程中,民N-甲基-D-天冬氨酸(N-methyl-D-aspartate,NMDA)受体介导的兴奋性氨基酸毒性起着重要作用,是神经元凋亡的启动者和执行者.NR2B是该受体的主要调节亚基,其跨膜片段M2是一个面向胞质向膜内反折的膜襻区,形成离子通道的内壁,决定了NMDA受体离子通道对ca2+的通透性.谷氨酸主要通过钙超载介导细胞损伤,因此,NR2B亚基在缺血性卒中神经元凋亡中起着至关重要的作用.     

二十烷酸对大鼠皮质神经元Aβ生成的影响及激活过氧化物酶体增殖剂激活受体α的干预作用

目的 观察二十烷酸(EA)对神经元Aβ生成途径的影响及激活过氧化物酶体增殖剂激活受体α(PPARα)的干预作用.方法 将原代培养的大鼠皮质神经元分为3组:对照组、EA组、EA+ Wy14 643组.EHSA法检测培养液中Aβ含量,Western印迹法检测神经元β-淀粉样前体蛋白(APP)、β-分泌酶(BACE1)蛋白表达,RT-PCR法分析脂酰辅酶A氧化酶(ACOX1)mRNA表达.结果 EA组细胞APP、BACE1蛋白表达及Aβ生成增多(P ＜0.01,P＜0.05),ACOX1 mRNA表达加强(P＜0.05);应用PPARα激活剂Wy14 643干预后,ACOX1 mRNA表达进一步加强(P＜0.05),细胞APP、BACE1蛋白表达及Aβ生成减少(P＜0.01,P＜0.05).结论 饱和脂肪酸可能通过促进Aβ生成在AD发病机制中起重要作用,激活PPARα有效降低了饱和脂肪酸所致的Aβ生成.