福建省沙门菌病invA与spvB基因分布状况的研究

[目的]了解福建省沙门菌临床分离株invA与spvB基因的分布特点,为掌握我省沙门菌病分子流行病学特征提供依据。[方法]采集2006、2007年沙门菌临床分离株137株,煮沸裂解法提取DNA后对invA和spvB基因进行PCR检测。[结果]invA和spvB基因的阳性率分别为99.3%和24.8%;spvB基因在腹泻病例中的阳性率高于在发热病例中的阳性率,在非伤寒病例株的阳性率显著高于伤寒、副伤寒病例株的阳性率。[结论]invA基因可作为沙门菌病快速诊断基因,spvB基因在非伤寒、伤寒及副伤寒沙门菌血清型中均有不同程度地存在。     

多重实时PCR检测沙门菌、志贺菌和致泻性大肠埃希菌

目的 建立多重实时荧光PCR检测沙门菌侵袭蛋白A基因（invA）、肠产毒性大肠埃希菌（ETEC）不耐热肠毒素基因（elt）、志贺菌和肠侵袭性大肠埃希菌侵袭力基因（ipaH）的方法。方法 优化多重实时荧光PCR的反应条件,检测系列10倍稀释的阳性菌DNA提取物。90份腹泻患者粪便样品经缓冲蛋白胨水（buffered peptone water,BP）增菌6h后进行多重实时荧光PCR检测,并对阳性标本进行菌株分离和鉴定。结果 多重实时PCR方法最低可以检测到10CFU／μl的福氏2aF301株、10。CFU／μl的鼠伤寒沙门菌和ETEC44815株。检测腹泻患者粪便样品,elt基因阳性率为14．4％（13／90）,ipaH基因阳性率为5．6％（5／90）;并从阳性样品中分离到3株elt基因阳性大肠埃希菌和4株ipaH基因阳性大肠埃希菌。整个检测过程可在10h内完成,其中包括BP增菌6h。结论 建立了同时检测invA、elt、ipaH毒力基因的多重实时荧光PCR方法,具有高度的特异性,可用于沙门菌、肠产毒性大肠埃希菌、志贺菌和肠侵袭性大肠埃希菌菌株的毒力基因鉴定及临床腹泻粪便标本的快速筛检。     

食物中毒肠炎沙门菌的生物学特性及分子分型研究

目的:对一起食物中毒分离的肠炎沙门菌进行生物学特性和分子分型研究。方法:菌株分离、生化鉴定和血清型确定参照GB/T4789.4-2008方法进行,用VITEK-32全自动微生物鉴定系统检测菌株药物敏感性,用实时荧光PCR法检测沙门菌invA基因,用PFGE方法进行分子分型。结果:17份样品检出10株肠炎沙门菌;经耐药性分析,菌株对氨苄西林、氨苄西林/舒巴坦、头孢唑啉、头孢他啶等15种抗生素均为100%敏感,对呋喃妥因70%耐药;invA基因阳性率为100%;经PFGE分型,10株源于食物中毒患者和涂抹物样品的肠炎沙门菌带型一致,为相同菌株。结论:invA基因可作为沙门菌病快速诊断基因;PFGE是一种非常实用的分子分型方法,能用于沙门菌食物中毒细菌同源性的分析。     

伤寒和甲型副伤寒沙门菌复合PCR检测

目的 建立用于快速和特异检测伤寒沙门菌和甲型副伤寒沙门菌的复合PCR方法.方法 根据rfbS、rfbE、fliC和vi基因序列设计4对PCR引物,对54株沙门菌和其他菌属的菌株进行复合PCR检测.结果 采用所建立的复合PCR方法可分别检测到伤寒和甲型副伤寒沙门菌的3条和2条特异性条带带型,可与其他菌株带型准确分开.结论 本研究建立的复合PCR方法可用于检测伤寒沙门菌和甲型副伤寒沙门菌.     

食物中毒中副溶血性弧菌和沙门菌双重荧光PCR检测方法的建立

目的建立双重荧光PCR用于检测食物中毒中副溶血性弧菌和沙门菌。方法设计特异性引物和探针用于扩增副溶血性弧菌tlh基因和沙门菌invA基因(invA),采用倍比稀释法检测方法的DNA灵敏度和菌液灵敏度,采用9株其他肠道致病菌验证方法的特异性。结果两种病原菌DNA检测灵敏度分别为65 fg/PCR和56 fg/PCR体系,菌液检测灵敏度分别为11 cfu/ml和9 cfu/ml,特异度100%。用建立的方法对4起食物中毒进行检测,共检出副溶血性弧菌15株和沙门菌8株。结论该方法高效并具有很高的灵敏性和特异性,在副溶血性弧菌和沙门菌引起的食物中毒的快速检测中具有广阔的应用前景。     

实时荧光PCR检测沙门菌特异基因

目的：建立一种灵敏、快速检测沙门菌的实时荧光PCR方法.方法：针对沙门菌特异性基因invA设计引物、探针,在实时荧光PCR仪上进行扩增、检测和结果分析.结果：应用该实时荧光PCR方法,30株沙门菌检测结果均为阳性,19株非沙门菌结果均为阴性,96个肛门拭子样本增菌前后的PCR结果一致;检测灵敏度达到4 cfu/test,定量结果与培养计数无显著差异.结论：该方法检测沙门菌具有灵敏度高、快速方便的特点,且可用于定量检测.     

应用多重PCR法快速检测伤寒沙门菌的研究

目的:建立快速、特异检测伤寒沙门菌的多重PCR法,应用于临床肠热症的快速诊断。方法:根据GenBank,EMBL及DDBL公布的伤寒沙门菌鞭毛蛋白抗原基因、菌体抗原基因及表面抗原基因的核酸序列,设计出针对fliC-d,rfbE,rfbS及viaB基因的4对特异性引物,采用多重PCR法检测伤寒沙门菌标准株、非伤寒沙门菌标准株及伤寒沙门菌临床菌株。结果:实验结果证实,所有伤寒沙门菌株应用多重PCR法均成功扩增出预先设计的4条特异性目的条带。结论:所建立的多重PCR法可用于快速检测和鉴定伤寒沙门菌,为肠热症的临床诊断及流行病学溯源提供了一种更简便易行的检测技术。     

多重实时PCR及脉冲场凝胶电泳技术在一起食源性疾病暴发事件中的应用

目的探讨多重实时PCR(multiplex real-time PCR,MRP)和脉冲场凝胶电泳(pulse field gel elec-trophoresis,PFGE)技术在食源性疾病检测中的应用。方法利用多重实时PCR技术对39份样本增菌培养物进行沙门菌侵袭蛋白A基因(invA)、肠产毒素性大肠埃希菌不耐热肠毒素基因(elt)、志贺菌和肠侵袭性大肠埃希菌侵袭力基因(ipaH)的检测,并根据多重实时PCR的结果有针对性的开展了常规的分离培养鉴定工作。应用PFGE对10株分离菌株进行分子分型。结果 10份患者肛拭检出沙门菌侵袭蛋白A(invA)基因,并从这10份样本中分离到10株都柏林血清型沙门菌。39份样本均未检出肠产毒素性大肠埃希菌不耐热肠毒素基因(elt)、志贺菌和肠侵袭性大肠埃希菌侵袭力基因(ipaH)。10株都柏林血清型沙门菌PFGE条带完全一致。结论多重实时PCR有助于提高细菌性食源性疾病的判明率,指导病原菌的常规分离培养,PFGE可用于细菌性食源性疾病的追踪溯源。     

PCR快速检测甲型副伤寒沙门菌鞭毛抗原H-a研究

目的研究快速、特异、灵敏的检测甲型副伤寒沙门菌鞭毛特异相H-a的PCR法.方法选择甲型副伤寒沙门菌鞭毛抗原H-a基因的特异引物进行PCR扩增,检测甲型副伤寒沙门菌标准菌株和我省不同地区上送的57株甲型副伤寒沙门菌以及非甲型副伤寒沙门菌的其它菌株;将甲型副伤寒沙门菌标准菌株按10-1～10-9稀释后扩增比较PCR的检测灵敏度.结果所有甲型副伤寒沙门菌均在329bp处出现甲型副伤寒沙门菌鞭毛抗原基因产物,非甲型副伤寒沙门菌株PCR结果均为阴性;PCR检测下限为103cfu/ml.结论 PCR比传统细菌检测方法更特异、快速、灵敏、简便,为临床诊断、实验室筛查以及流行病学快速查源、溯源提供了新的手段.     

实时荧光PCR方法检测水产品中沙门菌

[目的]探索沙门菌快速检验法，加快水产品检验检疫通关速度，促进外经贸经济的发展。[方法]用深圳太太基因工程有限公司提供的沙门菌实时荧光PCR试剂盒对水产品样本进行检验。[结果]用实时荧光PCR从多个水产品样品的增菌液中检出9份样品沙门菌阳性，用传统的微生物生理生化培养法从该9份样品中分离出9株沙门菌。根据血清分型、API鉴定和荧光PCR结果，确认所分离的菌株中有沙门菌B群3株、C1群4株、D群1株、其他群1株。[结论]实时荧光PCR方法在沙门菌的检验方面较传统方法具有快速、灵敏、特异性强等优势，有利于提高沙门菌的检出率，具有广阔的运用前景。