川芎嗪对中波紫外线诱导黑素细胞黑素生成的影响

目的:研究川芎嗪(TMP)对不同剂量中波紫外线(UVB)诱导正常人黑素细胞黑素合成的影响,并初步探讨其机理。方法:常规分离培养正常人黑素细胞,分别用30mJ/cm2、90mJ/cm2的UVB照射细胞,然后加入100μg/ml、300μg/ml、600μg/ml的TMP孵育至72h,采用噻唑蓝(MTT)法测定细胞增殖情况;多巴氧化法测定酪氨酸酶活性;NaOH裂解法测定黑素含量。结果:30mJ/cm2的UVB能诱导黑素细胞增殖,加强酪氨酸酶活性,促进黑素生成,TMP能显著抑制该效应,并呈剂量依赖性;90mJ/cm2的UVB对黑素细胞产生明显的细胞毒作用,细胞增殖下降,黑素合成减少,TMP则能减轻其细胞毒作用,并也表现为剂量依赖性,以600μg/ml的TMP作用最为显著,差异有统计学意义。结论:TMP不但能抑制低剂量UVB照射诱导的黑素细胞增殖和黑素合成,而且还能减轻高剂量UVB照射对黑素细胞的细胞毒作用,对黑素细胞起一定的光保护作用。     

黑素细胞的体外培养研究进展及意义

黑素细胞（Melanocyte简称MC）来源于外胚层的神经嵴,在胚胎8～10周时逐渐迁移至皮肤,广泛存在于机体各组织,可见于表皮、毛囊、真皮、眼、血管周围、外周神经及交感神经干、软脑膜、内耳、胆囊、卵巢等结构。通过黑素细胞（MC）的体外纯培养可以研究黄褐斑、白癜风、白发等色素障碍性疾病的发病机制,也可以利用黑素细胞模型来筛选治疗这些疾病的药物和方法。     

人源Dickkopf1原核表达产物对体外培养的黑素细胞的抑制作用

目的:观察人源Dickkopf1原核表达产物(DKK1蛋白)对体外培养的黑素细胞的抑制作用。方法:采用MTT法测定细胞增殖情况;光学显微镜观察细胞形态学变化;氢氧化钠裂解法测定黑素合成;多巴氧化法测定酪氨酸酶活性。结果:DKK1蛋白对黑素细胞的增殖有抑制作用,能使细胞数明显减少(P<0.05);光学显微镜观察到DKK1蛋白作用的黑素细胞胞体较大,形态略呈多角形,树突较粗短;并能使黑素合成显著下降(P<0.05);使酪氨酸酶活性显著减弱(P<0.05)。结论:DKK1蛋白能抑制黑素细胞增殖、黑素合成、酪氨酸酶活性,为DKK1蛋白应用于治疗色素增多性疾病奠定实验基础。     

紫外线照射对体外培养人表皮黑素细胞雌激素受体的影响

目的:为了了解紫外线照射对对体外培养人正常黑素细胞雌激素受体的影响.方法:采用MTT法测定UVR照射后黑素细胞增殖情况,Nakajima M方法测定酪氨酸酶活性,PSA免疫组织化学方法和半定量RT-PCR法检测UVR照射后黑素细胞雌激素受体基因mRNA表达.结果:UVA照射后黑素细胞数量在低照射剂量时升高,高剂量时无明显变化,酪氨酸酶活性在低照射剂量时升高,高剂量时随着剂量加大而逐浙下降;UVB照射后黑素细胞数量在低照射剂量时升高,在熙射剂量到达某个临界点后随着照射剂量的增加而迅速降低,酪氨酸酶活性在低剂量时增加,在高剂量照射时继续保持高度活性,不随照射剂量增加而变化;UVA和URB照射后黑素细胞ER免疫组化均可产生棕黄色颗粒,主要定位于细胞核;雌激素受体基因mRNA表达也明显高于对照组.结论:不同剂量和不同类型的紫外线照射对体外培养人正常黑素细胞雌激素受体表达均可产生正性作用.     

己烯雌酚对体外培养正常人表皮黑素细胞的作用

目的：观察不同浓度外源性雌激素己烯雌酚（Diaethylstilbestro，DES）对体外培养人正常黑素细胞的细胞增殖及酪氨酸酶活性的影响。方法：采用MTT法测定黑素细胞增殖情况，参考Nakajima M方法测定酪氨酸酶活性。结果：不同浓度己烯雌酚对体外培养人黑素细胞增殖及酪氨酸酶活性均有促进作用。结论：己烯雌酚能促进人黑素细胞增殖及酪氨酸酶活性，对相关皮肤色素性疾病可能有一定的治疗作用。     

含己烯雌酚血清对体外培养正常人黑素细胞的作用

目的:观察不同浓度含己烯雌酚(DES)血清对体外培养人黑素细胞的增殖和酪氨酸酶活性的影响。方法:采用MTT法测定黑素细胞增殖情况;参考Nakajima M方法测定酪氨酸酶活性;NaOH溶解法测定黑素含量。结果:己烯雌酚血清不同剂量对人黑素细胞增殖及酪氨酸酶活性均有促进作用。结论:己烯雌酚能促进体外培养人黑素细胞增殖及酪氨酸酶活性,对相关皮肤色素性疾病可能有一定的治疗作用。     

NB-UVB对体外培养黑素细胞黑素合成及细胞内钙离子的影响

目的:研究NB-UVB对体外培养黑素细胞黑素合成及黑素细胞内钙离子的影响。方法:由青少年的包皮组织中分离黑素细胞,采用NaOH法测定NB-UVB辐射对黑素细胞黑素合成影响,采用激光共聚焦扫描显微镜检测细胞内游离钙。结果:相对于对照组,实验剂量下NB-UVB辐射后72h均能提高人黑素细胞的黑素合成能力及细胞内钙离子的水平。结论:NB-UVB可能通过诱导细胞内Ca2+升高,提高黑素细胞黑素合成能力,从而促进黑素细胞迁移,促进皮损复色。     

含己烯雌酚血清对体外培养正常人黑素细胞的作用

目的:观察不同浓度含己烯雌酚(DES)血清对体外培养人黑素细胞的增殖和酪氨酸酶活性的影响。方法:采用MTT法测定黑素细胞增殖情况;参考Nakajima M方法测定酪氨酸酶活性;NaOH溶解法测定黑素含量。结果:己烯雌酚血清不同剂量对人黑素细胞增殖及酪氨酸酶活性均有促进作用。结论:己烯雌酚能促进体外培养人黑素细胞增殖及酪氨酸酶活性,对相关皮肤色素性疾病可能有一定的治疗作用。     

三种人工合成寡核苷酸序列对体外培养的毛囊黑素细胞的影响

目的：研究三种人工合成寡核苷酸序列对体外培养的毛囊黑素细胞形态及酪氨酸酶活性的影响。方法：采用胶原酶和胰酶两步消化法,分离培养毛囊内黑素细胞。多巴氧化法测酪氨酸酶活性,硝酸银染色观察细胞形态的变化。结果：三种人工合成寡核苷酸序列可以显著增强酪氨酸酶活性（P〈0.05）;银染色细胞显示CpG-1826和CpG-2006组胞体变得肥大,黑素化明显,树突增多,与对照组相比有显著差异。结论：部分人工合成寡核苷酸序列可促进毛囊黑素细胞的酪氨酸酶活性和树突增加,为白癜风皮损复色的研究奠定基础。     

放线菌酮诱导体外培养黑素细胞凋亡的实验研究

观察放线菌酮对体外培养的黑素细胞的影响。方法：放线菌酮处理体外培养黑素细胞24h后，利用MTT法测定MC活力、流式细胞术测定MC凋亡率、电镜观察MC凋亡时形态学改变。结果：用40mg／1和80mg／1的放线菌酮分别作用24h后，黑素细胞活力明显降低，并出现典型的凋亡特征，染色质边集，核固缩，凋亡小体出现。流式细胞仪检测可见典型的凋亡峰。结论：放线菌酮有抑制黑素细胞增殖和促黑素细胞凋亡作用。．     

白介素-1对培养人表皮黑素细胞增殖及黑素合成的影响研究

目的:建立正常人表皮黑素细胞体外培养体系,观察不同浓度的白介素-1α,白介素-1β对体外培养正常人黑素细胞的细胞增殖及黑素合成的影响。方法:采用四甲基偶氮唑盐(MTT)法测定白介素-1α及白介素-1β对黑素细胞增值的影响,NaOH裂解法测定黑素生成量,流式细胞仪检测黑素细胞的凋亡率。结果:白介素-1α及白介素-1β对黑素细胞活力有抑制作用,能使细胞增殖能力降低,黑素合成减少,增加黑素细胞的凋亡率。结论:白介素-1α及白介素-1β对体外培养的黑素细胞增殖及黑素生成都有抑制作用,这为临床应用白介素-1α及白介素-1β治疗色素性疾病提供了实验依据。     

Inhibitory effects of the peptide (CKPV)2 on endotoxin-induced host reactions

BACKGROUND: alpha-Melanocyte stimulating hormone (alpha-MSH) is an endogenous peptide that has remarkable anti-inflammatory and antimicrobial effects. These activities have been traced to the C-terminal tripeptide Lys-Pro-Val (KPV). A dimer composed of two KPV sequences connected with a Cys-Cys linker, (CKPV)2, is currently under clinical investigation for antimicrobial use. The present research was designed to evaluate effects of (CKPV)(2) on endotoxin-induced host reactions in vitro and in vivo. MATERIALS AND METHODS: Effects of (CKPV)2, KPV, and [Nle4-dPhe7]-alpha-MSH (NDP-alpha-MSH) on tumor necrosis factor alpha (TNF-alpha) production were determined: 1) in human peripheral blood mononuclear cells (PBMC) stimulated with lipopolysaccharide (LPS) in vitro, and 2) in rats injected with LPS i.v. and sacrificed at 1 h. In additional experiments, dialysis peritonitis was induced in rats by adding LPS to dialysis fluid. Net ultrafiltrate was calculated and concentrations of nitrite (NO2-) and TNF-alpha were measured in blood and peritoneal fluid at 7 h. RESULTS: (CKPV)2 inhibited TNF-alpha production by LPS-stimulated human PBMC. This small peptide was as effective as NDP-alpha-MSH and more potent than KPV. Similar effectiveness was observed in vivo: 1 h after LPS injection, the large increase in circulating TNF-alpha was markedly reduced by (CKPV)2 treatment. In LPS-induced peritonitis, (CKPV)2 restored net ultrafiltrate to control values and significantly inhibited concentrations of TNF-alpha and NO2- both in plasma and in dialysate. CONCLUSIONS: The remarkable capacity of (CKPV)2 to inhibit endotoxin-induced host reactions suggests that it may be useful in treatment of inflammatory disorders.     

1,25(OH)2VD3对人脐带间充质干细胞增殖及成骨分化的影响

目的 研究人脐带组织间充质干细胞(UCMSCs)体外分离、扩增的方法,探讨不同浓度的1,25(OH)2维生素D3[1,25(OH)2VD3]对人UCMSCs增殖及成骨分化的影响.方法 利用组织块贴壁法分离并培养人UCMSCs,通过免疫组化技术对其鉴定;取生长状态良好的第3代人UCMSCs进行干预实验,设置10-7、10-9和10-11mol/L 3种浓度的1,25 (OH)2VD3作为实验组,并设空白对照组(常规DMEM培养基).动态观察干预前、后各组细胞的形态变化,四唑盐(MTT)比色法观察细胞增殖,免疫组化法检测碱性磷酸酶及Ⅰ型胶原蛋白表达,茜素红染色观察矿化结节形成情况.结果 组织块贴壁培养法可获得人UCMSCs,免疫细胞化学显示CD44、CD105强阳性,CD34、CD45阴性,符合人UCMSCs的特征;1,25 (OH)2VD3对人UCMSCs增殖的影响表现为少于7d促进增殖,超过7d则抑制增殖,高剂量组(10-7mol/L组)抑制干细胞增殖效应更明显,不同浓度效应与时间效应之间存在交互作用(P＜0.05);1,25(OH)2VD3对人UCMSCs成骨分化影响表现为10-11 mol/L组促碱性磷酸酶和Ⅰ型胶原蛋白分泌作用高于10-7和10-9 mol/L组,低剂量1,25(OH)2VD3促进成骨细胞分化作用更明显(P＜0.05);1,25(OH)2vD3可促进人UCMSCs钙化结节的形成.结论 采用组织块贴壁培养法可以成功获得人UCMSCs,1,25(OH)2VD3可有效调节人UCMSCs增殖并促进其向成骨细胞分化.     

腺病毒载体介导的Polo样激酶1短发夹环RNA对胶质瘤体内外增殖的抑制作用

目的探讨重组腺病毒载体介导的Polo样激酶1（PLK1）短发夹环RNA（shRNA）对人胶质瘤细胞株U251在体内外增殖的抑制作用。方法设计并合成针对PLK1的shRNA,并克隆至真核表达载体pEGFP—H1上,再将H1启动子和shRNA亚克隆至腺病毒穿梭质粒pAdTrack上,通过在携带有pAdeasy-1质粒的BJ5183细菌内同源重组,生成针对PLK1的shRNA重组腺病毒载体pAD-H1／PLK1,经293细胞包装产生重组腺病毒AD-H1／PLK1,感染U251细胞。应用逆转录-聚合酶链反应（RT—PCR）的方法检测U251细胞PLK1mRNA表达,流式细胞仪检测细胞凋亡以及细胞G2／M期转变情况,以噻唑蓝（MTT）比色法检测各组细胞的增殖活性。同时制备裸鼠U251细胞移植瘤模型并注射重组腺病毒,观察肿瘤生长情况。结果成功构建针对PLK1基因的RNA干扰腺病毒表达载体,与AD-H1组比较AD-H1／PLK1组在转染24h和48hU251细胞PLK1mRNA表达水平分别降低50．4％（P〈0．01）和71．9％（P〈0．01）。且感染AD-H1／PLK1病毒48h后的U251细胞凋亡率从8．3％升至65．6％（P〈0．01）,而G2／M期的细胞从21．5％增至51．4％（P〈0．01）,细胞的增殖能力则下降50％（P〈0．01）。体内实验表明重组腺病毒载体介导的PLK1shRNA也明显抑制肿瘤生长（P〈0．01）。结论腺病毒介导的RNA干扰技术可有效降低PLK1在胶质瘤细胞中的表达水平,抑制肿瘤细胞在体内外的增殖活性。     

Flavopiridol对尤文肉瘤SK-N-MC细胞增殖的抑制作用

目的探讨细胞周期蛋白激酶抑制剂（flavopiridol）在体内外抑制尤文肉瘤细胞增殖的作用及其机制。方法以不同浓度的flavopiridol作用于培养的SK-N-MC细胞,用噻唑蓝法（MTT）检测细胞增殖,流式细胞分析仪测定细胞周期。采用DNA凝胶电泳检测法,观察flavopiridol诱导细胞凋亡的情况;蛋白质电泳观察Bcl-2及Mcl-1表达变化;建立SK-N-MC细胞裸小鼠皮下移植瘤模型,腹腔内给药,观察肿瘤生长情况;肿瘤标本石蜡包埋切片,免疫组织化学原位末端标记法（TUNEL）检测flavopiridol在体内对肿瘤细胞的凋亡诱导情况。结果（1）Flavopiridol对人尤文肉瘤细胞增殖有抑制作用,时间越长、浓度越高,抑制作用越强。（2）Flavopiridol可改变尤文肉瘤细胞周期,随药物浓度增加Sub-G1期百分比逐渐上升。尤文肉瘤细胞经flavopiridol中、高浓度给药后,DNA凝胶电泳可见典型的梯状带。（3）Flavopiridol给药前后,Bcl-2蛋白表达无变化,而Mcl-1蛋白表达明显下降。（4）TUNEL染色结果显示实验组阳性细胞比例上升,与对照组比较差异有统计学意义。结论Flavopiridol能在体内外抑制尤文肉瘤细胞的增殖,其机制主要是阻滞细胞周期的G1/S期,诱导细胞凋亡。     

共轭三烯酸对人胶质瘤U251细胞的增殖抑制作用

目的 探讨共轭三烯酸(TCLA)对人胶质瘤细胞的增殖抑制作用及作用机制。方法 用噻唑蓝(MTT)比色法、克隆形成试验、5-溴脱氧尿嘧啶核苷(BrdU)掺人试验研究TCLA对人脑胶质瘤细胞的增殖抑制作用;Hoechst 33342/PI双染法、流式细胞术检测细胞凋亡指数和周期分布;逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)检测凋亡相关基因腺苷二磷酸核糖转移酶1(ADPRTL1)、细胞色素P4501A1( CYP1A1),过氧化物酶增殖体激活受体-γ(PPAR-γ)的表达。结果 共轭三烯酸对人胶质细胞瘤(U251)有明显抑制作用,呈剂量-时间-效应关系(P＜0.05)。克隆形成下降,40 μmol/LTCLA可完全抑制克隆形成。BrdU标记从(91.6±3.6)％下降到(14.4±4.4)％(P＜0.05),Hoechst 33342/PI双染试验,凋亡细胞增加(P＜0.05)。流式细胞仪检测显示,细胞凋亡指数从(7.3±1.2)％升高到(34.2±2.4)％(P＜0.05),Go/G1期细胞比例增加,S期细胞比例减少(P＜0.05);RT-PCR结果显示,凋亡相关基因ADPRTL1、CYP1 A1、PPAR-γ mRNA表达增强(P＜0.05)。结论 TCIA对人脑胶质瘤细胞具有增殖抑制和凋亡诱导作用,其作用机制可能与抑制肿瘤细胞DNA合成、细胞周期阻滞、上调凋亡相关基因(ADPRTL1、CYP1A1、PPAR-γ)表达有关。     

普伐他汀对肝癌HepG2细胞增殖的抑制作用

目的探讨HMG-CoA还原酶抑制剂(Statins)在体内外抑制肝细胞癌增殖和侵犯的作用及其机制。方法以不同浓度的普伐他汀(Pr)作用于培养的HepG2细胞,用噻唑蓝比色试验检测细胞的增殖活性,并观察细胞的形态学变化。建立HepG2细胞裸小鼠皮下移植瘤模型,腹腔注射浓度为5 g／L的Pr,每只每日10 ml／kg体重。观察肿瘤的生长情况,实验结束时切取肿瘤称重,检测血中AFP水平。肿瘤标本石蜡切片,免疫组织化学检测CyclinD1和FⅧRA的表达。结果 Pr作用96 h后明显抑制了HepG2细胞的生长,细胞出现明显的形态学改变。Pr也抑制裸小鼠皮下移植型肝癌的生长,Pr组和对照组瘤重分别是(0．246±0．129)g和(0．376±0．102)g(P< 0．05),抑瘤率34．6％。两组的AFP表达差异有统计学意义[(2．657±1．465)μg／L比(4．206± 1．204)μg／L,P<0．05]。Cydin D1在肿瘤间质的成纤维细胞表达,Pr组的积分吸光度(OPTID)为 219．40±24．00,对照组为451．54±47．97(P<0．05)。两组的微血管密度(MVD)分别为27．43± 6．83和41．22±6．26(P<0．05)。结论 Pr能抑制肝癌细胞的增殖,其机制主要是抑制肿瘤的血管形成和肿瘤基质中的成纤维细胞的增生。     

三羟基异黄酮对增生性瘢痕成纤维细胞增殖与胶原合成作用的影响

目的探讨5,7,4′-三羟基异黄酮对体外培养的人增生性瘢痕成纤维细胞增殖及胶原合成作用的影响。方法以不同浓度三羟基异黄酮处理体外培养的人增生性瘢痕成纤维细胞分为25、50、100μmol/L三组,以加DMSO溶剂为对照组,MTT法测定成纤维细胞的增殖,3H-脯氨酸掺入法测定细胞胶原合成情况,逆转录聚合酶链式反应(RT-PCR)检测Ⅰ、Ⅲ型前胶原mRNA的表达。结果三羟基异黄酮能有效抑制增生性瘢痕成纤维细胞的增殖及胶原合成(P<0.05),且具有剂量-效应关系;100μmol/L浓度组作用后,与对照组相比,差异有显著意义(P<0.01);三羟基异黄酮作用后成纤维细胞Ⅰ、Ⅲ型前胶原mRNA的表达显著下调(P<0.05)。结论三羟基异黄酮能抑制增生性瘢痕成纤维细胞的增殖与活性,可能成为治疗瘢痕及纤维化疾病的有效药物。     

三羟基异黄酮对增生性瘢痕成纤维细胞增殖与胶原合成作用的影响

目的探讨5,7,4′-三羟基异黄酮对体外培养的人增生性瘢痕成纤维细胞增殖及胶原合成作用的影响。方法以不同浓度三羟基异黄酮处理体外培养的人增生性瘢痕成纤维细胞分为25、50、100μmol/L三组,以加DMSO溶剂为对照组,MTT法测定成纤维细胞的增殖,3H-脯氨酸掺入法测定细胞胶原合成情况,逆转录聚合酶链式反应（RT-PCR）检测Ⅰ、Ⅲ型前胶原mRNA的表达。结果三羟基异黄酮能有效抑制增生性瘢痕成纤维细胞的增殖及胶原合成（P〈0.05）,且具有剂量-效应关系;100μmol/L浓度组作用后,与对照组相比,差异有显著意义（P〈0.01）;三羟基异黄酮作用后成纤维细胞Ⅰ、Ⅲ型前胶原mRNA的表达显著下调（P〈0.05）。结论三羟基异黄酮能抑制增生性瘢痕成纤维细胞的增殖与活性,可能成为治疗瘢痕及纤维化疾病的有效药物。