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目的探讨肾小管上皮细胞-间充质转化(EMT)与肾脏病理进展及原发性肾病综合征(INS)糖皮质激素(GC)耐药的关系。方法2005年9月至2007年12月在中南大学湘雅二医院儿科住院行肾穿刺活检的INS患儿40例,分为激素耐药性肾病综合征(SRNS)组(20例)和激素敏感性肾病综合征(SSNS)组(20例)。免疫组化双染法检测INS患儿和5例正常对照组儿童肾组织中细胞角蛋白(CK)和波形蛋白(vimentin)的表达,肾脏病理评分半定量评价肾组织病理损害程度。结果SRNS组肾小管-间质病理评分显著高于SSNS组(P<0.05);正常对照组肾小管上皮细胞内只表达CK,不表达vimentin;INS肾小管上皮细胞均不同程度表达vimentin;SRNS组肾组织CK表达较SSNS组显著降低[分别为(66.25±12.13)%和(76.64±7.64)%,P<0.05],vimentin表达较SSNS组显著增高[分别为(11.51±7.48)%和(4.98±2.27)%,P<0.05];不同肾小管-间质病变(轻、中、重度)组肾小管上皮细胞内CK和vimentin表达量的差异均有统计学意义[CK表达量分别为(79.97±...     

肾病综合征患儿肾组织中AP-1及TGF-β1的表达与激素疗效关系的探讨

目的探讨原发性肾病综合征(PNS)患儿肾组织激活蛋白_1(AP_1)、转化生长因子_β1(TGF_β1)的表达与激素耐药、肾脏病理损害的相关性,以期阐明PNS激素耐药的可能机制。方法应用非生物素免疫组化ElivisionTMplus法检测48例PNS(SSNS8例,SRNS20例,SDNS20例)患儿肾组织中AP_1亚基c_Jun和TGF_β1的表达水平,用计分法半定量评价肾脏的病理损害程度。结果①肾小球内和肾小管间质内AP_1和TGF_β1的表达,均为SRNS>SDNS>SSNS(P<0.01)。②SSNS、SDNS、SRNS3组肾小球的病理损害分数分别为4.25±1.49,5.25±1.65,8.10±2.57(SRNS与SDRS比较P<0.01,SDRS与SSNS比较P>0.05);SSNS、SDNS、SRNS3组肾小管间质的病理损害分数分别为4.13±0.99,6.90±1.55,11.10±2.94(P<0.01)。③肾组织中AP_1和TGF_β1的表达与肾小球和肾小管间质病理损害的程度呈正相关(相关系数分别为:0.463,0.352;0.547,0.646,P均<0.05)。结论SRNS患儿肾组织中AP_1和TGF_β1的表达增强,并与肾脏病理损害程度密切相关。     

肾病综合征患儿肾组织P-糖蛋白170表达的研究

目的检测P-糖蛋白170(P-gp170)mRNA及蛋白在糖皮质激素(GC)敏感和耐药型肾病综合征(NS)患儿肾组织中的分布、表达变化,初探NS患儿肾组织P-gp170表达在GC耐药中的作用。方法2005-09—2006-04在中南大学湘雅二医院住院的初发特发性肾病(INS)患儿34例,按照GC对患儿的疗效分为GC敏感组(SSNS)和GC耐药组(SRNS),分别以免疫组织化学和原位杂交方法检测患儿肾组织P-gp170蛋白及mRNA的表达,6例正常肾组织为对照。结果正常对照组肾组织及NS患儿肾组织中均有P-gp170蛋白及mRNA的表达;正常对照组及NS患儿肾小球均无P-gp170蛋白及mRNA的表达,其蛋白及mRNA均主要表达于肾小管及肾间质,肾小管近端表达多于远端(P<0.01);免疫组化和原位杂交结果均显示SSNS阳性信号表达多于对照组,而SRNS又高于SSNS(P均<0.01);P-gp170蛋白与mRNA的表达成显著正相关(r=0.87,P<0.05)。结论肾脏本身即可合成、分泌P-gp170;P-gp170在正常肾小管的表达可能与某些代谢物质的转运有关;NS患儿肾小管P-gp170表达增高可能与NS本身的状态有关,或者是GC通过诱导P-gp170的表达增高而导致GC耐药;P-gp170表达上调可能为GC耐药的机制之一;检测肾组织P-gp170的表达水平有助于预测NS患儿GC反应差异性。     

白细胞介素18在激素耐药型肾病综合征外周血单个核细胞中的表达及意义

目的：通过研究原发性肾病综合征（PNS）患儿血清白细胞介素18（IL-18）水平及其在外周血单个核细胞（PBMC）中的表达,探讨IL-18在激素耐药型肾病综合征（SRNS）发生、发展中的可能机制。方法：采用ELISA法及RT-PCR法测定40例正常儿童及39例激素敏感型肾病综合征（SSNS）、27例 SRNS血清IL-18蛋白水平及PBMC mRNA表达。双缩脲法检测24 h尿蛋白量。全自动生化分析仪检测血清总胆固醇（T-Ch）、甘油三酯（TG）、低密度脂蛋白(LDL)、总蛋白（TP）及白蛋白（Alb）含量。结果：①与正常对照组相比,治疗前SSNS、SRNS血清IL-18蛋白水平及PBMC IL-18 mRNA表达均明显增高（P<0.05）;与SSNS相比,SRNS上述指标均增高（P<0.05）;SSNS及SRNS之间血清Alb,TP,T-Ch,TG水平及 24 h 尿蛋白量差异无显著性（P>0.05）,SRNS血清LDL水平较SSNS高（P<0.05）。②治疗后SRNS组血清IL-18蛋白水平及PBMC IL-18 mRNA表达均高于SSNS组及正常对照组（P<0.05）;SSNS 组与正常对照组比较差异无显著性（P>0.05）。③治疗后SSNS组血清IL-18蛋白水平及PBMC IL-18 mRNA表达较治疗前明显下降（P<0.05）。而SRNS 组治疗前、后无明显变化（P>0.05）。结论：PNS 激素耐药与 IL-18血清水平及PBMC mRNA表达明显升高有关,IL-18 的过度分泌在SRNS的发生发展中发挥一定作用。［中国当代儿科杂志,2009,11（5）：337-340］     

P300在肾病综合征糖皮质激素耐药中的作用

目的观察原发性肾病综合征(PNS)激素敏感与激素耐药组P300表达的差异,探讨P300在肾病综合征糖皮质激素耐药中的作用,为揭示PNS激素耐药发生机制提供理论依据。方法采用免疫组化法检测正常对照组肾组织及40例PNS患儿(激素敏感组20例,激素耐药组20例)肾活检组织中P300表达差异。结果正常肾组织仅偶见肾小管上皮细胞P300呈阳性表达;PNS患儿肾组织均存在不同程度P300表达,主要分布于肾小管上皮细胞,肾小球系膜区表达微弱或未表达,其他肾固有细胞未见P300表达;激素敏感组肾小管上皮细胞P300表达较激素耐药组明显增多(P<0.01),P300表达密集部位的肾小管形态正常,结构完整;肾小管上皮细胞P300阳性表达与肾小管间质病理积分呈负相关(P<0.01)。结论P300蛋白主要通过肾小管上皮细胞促进GC效应发挥;PNS患儿肾小管上皮细胞P300表达下降,可能是导致GC耐药及增加GC对肾小管上皮细胞损伤的机制之一。     

激素耐药型与激素敏感型肾病综合征儿童尿液双向电泳图谱分析

目的建立激素耐药型原发性肾病综合征(SRNS)儿童与激素敏感型原发性肾病综合征(SSNS)儿童尿液全蛋白双向凝胶电泳(2-DE)图谱,分析差异的蛋白质位点,为研究原发性肾病综合征(INS)糖皮质激素耐药的机制提供依据。方法病例来源于湘雅二医院儿科住院部,收集时间为2005-01-2005-10,入选的INS患儿依据中华医学会儿科学分会肾脏病学组制定的诊断标准,分为3组,每组5例。利用2-DE技术分离SRNS与SSNS(治疗前、后)儿童尿液总蛋白质,Image Master 2D V3.01分析软件进行凝胶图像分析。结果获得了图像清晰、分辨率高的SRNS组、SSNS(治疗前)与SSNS(治疗后)组儿童尿液2-DE图谱,3组点数分别为(206±8)个、(204±5)个、(55±5)个;SRNS组与SSNS组(治疗前)尿液2-DE凝胶共筛选出差异蛋白质点66个;SRNS组与SSNS组(治疗后)尿液2-DE凝胶共筛选出差异蛋白质点33个。结论该研究成功建立了分辨率高且重复性较好的SRNS与SSNS儿童尿液全蛋白的2-DE图谱;通过组间尿液2-DE图谱分析,发现了一些可能与INS激素耐药或敏感有关的蛋白质位点,为进一步运用蛋白质组学技术寻找与INS激素耐药抑或激素敏感相关的蛋白质打下了基础。     

儿童激素耐药型与激素敏感型肾病综合征尿蛋白组学的初步研究

目的：筛选和鉴定激素耐药型（SRNS）与激素敏感型原发性肾病综合征（SSNS）尿液中差异表达的蛋白质,寻找可能与肾病综合征激素耐药和激素敏感相关的蛋白质。方法：SSNS治疗前后病例、SRNS、正常对照各5例,提取尿液全蛋白,采用双向凝胶电泳建立全蛋白凝胶图谱;银染后用Image Master 2D V3.01软件分析差异表达蛋白质点,利用MALDI-TOF-MS分析获得肽质量指纹图谱,通过Mascot软件进入NCBI数据库,鉴定出差异表达蛋白质。结果：SRNS组与SSNS治疗前组尿液2-DE凝胶比较有差异蛋白质点66个,其中仅出现于SRNS组24个、SSNS治疗前组27个;SSNS治疗后组与正常对照组尿液2-DE凝胶比较有差异蛋白质点75个,其中仅出现于SSNS治疗后组11个。对18个差异蛋白质点进行分析,鉴定出α1-抗胰蛋白酶、转铁蛋白、带异类电荷糖蛋白复合体等9类差异表达的蛋白质。结论：成功鉴定了SRNS和SSNS的尿液中存在9类差异表达的蛋白质,部分蛋白可能是SRNS或SSNS的标志物。［中国当代儿科杂志,2009,11（5）：341-345］     

肾病综合征患儿肾组织原位血管紧张素转换酶mRNA表达与激素疗效关系的研究

目的　探讨肾病综合征 (NS)患儿肾脏局部肾素 血管紧张素系统 (RAS)、激素耐药、肾脏病理损害程度之间的关系 ,阐述激素耐药的部分机制。方法　 85例原发性NS患儿按激素敏感型NS(SSNS)、激素依赖型NS(SDNS)、激素耐药型NS(SRNS)分成 3组 ,选 6例行肾切除的肾肿瘤患儿的正常肾组织作为对照组。采用原位杂交的方法检测 4组患儿肾脏原位血管紧张素转换酶 (ACE)mRNA的表达水平 ;评分法半定量评估肾脏的病理损害程度。分析NS患儿肾组织ACEmRNA表达水平、激素反应性、肾脏的病理损害程度间的关系。结果　①在肾小球和小管间质区域的ACEmRNA表达水平均为SRNS组 >SSNS组 >对照组 (P <0 0 1)。②SRNS、SDNS、SSNS肾小球病理损害的评分分别为 :6 6 7± 2 4 3,4 6 8± 2 30 ,4 4 2± 2 87(P <0 0 1) ;小管间质病理损害评分分别为 :10 4 8± 3 77,7 2 0± 2 79,4 2 5± 1 4 8(P <0 0 1)。③肾组织ACEmRNA的表达与肾小球和小管间质病理损害程度呈正相关 ,相关系数分别为 0 4 82 ,0 85。结论　SRNS型NS患儿肾组织ACEmRNA表达增强 ,并且与肾脏的病理损害程度密切相关     

PAX2在肾小管上皮细胞转分化中的作用

目的 揭示核转录因子（PAX2）在肾小管上皮细胞转分化过程中的可能作用。方法 38例病例组肾组织按间质病变程度分为轻、中、重3组,其中轻度病变15例,中度病变11例,重度病变12例;对照组为5例外伤后肾切除组织。采用免疫组化法评定肾组织PAX2的表达率和肾小管上皮细胞转分化率。对肾间质病变轻、中、重3组组内肾小管上皮细胞转分化率、PAX2表达率作方差分析,对PAX2表达量与肾小管上皮细胞转分化率作相关分析。结果 正常对照组肾小管上皮细胞只表达角蛋白（CK）,不表达平滑肌肌动蛋白（α-SMA）及PAX2。病例组肾间质病变轻、中、重3组肾小管上皮细胞均不同程度表达α-SMA及PAX2;不同肾间质病变组,肾小管上皮细胞转分化率及PAX2表达量差异均有统计学意义。相关分析表明,PAX2表达量和肾小管上皮细胞转分化率呈正相关（r=0．886,P〈0．05）。结论 PAX2回归表达可能导致肾小管上皮细胞转分化。     

中性粒细胞明胶酶相关脂质转运蛋白在儿童原发性肾病综合征尿液中的表达及意义

目的：研究中性粒细胞明胶酶相关脂质转运蛋白（NGAL）在原发性肾病综合征患儿尿中的水平及其意义。方法：原发性肾病综合征初治患儿34例,经口服泼尼松足量治疗4周尿蛋白未转阴患者归入糖皮质激素耐药型肾病综合征（SRNS）组,尿蛋白转阴患者归入糖皮质激素敏感型肾病综合征（SSNS）组。所有病例在口服泼尼松治疗前、治疗1周、2周、3周、4周时分别收集晨起中段尿,采取ELISA法检测尿液NGAL浓度,同时测得尿中肌酐(Cr)值,采用尿Cr排出量来校正单次尿NGAL水平,比较两组间尿NGAL与Cr比值的表达差异。结果：与SRNS组比较,SSNS组病例尿标本中NGAL/Cr比值在泼尼松治疗3、4周时明显下降（P＜0.05）;与SRNS组比较,SSNS组病例尿标本中β2-MG/Cr比值在泼尼松治疗4周时才开始明显下降。SSNS与SRNS两组病例尿NGAL/Cr与尿蛋白/Cr比值呈正相关(r=0.510,P＜0.01)。ROC曲线下分析结果显示,用药3周后尿NGAL/Cr诊断截点为0.043时,敏感度和特异度分别为100%和79.2%。结论 ：SRNS患儿尿液中NGAL/Cr比值持续维持于高水平,而SSNS患儿尿液中NGAL/Cr比值在泼尼松治疗后逐渐下降,且其下降时间早于β2 MG/Cr比值,提示动态监测尿液中NGAL/Cr比值,有助于早期判断原发性肾病综合征的泼尼松治疗效应。     

Toll样受体4在原发性肾病综合征患儿肾组织及外周血中表达的意义

目的探讨Toll样受体4(TLR4)在原发性肾病综合征(INS)患儿肾组织及外周血中的表达及意义。方法采集2015年10月至2018年6月在新乡医学院第一附属医院确诊为INS的78例患儿肾活检组织及21例儿童正常肾组织(对照组1),应用免疫组织化学方法检测标本中TLR4表达水平,比较INS不同肾脏病理类型、不同临床分型中TLR4表达水平的差异,分析其与24 h尿蛋白、血清清蛋白的相关性;应用酶联免疫吸附试验(ELISA)检测INS患儿治疗前(活动期)及治疗后(缓解期)和23例健康儿童(对照组2)外周血中TLR4表达水平,比较INS不同肾脏病理类型、不同临床分型患儿血清中TLR4表达水平的差异,分析其与24 h尿蛋白、血清清蛋白的相关性;对INS患儿肾小管中TLR4的表达水平与血清TLR4的表达水平进行相关性分析。结果1.与正常肾组织TLR4水平[(0.93±0.26)%]比较,TLR4在各型INS患儿肾小球及肾间质的表达[系膜增生性肾小球肾炎(MsPNG)型:(0.93±0.21)%、局灶节段性肾小球硬化(FSGS)型:(1.02±0.25)%、膜性肾病(MN)型(1.03±0.09)%、微小病变(MCD)型(1.02±0.27)%]差异无统计学意义(F=0.741,P=0.562);而肾小管TLR4的表达水平明显增高[MCD型:(82.94±4.62)%、MN型:(63.54±1.98)%、MsPGN型:(42.32±2.97)%、FSGS型:(22.60±2.07)%],差异有统计学意义(F=1929.842,P<0.01),其中MCD型INS患儿肾小管TLR4表达水平较MN型、MsPGN型、FSGS型明显增高,差异均有统计学意义(均P<0.01);肾小管TLR4在临床分型为激素敏感型肾病综合征(SSNS型)肾脏组织中表达最高,在激素耐药型肾病综合征(SRNS)型表达最低,差异有统计学意义(F=220.951,P<0.01)。2.活动期INS患儿血清TLR4表达[MsPNG型:(143.36±12.99)ng/L、FSGS型(75.94±7.29)ng/L、MN型(210.22±14.66)ng/L、MCD型(283.93±21.58)ng/L]显著高于缓解期患儿[MsPNG型:(29.51±4.93)ng/L、FSGS型(15.66±3.78)ng/L、MN型(45.40±5.73)ng/L、MCD型(62.29±7.90)ng/L]及对照组2儿童[(0.69±0.33)ng/L],差异均有统计学意义(均P<0.01);且缓解期INS患儿血清TLR4的表达水平高于对照组2儿童,差异有统计学意义(F=286.287,P<0.01)。活动期及缓解期INS患儿血清TLR4的表达水平均以MCD型最高,其次为MN型,而FSGS型最低;血清TLR4在临床分型为SSNS型表达最高,SRNS型表达最低,差异有统计学意义(F=147.438,P<0.01)。3.INS患儿肾小管中TLR4的表达水平[(62.82±20.94)%]与其活动期血清中TLR4的表达水平[(213.26±73.33)ng/L]呈正相关(r=0.852,P<0.05);INS患儿肾小管及活动期血清TLR4的表达水平均与24 h尿蛋白水平[(123.05±33.55)mg/kg]均呈正相关(r=0.401、0.427,均P<0.05),与血清清蛋白水平[(19.54±3.55)g/L]均呈负相关(r=-0.602、-0.617,均P<0.05)。结论TLR4在INS患儿肾小管及血清中表达增高,且表达水平可能与不同肾脏病理类型及临床分型有关,与疾病活动具有相关性。     

肾病综合征患儿外周血单个核细胞内地塞米松浓度与细胞膜表面P-糖蛋白170表达的相关性研究

目的分析对糖皮质激素（GC）敏感（SS）和耐药（SR）的原发性肾病综合征（NS）患儿的外周血单个核细胞（PBMC）内地塞米松浓度和P-糖蛋白170（P-gp170）表达与GC耐药的关系,探讨P-gp170在GC耐药NS患儿中的作用及介导耐药的可能机制。方法收集2006年1至10月在中南大学湘雅二医院儿科诊断为原发性NS的初治患儿为研究对象,依据对GC的反应分为SSNS亚组和SRNS亚组,并设同期行查体的健康儿童为对照组。应用地塞米松刺激SSNS和SRSS亚组患儿的PBMC并进行培养,以高效液相色谱法测定培养前（0 h ）及培养后12、24和36 h时PBMC内地塞米松浓度;蛋白质免疫印迹检测培养各时间点PBMC膜表面P-gp170的表达量;分别对不同培养时间点PBMC内地塞米松浓度与P-gp170的表达量行相关性分析。结果研究期间SSNS亚组纳入16例,SRNS亚组纳入8例,对照组纳10例。①PBMC内地塞米松浓度随培养时间延长SSNS亚组呈增高趋势（P<0.05）, SRNS亚组变化不显著（P>0.05）;各培养时间点PBMC内地塞米松浓度SSNS亚组和SRNS亚组均高于对照组（P<0.05）。②SSNS亚组P-gp170表达随培养时间的延长而逐渐降低,各培养时间点差异有统计学意义（P<0.05）,且均高于对照组（P<0.05）。SRNS亚组各培养时间点P-gp170表达差异无统计学意义（P>0.05）,但高于SSRN亚组（P<0.05）。③对照组不同培养时间点PBMC内地塞米松浓度与P-gp170表达呈显著负相关（12 h：r＝-0.852,24 h：r＝-0.794,36 h：r＝-0.847;P均<0.05）;SSNS亚组也呈显著负相关（12 h：r＝-0.728,24 h:r＝- 0.785,36 h:r＝-0.842;P均<0.05）; SRNS亚组无显著相关性。结论①PBMC膜表面P-gp170表达增高与NS患儿GC耐药有,P-gp170表达增高介导了部分NS患儿的GC耐药;②应用GC可诱导NS患儿PBMC膜表面P-gp170的表达增高,部分GC耐药患儿与GC应用所致P-gp170增高有关;③NS患儿PBMC膜表面P-gp170的表达增高为GC耐药标志之一。     

应用SELDI-TOF-MS筛选激素耐药型肾病综合征患儿尿液生物标志物

目的应用表面增强激光解吸电离飞行时间质谱(SELDI-TOF-MS)蛋白质芯片技术筛选激素耐药型肾病综合征(SRNS)患儿尿液生物标志物。方法激素敏感型肾病综合征(SSNS)组32例,SRNS组9例,正常对照组45例,应用金芯片检测各组尿液标本。结果SRNS有差异明显的生物标志物4个,相对分子量分别为6703、7212、11820、14356,其中7212、11820、14356差异表达蛋白质在SRNS呈高表达,在SSNS呈低表达,6703差异表达蛋白质在SSNS高表达,在SRNS低表达。4个蛋白质峰[6703、7212、11820、14356质荷比(m/z)]组合构建的诊断模型鉴别SRNS和SSNS,灵敏度为88.89%,特异度93.75%。结论SELDI-TOF-MS蛋白质芯片技术是一种无创、快速、简便易行、用量少和高通量分析方法,能直接筛选出SRNS患儿尿液中的生物标志物,具有较好的临床应用价值。     

P-糖蛋白170在原发性肾病综合征患儿糖皮质激素耐药中的作用

目的探讨原发性肾病综合征(PNS)患儿治疗前外周血单个核细胞(PBMC)P-糖蛋白170(P-gp170)与糖皮质激素(GC)耐药的关系。方法采用流式细胞仪(FCM)检测30例PNS患儿PBMCP-gp170的表达,并分析其与复发次数、24h尿蛋白定量(24hUTP)及肾脏病理积分的关系。根据随访结果分成激素耐药型肾病综合征(SRNS)和激素敏感型肾病综合征(SSNS)2组,各15例。10例健康体检儿童作为正常对照组。结果SRNS组患儿PBMCP-gp170的表达量显著高于SSNS组患儿(P均<0.05)。PNS患儿激素治疗前PBMCP-gp170的表达量与复发的次数呈正相关(r=0.399,P<0.05);SRNS患儿激素治疗前PBMCP-gp170的表达量与24h尿蛋白定量(24hUTP)及肾脏病理积分均呈正相关(r=0.576、0.529,P均<0.05)。结论PBMCP-gp170表达增高可能与PNS患儿GC耐药有关,可作为PNS患儿GC耐药的标志之一。PBMCP-gp170表达增高与PNS活动、复发及病理有关,可做为临床判断预后的指标。     

泌尿生殖系统疾病

073457PAX2在肾小管上皮细胞转分化中的作用/耿文茂…∥临床儿科杂志.-2007,25(4).-284~28738例病例组肾组织按间质病变程度分为轻、中、重3组,其中轻度病变15例,中度病变11例,重度病变12例;对照组为5例外伤后肾切除组织。采用免疫组化法评定肾组织核转录因子(PAX2)的表达率和肾小管上皮细胞转分化率。结果:正常对照组肾小管上皮细胞只表达角蛋白(CK),不表达平滑肌肌动蛋白(α-SMA)及PAX2。病例组肾间质病变轻、中、重3组肾小管上皮细胞均不同程度表达α-SMA及PAX2;不同肾间质病变组,肾小管上皮细胞转分化率及PAX2表达量差异均有…     

原发性肾病综合征患儿外周血GRα、GRβ的表达及临床意义

目的探讨糖皮质激素受体α(GRα)和β(GRβ)在原发性肾病综合征(PNS)中的作用及其介导耐药的可能机制。方法选择15例糖皮质激素(GC)敏感型PNS(SSNS)患儿和15例GC耐药型PNS(SRNS)患儿,以及10例健康对照儿童,应用逆转录-聚合酶链式反应(RT-PCR)检测各组外周血单个核细胞(PBMC)中GRα和GRβ mRNA的表达,并分析其与24 h尿蛋白定量(24 hUTP)及肾脏病理积分的关系。结果 PNS患儿PBMC中GRα和GRβ均有表达,并以GRα为主;三组间GRα mRNA的表达无差异(P>0.05);而SRNS组GRβ mRNA、GRα/GRβ水平均高于SSNS和对照组(P均<0.05)。GRβ mRNA的表达与24 hUTP和病理积分呈正相关(P<0.05),即GRβ mRNA的表达越高,病理积分越高,病理损伤越大。结论 GRβ mRNA可以作为监测PNS患儿病情以及预后的指标。针对SRNS患儿PBMC中GRβ升高,增加激素受体敏感性,有望为SRNS的治疗提供新的思路。     

GRβ在原发性肾病综合征患儿糖皮质激素耐药中的作用

目的　研究原发性肾病综合征患儿PBMCsGRβ表达水平与肾组织中原位GRβ表达水平的关系及其在PNS患儿糖皮质激素耐药中的作用。方法　40例原发性肾病综合征患儿分成激素敏感组与激素耐药组,每组各 20例,应用免疫组织化学技术,对其肾活检组织与PBMCs中GRα、GRβ进行检测,应用半定量评分法对各组肾病患儿肾小球与肾小管间质病理改变进行半定量分析。结果　激素耐药组肾小球病理积分与肾小管病理积分高于激素敏感组 (P均 <0.01);激素敏感组与激素耐药组原发性肾病综合征患儿肾活检组织GRα与PBMCs中GRα表达低于正常对照组 (P均 <0.01);激素敏感组与激素耐药组原发性肾病综合征患儿肾活检组织GRβ与PBMCs中GRβ表达高于正常对照组(P均<0.01);中度损害组肾活检组织与PBMCsGRβ表达高于轻度损害组,重度损害组高于中度损害组(P均<0.01);相关分析表明:原发性肾病综合征患儿PBMCs和肾固有细胞GRβ表达明显正相关(r=0. 651; P<0.01), PBMCs和肾固有细胞中GRβ表达与肾脏病理积分正相关(r=0.579, 0.623,P均<0.01)。结论　原发性肾病综合征患儿肾局部、PBMCs中GRβ过表达与PNS患儿糖皮质激素耐药发生有关,与PBMCs和肾局部GRα数目的多少无关,过表达的GRβ可能是通过拮抗GRα的活性影响激素效应的发挥。     

新型免疫调节剂FTY720对单侧输尿管梗阻大鼠肾间质纤维化的影响

目的 探讨新型免疫调节剂FTY720对单侧输尿管梗阻（UUO）大鼠肾间质纤维化的影响。 方法 将45只SD大鼠随机分为假手术组,模型组和FTY720治疗组（UUO＋FTY720）（每组n=15)。FTY720治疗组于术前3 d给予FTY720 0.5 mg·kg-1·d-1，灌胃，每日1次，直至处死动物，模型组和假手术组给予等量生理盐水同法处理。3组分别于术后7、14和21 d平行处死5只大鼠，并收集血清和24 h尿液，观察肾功能和24 h尿蛋白变化。取梗阻侧肾脏行组织学检查，观察肾间质纤维化程度和炎性细胞浸润情况。用免疫组化方法检测肾组织中α-平滑肌肌动蛋白（α-SMA）、胶原-Ⅲ型（COL-Ⅲ）的表达水平。结果 24 h尿蛋白定量：术后14 d模型组为(15.5±1.5 ) mg·d-1，FTY720治疗组为(9.7±1.7) mg·d-1，较模型组明显降低（P<0.05）。术后7、14和21 d，模型组血清肌酐（SCr）水平分别为（123.0±15.8)μmol·L-1、（65.9±6.1）μmol·L-1和（51.4±6.9） μmol.·L-1，FTY720治疗组SCr分别为（41.8±4.5） μmol·L-1、（39.5±7.9）μmol·L-1和（38.5±4.5）μmol·L-1，均较模型组明显降低（P<0.05），FTY720治疗组与假手术组SCr水平差异无统计学意义。术后7和14 d，模型组BUN分别为（16.1±3.2）mmol·L-1和（10.7±1.7）mmol·L-1，FTY720治疗组BUN分别为（8.1±1.0）mmol·L-1和（7.0±0.8）mmol·L-1，均较模型组明显降低（P<0.05）。病理学检查显示，FTY720治疗组肾间质浸润细胞较模型组明显减少，纤维化程度明显减轻。免疫组化结果显示，α-SMA表达在假手术组中仅限于血管，而在FTY720治疗组和模型组，表达明显增多，可见于肾小管和间质细胞，但FTY720治疗组中表达要弱于模型组。假手术组各个时间点肾间质中可见少量COL-Ⅲ表达，模型组手术后7、14和21 d COL-Ⅲ表达明显增强，主要集中于肾小管间质病变明显区域,FTY720治疗组表达则明显减少。结论 FTY720可以明显减轻单侧输尿管梗阻后大鼠肾间质纤维化的程度，减少肾间质炎性细胞浸润，在一定程度上可抑制肾小管上皮细胞转分化和细胞外基质的积聚，对肾功能有一定的保护作用。     

原发性肾病综合征患儿血清白细胞介素-13与激素耐药的相关性

目的 探讨原发性肾病综合征(PNS)患儿血清IL-13蛋白水平及外周血单个核细胞(PBMC) IL-13 mRNA表达与激素耐药的相关性,以期阐明IL-13在PNS激素耐药中的可能机制.方法 分别采用ELISA及RT-PCR法测定40例健康儿童及39例激素敏感型肾病综合征(SSNS)、27例激素耐药型肾病综合征(SRNS)患儿血清IL-13蛋白水平及PBMC中IL-13 mRNA表达水平.采用双缩脲法检测上述患儿24 h尿蛋白.全自动生化分析仪检测血清总胆固醇(Chol)、三酰甘油(TG)、低密度脂蛋白(LDL)、总蛋白(TP)、清蛋白(Alb).采用SPSS 13.0软件比较各组间差异.结果 1.与健康对照组比较,治疗前SSNS、SRNS患儿血清IL-13蛋白水平及PBMC中IL-13 mRNA表达均明显增高(Pa<0.05);与SSNS患儿比较,SRNS患儿血清IL-13蛋白水平及PBMC中IL-13 mRNA 表达均增高(Pa<0.05);SSNS、SRNS患儿血清Alb、TP、Chol、TG水平及24 h尿蛋白量比较均无统计学意义(Pa>0.05),SRNS患儿血清中LDL水平较SSNS患儿高(P<0.05).2.经正规激素治疗8周后,SRNS组血清IL-13蛋白水平及PBMC中IL-13 mRNA表达均高于SSNS组及健康对照组(Pa＜0.05);SSNS组血清IL-13蛋白水平及PBMC中IL-13 mRNA表达与健康对照组比较均无显著性差异(Pa>0.05).3.治疗后SSNS组IL-13蛋白水平及PBMC中IL-13 mRNA 表达量较治疗前均明显下降(Pa<0.05).而治疗前、后 SRNS组IL-13蛋白水平及PBMC mRNA 表达量均无明显变化(Pa>0.05).结论 PNS 激素耐药与 IL-13蛋白水平及PBMC mRNA表达明显升高有关,IL-13的过度分泌在SRNS的发生、发展中发挥一定作用.调节血清IL-13蛋白水平及表达可能是治疗SRNS的新途径.     

沉默PAX2基因对肾间质纤维化大鼠的影响

目的 探讨体内沉默PAX2基因对肾间质纤维化大鼠肾小管上皮细胞转分化(EMT)的影响。方法 64只Wistar大鼠麻醉后,单侧输尿管结扎法制作肾间质纤维化大鼠模型,随机分为阴性对照组和PAX2基因沉默组,每组32只。将200 μL NC-siRNA-in vivo jetPEITM混合液转染阴性对照组大鼠,将200 μL PAX2-siRNA-in vivo jetPEITM混合液转染PAX2基因沉默组大鼠,各组分别于转染后3、5、7、14 d分为4个亚组,每组8只。留取各组肾组织标本,应用Real-Time PCR及Western blot法检测肾皮质PAX2 mRNA及其蛋白的沉默情况,以及E-钙粘连素(E-cadherin)、α-平滑肌肌动蛋白(α-SMA)mRNA和蛋白表达情况。结果 PAX2基因沉默组PAX2 mRNA和蛋白表达量较阴性对照组均降低 (P < 0.05)。随着梗阻时间的延长,两组E-cadhelin mRNA和蛋白表达量逐渐下降,α-SMA mRNA和蛋白表达量逐渐升高;在转染14 d时,PAX2基因沉默组E-cadhelin mRNA和蛋白相对表达量明显高于阴性对照组 (P < 0.05),而α-SMA mRNA和蛋白相对表达量明显低于阴性对照组 (P < 0.05)。结论 沉默PAX2基因在肾间质纤维化晚期大鼠中可明显抑制肾小管EMT进程,可能对肾间质纤维化有治疗作用。