重组人脑利钠肽质量标准与检定方法研究

目的：建立重组人脑利钠肽（rhBNP)质量标准与检定方法，用于该产品的质量控制。方法：用离体动脉条测定法测定rhBNP的生物活性；用反相HPLC和SDS-PAGE分析蛋白纯度；用肽图，免疫印迹及N-端氨基酸序列测定分析。鉴定产品特性；用固相斑点杂交法测定残余外源DNA含量；用ELISA测定残余工程菌蛋白含量；用《中国生物制品规程》的方法对rhBNP成品进行无菌，热原，细菌内毒素和异常毒性等常规试验等。结果：用建立的方法对连续3批rhBNP原液和成品进行检定，结果各项指标均符合《重组DNA制品质量控制要点》和《中国生物制品规程》的要求。结论：建立的rhBNP质量标准与检定方法，具有保证产品安全，有效，质量可控等特点，可用于该产品的常规检定。     

聚乙二醇化重组人粒细胞集落刺激因子的质量标准和质控方法研究

目的:建立聚乙二醇化重组人粒细胞集落刺激因子的质量标准和质控方法.方法:采用荧光分光光度法测定PEG-rhG-CSF的PEG化率,RP-HPLC方法蒸发光检测器检测游离PEG残留量,胰蛋白酶裂解进行肽图分析,其它指标按照<中国生物制品规程>进行.结果:建立了聚乙二醇化重组人粒细胞集落刺激因子的质控方法和质量标准.结论:建立的方法和质量标准已用于聚乙二醇化重组人粒细胞集落刺激因子产品的检定.     

重组人粒细胞集落刺激因子-Fc融合蛋白(rhG-CSF-Fc)的质量研究

目的:建立重组人粒细胞集落刺激因子-Fc融合蛋白的质控方法和质量标准。方法:采用NSF-60细胞增殖法测定生物学活性;非还原SDS-PAGE电泳和RP-HPLC测定纯度;以ELISA法分别测定残留CHO细胞蛋白和蛋白A;其余检测项目按中国药典2010年版三部规定进行。结果:用建立的方法对重组人粒细胞集落刺激因子-Fc融合蛋白原液和成品进行了检定,各项指标均符合《人用重组DNA制品质量控制技术指导原则》和中国药典2010年版三部的要求。结论:建立的质控方法和质量标准具有保证产品安全有效、质量可控的特点,可用于该类产品的常规检定。     

GM—CSF／IL-3融合蛋白质量标准的研究和建立

目的：建立重组GM—CSF／IL-3融合蛋白的质控标准和检测方法，以用于该产品的常规质量控制。方法：用TF-1／MTT细胞增殖试验定量测定GM—CSF／IL-3融合蛋白体外生物学活性；用抗GM—CSF和IL-3的抗体分别进行WesternBlot进行鉴别试验；用C8-HPLC和SDS—PAGE测定蛋白纯度；用胰蛋白酶消化/C18-HPLC进行肽图分析；用顶空进样气相色谱法检测甲醇残留量；还原型SDS—PAGE测定融合蛋白相对分子质量；其他原液和成品检测项目参照2005年版中国药典三部的方法进行。结果：GM～CSF／IL-3融合蛋白的原液及成品与TF-1细胞的反应呈典型的S型曲线，符合四参数方程y=（A—D）／[1＋（x／C）^B）]＋JD，相关系数大于0．99，成品和原液的回收率均大于94％，RSD均小于20％；与GM—CSF和IL-3抗体进行的Western Blot均为阳性；原液纯度大于95．0％；甲醇残留量小于0．005％，其他项目均符合2005年版中国药典三部要求。结论：建立的重组GM—CSF／IL-3融合蛋白质控标准和检测方法可以有效控制该制品的质量，并确保制品的安全与有效，已用于该制品的常规检定。     

重组人源化兔抗VEGF单克隆抗体质控方法与质量标准研究

目的:建立重组人源化兔抗VEGF单抗的质控方法和质量标准。方法:利用HUVEC细胞增殖抑制试验测定重组人源化兔抗VEGF单抗的生物学活性;SDS-PAGE和SEC-HPLC测定纯度;胰酶酶切,HPLC测定其肽图;实时定量PCR检测CHO宿主DNA残留量;采用ELISA法分别测定VEGF结合力、残留ProA含量和残留菌体蛋白含量;水平等电聚焦电泳法测定等电点;其余检测项目按中国药典2010年版三部规定进行。结果:用建立的方法对重组人源化兔抗VEGF单抗的原液和成品进行了检定,各项指标均符合《人用重组DNA制品质量控制技术指导原则》、《人用单克隆抗体质量控制技术指导原则》和中国药典2010年版三部的要求。结论:建立的质控方法和质量标准具有保证产品安全、有效、质量可控的特点,可用于该类产品的常规检定。     

含绿色荧光蛋白报告基因rhPDGF-BB非融合型表达载体的构建及其转染

目的：构建并转染含绿色荧光蛋白（GFP）报告基因的重组人血小板衍化生长因子-BB（rhPDGF-BB）非融合型表达载体，为采用转基因工程化细胞修复糖尿病溃疡创面奠定基础。方法：从人脐静脉内皮细胞human umbil ical vein endothelial cell，HUVEC）中分离总RNA，行RT—PCR获得rhPDGF—BB cDNA，构建克隆质粒pMD 19-T／rhPDGF—BB，经测序正确后，再将该目的片段与真核表达载体pSELECT—GFPzeo—mcs连接，转化E．coli DH 5α感受态菌落筛选得到含GFP报告基因的非融合型表达载体，然后将其转染中国仓鼠卵巢细胞（CHO细胞）并用免疫组化染色法鉴定。结果：PCR获得长度为681bp的目的片段，经pSELECT-GFPzeo—mcs载体连接、筛选及序列分析后，证实所插入目的片段与GenBank检索的rhPDGF-BB cDNA序列（NM-033016）完全匹配。结论：成功构建了非融合型表达载体pSELECT-GFPzeo—mes／rhPDGF-BB，并实现了rhPDGF-BB基因在CHO的表达。     

胰激肽原酶纯度的质量研究

目的：为修订《中国药典》2005年版相关质量标准,对国内不同企业的胰激肽原酶的产品纯度进行了质量评价,并制定合理的方法限度。方法：采用HPLC和SDS—PAGE电泳两种不同的方法测定了胰激肽原酶的纯度。结果：不同企业生产的胰激肽原酶的纯度具有差异,个别企业胰激肽原酶原料药纯度达到100％。结论：HPLC和SDS—PAGE电泳两种方法均能有效地控制胰激肽原酶的纯度,提高产品的纯度有利于稳定性的增强。     

重组人白介素12质量标准与检测方法研究

目的：建立白介素12的质量标准与检测方法，用于该产品的质量控制。方法：采用诱导PBMC生成IFN-γ的方法测定生物学活性；用胰酶酶解分析肽图；用分子排阻HPLC、离子交换HPLC和SDS-PAGE法分析蛋白纯度；免疫印迹及N端氨基酸序列测定分析、鉴定产品特性。按照《中国药典》三部2005年版的有关规定进行了其他项目检查。结果：用建立的方法对重组人白介素12成品及原液进行检定，结果各项指标均符合《中国药典》的要求。结论：建立了重组人白介素12的质量标准，并可有效地控制制品的质量。     

我国生物制品质量控制标准的发展与现状

《中国生物制品规程》是生物制品质量控制的国家标准,是国家对生物制品生产及检定实施质量监督管理的主要依据。本文通过阐述《中国生物制品规程》制定的发展和现状,反映了我国生物制品质量不断提高、种类不断增加的进程,以及《中国生物制品规程》对生物制品标准化所起到的推动作用。     

肿瘤治疗性多肽疫苗——重组人纽表位肽12质控方法的研究

目的建立重组人纽表位肽12质控方法和检定规程。方法采用FVB/N转neu基因小鼠,以ELISA法检测给药后小鼠的抗体阳转百分率评价其生物学活性,用胃蛋白酶酶切分析肽图,用SEC-HPLC法测定抗原含量。结果与结论建立了重组人纽表位肽12的生物学活性、肽图分析、抗原含量测定等质控方法及检定规程,并已用于重组人纽表位肽12产品的检定。     

注射用人组织尿激酶型纤溶酶原激活剂质量标准研究

目的:建立注射用人组织尿激酶型纤溶酶原激活剂(HTUPA)的质控方法和质量标准。方法:以纤维蛋白平板法测定HTUPA 的生物学活性,还原型 SDS-PAGE 确定相对分子质量,SDS-PAGE 和反相高效液相色谱测定纯度,毛细管电泳法测定等电点,用胰蛋白酶酶切后分析肽图,其余检测项目按2005年版中国药典三部规定进行。结果:用建立的方法对原液和成品进行了检定,各项指标均符合《人用重组 DNA 制品质量控制技术指导原则》和2005年版中国药典三部的要求。结论:建立的质控方法和质量标准具有保证产品安全、有效、质量可控的特点,可用于注射用人组织尿激酶型纤溶酶原激活剂产品的常规检定。     

2005年版《中国药典》三部中的部分病毒类制品标准与国外标准的比较

《中国药典》三部是我国生物制品生产、质控和监管必须依照的法定标准。世界卫生组织（WHO）生物制品规程通常为世界各国药品管理当局制定本国相关生物制品标准的重要依据。《欧洲药典》是欧盟各国必须遵守的药品质量标准。     

重组人肿瘤坏死因子受体-Fc融合蛋白质控方法和标准的研究

目的建立重组人肿瘤坏死因子受体-Fc融合蛋白质控方法和质量标准。方法用中和TNF-α生物学活性的方法测定重组人肿瘤坏死因子受体-Fc融合蛋白效价,用胰蛋白酶酶切分析肽图,用ELISA方法分别测定蛋白A、残留宿主细胞蛋白残留量和重组人肿瘤坏死因子受体-Fc融合蛋白含量。结果建立了重组人肿瘤坏死因子受体-Fc融合蛋白的生物学活性、肽图分析、残留蛋白A等质控方法和质量标准。结论建立的方法和质量标准已用于重组人肿瘤坏死因子受体-Fc融合蛋白产品的检定。     

SDSPAGE结合125I示踪法与ELISA法测定血中rh-bFGF的比较

目的：比较和评价SDS－聚丙烯酰胺凝胶电泳（SDS－PAGE）结合^125I示踪法与ELISA法测定血浆中重组人碱性成纤维细胞生长因子（recombinant human basic fibroblast growth factor,rh-bFGF)。方法：10只大鼠iv^125I-rh-bFGF1600ng/kg,用SDS－PAGE结合放射性计数测定血浆rh-bFGF含量。9只大鼠iv,rh-bFGF 1600ng/kg,用ELISA法测定血浆rh-bFGF含量。结果：两种方法的灵敏度、回收率和重现性好。ELISA法测定血浆rh-bFGF含量较SDS－PAGE结合^125I示踪法低。结论：SDS－PAGE结合^125I示踪法与ELISA均可满足药动学研究的要求。     

重组人淋巴细胞功能相关抗原3-抗体融合蛋白质量控制方法与质量标准研究

研究建立重组人淋巴细胞功能相关抗原3-抗体融合蛋白(rhLFA3-IgG1)质量控制方法和质量标准。采用针对Jurkat细胞表面CD2分子的竞争结合试验测定融合蛋白的体外活性，以分子筛和离子交换色谱分别确定制品纯度，将制品还原、羧甲基化后再以胰蛋白酶裂解并经反相高效液相色谱进行肽图分析，采用ELISA法分别测定蛋白A与CHO宿主细胞蛋白残留量。建立了重组人淋巴细胞功能相关抗原3-抗体融合蛋白生物学活性、理化特性与残留杂质等质量控制方法和质量标准。所建立的质量控制方法和质量标准具有保证产品安全有效、质量可控的特点，可用于重组人淋巴细胞功能相关抗原3-抗体融合蛋白(rhLFA3-IgG1)的质量控制与产品检定。     

重组白细胞抑制因子和水蛭肽嵌合蛋白质量标准研究

目的:建立重组白细胞抑制因子和水蛭肽嵌合蛋白(TNHH)的质控方法和质量标准.方法:采用抗凝血酶活性试验和抗白细胞黏附试验测定活性;通过胰蛋白酶消化分析该蛋白还原型肽图;利用RP-HPLC法和SEC-HPLC法分别测定有关物质和高分子蛋白质含量;其余检测项目均按<中华人民共和国药典)2005版三部相关规定进行.结果:用建立的方法分别对一批TNHH原液和成品进行了检定,各项指标均符合<入用重组DNA制品质量控制技术指导原则>和现版<中华人民共和国药典>的要求.结论:建立的质控方法可有效地控制TNHH产品质量,并可用于TNHH原液及成品的常规检定.     

《中国生物制品规程》的沿革及现状

《中国生物制品规程》的沿革及现状李桂萱（中国药品生物制品检定所１０００５０）生物制品属于药品，它多数以微生物作为材料制备而成，所以又称生命制品。如果制品质量不好，就可能产生不良后果，从这个意义上讲，生物制品的质量就是生命。《中国药典》是药品的质量标准...     

2000年版《中国生物制品规程》即将问世

经第三届中国生物制品标准化委员会审定的 2 0 0 0年版《中国生物制品规程》较现行版规程在质量标准及规范化方面均有明显提高 ,主要技术指标达到了 WHO生物制品规程的标准。该版规程全面统一规范了各类规程及使用说明的框架、专业术语和书写格式 ,并根据 WHO规程 ,在框架中增加了原液的制备及检定要求 ,增加了生产设施、生产用水、原辅材料等的基本要求 ;在使用说明中增加了药理作用、不良反应及处理等内容 ;修订了生物制品名称命名原则 ,规范了生物制品名称 ,增补了生物制品常用词汇注释以及规程英文目录 ;制定了菌、毒种三级管理要求 …     

关于中药标准采用“生物活性测定”项目的建议

中药是天然环境条件中产生的生物制品,具有成分复杂,可变因素多、活性成分多、作用靶点多、药效成分和毒性成分不清晰等特点。因此,中药质量标准中仅川理化方法测定指标成分有一定的局限性,而通过生物检定方法可测定与临床相关的生物学活性,生物检定正适用于中药这样具有多种相似生物活性成分的药品。本文讨论了对中药制剂,尤其对中药注射剂、危重病症用药品质量标准中采用生物活性测定法的必要性和可行性:探讨了进行中药生物活性测定方法学研究的基本步骤。本文建议:中药"生物活性测定"应结合中药的"功能主治",参考其主要药效学试验方法,首先开展生物活性测定方法和测定限值的研究。研究过程可采用方法筛选—方法和限值确定研究—方法验证—内控标准—质量标准的步骤;本文用某中药注射剂对人鼠血小板聚集试验、小鼠脑血栓形成试验等约效学试验方法、举例作为对只有活血化瘀功能,主冶脑血栓中风后遗症药物进行生物学活性质量的内控测定方法,也可作为开展其他类似"功能主治"中药生物学活性方法研究的参考。     

重组人内皮抑素的质控方法研究

目的通过研究并建立重组人内皮抑素质量控制方法。方法用内皮细胞迁移法测定内皮抑素的生物学活性;胰酶消化法测定肽图;分别用非还原型SDS-PAGE和RP-HPLC法测定样品的纯度;其余项目按《中国生物制品规程》2000年版进行测定。结果建立了内皮抑素的活性测定方法,应用该方法测定３批内皮抑素比活性分别为1.45×106, 1.57×106和2.73×106 u·mg^-1蛋白,肽图测定结果显示3批样品批间一致,SDS-PAGE纯度和RP-HPLC纯度均大于99%,其余各项指标均符合规定。结论建立的方法可有效地控制内皮抑素制品的质量。